专利名称：海绵核苷的合成的制作方法
技术领域：
本发明涉及海绵核苷(也被称为9-(β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤或2-甲氧基腺苷)的合成并涉及适用于合成海绵核苷的中间产物的合成。
天然产物海绵核苷在1945年首先从佛罗里达海岸收集的海绵，隐南瓜海绵(Cryptotethia crypta)中分离得到(Bergmann和Feeney，J.Org.Chem.1951，16，981；出处同上的1956，21，226)。海绵核苷被认为是一种罕见的核苷，因为它不仅是第一个在自然界中发现的甲氧基嘌呤，而且是最早从动物组织中分离出来的O-甲基化合物之一。
Bergmann和Stempien描述了合成海绵核苷的方法(J.Org.Chem.1957，22，1575)。这种方法包括以下步骤将氯汞-2-甲氧基腺嘌呤与2，3，5-三-O-苯甲酰基-D-呋喃核糖基氯化物在二甲苯中回流，形成9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤，用氯仿提取，然后在甲醇中与甲醇钠一起回流 以31％的粗收率获得了产生的海绵核苷，然后从热水中重结晶，得到熔点为191-191.5℃和旋光性为-43.5°(NaOH)的海绵核苷。
这种方法的缺点是不能以高收率制得海绵核苷。更进一步的缺点是，因为与安全地除去汞残留物相关的问题，这种方法不太可能适用于大规模地合成海绵核苷。
已对这种方法进行了几种改进，这些改进允许以高收率和高纯度，以及大规模地合成海绵核苷。
现已发现，9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤能够通过使2-甲氧基腺嘌呤与1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖反应而获得。与Bergmann和Stempien描述的方法相比，这种反应能以更高的收率制备9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤。此外，这种反应不产生任何汞残留物，并能在室温下实现。这使得该反应比Bergmann和Stempien的方法更容易按比例扩大规模。
因此，根据本发明的第一方面，提供了合成海绵核苷的方法，该方法包括使1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖与2-甲氧基腺嘌呤反应，形成9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤，然后将9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护，形成海绵核苷。
根据本发明，也提供了合成9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤的方法，该方法包括使1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖与2-甲氧基腺嘌呤反应。
根据本发明，进一步提供了1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖在合成海绵核苷或9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤中的用途。
优选地，1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖与2-甲氧基腺嘌呤的反应是通过将这些反应物混悬或混合在无水乙腈中并用三甲基甲硅烷基三氟甲基磺酸酯(TMSOTf)处理混悬液或混合液来实现的，优选在室温下。
优选然后分离出制得的9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤。这可以通过用二氯甲烷接触反应混合物，并且优选洗涤混合物(例如用氢氧化钠水溶液和盐水)，然后使9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤从有机相(优选在用硫酸镁干燥并过滤后)中沉淀出来。优选然后将沉淀物过滤、洗涤(例如，用甲基叔丁基醚)并干燥。
形成9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤的优选方法显示在以下方案2的步骤3中。形成和分离9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤的优选方法描述在以下的实施例中。
优选地，用甲醇钠/甲醇处理，使9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护，形成海绵核苷。
在Bergmann和Stempien的方法中，用甲醇中的甲醇钠处理并回流氯汞-2-甲氧基腺嘌呤与2，3，5-三-O-苯甲酰基-D-呋喃核糖基氯化物偶联的产物。然而，已经发现可以通过在环境温度下用甲醇钠的甲醇溶液处理，除去9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤的苯甲酰基团。使用这种方法可以高收率和高纯度获得期望产物。在以下实施例中，纯度为98％(用面积LC法)并且收率为86％。
因此，优选在室温下用甲醇钠/甲醇处理，将9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护，形成海绵核苷。
根据本发明的第二方面，提供了合成海绵核苷的方法，该方法包括在室温下用甲醇钠/甲醇处理9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤，制备海绵核苷。
根据Bergmann和Stempien的方法，将氯汞-2-甲氧基腺嘌呤与2，3，5-三-O-苯甲酰基-D-呋喃核糖基氯化物之间的偶联反应的产物分离，溶解于无水甲醇中，并用甲醇钠的甲醇溶液回流。然后在真空中干燥溶液，并用醚研磨半固体残留物。然后将剩下的粗制海绵核苷溶于热水中，用氢氧化钠使溶液变得微碱性，并将该溶液从棕色、油状残留物中倾析出来。然后用盐酸使提取物为酸性，冷冻干燥除去所有的液体。用氯仿提取残留的、棕色固体，蒸发干燥提取物至干，留下白色的残留物海绵核苷(31％收率)。
已经发现，如果通过用甲醇钠/甲醇处理，使9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护而制备的海绵核苷，是通过使海绵核苷与乙酸接触或将海绵核苷混悬在乙酸中(优选在室温下)，然后分离海绵核苷而获得的，那么可以高收率和高纯度获得海绵核苷。
因此，优选通过使海绵核苷与乙酸接触，或将海绵核苷混悬在乙酸中，然后分离海绵核苷，来获得通过使9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护而制备的海绵核苷。
根据本发明的第三方面，提供了合成海绵核苷的方法，该方法包括将9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护，以形成海绵核苷，并通过使海绵核苷接触乙酸或将海绵核苷混悬在乙酸中，然后分离海绵核苷而获得海绵核苷。
可以通过过滤(优选在浓缩反应混合物之后)、洗涤(例如，用甲基叔丁基酮)并干燥，来分离海绵核苷。
在以下方案2的步骤4中显示了使9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护的优选方法。在以下的实施例中描述了使9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护并获得制备的海绵核苷的优选方法。
已经发现，也可以通过将海绵核苷溶解在有机酸中，然后使溶解的海绵核苷从有机酸中结晶出来，来提高海绵核苷的收率和纯度。
因此，优选将9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护后获得的海绵核苷溶解于有机酸中，然后从有机酸中结晶出来。
根据本发明的第四方面，提供了合成海绵核苷的方法，该方法包括使9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护，以形成海绵核苷，并将海绵核苷溶解于有机酸中，然后使溶解的海绵核苷从有机酸中结晶出来。
根据本发明第三方面的方法，使海绵核苷接触乙酸接触或使海绵核苷混悬在乙酸中，并分离出海绵核苷后，优选地将海绵核苷溶解于有机酸中并结晶。然而，在本发明的一些实施方案中，将通过使9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护制备的海绵核苷溶解在有机酸中，然后使海绵核苷从有机酸中结晶出来，而没有首先实施本发明的第三方面的方法，可能是理想的。
可以通过使有机酸与有机醇(在该有机醇中海绵核苷部分可溶)接触，使海绵核苷从有机酸中结晶出来。虽然认为可以替代使用异丙醇，但优选的有机醇是乙醇。适当的有机酸是乙酸。
通过以下步骤可以将海绵核苷溶解在乙酸中在乙酸中形成海绵核苷的混悬液、加热混悬液(例如到70℃)，然后如果需要，进一步使乙酸与热的混悬液接触，直至形成溶液。然后通过使溶液与乙醇接触，并冷却至室温，可以使海绵核苷从溶液中结晶出来。
使用任何合适的方法，可以将结晶的海绵核苷从乙酸/有机醇中分离出来。优选的方法是过滤、用甲基叔丁基酮洗涤、然后干燥。
在以下方案2的步骤5中显示了结晶海绵核苷的优选方法。在以下的实施例中描述了将海绵核苷溶解在乙酸中，并结晶然后分离海绵核苷的优选方法。
根据Bergmann和Stempien的方法，2-甲氧基腺嘌呤是通过如下步骤形成的在150℃将2-氯腺嘌呤、无水甲醇中的钠溶液与另外量的无水甲醇的混合物加热5小时，然后提取制得的2-甲氧基腺嘌呤。然而，2-甲氧基腺嘌呤的收率是相对低的(50％)。
现已开发了改进的后处理(work up)，其包括调节pH至9.5(±0.5)并过滤所述产物。
因此，优选地将2-氯腺嘌呤与甲醇钠/甲醇的混合物加热，以形成2-甲氧基腺嘌呤，然后将混合物的pH调节至pH 9.5(±0.5)，然后分离2-甲氧基腺嘌呤。
根据本发明的第五方面，提供了合成海绵核苷的方法，该方法包括将2-氯腺嘌呤与甲醇钠/甲醇的混合物加热，以形成2-甲氧基腺嘌呤，然后将混合物的pH调节至pH 9.5(±0.5)，分离2-甲氧基腺嘌呤，并且由分离出来的2-甲氧基腺嘌呤形成海绵核苷。
根据本发明，还提供了合成2-甲氧基腺嘌呤的方法，该方法包括将2-氯腺嘌呤与甲醇钠/甲醇的混合物加热，以形成2-甲氧基腺嘌呤，将混合物的pH调节至pH 9.5(±0.5)，然后分离2-甲氧基腺嘌呤。
优选地，将2-氯腺嘌呤与甲醇钠/甲醇的混合物加热至低于150℃，更优选地至100℃。优选地，将混合物冷却并用水稀释。优选地，用盐酸(优选将混合物加热至60℃)将混合物的pH调节至pH 9.5(±0.5)。可以通过过滤、洗涤(例如，用水然后用甲醇)、然后干燥而分离2-甲氧基腺嘌呤。
在以下方案2的步骤2中显示了合成2-甲氧基腺嘌呤的优选方法。在以下的实施例中描述了合成和分离2-甲氧基腺嘌呤的优选方法。这种方法以高收率制备2-甲氧基腺嘌呤，并适合大规模的合成(直到150g)。
通过任何合适的方法，可以由分离出来的2-甲氧基腺嘌呤形成海绵核苷。优选地根据如上所述本发明的方法通过以下步骤形成海绵核苷使2-甲氧基腺嘌呤与1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖反应，以制备9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤，然后将9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护以制备海绵核苷，然后优选地将制得的海绵核苷结晶。
根据本发明，也提供了合成海绵核苷的方法，该方法包括在低于150℃(优选地在100℃)将2-氯腺嘌呤与甲醇钠/甲醇加热，以形成2-甲氧基腺嘌呤，然后由2-甲氧基腺嘌呤形成海绵核苷。
根据本发明，进一步提供了合成2-甲氧基腺嘌呤的方法，该方法包括在低于150℃(优选地在100℃)将2-氯腺嘌呤与甲醇钠/甲醇加热。
优选地，例如通过氨基化，由2，6-二氯嘌呤合成2-氯腺嘌呤。Brown和Weliky(J.O.C.1958 Vol.23，第125页)描述了2，6-二氯嘌呤至2-氯腺嘌呤的氨基化。在100℃将2，6-二氯嘌呤与50体积的用氨饱和的甲醇一起加热17小时。冷却后可观察到晶体。蒸发上清液，将残留物和晶体溶解在1N NaOH中。将溶液过滤，用乙酸酸化得到期望的产物。然而，由于用1N NaOH溶解残留物的困难，重复该过程的努力导致不好的收率。根据本发明，已开发了合成2-氯腺嘌呤的改良方法。
根据本发明，提供了合成2-氯腺嘌呤的方法，该方法包括用饱和的甲醇氨处理2，6-二氯嘌呤，以形成2-氯腺嘌呤，用水稀释，然后分离制得的2-氯腺嘌呤。
根据本发明的第六方面，提供了合成海绵核苷的方法，该方法包括通过用饱和的甲醇氨处理2，6-二氯嘌呤将2，6-二氯嘌呤转换成2-氯腺嘌呤，用水稀释，分离制得的2-氯腺嘌呤，然后由分离出来的2-氯腺嘌呤形成海绵核苷。
使用任何合适的方法，可以由分离出来的2-氯腺嘌呤形成海绵核苷，但是优选使用根据本发明的方法。
根据本发明的另外方面，提供了合成2-甲氧基腺嘌呤的方法，该方法包括通过用饱和的甲醇氨处理2，6-二氯嘌呤将2，6-二氯嘌呤转换成2-氯腺嘌呤，用水稀释，分离制得的2-氯腺嘌呤，然后由分离出来的2-氯腺嘌呤形成2-甲氧基腺嘌呤。
根据本发明的另外方面，提供了合成9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤的方法，该方法包括通过用饱和的甲醇氨处理2，6-二氯嘌呤将2，6-二氯嘌呤转换成2-氯腺嘌呤，用水稀释，分离制得的2-氯腺嘌呤，然后由分离出来的2-氯腺嘌呤形成9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤。
优选地，将2，6-二氯嘌呤与饱和的甲醇氨加热，优选加热到100℃。
优选地，将2，6-二氯嘌呤用少于50体积，优选10体积的饱和的甲醇氨处理。
在以下方案2的步骤1中显示了合成2-氯腺嘌呤的优选方法。
可以通过过滤、洗涤(例如用甲醇)和干燥而分离2-氯腺嘌呤。在以下的实施例中描述了合成并分离2-氯腺嘌呤的优选方法。用877g的2，6-二氯腺苷成功地进行了这种方法，并得到725g(92mol％)纯度为96％(峰面积LC)的产物。
根据本发明，还提供了合成海绵核苷的方法，该方法包括将2，6-二氯嘌呤转换成2-氯腺嘌呤，然后由2-氯腺嘌呤形成海绵核苷。
根据本发明，进一步提供了2，6-二氯嘌呤在合成海绵核苷中的用途。
以下的方案1显示了从2，6-二氯嘌呤合成海绵核苷的连续步骤。
方案中每个合成步骤后面括号中的数字对应于与对该步骤的改进相关的本发明的特定方面。
方案1.合成海绵核苷中的步骤尽管通过合并根据本发明第一、第二、第三、第四、第五和第六方面的改进的方法制备海绵核苷是优选的，但将要理解，通过使用本发明的任一不同方面，或本发明两个或更多个不同方面的任意组合，相对于Bergmann和Stempien方法可以获得海绵核苷收率的改进。如果方法没有合并本发明的全部6个方面，剩余的步骤可以如Bergmann和Stempien所述的或替换的方法来实现。
例如，能够通过本发明第一方面的方法来形成9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤，然后使用Bergmann和Stempien所描述的方法使这种被保护的中间产物脱保护。然后能够通过本发明第三方面的方法获得通过脱保护制得的海绵核苷，并且任选地采用本发明第四方面的方法进行结晶。
在其他的实施方案中，从2-氯腺嘌呤、2-甲氧基腺嘌呤或9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤开始，而不是从2，6-二氯嘌呤开始进行海绵核苷的合成，可能是优选的。此外，优选的是合成海绵核苷的以后步骤(方案1中所示)全部根据本发明适当的方面进行。然而，可以使用本发明的任一不同方面，或本发明两个或多个不同方面的任意组合，并且剩余的步骤按照Bergmann和Stempien所述的或替换的方法来实现。
因此，可以以下面的任一组合使用本发明的不同方面第一方面+第二方面；第一方面+第三方面；第一方面+第四方面；第一方面+第五方面；第一方面+第六方面；第二方面+第三方面；第二方面+第四方面；第二方面+第五方面；第二方面+第六方面；第三方面+第四方面；第三方面+第五方面；第三方面+第六方面；第四方面+第五方面；第四方面+第六方面；或第五方面+第六方面；第一方面+第二方面+第三方面；第一方面+第二方面+第四方面；第一方面+第二方面+第五方面；第一方面+第二方面+第六方面；第一方面+第三方面+第四方面；第一方面+第三方面+第五方面；第一方面+第三方面+第六方面；第一方面+第四方面+第五方面；第一方面+第四+第六方面；第一方面+第五方面+第六方面；第二方面+第三方面+第四方面；第二方面+第三方面+第五方面；第二方面+第三方面+第六方面；第二方面+第四方面+第五方面；第二方面+第四方面+第六方面；第二方面+第五方面+第六方面；第三方面+第四方面+第五方面；第三方面+第四方面+第六方面；第三方面+第五方面+第六方面；或第四方面+第五方面+第六方面；第一方面+第二方面+第三方面+第四方面；第一方面+第二方面+第三方面+第五方面；第一方面+第二方面+第三方面+第六方面；第一方面+第二方面+第四方面+第五方面；第一方面+第二方面+第四方面+第六方面；第一方面+第二方面+第五方面+第六方面；第一方面+第三方面+第四方面+第五方面；第一方面+第三方面+第四方面+第六方面；第一方面+第三方面+第五方面+第六方面；第一方面+第四方面+第五方面+第六方面；第二方面+第三方面+第四方面+第五方面；第二方面+第三方面+第四方面+第六方面；第二方面+第三方面+第五方面+第六方面；第二方面+第四方面+第五方面+第六方面；或第三方面+第四方面+第五方面+第六方面；第一方面+第二方面+第三方面+第四方面+第五方面；第一方面+第二方面+第三方面+第四方面+第六方面；或第一方面+第三方面+第四方面+第五方面+第六方面。
与Bergmann和Stempien的方法相比，本发明的方法实施起来更简单得多，以更大的收率提供海绵核苷，并能用于大规模的合成海绵核苷(或合成用于合成海绵核苷的中间产物)。
现在描述本发明实施方案，仅通过实施例的方式并参考附随的方案2，方案2显示了根据本发明优选实施方案的海绵核苷的合成。
实施例海绵核苷的合成
试剂和条件1.MeOH/NH3，100℃(压热器)，16h2.NaOMe，MeOH，100℃(压热器)，24h3.1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖，TMSOTf，MeCN，rt，4h4.NaOMe，MeOH，rt，16h5.AcOH，EtOH，70℃方案2.海绵核苷的合成2-氯腺嘌呤的制备 将2，6-二氯嘌呤(0.877kg，4.64mol)放入20L压热器中，用甲醇氨处理(7.0N，6.95kg)。密封压热器，开始搅拌并将混合物加热到内部温度为100℃。将反应混合物维持在100℃17小时，然后冷却至环境温度。一旦完全冷却，将压热器打开，用水(3.5kg)稀释反应混合物。通过吸滤收集所得到的固体混悬物并用甲醇(2×0.7kg)洗涤滤饼，然后在40℃的真空干燥箱中干燥至恒重。分离2-氯腺嘌呤，得到淡黄色固体(0.725kg，4.28mol，92％)。
δH(250MHz；d6-DMSO)；7.67(2H，s，NH2)，8.15(1H，s，CH)，12.40(1H，br s，NH)LC96％，由峰面积计算2-甲氧基腺嘌呤的制备 通过与无水甲苯(2×200mL)一起共-蒸发使2-氯腺嘌呤(100g，0.59mmol)干燥，然后放入2.0L压热器中，用甲醇钠(25％w/w，1000ml，4.63mol)处理。密封压热器，开始搅拌并将混合物加热到内部温度为100℃。将反应混合物维持在100℃24小时，然后冷却至环境温度。一旦完全冷却，将压热器打开，用水(1000mL)稀释混悬液。在减压下蒸发所得到的溶液，得到最终体积1400mL；向此溶液中加入水(600mL)得到最终体积2000mL。将此溶液转移到备有高架搅拌器、pH计和温度计的3.0L的3-颈烧瓶中。将溶液加热至60℃(内部温度)，然后以控制的速率加入50％盐酸水溶液，以便将pH调节到9.5(±0.5)。将所得到的混悬液在60℃下搅拌1小时，然后慢慢冷却到室温，再搅拌16小时。使用华特门(Whatman)3号滤纸过滤混悬液并用水(200mL)和甲醇(2×200mL)洗涤滤饼。在真空50℃下干燥固体，得到灰白色固体形式的2-甲氧基腺嘌呤(71g，73mol％)。
δH(250MHz；d6-DMSO)；3.79(3H，s，OCH3)，7.18(2H，br s，NH2)，7.92(1H，br s，CH)LC97％，由峰面积计算9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤的制备
通过与无水乙腈(2×60mL)一起共-蒸发使2-甲氧基腺嘌呤(11g，68mmol)与1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖(41g，81mmol)的混合物干燥。向无水乙腈中的该混合物(328ml)中用10分钟滴加三甲基甲硅烷基三氟甲基磺酸酯(29ml，36g，162mmol)(观察到少量的放热，温度24-27℃)。在加入的过程中观察到悬浮物质逐渐地被溶剂化。在完成加入后，将反应混合物在环境温度下搅拌4小时。然后用二氯甲烷(328mL)稀释反应混合物，用1N氢氧化钠水溶液(200mL)和盐水(200mL)洗涤。将有机相用硫酸镁(20g)干燥并过滤。然后在减压下浓缩溶液至其最初体积的大约四分之一，此时开始形成沉淀物。静置1小时后，过滤沉淀物并用甲基叔丁基醚(2×100mL)洗涤滤饼。在室温下干燥固体，得到白色固体形式的9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤(31g，75mol％)。
δH(250MHz；CDCl3)；3.92(3H，s，OCH3)，4.64-4.72(1H，m，CH)，4.79-4.88(2H，m，2xCH)，5.79(2H，br s，NH2)，6.29(1H，d J 3.0，异头CH)，6.38-6.46(2H，m，2xCH)，7.35-7.43(6H，m，6xCH)，7.52-7.60(3H，m，3xCH)，7.78(1H，s，CH)，7.95-8.00(6H，m，6xCH)。
LC 97％，由峰面积计算9-(β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤(海绵核苷)的制备
将无水甲醇(400mL)中的9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤(39.6g，65mmol)的混悬液用甲醇钠(378mg，7mmol，0.1eq)处理。在环境温度下将混合物搅拌24小时，然后加入乙酸(1g)并将混悬液搅拌10分钟。在减压下浓缩混合物至一半体积，并且过滤沉淀物。用甲基叔丁基酮(2×40mL)洗涤滤饼，干燥得到白色固体形式的9-(β-D-呋喃糖基)-2-甲氧基腺嘌呤(16.7g 86mol％)。
δH(250MHz；CD3OD)；3.73(1H，dd J 12.4，3.4，CHab)，3.86(1H，dd J 12.4，3.4，CHab)，3.92(3H，s，OCH3)，4.12(1H，dd J 6.0，3.0，CH)，4.34(1H.dd J 5.0，3.3，CH)，4.75(1H，t J 5.5，CH)，5.90(1H，d J 6.0，CH)，8.13(1H，s，CH)δH(250MHz；d6-DMSO)；3.55(1H，m，CH)，3.65(1H，m，CH)，3.83(3H，s，OCH3)，3.94(1H，m，CH)，4.16(1H.m，CH)，4.63(1H，m，CH)，5.19(2H，m，OH)，5.43(1H，d J 6.1，OH)，5.80(1H，d J6.1，CH)，7.35(2H，bs，NH)，8.16(1H，s，CH)LC大于98％，由峰面积计算9-(β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤(海绵核苷)的结晶 将9-(β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤(3g，10mmol)混悬于AcOH(6mL)中并加热至70℃。再加入6mL的AcOH，得到澄清的淡黄色溶液；加入乙醇(48mL)并将溶液冷却至室温。静置16小时后，过滤固体并用甲基叔丁基酮(30mL)洗涤。在室温下干燥固体，得到白色固体形式的9-(β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤(2.6g，86mol％)，其纯度大于99％，没有大于0.5％的单一杂质。
NB1H核磁共振分析显示，样品含有残留的乙醇(0.24wt％)和乙酸(0.29wt％)。
权利要求
1.合成海绵核苷的方法，该方法包括使1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖与2-甲氧基腺嘌呤反应，形成9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤，然后将9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护，形成海绵核苷。
2.根据权利要求1的方法，该方法中通过在室温下用甲醇钠/甲醇处理，将9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤脱保护。
3.根据权利要求1或2的方法，该方法进一步包括将海绵核苷混悬在乙酸中，然后分离海绵核苷。
4.根据权利要求3的方法，该方法进一步包括将分离的海绵核苷溶解于有机酸中，然后使溶解的海绵核苷从该有机酸中结晶出来。
5.根据权利要求1或2的方法，该方法进一步包括将海绵核苷溶解在有机酸中，然后使溶解的海绵核苷从该有机酸中结晶出来。
6.根据权利要求4或5的方法，该方法中所述有机酸是乙酸。
7.根据权利要求4至6任一项的方法，该方法中通过使有机酸与有机醇接触，使海绵核苷从有机酸中结晶，在所述有机醇中海绵核苷为部分溶解。
8.根据前述任一权利要求的方法，该方法进一步包括在低于150℃，优选在100℃，将2-氯腺嘌呤与甲醇钠/甲醇加热，形成2-甲氧基腺嘌呤。
9.合成2-甲氧基腺嘌呤的方法，该方法包括将2-氯腺嘌呤与甲醇钠/甲醇加热至低于150℃，优选至100℃。
10.根据权利要求1至7任一项的方法，该方法进一步包括将2-氯腺嘌呤与甲醇钠/甲醇的混合物加热，以形成2-甲氧基腺嘌呤，将混合物的pH调节至pH9.5(±0.5)，并在使分离的2-甲氧基腺嘌呤与1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖反应前，分离2-甲氧基腺嘌呤。
11.合成2-甲氧基腺嘌呤的方法，该方法包括将2-氯腺嘌呤与甲醇钠/甲醇的混合物加热，以形成2-甲氧基腺嘌呤，将混合物的pH调节至pH9.5(±0.5)，并分离2-甲氧基腺嘌呤。
12.根据权利要求10或11的方法，该方法中将混合物加热至低于150℃，优选至100℃。
13.根据权利要求8至12任一项的方法，该方法进一步包括将2，6-二氯嘌呤转换成2-氯腺嘌呤。
14.根据权利要求13的方法，该方法中通过用甲醇氨处理2，6-二氯嘌呤以制备2-氯腺嘌呤，用水稀释制得的2-氯腺嘌呤，然后分离2-氯腺嘌呤，将2，6-二氯嘌呤转换成2-氯腺嘌呤。
15.合成2-氯腺嘌呤的方法，该方法包括用甲醇氨处理2，6-二氯嘌呤以制备2-氯腺嘌呤，用水稀释制得的2-氯腺嘌呤，然后分离2-氯腺嘌呤。
16.合成海绵核苷的方法，该方法包括方案2的步骤。
17.合成海绵核苷的方法，该方法实质上如方案2所述。
18.合成9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤的方法，该方法包括使1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖与2-甲氧基腺嘌呤反应，形成9-(2’，3’，5’-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖基)-2-甲氧基腺嘌呤。
19.2，6-二氯嘌呤在合成海绵核苷中的用途。
20.至少99％纯的海绵核苷。
全文摘要
本发明描述了使1－O－乙酰基－2，3，5－三－O－苯甲酰基－β－D－呋喃核糖与2－甲氧基腺嘌呤反应，形成9－(2’，3’，5’－三－O－苯甲酰基－β－D－呋喃核糖基)－2－甲氧基腺嘌呤，然后将9－(2’，3’，5’－三－O－苯甲酰基－β－D－呋喃核糖基)－2－甲氧基腺嘌呤脱保护，形成海绵核苷。本发明也描述了用于合成海绵核苷的中间产物的合成。
文档编号C07H19/16GK1910194SQ200580003003
公开日2007年2月7日 申请日期2005年1月19日 优先权日2004年1月21日
发明者J·V·A·乌兹曼 申请人:剑桥生物工艺有限公司