专利名称：一种从麦冬皂甙中除去黄酮的方法
技术领域：
本发明涉及中药有效部位的分离纯化技术领域，具体涉及从麦冬皂甙中除去黄酮的分离纯化方法。
背景技术：
麦冬为百合科沿阶草属植物(Ophiopogon japonicus(L.f.)ker-Gawl)的干燥块根，是一味常用滋阴中药，始载于《神农本草经》。它具有养阴生津，润肺清心的功能，可用于热病伤津，心烦口渴等症。现代研究发现麦冬含有甾体皂甙、高异黄酮、多糖、氨基酸等成分。其中麦冬皂甙类成分具有一定的抗心肌缺血、抗心律失常作用，临床用于冠心病心绞痛取得了一定疗效。
本发明人已在中国专利申请01131988.7中公开了一种含麦冬总皂甙大于60％的麦冬提取物，该提取物是采用大孔树脂进行纯化获得的。但该提取物中仍含有大量无药效作用的高异黄酮，如何将这些杂质去除，以提高麦冬皂甙提取物的纯度，至今没有一种有效的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种可靠、稳定，操作简便的从麦冬皂甙中除去黄酮的方法。
本发明公开的从麦冬皂甙中除去黄酮的方法是将麦冬皂甙提取物采用大孔吸附树脂纯化，然后用碱性洗脱剂洗脱除去高异黄酮类成分。
本发明公开的从麦冬皂甙中除去黄酮的方法包括下列步骤1.麦冬皂甙总提取液制备取药材一定量，加10倍量提取溶媒回流提取3次，每次1小时，提取液回收乙醇后，以2000r/min离心10分钟，离心后的药液定容到一定浓度(g生药/ml)。
本发明所述提取溶媒可以是60％-90％乙醇溶液或60％-90％甲醇溶液。
2.麦冬总皂甙的纯化取上述提取液上大孔树脂柱，上样吸附一段时间后达到吸附平衡，以碱性洗脱剂除杂，再用水洗至流出液呈中性，然后用极性洗脱液洗脱并收集，其洗脱物中麦冬总皂甙含量以分光光度法测定可达70％左右，从生药到总皂甙富集物，转移率达到60％左右。
本发明所述大孔树脂是指苯乙烯型树脂包括D-101、DA-201、HPD-100等。
本发明所述碱性洗脱剂是指0.01-0.2mol/l的NaOH、氨水等碱性水溶液；极性洗脱剂是指40-80％乙醇溶液、40-80％甲醇溶液。
本发明所述提取液上大孔树脂浓度可以是0.5g-1.5g生药/ml；上样量是1.5g-3.0g生药/g干树脂；吸附时间可以是1hr-8hr。
用本发明方法制得的富集物含麦冬总皂甙含量达70％，其关键在于碱性洗脱剂的使用与否。分别测定上柱前后，用碱性洗脱剂与否，富集物样品中的总皂甙含量，结果见下表表1 不同洗脱溶剂的洗脱结果比较洗脱溶剂总皂甙含量(mg总皂甙/g生药) 转移率 纯度(％) (％)上柱药液7.7407 100％ 9.0不用碱性溶液在350～430nm之间无吸收峰用碱性溶液 5.0220 65％ 78％从表中数据可知(1)未用碱性洗脱剂洗脱的样品洗脱液固体量多，但在350～430nm之间无最大吸收峰。主要是因为样品中的杂质(高异黄酮类物质)太多，掩盖了皂甙的特征吸收。前期研究与文献报道均表明高异黄酮类物质的药理作用与皂甙的不同，不能增强皂甙的作用，对于皂甙来说，高异黄酮类物质为杂质，除去它，可以提高总皂甙的纯度。
(2)用碱性洗脱剂洗脱的样品在350～430nm之间，出现最大吸收峰(见图1)，转移率和纯度都大于50％。原因主要是麦冬皂甙为中性皂甙，NaOH溶液的使用基本不造成皂甙类成分的损失；而高异黄酮结构中因为含有酚性羟基，具有酸性，碱性洗脱剂可以与高异黄酮反应，从而除去提取物中高异黄酮类物质，使样品较纯净。
因而，先用碱性洗脱剂冲洗大孔树脂柱，再用水洗至流出液呈中性，然后用极性洗脱剂洗脱并收集，是比较理想的麦冬皂甙富集纯化的洗脱方式。
本发明采用大孔树脂富集麦冬总皂甙，用碱性洗脱剂除去黄酮类物质，使麦冬总皂甙的纯度达70％左右、转移率大于50％。该方法稳定，操作简单，树脂再生容易。
图1、各部分洗脱液的UV吸收曲线图其中1为碱性洗脱剂洗脱后醇洗脱液，2为麦冬皂甙OD标准品，3为碱性洗脱剂洗脱部分，4水洗脱部分。
具体实施例方式实施例1取药材一定量，60％乙醇10倍量回流提取3次，每次1小时，提取液回收乙醇后，以2000r/min离心10分钟，离心后的药液定容到0.9g生药/ml，作为上柱供试液。采用D101树脂纯化麦冬总皂甙，其上样浓度为0.9g生药/ml，上样量2.8g生药/g干树脂，上样吸附1hr后开始以0.1mol/l氨水-50％乙醇作为洗脱剂洗脱，其洗脱物中麦冬总皂甙含量可达70％，从生药到总皂甙富集物，转移率达到62％。
实施例2取药材一定量，70％乙醇10倍量回流提取3次，每次1小时，提取液回收乙醇后，以2000r/min离心10分钟，离心后的药液定容到1.2g生药/ml，作为上柱供试液。采用HPD100树脂纯化麦冬总皂甙，其上样浓度为1.2g生药/ml，上样量2.0g生药/g干树脂，上样吸附5hr后开始以0.05mol/lNaOH-60％乙醇作为洗脱剂洗脱，其洗脱物中麦冬总皂甙含量可达72％，从生药到总皂甙富集物，转移率达到59％。
权利要求
1.一种从麦冬皂甙中除去黄酮的方法，该方法是将麦冬皂甙提取物采用大孔吸附树脂纯化，其特征在于在将麦冬皂甙提取物上大孔吸附树脂后用碱性洗脱剂除去高异黄酮类成分，然后再用极性洗脱液洗脱。
2.根据权利要求1所述的从麦冬皂甙中除去黄酮的方法，其特征在于该方法包括下列步骤1)麦冬皂甙总提取液制备取药材一定量，加10倍量提取溶媒回流提取3次，每次1小时，提取液回收乙醇后，以2000r/min离心10分钟，离心后的药液定容到一定浓度；2)麦冬总皂甙的纯化取上述提取液上大孔树脂柱，上样吸附一段时间后达到吸附平衡，以碱性洗脱剂除杂，再用水洗至流出液呈中性，然后用极性洗脱液洗脱并收集，即得。
3.根据权利要求1或2所述的从麦冬皂甙中除去黄酮的方法，其特征在于其中所述的大孔树脂选自苯乙烯型树脂。
4.根据权利要求3所述的从麦冬皂甙中除去黄酮的方法，其特征在于其中所述的苯乙烯型树脂选自D-101、DA-201或HPD-100。
5.根据权利要求1或2所述的从麦冬皂甙中除去黄酮的方法，其特征在于其中所述的碱性洗脱剂采用0.01-0.2mol/l的NaOH或氨水。
6.根据权利要求1或2所述的从麦冬皂甙中除去黄酮的方法，其特征在于其中所述的极性洗脱剂采用40-80％乙醇溶液或40-80％甲醇溶液。
7.根据权利要求2所述的从麦冬皂甙中除去黄酮的方法，其特征在于其中所述的从药材中提取麦冬皂甙的提取溶媒采用60-90％乙醇溶液或60-90％甲醇溶液。
8.根据权利要求2所述的从麦冬皂甙中除去黄酮的方法，其特征在于其中所述的提取液上大孔树脂浓度采用0.5g-1.5g生药/ml；上样量为1.5g-3.0g生药/g干树脂；吸附时间为1hr-8hr。
全文摘要
本发明涉及从麦冬皂甙中除去黄酮的方法。该方法是将麦冬皂甙提取物采用大孔吸附树脂纯化，然后用碱性洗脱剂洗脱除去高异黄酮类成分。本发明方法大大提高了麦冬总皂甙的纯度，富集物中含麦冬总皂甙可达70％左右。本发明方法稳定、可靠，能有效地从麦冬总皂甙富集物中除去黄酮。
文档编号C07J71/00GK1546517SQ20031010942
公开日2004年11月17日 申请日期2003年12月15日 优先权日2003年12月15日
发明者徐德生, 冯怡, 吴笑如 申请人:上海中医药大学