专利名称：一种穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法
技术领域：
本发明涉及到一种将酶水解和超临界CO2流体萃取技术结合提取穿山龙中薯蓣皂甙元并纯化的方法，尤其适用于医药中间体的制备，属于天然植物有效成分的提取方法技术领域。
背景技术：
薯蓣皂甙元属异螺旋甾烯烷的衍生物，分子式为C27H42O3，相对分子量为414.64，是制药工业中合成甾体避孕药的重要原料，也是甾体激素类药物中间体醋酸妊娠双烯醇酮的原料，由它可合成可的松、强的松、炔诺酮、肤轻松、地塞米松等各类甾体激素类药物，是目前倍受关注的天然化合物之一。
传统的薯蓣皂甙元提取分离技术是马敬中等利用酸水解和索氏提取法从穿山龙中提取粗品，通过乙醇或丙酮多次重结晶纯化。这种方法提取时间长、有机溶剂消耗量大，污染严重，提取率低。而超临界流体萃取法操作方便，提取时间短，提取率高，产物无溶剂残留，是近年来被大量采用的植物有效部位提取方式。薯蓣皂甙元的纯化方法通常选用硅胶柱层析分离(一般用CHCl3-CH3OH-H2O系统)，有时结合凝胶Sephadex LH-20柱层析、大孔树脂柱层析或DC-CC法进行分离。但是这种方法均比较复杂，溶剂消耗量大，成本较高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种在穿山龙饮片中用CO2流体萃取薯蓣皂甙元，再结合三氧化二铝柱层析的纯化方法，以提高有效成分的纯度。
本发明的技术方案是这样实现的这种穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，其特征在于先将穿山龙原料用硫酸进行水解，再用CO2流体对穿山龙中薯蓣皂甙元进行超临界萃取，将得到的粗品用三氧化二铝柱层析纯化。
所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，采用如下步骤完成A、将穿山龙饮片原料粉碎至10目，以1∶10的料液比在2.0mol/L的硫酸溶液中水解4.0h，用无水碳酸钠中和烘干备用；B、将烘干后的原料粉碎至40目，加入超临界流体萃取罐中，打开CO2钢瓶，以乙醇为携带剂开始萃取，萃取器温度为50～60℃，萃取压力为25～35MPa，CO2流量为40～45Kg/h，萃取时间为2～4h，得到薯蓣皂甙元粗品；C、采用三氧化二铝作为层析柱的固定相，氯仿或甲醇为流动相及洗脱液，干法装柱，将步骤B得到薯蓣皂甙元粗品进行柱层析纯化。
所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法中一种延伸技术方案是先将穿山龙饮片原料以每克加入100U纤维素酶或α-淀粉酶计，在40℃恒温水浴中对其进行酶解24h，再进行硫酸水解处理。
所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，步骤B所述的CO2气体经过净化器I后，进入冷凝器液化，然后由柱塞泵加压再进入净化器II进一步液化，通过管道进入萃取器底部，溶有溶质的CO2流体由萃取器顶部出来进入分离器，形成回流。
所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，设定一级分离器I的压力为6MPa，温度为60℃；二级分离器II的压力为6MPa，温度为45℃。
所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，步骤B所述的携带剂是95％的乙醇或无水乙醇。
所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，步骤C层析柱三氧化二铝和薯蓣皂甙元的粗品重量比为20∶1。
所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，步骤C层析柱加入洗脱液与薯蓣皂甙元粗品的重量比为500-1000∶1。
所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，步骤C三氧化二铝柱层析纯化方法包括A、将三氧化二铝在200℃的烘箱中活化4小时，干法装入层析柱中；B、将薯蓣皂甙元粗品溶于氯仿中，制成样品溶液；C、先用氯仿洗脱液通柱，再加入样品溶液；D、用氯仿洗脱，控制流速为2mL/min，每20mL洗脱液取样一次，在160～300mL收集薯蓣皂甙元纯品。
上述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，纯化步骤B将薯蓣皂甙元粗品溶于甲醇中制成样品溶液，纯化步骤C先用甲醇通柱，再加入样品溶液；纯化步骤D用甲醇洗脱，在200～300mL收集薯蓣皂甙元纯品。
本发明的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法的技术进步效果表现在
1、所得产物中薯蓣皂甙元的含量大大提高，为后续产品的开发提供了保障；2、本发明中超临界CO2萃取简化了操作过程，提取时间也由原来的20多个小时缩短到3小时；3、本发明提供的三氧化二铝柱层析洗脱的薯蓣皂甙元纯度高，薯蓣皂甙元的损失少，使用的洗脱剂量少，节约成本，操作简便；4、使薯蓣皂甙元的生产和纯化合为一体，有益于这种医药中间体的工业化。
图1是本发明的超临界CO2流体萃取部分流程图具体实施方式
实施例1(1)穿山龙饮片的水解将穿山龙饮片粉碎至10目，置于圆底烧瓶中，在2.0mol/L的硫酸溶液中水解，结束后用无水碳酸钠中和烘干备用；(2)超临界CO2流体萃取薯蓣皂甙元将烘干后的粉末粉碎至40目加入超临界流体萃取罐中，工艺流程如图1所示打开CO2钢瓶，气体经过净化器I后，进入冷凝器液化，然后由柱塞泵加压再进入净化器I I进一步液化，通过管道进入萃取器底部，设定分离器I的压力为6MPa，温度为60℃；二级分离器II的压力为6MPa，温度为45℃；萃取器温度55℃，萃取压力35MPa，CO2流量为40～45Kg/h，萃取时间为3h，95％乙醇为携带剂，萃取3小时后由分离釜中取样，得到薯蓣皂甙元粗品，粗品纯度54.64％；其提取率为2.23％。
(3)薯蓣皂甙元粗品的纯化称取三氧化二铝70g，在200℃的烘箱中活化4小时，干法装入20×40cm垂直放置的层析柱中，准确称取薯蓣皂甙元粗品0.35g溶于氯仿中，先用氯仿通柱，再加入样品溶液，用氯仿洗脱，控制流速为2mL/min。每20mL氯仿溶液取样一次，在160～300mL可得到纯度98％的薯蓣皂甙元纯品。其回收率可达95％以上。
实施例2(1)穿山龙饮片的水解每克穿山龙饮片加入100U纤维素酶，在40℃恒温水浴中对其进行酶解24h；将酶解后的穿山龙在2.0mol/L的硫酸溶液中水解4.0h，结束后用无水碳酸钠中和烘干备用；(2)超临界CO2流体萃取薯蓣皂甙元过程同实施例1，其提取率为2.43％，相对未经酶水解处理的穿山龙饮片提高0.2％。
(3)薯蓣皂甙元的纯化称取三氧化二铝70g，在200℃的烘箱中活化4小时，干法装入20×40cm垂直放置的层析柱中，准确称取薯蓣皂甙元粗品0.35g溶于甲醇中，先用甲醇通柱，再加入样品溶液，用甲醇洗脱，控制流速为2mL/min。每20mL甲醇溶液取样一次，在200～300mL可得到纯度98％的薯蓣皂甙元纯品。其回收率可达90％以上。
实施例3(1)穿山龙饮片的水解每克穿山龙饮片原料加入100Uα-淀粉酶，在40℃恒温水浴中对其进行酶解24h；(2)超临界CO2流体萃取薯蓣皂甙元以无水乙醇作携带剂，过程同实施例1，其提取率为2.66％，相对未经酶水解处理的穿山龙饮片提高0.43％。
(3)薯蓣皂甙元的纯化过程同实施例1本发明的超临界CO2流体萃取设备选自江苏南通华安超临界萃取有限公司，纤维素酶产于何氏璧生物技术有限公司，α-淀粉酶产于北京双旋微生物培养基制品厂。
本发明列举的实施例旨在进一步地阐述工艺方法，而不对本发明的范围构成任何限制。本发明实例得到的产品和经由本发明权利要求书1-10所述的方法均可得到薯蓣皂甙元纯化产品。
权利要求
1.一种穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，其特征在于先将穿山龙原料用硫酸进行水解，再用CO2流体对穿山龙中薯蓣皂甙元进行超临界萃取，将得到的粗品用三氧化二铝柱层析纯化。
2.根据权利要求1所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，其特征在于采用如下步骤完成A、将穿山龙饮片原料粉碎至10目，以1∶10的料液比在2.0mol/L的硫酸溶液中水解4.0h，用无水碳酸钠中和烘干备用；B、将烘干后的原料粉碎至40目，加入超临界流体萃取罐中，打开CO2钢瓶，以乙醇为携带剂开始萃取，萃取器温度为50～60℃，萃取压力为25～35MPa，CO2流量为40～45Kg/h，萃取时间为2～4h，得到薯蓣皂甙元粗品；C、采用三氧化二铝作为层析柱的固定相，氯仿或甲醇为流动相及洗脱液，干法装柱，将步骤B得到薯蓣皂甙元粗品进行柱层析纯化。
3.根据权利要求1所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，其特征在于先将穿山龙饮片原料以每克加入100U纤维素酶或α-淀粉酶计，在40℃恒温水浴中对其进行酶解24h，再进行硫酸水解处理。
4.根据权利要求2所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，其特征在于步骤B所述的CO2气体经过净化器I后，进入冷凝器液化，然后由柱塞泵加压再进入净化器II进一步液化，通过管道进入萃取器底部，溶有溶质的CO2流体由萃取器顶部出来进入分离器，形成回流。
5.根据权利要求4所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，其特征在于设定一级分离器I的压力为6MPa，温度为60℃；二级分离器II的压力为6MPa，温度为45℃。
6.根据权利要求2所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，其特征在于步骡B所述的携带剂是95％的乙醇或无水乙醇。
7.根据权利要求2所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，其特征在于步骤C层析柱三氧化二铝和薯蓣皂甙元的粗品重量比为20∶1。
8.根据权利要求2所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，其特征在于步骤C层析柱加入洗脱液与薯蓣皂甙元粗品的重量比为500-1000∶1。
9.根据权利要求2所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，其特征在于步骤C三氧化二铝柱层析纯化方法包括A、将三氧化二铝在200℃的烘箱中活化4小时，干法装入层析柱中；B、将薯蓣皂甙元粗品溶于氯仿中，制成样品溶液；C、先用氯仿洗脱液通柱，再加入样品溶液；D、用氯仿洗脱，控制流速为2mL/min，每20mL洗脱液取样一次，在160～300mL收集薯蓣皂甙元纯品。
10.根据权利要求9所述的穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，其特征在于纯化步骤B将薯蓣皂甙元粗品溶于甲醇中制成样品溶液，纯化步骤C先用甲醇通柱，再加入样品溶液；纯化步骤D用甲醇洗脱，在200～300mL收集薯蓣皂甙元纯品。
全文摘要
本发明提供一种穿山龙中薯蓣皂甙元的纯化方法，其特征在于先将穿山龙原料用硫酸进行水解，再用CO
文档编号C07J71/00GK1772762SQ20051001296
公开日2006年5月17日 申请日期2005年11月11日 优先权日2005年11月11日
发明者魏福祥, 王焕 申请人:河北科技大学