专利名称：制备六环喜树碱衍生物的方法
技术领域：
本发明涉及制备具有有效抗肿瘤活性的新六环化合物(喜树碱类似物)的新方法。
背景技术：
喜树碱的细胞毒活性可归因于它的干扰DNA拓扑异构酶I的能力(Hsiang，Y.-H.等人，用哺乳动物DNA拓扑异构酶I喜树碱诱导蛋白连接的DNA断裂，J.Biol.Chem.，26014873-14878，1985)。DNA拓扑异构酶I是一种磷酸化蛋白并且为DNA复制、转录和重组所需要。它形成共价可逆的DNA拓扑异构酶I-双链DNA复合物(也称可解离复合物)，并且通过断裂和再连接两条DNA链中的一条，来松弛超螺旋DNA(见例如Wang，J.C.DNA拓扑异构酶，Annu.Rev.Biochem.54665-697，1985；Champoux，J.J.Mechanisticaspects of type-I topoisomerase.In“DNA topology and its biological effects”pp.217-242，1990)。喜树碱与该可解离复合物可逆地相互作用，并且随后通过干扰再连接步骤而诱发DNA单链断裂(Hsiang，Y.-H.等人，用哺乳动物DNA拓扑异构酶I喜树碱诱导蛋白连接的DNA断裂，J.Biol.Chem.，26014873-14878，1985；Porter，S.E.等人，用真核生物DNA拓扑异构酶I喜树碱增加DNA断裂的基本原理，Nucleic Acid Res.178521-8532，1989)。
尽管DNA拓扑异构酶I是一种普遍存在的酶并在整个细胞周期中存在，喜树碱的抗增殖活性只限于临床试验，并且喜树碱的血浆半衰期表现的较短(少于30分钟)，被转化成非活性的羧酸盐的形式。而且，喜树碱在水中是难溶的，因此，它本身不能制成用于静脉注射的制剂。
大量的喜树碱衍生物被合成以提高抗肿瘤活性、血浆中的内酯稳定性和/或水溶性，并被临床试验(Gerrits，C.J.H.，de Jonge，M.J.等人，拓扑异构酶I抑制剂临床研究中延长接触的关系，Br.J.Cancer，76952-962，1997；O′Leary，J.等人，喜树碱的研制与给药方案综述，Eur.J.Cancer，341500-1508，1988，Gerderblom，H.A.等人，成年患者口服拓扑异构酶I抑制剂现状或展望，Investig.New Drugs，17401-415，1999)。
然而，现在，只有两种喜树碱衍生物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38，EP0074256)的前药7-乙基-10-[4-(1-哌啶子基)-1-哌啶子基]羧基喜树碱(依立替康)和9-(二甲氨基)甲基-10-羟基喜树碱(托泊替康)进入了临床实践(Kunimoto，T.等人，新型水溶性喜树碱衍生物7-乙基-10-[4-(1-哌啶子基)-1-哌啶子基]羰氧基喜树碱抗鼠肿瘤活性，Cancer Res.，475944-5947，1987；Kingsbury，W.D.等人，水溶性(氨基烷基)喜树碱类似物的合成拓扑异构酶I的抑制和抗肿瘤活性，J.Med.Chem.，3498-107，1991)。
由于喜树碱的复杂结构，喜树碱的衍生以及制备它们的合成路线明显地存在限制。因此还有很强的需要来发现新的合成路线以制备具有改善活性的喜树碱类似物。
发明内容
下式[1]代表的新六环化合物及其药学上可接受的盐在采用人肿瘤异种移植物模型的研究中显示出有效的抗肿瘤活性， 其中R1和R2独立地为氢、卤素、(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷氧基；R3为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C5)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C5)-烷氧基、羟基、卤素、氨基，(C3-C7)-环烷基、杂环或芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、(C1-C5)-烷氧基、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基或二-(C1-C5)-烷氨基；R4为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C10)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C5)-烷氧基、羟基、卤素、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基、二-(C1-C5)-烷氨基和(C3-C7)-环烷基、杂环和芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、烷氧基、卤素、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基和二-(C1-C5)-烷氨基。
式[1]化合物可以如下列图解1说明的由9-硝基喜树碱衍生物制备。
图解1 然而，这些方法伴随有一些缺点，例如，多的合成步骤、低的总产率以及许多色谱纯化步骤，这对工业规模生产造成巨大的挑战。
因此本发明的一个目的是提供制备式[1]六环化合物及其药学上可接受盐的新的并且更充分的合成方法， 其中R1、R2、R3和R4与上述定义的相同，该方法包括将式[2]化合物或其盐
其中R1、R2、R3和R4与上述定义的相同并且R5为-OH或-O-(C1-C5)烷基，与式[3]化合物缩合， 其中R6为氯或溴。
更具体而言，本发明的另一个目的是提供制备式[1A]化合物的方法， 该方法包括将式[2A]化合物或其盐 与式[3A]化合物缩合 本发明的另一个目的是提供制备式[2]化合物的方法， 其中R1、R2、R3、R4和R5与上述定义的相同，该方法包括a)将式[4]化合物或其盐进行臭氧分解， 其中R1、R2和R3与上述定义的相同，以得到式[5]化合物 其中R1、R2和R3与上述定义的相同，b)用胺R4-NH2(R4与上述定义的相同)将式[5]化合物环化以得到式[6]化合物， 其中R1、R2、R3、R4和R5与上述定义的相同，c)将式[6]化合物的硝基进行氢化以得到式[2]化合物， 其中R1、R2、R3、R4和R5与上述定义的相同。
本发明的另一个目的是提供制备式[2]化合物的方法，该方法在式[4]化合物臭氧分解产生式[5]化合物后，包括d)将式[5]化合物的硝基进行氢化， 其中R1、R2和R3与上述定义的相同，以得到式[7]化合物 其中R1、R2和R3与上述定义的相同，e)用胺R4-NH2，其中R4与上述定义的相同，将式[7]化合物环化以得到式[2]化合物 更具体而言，本发明的另一个目的是提供制备产生式[5A]化合物的式[2A]化合物的方法，该方法包括a’)将式[4A]化合物或其盐进行臭氧分解， 以得到式[5A]化合物 b’)用正-戊胺将式[5A]化合物环化以得到式[6A]化合物， c’)将式[6A]化合物的硝基进行氢化以得到式[2A]化合物， 本发明的另一个目的是提供制备式[2A]化合物的方法，该方法在式[4A]化合物臭氧分解产生式[5A]化合物后，包括d’)将式[5A]化合物的硝基进行氢化， 以得到式[7A]化合物 e’)用正-戊胺将式[7A]化合物环化以得到式[2A]化合物 本发明的另一个目的是提供制备式[3]化合物的方法，包括将式[8]化合物卤化
以得到式[3]化合物， 其中R6为氯或溴。
上述方法可以概括为下列反应图解2。
图解2 除非另外说明，下列定义用来解释和定义本说明书中说明本发明使用的不同术语的意义和范围。
术语“烷基”指直链或支链单价饱和脂肪烃基团。
“(C1-C10)-烷基”指具有1～10个，优选1～8个，碳原子的直链或支链烃链，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔-丁基、仲-丁基、戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、1，1-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，2-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、3，3-二甲基丁基等，更优选丁基、异丁基、3-甲基丁基或戊基。
“(C1-C5)-烷基”指甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔-丁基、仲-丁基、戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基等，更优选甲基、乙基、丙基或异丙基。
术语“烷氧基”指-O-R’基团，其中R’为如上述所定义的烷基。“(C1-C5)-烷氧基”优选指甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔-丁氧基、戊氧基、3-甲基丁氧基、2，2-二甲基丙氧基等。
术语“羟基”指HO-基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴和碘。
术语“氨基”指-NH2基团并且包括被本领域已知基团保护的氨基基团，这些已知基团例如甲酰基、乙酰基、trithyl、叔-丁酰基、苄基、苄氧羰基等。优选指-NH2。
术语“单-烷氨基”指-NH-R’基团，其中R’为如上述所定义的烷基，并且包括被本领域已知基团保护的氨基基团，这些已知基团例如甲酰基、乙酰基、trithyl、叔-丁酰基、苄基、苄氧羰基等。术语“单-(C1-C5)-烷氨基”优选指N-甲氨基、N-乙氨基、N-丙氨基、N-异丙氨基、N-丁氨基、N-(1-甲基丙基)-氨基、N-(2-甲基丙基)-氨基、N-戊氨基等，更优选N-乙氨基、N-丙氨基或N-丁氨基。
术语“二-烷氨基”指-NR’R”基团，其中R’和R”(互相独立)为如上述所定义的烷基。“二-(C1-C5)-烷氨基”优选指N，N-二甲基氨基、N，N-二乙基氨基、N，N-二丙基氨基、N，N-二异丙基氨基、N，N-二丁基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、N-甲基-N-丙基氨基等，更优选N，N-二甲基氨基或N，N-二乙基氨基。
术语“(C3-C7)-环烷基”指3～7员环，环中不含有任何杂原子。“环烷基”优选指环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等，更优选环戊基和环己基。
术语“杂环”指3～10员杂环或杂芳环，其中含有一个或多个选自N、S和O的杂原子。优选杂环选自噁唑基、噻唑基、4，5-二氢-噁唑基、4，5-二氢-噻唑基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、噁二唑基、噻二唑基、吡咯烷基、四氢噻吩基、四氢呋喃基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、1-甲基哌嗪基等，更优选咪唑基、吡啶基、吗啉基和吡咯烷基。
术语“芳基”指芳香碳环基团，即6或10员芳香或部分芳香环，例如苯基、萘基或四氢萘基，优选苯基或萘基，最优选苯基。
本发明中，“任选被...取代”的表述指取代可以在1～3个位置发生，优选在一个位置发生，并且除非另外说明，取代基独立地选自所述特定的可选择的取代基。
术语“药学上可接受的”，例如药学上可接受的载体、赋形剂、前药等，指药学上可接受的并且基本上对于给药该具体化合物的对象是无毒的。
术语“药学上可接受的盐”指常规的酸加成盐或碱加成盐，该盐保留式[1]六环化合物的生物学有效性和性质，并且由适合的非毒性有机或无机酸或有机或无机碱形成。酸加成盐包括衍生于无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸的那些盐，以及衍生于有机酸例如对-甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、枸橼酸、苹果酸、乳酸、富马酸等的那些盐。碱加成盐包括衍生于钾、钠、铵和季铵氢氧化物例如四甲基氢氧化铵的那些盐。
在上述定义中，R3的优选具体实施方案为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、戊基、羟甲基、甲氧甲基、乙酰氧甲基、氨甲基、(甲氨基)甲基、(二甲氨基)甲基、氟甲基、氯甲基、三氟甲基、苯基、吡啶-2-基、甲氧基、乙氧基、甲硫基、乙硫基、氨基、甲氨基、乙氨基、丙氨基、丁氨基、二甲氨基、二乙氨基等，更优选氢、甲基、乙基、丙基、羟甲基、氨甲基、氯甲基、三氟甲基。
R4的优选具体实施方案为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、3-甲基丁基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、己基、4-甲基戊基、3，3-二甲基丁基、庚基、2-甲氧乙基、2-乙氧乙基、2-丙氧乙基、3-甲氧丙基、4-甲氧丁基、2-羟乙基、3-羟丙基、4-羟丁基、5-羟戊基、2-氟乙基、3-氟丙基、4-氟丁基、2-氯乙基、3-氯丙基、4-氯丁基、2-(二甲氨基)乙基、3-(二甲氨基)丙基、2-(环己基)乙基、2-(4-吗啉代)乙基、2-(吡咯烷基)乙基、2-(哌啶子基)乙基、2-(4-甲基哌嗪基)乙基、2-(吡啶-2-基)乙基、2-(吡啶-3-基)乙基、2-(咪唑-1-基)乙基、苄基、苯乙基、2-(1-萘基)乙基、3-苯丙基、2-(4-氟苯基)乙基、2-(4-氯苯基)乙基、2-(4-甲氧苯基)乙基、2-(4-羟苯基)乙基、2-[4-(二甲氨基)苯基]乙基、2-(3，4-亚甲二氧基苯基)苯基]乙基等，更优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、3-甲基丁基、己基、3，3-二甲基丁基、庚基、2-羟乙基、3-羟丙基、2-(二甲氨基)乙基、3-(二甲氨基)丙基、2-(4-吗啉代)乙基、2-(吡啶-2-基)乙基、2-(吡啶-3-基)乙基、苄基、苯乙基、3-苯丙基、2-(4-氟苯基)乙基、2-(4-氯苯基)乙基、2-(4-甲氧苯基)乙基等。
更详细地，本发明涉及制备式[1]化合物及其药学上可接受的盐的方法， 其中R1和R2独立地为氢、卤素、(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷氧基；R3为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C5)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C5)-烷氧基、羟基、卤素、氨基，(C3-C7)-环烷基、杂环或芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、(C1-C5)-烷氧基、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基或二-(C1-C5)-烷氨基；R4为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C10)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C5)-烷氧基、羟基、卤素、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基、二-(C1-C5)-烷氨基和(C3-C7)-环烷基、杂环或芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、烷氧基、卤素、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基和二-(C1-C5)-烷氨基，该方法包括将式[2]化合物或其盐 其中R1、R2、R3和R4与上述定义的相同并且R5为-OH或-O-(C1-C5)-烷基，与式[3]化合物缩合，
其中R6为氯或溴。
式[2]化合物与式[3]化合物缩合成式[1]化合物的反应优选在酸催化剂存在或不存在下在适合的溶剂中进行。优选溶剂为甲醇、乙醇、甲苯、二氯甲烷、氯仿、乙酸和甲酸等，最优选乙酸和甲酸。优选酸催化剂为盐酸、对-甲苯磺酸和三氟乙酸。反应优选在温度室温～150℃，更优选50℃～100℃下进行。
更优选地，本发明的方法为制备式[1]化合物的方法，其中R1为氢；R2为氢或(C1-C3)烷基；R3为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C5)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C5)-烷氧基、羟基、卤素、氨基、(C3-C7)-环烷基、杂环和芳基；和R4为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C8)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C3)-烷氧基、羟基、卤素、氨基、单-(C1-C3)-烷氨基、二-(C1-C3)-烷氨基、(C3-C7)-环烷基、杂环和芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、烷氧基、卤素。
最优选地，本发明方法是制备式[1]化合物的方法，其中R1和R2为氢；R3氢、甲基、乙基、丙基、羟甲基、氨甲基、(甲氨基)甲基、(二甲氨基)甲基、氯甲基、三氟甲基；并且R4为甲基、乙基、正-丙基、1-甲基乙基、正-丁基、1，1-二甲基乙基、2-甲基丙基、2，2-二甲基丙基、正-戊基、3-甲基丁基、2-正-己基、3，3-二甲基丁基、正-庚基、正-辛基、苄基、苯乙基、2-(二甲氨基)乙基、2-(4-吗啉代)乙基、3-(二甲氨基)丙基、2-(吡啶-2-基)乙基、2-(吡啶-3-基)乙基、2-(4-甲氧苯基)乙基、2-(4-氯苯基)乙基或2-(4-氟苯基)乙基、3-苯丙基。
由本发明方法制备的式[1]化合物的实例是选自下列的化合物
a)(9S)-1-丁基-9-乙基-9-羟基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]中氮茚并-[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；b)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-[2-(4-吗啉代)乙基]-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并-[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮盐酸盐；c)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-丙基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]中氮茚并[1’，2’6，5]-吡啶并-[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；d)(9S)-1-苄基-9-乙基-9-羟基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’7’]中氮茚并-[1’2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；e)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-苯乙基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’7’]中氮茚并-[1’2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；f)(9S)-2.9-二乙基-9-羟基-1-苯乙基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’7’]中氮茚并-[1’2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；g)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-(3-苯丙基)-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’7’]中氮茚并-[1’2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；h)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-(3-甲基丁基)-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’7’]中氮茚并-[1’2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；i)(9S)-2.9-二乙基-9-羟基-1-(3-甲基丁基)-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’7’]-中氮茚并-[1’2’6，5]吡喃并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；j)(9S)-2.9-二乙基-9-羟基-1-(2-甲基丙基)-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’7’]-中氮茚并[1’2’6，5]吡喃并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；k)(9S)-9-乙基-1-庚基-9-羟基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；l)(9S)-9-乙基-9-羟基-l-甲基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；m)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-(2-甲基丙基)-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]中氮茚并-[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；n)(9S)-9-乙基-1-己基-9-羟基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]中氮茚并-[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；o)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-戊基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]中氮茚并-[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；
p)(9S)-1，9-二乙基-9-羟基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]中氮茚并-[1’，2’6，5]吡喃并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；q)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-[2-(4-甲氧苯基)乙基]-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并-[1’，2’6，5]吡喃并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；r)(9S)-1-[2-(4-氯苯基)乙基]-9-乙基-9-羟基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；s)(9S)-9-乙基-1-[2-(4-氟苯基)乙基]-9-羟基-1H，12H-吡喃并[3’，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；t)(9S)-9-乙基-1-[2-(4-氟苯基)乙基]-9-羟基-2-甲基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；u)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-(1-甲乙基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；v)(9S)-1-(3，3-二甲丁基)-9-乙基-9-羟基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；w)(9S)-2，9-二乙基-9-羟基-1-(3-甲丁基)-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；x)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-(2-羟乙基)-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；y)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-(2-羟乙基)-2-甲基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；z)(9S)-9-乙基-9-羟基-2-甲基-1-戊基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；aa)(9S)-2，9-二乙基-9-羟基-1-戊基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；bb)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-戊基-2-丙基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；cc)(9S)-9-乙基-9-羟基-2-羟甲基-1-戊基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’7’]-中氮茚并[1’2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；dd)(9S)-9-乙基-9-羟基-2-羟甲基-1-(2-甲丙基)-1H，12H-吡喃并-[3”，4”6’7’]中氮茚并[1’2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；
ee)(9S)-9-乙基-9-羟基-2-羟甲基-1-(3-甲丁基)-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’7，]中氮茚并[1’2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；ff)(9S)-2-氯甲基-9-乙基-9-羟基-1-(3-甲丁基)-1H，12H-吡喃并-[3”，4”6’7’]中氮茚并[1’2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；gg)(9S)-2-氨甲基-9-乙基-9-羟基-1-戊基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’7’]-中氮茚并[1’2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮；和hh)(9S)-9-乙基-9-羟基-1-戊基-2-三氟甲基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮。
本发明的一个特别优选方法为制备式[1A]化合物的方法，该方法包括将式[2A]化合物或其盐 与式[3A]化合物缩合， 本发明的另一个具体实施方案涉及式[2]化合物的制备方法，包括a)将式[4]化合物或其盐进行臭氧分解 其中R1、R2和R3与上述定义的相同，以得到式[5]化合物，
其中R1、R2和R3与上述定义的相同，b)用胺R4-NH2将式[5]化合物环化以得到式[6]化合物， 其中R1、R2、R3、R4和R5与上述定义的相同，c)将式[6]化合物的硝基进行氢化以得到式[2]化合物， 其中R1、R2、R3、R4和R5与上述定义的相同。
或者，本发明来提供制备式[2]化合物的方法，该方法在式[4]化合物臭氧分解产生式[5]化合物后，包括d)将式[5]化合物的硝基进行氢化， 其中R1、R2和R3与上述定义的相同，以得到式[7]化合物
其中R1、R2和R3与上述定义的相同，e)用胺R4-NH2将式[7]化合物环化以得到式[2]化合物。
其中R1、R2、R3、R4和R5与上述定义的相同。
上述步骤a)中的臭氧分解优选在适合的溶剂中进行。适合的溶剂为二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、乙酸、甲醇和水等以及上述溶剂的混合物，更优选二氯甲烷、二氯甲烷-甲醇混合物和二氯甲烷-N，N-二甲基甲酰胺混合物。典型地，该臭氧分解在-78℃～室温温度下进行1～10小时。反应完成后，反应混合物可以用适合的还原剂处理。优选还原剂为二烷基硫醚例如二甲基硫醚和二乙基硫醚和三烷基-或三芳基膦例如三丁基膦和三苯基膦，最优选二甲基硫醚。
上述步骤b)或e)中用胺R4-NH2的环化优选在适合的有机溶剂例如甲醇、乙醇、四氢呋喃、1，4-二噁烷、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺等，更优选甲醇和乙醇中进行。反应在室温～120℃温度下进行15分钟～几天时间。
上述步骤c)或d)中的氢化优选在适合的催化剂的存在下用还原剂在适当的溶剂中进行。适合的还原剂为分子氢、或氢源例如环己二烯、甲酸、甲酸铵等。适合的溶剂例如甲醇、乙醇、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、1，4-二噁烷，和水，混有或不混有无机或有机酸例如1～10N含水盐酸、磺酸、磷酸、硝酸、乙酸、三氟乙酸(frifluoroacetic acid)。适合的催化剂为过渡金属例如钯、铂、镍，并且典型地为5～20％钯/炭和5～10％氢氧化钯/炭。典型地反应在温度0～100℃压力1～100大气压下进行15分钟～几天时间。步骤c)和e)的反应也用金属元素或低价金属盐例如Zn、Fe、和SnCl2在适合的溶剂例如含水盐酸和甲醇盐酸中于0～100℃温度下进行15分钟～几天时间。
更优选地，本发明涉及制备式[2A]化合物的方法， 包括a’)将式[4A]化合物或其盐进行臭氧分解， 以得到式[5A]化合物 b’)用正-戊胺将式[5A]化合物环化以得到式[6A]化合物， 并且c’)将式[6A]化合物的硝基进行氢化以得到式[2A]化合物 或者，式[2A]化合物可以由根据权利要求7的步骤a’)臭氧分解后所得的式[5A]化合物制备，包括d’)将式[5A]化合物的硝基进行氢化，
以得到式[7A]化合物 并且e’)用正-戊胺将式[7A]化合物环化以得到式[2A]化合物。
本发明进一步涉及式[2]化合物， 其中R1和R2独立地为氢、卤素、(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷氧基；R3为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C5)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C5)-烷氧基、羟基、卤素、氨基、(C3-C7)-环烷基、杂环或芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、(C1-C5)-烷氧基、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基或二-(C1-C5)-烷氨基；R4为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C10)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C5)-烷氧基、羟基、卤素、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基、二-(C1-C5)-烷氨基和(C3-C7)-环烷基、杂环或芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、烷氧基、卤素、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基和二-(C1-C5)-烷氨基；并且R5为-OH或-O-(C1-C5)-烷基。
最优选地，所述化合物为5-氨基-4-羟基-3-戊基-3，4-二氢喹唑啉[2a]。
本发明也进一步涉及制备式[3]化合物的方法，包括将式[8]化合物卤化，
以得到式[3]化合物 其中R6为氯或溴。
上述步骤的卤化优选用卤化试剂在适合的溶剂中进行。适合的卤化试剂为磺酰氯、N-氯琥珀酰亚胺、次氯酸叔-丁基酯(t-butyl hypochloride)、溴、N-溴琥珀酰亚胺等。适合的溶剂优选二氯甲烷、氯仿、乙酸、甲酸和四氢呋喃等。典型地反应在温度-30℃～50℃下进行，更优选在温度0℃～室温下进行。
本发明也涉及式[3]化合物， 其中R6为氯或溴。
最优选地，式[3]化合物为(4S)-6-氯-4-乙基-7，8-二氢-4-羟基-lH-吡喃并[3，4-f]-中氮茚-3，6，10(4H)-三酮[3a]。
本发明的另一个具体实施方案涉及式[1]化合物的制备方法，包括将由上述所定义的方法制备的式[2]化合物与由上述所定义的方法制备的式[3]化合物缩合。
本发明的六环化合物在抑制或阻止恶化前或恶化细胞中肿瘤生长方面是有效的，并且对治疗癌成形实体瘤，尤其是结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、子宫颈癌和膀胱癌是有用的。本发明的六环化合物能够用来治疗这些肿瘤、延缓这些肿瘤的发展以及阻止肿瘤数量的增加。
本发明六环化合物的抗癌治疗活性可以被各种标准体外试验所证实。已知在下面以及在实施例中说明的这些试验说明抗癌活性，并且为用于癌症治疗的试验。本发明的六环化合物具有式[1]化合物描述的结构以及被任何标准试验尤其是对凋亡的试验所测定的抗癌活性。本发明的六环化合物尤其对诱导癌细胞凋亡有效，引发该细胞死亡。因此如果当癌细胞暴露于本发明六环化合物中该化合物引发癌细胞死亡时，则本发明的六环化合物是有所期望活性的。试验的癌细胞(例如乳腺、肺、结肠直肠等)可以从细胞保藏单位例如American Type Culture Collection(ATCC)容易地得到，或可以由技术人员从癌症病人上分离。本发明六环化合物最有活性的抗癌类型用试验中所用的细胞类型测定。
在培养中长成的癌细胞可以用特定的化合物培养，细胞成活力的变化可以通过比如选择性染色死细胞的染料或光密度(O.D.)测量法来测定。如果超过10％的细胞死亡，那么该化合物在诱导凋亡上是有活性的。该化合物不能直接杀死细胞(细胞毒性)但可以调整某些导致凋亡的细胞内或细胞外事件。本发明化合物的抗癌活性可以用评估化合物对细胞生长和分化影响的试验来确定。细胞生长抑制可以通过将所讨论的化合物加入到有染料或放射活性母体培养物的癌细胞中，并用显微镜细胞计数、闪烁计数或O.D.测量法测定在培养期间细胞数量是否增加来确定。如果细胞的数量没有增加，生长就被抑制，并且该化合物就被认为有治疗活性。相似地，加入测试化合物后分化的细胞的比例可以通过已知的方法测定(即在HL-60细胞中用NBT(氮蓝四唑)测定作为分化指示的氧化爆发)。如果10％或更多的细胞分化了，那么该化合物就被认为具有治疗活性。
抗增殖活性试验按如下进行。肿瘤细胞的单悬浮液接种到系列稀释的96-孔微量培养板中。然后该培养板在5％ CO2环境中于37℃培养4天(2-3×103细胞/孔)。单层细胞生长的程度用WST-8(Dojindo，Japan)测量。药物抗肿瘤细胞的IC50值以药物产生对照生长50％ OD的浓度计算。IC50)值度量与对照相比体外肿瘤细胞生长50％的药物浓度。该结果在下列表1中显示。
在表1中显示了式[1]六环化合物在体外抗人肿瘤细胞系结肠直肠癌(CRC)的HCT116和DLD-1、以及非小细胞肺癌(NSCLC)的QG56和NCI-H460生长的抗肿瘤活性。这些细胞系通过American Type CultureCollection(ATTC)可商业获得。
在表1中，化合物A表示(9S)-9-乙基-9-羟基-1-戊基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮。
化合物B表示(9S)-9-乙基-9-羟基-2-甲基-1-戊基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮。
化合物C表示(9S)-9-乙基-9-羟基-2-羟甲基-1-(3-甲丁基)-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮。
SN-38表示7-乙基-10-羟基喜树碱。
表1抗增殖活性试验(IC50以nM计)
对于临床应用，式[1]六环化合物、其前药、或其盐形式等能够单独给药，但一般来说是通过混合赋形剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、包衣材料、乳化剂、助悬剂、溶剂、稳定剂、吸收促进剂和/或软膏基质，以适合于所期望的具体应用和目的配制的药物混合物给药。该混合物可以用于口服、注射、直肠或局部给药。
更详细地，如早期提到的，含有式[1]化合物或其前药的药物组合物也是本发明的一个方面，这些药物的制备方法包括将一种或多种式[1]化合物和，如果期望，一种或多种其他有治疗价值的物质引入盖仑制剂给药形式。
该药物组合物可以口服给予，例如以片剂、包衣片剂、锭剂、硬或软明胶胶囊、溶液、乳剂或悬浮剂的形式。给药也可以通过直肠，例如使用栓剂；局部或经皮，例如使用软膏、乳膏、凝胶或溶液；或胃肠外，例如使用注射液来进行。
为制备片剂、包衣片剂、锭剂或硬明胶胶囊，本发明的六环化合物可以与药学惰性的无机或有机赋形剂(药学上可接受的载体)混合。片剂、锭剂或硬明胶胶囊适合的赋形剂实例包括乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石粉或硬脂酸或其盐。用于软明胶胶囊适合的赋形剂包括，例如，植物油、蜡、脂肪、半-固体或液体多元醇等；然而根据活性成分的性质，存在软明胶胶囊完全不需赋形剂的情况。为制备溶液和糖浆剂，可以使用的赋形剂包括例如水、多元醇、蔗糖、转化糖和葡萄糖。对于注射液，可以使用的赋形剂包括例如水、乙醇、多元醇、甘油、和植物油。对于栓剂、和局部或经皮应用，可以使用的赋形剂包括例如天然或氢化油、蜡、脂肪和半-固体或液体多元醇。
该药物组合物也可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、增甜剂、着色剂、除臭剂、用于改变渗透压的盐、缓冲液、涂层剂或抗氧剂。它们也可以含有其他有治疗价值的药剂。
概括的说，口服药物制剂可以为颗粒、片剂、糖衣片、胶囊、丸剂、悬浮剂或乳剂，用于胃肠外注射的，例如，静脉注射、肌肉注射或皮下注射，可以以无菌水溶液的形式使用，该无菌水溶液可以含有其他物质例如盐或葡萄糖来使溶液等渗。抗肿瘤药剂也能以栓剂或阴道栓剂的形式给药，或者它们可以以洗剂、溶液、乳膏、软膏或扑粉的形式局部应用。
当经口或非胃肠途径给药时，本发明六环化合物的日剂量水平为5～2000mg/m2。因此对于单次给药或间隔适当时间两次或多次给药片剂或胶囊可含有5mg～1000mg的活性化合物。在任何情况下该实际剂量可增加并取决具体病人的反映。
下列实施例举例说明本发明六环化合物制备的优选方法，这些实施例不限制本发明的范围。
实施例1、N-(2-甲酰基-3-硝基苯基)甲酰胺[5a]的制备 将在干冰-丙酮浴中冷却的搅拌的4-硝基-1H-吲哚(4a，93.8g，0.56mol)的DMF-MeOH(1∶2，2.7L)溶液，用臭氧(由氧气产生，22g/m3，流速500L/hr，臭氧发生器Tokyo Keiso，11g/hr)鼓泡3.5小时。该混合物在干冰-丙酮浴中不搅拌保持冷却1小时。产生的沉淀物过滤并用H2O洗涤得到N-(2-甲酰基-3-硝基苯基)甲酰胺(5a，62.0g，55％)；1H NMR(270MHz)δ(DMSO-d6)7.82(t，J＝7.9Hz，1H)，7.91(d，J＝7.9Hz，1H)，8.15(m，1H)，8.37(br，1H)，10.07(s，1H)，10.71(br，1H)；MS(EI)m/z 194(M+)。
2、4-羟基-5-硝基-3-戊基-3，4-二氢喹唑啉[6a]的制备 将N-(2-甲酰基-3-硝基苯基)甲酰胺(5a，20.0g，103mmol)和正-戊胺(23.9ml，206mmol)溶解于EtOH(240ml)中，并且混合物在室温搅拌3小时。混合物在减压下浓缩后，将EtOAc(100ml)加入到该残渣中，通过过滤收集产生的黄色结晶。该结晶用EtOAc洗涤并在真空下干燥得到4-羟基-5-硝基-3-戊基-3，4-二氢喹唑啉(6a，19.6g，72％)；1H NMR(270MHz)δ(CDCl3)0.91(t，J＝6.7Hz，3H)，1.26-1.38(m，4H)，1.67-1.78(m，2H)，3.21(dt，J＝13.9 and7.9Hz，1H)，3.77(ddd，J＝6.3，7.6 and 13.9Hz，1H)，6.57(s，1H)，6.90(s，1H)，7.30-7.41(m，2H)，7.80(dd，J＝1.7 and 7.6hz，1H)；MS(ES)m/z 264(M++1)。
3、N-(3-氨基-2-甲酰基苯基)甲酰胺[7a]的制备
将N-(2-甲酰基-3-硝基苯基)甲酰胺(5a，51.6g，0.27mol)溶解到THF(1L)中并加入20重量％Pd(OH)2/活性炭(4.96g)。于37℃ H2气氛下在油浴中进行氢化。搅拌4小时后，追加20重量％Pd(OH)2/活性炭(2.01g)并且氢化在37℃油浴中再继续进行。22小时之后，过滤混合物并且用THF洗涤分离的Pd催化剂。合并的滤液和洗涤液在减压下浓缩。产生的粗固体悬浮于H2O(500mL)中并且之后通过过滤收集橙色粉末，用水洗涤，并在真空中干燥得到N-(3-氨基-2-甲酰基苯基)-甲酰胺(7a，40.2g，92％)；1H NMR(270MHz)δ(CD3OD)旋转异构体A(较多的)*6.53(d，J＝7.9Hz，1H)，6.66(d，J＝7.9Hz，1H)，7.17(t，J＝7.9Hz，1H)，8.23(s，1H)，9.97(s，1H)；旋转异构体B(较少的)*6.33(d，J＝7.9Hz，1H)，6.54(d，J＝7.9Hz，1H)，7.17(t，J＝7.9Hz，1H)，8.40(s，1H)，10.05(s，1H).两种旋转异构体A和旋转异构体B的比率大约为2∶1。
1H NMR(400MHz)δ(DMSO-d6，120℃)；6.60(d，J＝8.0Hz，1H)，6.70(m，1H)，6.97(br，2H)，7.24(t，J＝8.0Hz，1H)，8.41(s，1H)，10.10(s，2H)；MS(EI)m/z 164(M+)。
4、由[6a]制备5-氨基-4-羟基-3-戊基-3，4-二氢喹唑啉[2a] 将4-羟基-5-硝基-3-戊基-3，4-二氢喹唑啉(6a，10.0g，38.0mmol)溶解于EtOAc-MeOH混合溶剂(2∶1，150ml)中并加入3％Pt-C(1.0g)。于室温在使用气瓶的H2气氛中进行氢化。2小时后，停止反应并过滤该混合物。滤液在减压下浓缩并且将所得到的残留油用短硅胶(100g)柱色谱(洗脱剂EtOAc/MeOH＝20/1)纯化，得到5-氨基-4-羟基-3-戊基-3，4-二氢喹唑啉(2a，6.56g，74％)；1H NMR(270MHz)δ(CD3OD)0.88(t，J＝6.9Hz，3H)，1.23-1.41(m，4H)，1.63-1.74(m，2H)，3.26-3.35(m，1H)，3.51-3.62(m，1H)，6.15(s，1H)，6.47-6.51(m，1H)，6.55(dd，J＝1.0 and 7.9Hz，1H)，7.06(t，J＝7.9Hz，1H)，7.43(s，1H)；MS(ES)m/z 234(M+)。
5、由[7a]制备5-氨基-4-羟基-3-戊基-3，4-二氢喹唑啉[2a] 将N-(3-氨基-2-甲酰基苯基)甲酰胺(7a，40.1g，0.24mol)和正-戊胺(34.0ml，0.29mol)溶解于EtOH(830mL)中并将该混合物在油浴中加热回流6小时。冷却到室温后，混合物在减压下浓缩。得到的残留油用硅胶柱色谱(洗脱剂只用EtOAc并且然后用EtOAc/MeOH＝20/1)纯化得到5-氨基-4-羟基-3-戊基-3，4-二氢喹唑啉(2a，48.8g，81％)。
6、(4S)-6-氯-4-乙基-7，8-二氢-4-羟基-1H-吡喃并[3，4-f]-中氮茚-3，6，10(4H)-三酮[3a]的制备 于室温向(S)-4-乙基-7，8-二氢-4-羟基-1H-吡喃并[3，4-f]中氮茚-3，6，10(4H)-三酮(8，40.7g，0.155mol)的二氯甲烷(750ml)溶液中滴加磺酰氯(15.0ml，187mmol)15分钟。该混合物于室温搅拌14小时，通过过滤收集产生的沉淀。将该固体悬浮于二氯甲烷(300ml)中并通过过滤收集固体，然后于真空下干燥得到第一批纯(4S)-6-氯-4-乙基-7，8-二氢-4-羟基-1H-吡喃并[3，4-f]中氮茚-3，6，10(4H)-三酮(3a，21.4g，46％)灰白色固体。合并滤液并在减压下浓缩得到残留固体，将该固体悬浮于二氯甲烷(200ml)中。通过过滤收集该固体并用二氯甲烷(200ml)洗涤。通过过滤收集该固体并在真空下干燥得到灰白色固体产物(3a，9.3g，20％)；1H NMR(270MHz，CDCl3)δ0.90-1.04(m，3H)，1.72-1.91(m，2H)，3.69(s，1H)，4.31-4.42(m，1H)，4.66-4.83(m，2H)，5.24(d，J＝17.3Hz，1H)，5.67(d，J＝17.3Hz，1H)，7.35(m，1H)。
DMSO-d6中的NMR波谱显示酮/烯醇式(1∶2)互变异构体混合物的存在。
1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ烯醇式0.68-0.89(m，3H)，1.65-1.90(m，2H)，4.59(s，2H)，5.31(s，2H)，6.36(br，1H)，6.75(s，1H)，10.99(s，1H)；酮式0.68-0.89(m，3H)，1.65-1.90(m，2H)，4.06-4.18(m，1H)，4.63-4.73(m，1H)，5.12-5.19(m，1H)，5.30-5.50(m，2H)，6.56(br，1H)，7.00(s，1H)。
7、(9S)-9-乙基-9-羟基-1-戊基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]-中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮[1a]的制备 将(4S)-6-氯-4-乙基-7，8-二氢-4-羟基-1H-吡喃并[3，4-f]中氮茚-3，6，10(4H)-三酮(3a，17.69g，59.4mmol)与5-氨基-4-羟基-3-戊基-3，4-二氢喹唑啉(2a，13.86g，56.0mmol)在乙酸(300mL)中混合，该混合物在油浴中于90℃加热2.5小时。冷却到室温后，混合物于减压下浓缩。向残留物中加入水(350mL)并通过过滤收集产生的固体，用乙醇-水(1∶3，120ml)洗涤并在减压下干燥得到(9S)-9-乙基-9-羟基-1-戊基-1H，12H-吡喃并[3”，4”6’，7’]中氮茚并[1’，2’6，5]吡啶并[4，3，2-de]喹唑啉-10，13(9H，15H)-二酮(1a，22.65g，88％)褐色固体。
1H NMR(270MHz，DMSO-d6))δ0.85-0.92(m，6H)，1.35-1.38(m，4H)，1.75-1.93(m，4H)，3.89-3.94(m，2H)，5.29(s，2H)，5.40(s，2H)，6.46(s，1H)，6.99(dd，J＝1.0，7.4Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.47(dd，J＝1.0，8.6Hz，1H)，7.62(dd，J＝7.4，8.6Hz，1H)，7.86(s，1H)；MS(ES)m/z 459(M++1)。
权利要求
1.一种制备式[1]化合物及其药学上可接受的盐的方法， 其中R1和R2独立地为氢、卤素、(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷氧基；R3为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C5)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C5)-烷氧基、羟基、卤素、氨基、(C3-C7)-环烷基、杂环和芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、(C1-C5)-烷氧基、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基或二-(C1-C5)-烷氨基；R4为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C10)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C5)-烷氧基、羟基、卤素、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基、二-(C1-C5)-烷氨基和(C3-C7)-环烷基、杂环和芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、烷氧基、卤素、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基和二-(C1-C5)-烷氨基，该方法包括将式[2]化合物或其盐， 其中R1、R3、R4与上述定义的相同并且R5为-OH或-O-(C1-C5)-烷基，与式[3]化合物缩合 其中R6为氯或溴。
2.根据权利要求1所述的制备式[1]化合物及其药学上可接受的盐的方法，其中R1和R2独立地为氢或(C1-C3)烷基；R3为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C5)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C5)-烷氧基、羟基、卤素、氨基、(C3-C7)-环烷基、杂环和芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、(C1-C5)-烷氧基和卤素；R4为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C8)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C3)-烷氧基、羟基、卤素、氨基、单-(C1-C3)-烷氨基、二-(C1-C3)-烷氨基、(C3-C7)-环烷基、杂环和芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、(C1-C5)烷氧基和卤素。
3.根据权利要求1或2所述的制备式[1]化合物的方法，其中R1和R2为氢；R3为氢、甲基、乙基、丙基、羟甲基、氨甲基、(甲氨基)甲基、(二甲氨基)甲基、氯甲基、三氟甲基；R4为甲基、乙基、正-丙基、1-甲基乙基、正-丁基、1，1-二甲基乙基、2-甲基丙基、2，2-二甲基丙基、正-戊基、3-甲基丁基、2-正-己基、3，3-二甲基丁基、正-庚基、正-辛基、苄基、苯乙基、2-(二甲氨基)乙基、2-(4-吗啉代)乙基、3-(二甲氨基)丙基、2-(吡啶-2-基)乙基、2-(吡啶-3-基)乙基、2-(4-甲氧苯基)乙基、2-(4-氯苯基)乙基或2-(4-氟苯基)乙基、3-苯丙基。
4.根据权利要求1所述的制备式[1A]化合物的方法， 包括将式[2A]化合物或其盐 与式[3A]化合物缩合
5.一种制备式[2]化合物的方法，包括a)将式[4]化合物或其盐进行臭氧分解， 其中R1、R2和R3与权利要求1定义的相同，以得到式[5]化合物 其中R1、R2和R3与权利要求1定义的相同，并且b)用胺R4-NH2将式[5]化合物环化以得到式[6]化合物， 其中R1、R2、R3、R4和R5与权利要求1定义的相同，并且c)将式[6]化合物的硝基进行氢化以得到式[2]化合物， 其中R1、R2、R3、R4和R5与权利要求1定义的相同。
6.一种由在权利要求5所述的步骤a)臭氧分解后得到的式[5]化合物制备式[2]化合物的方法，包括d)将式[5]化合物的硝基进行氢化， 其中R1、R2和R3与权利要求1定义的相同，以得到式[7]化合物 其中R1、R2和R3与权利要求1定义的相同，并且e)用胺R4-NH2将式[7]化合物环化以得到式[2]化合物，其中R1、R2、R3、R4和R5与权利要求1定义的相同。
7.一种制备式[2A]化合物的方法，包括a’)将式[4A]化合物或其盐进行臭氧分解， 以得到式[5A]化合物 b’)用正-戊胺将式[5A]化合物环化以得到式[6A]化合物， 并且c’)将式[6A]化合物的硝基进行氢化以得到式[2A]化合物，
8.一种由在权利要求7所述的步骤a’)臭氧分解后得到的式[5A]化合物制备式[2A]化合物的方法，包括d’)将式[5A]化合物的硝基进行氢化， 以得到式[7A]化合物 并且e’)用正-戊胺将式[7A]化合物环化以得到式[2A]化合物。
9.式[2]化合物 其中R1和R2独立地为氢、卤素、(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷氧基；R3为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C5)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C5)-烷氧基、羟基、卤素、氨基、(C3-C7)-环烷基、杂环或芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、(C1-C5)-烷氧基、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基或二-(C1-C5)-烷氨基；R4为氢；任选地被1～3个基团取代的(C1-C10)-烷基，所述基团独立地选自(C1-C5)-烷氧基、羟基、卤素、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基、二-(C1-C5)-烷氨基和(C3-C7)-环烷基、杂环或芳基，其中芳环任选地被1～3个基团取代，所述基团独立地选自羟基、烷氧基、卤素、氨基、单-(C1-C5)-烷氨基和二-(C1-C5)-烷氨基；并且R5为-OH或-O-(C1-C5)-烷基。
10.根据权利要求9的化合物，该化合物为5-氨基-4-羟基-3-戊基-3，4-二氢喹唑啉[2a]。
11.一种制备式[3]化合物的方法，包括将式[8]化合物卤化 以得到式[3]化合物 其中R6为氯或溴。
12.式[3]化合物 其中R6为氯或溴。
13.根据权利要求12所述的化合物，该化合物为(4S)-6-氯-4-乙基-7，8-二氢-4-羟基-1H-吡喃并[3，4-f]-中氮茚-3，6，10(4H)-三酮[3a]。
14.一种制备式[1]化合物的方法，包括将按照权利要求5、6、7或8限定的方法制备的式[2]化合物与按照权利要求11限定的方法制备的式[3]化合物进行缩合。
15.化合物，其是根据权利要求1～4中任意一项权利要求限定的方法，或权利要求5～8中任意一项权利要求限定的方法，或权利要求11限定的方法或权利要求14限定的方法制备的。
16.用于制备药剂的化合物，其是根据权利要求1～4中任意一项权利要求限定的方法或权利要求14限定的方法制备的。
17.根据权利要求16所述的化合物，用于制备治疗细胞增殖疾病的药剂。
18.根据权利要求16或17所述的化合物，用于制备治疗癌症的药剂。
19.本文前面限定的发明。
全文摘要
本发明涉及制备[1]化合物及其药学上可接受的盐的新方法，其中R
文档编号C07D491/14GK1777611SQ20048001058
公开日2006年5月24日 申请日期2004年2月20日 优先权日2003年2月21日
发明者福田弘志, 村田毅, 新妻谕, 须田仁三, 塚崎雅雄 申请人:中外制药株式会社