专利名称：：抗原和佐剂的多聚体复合物的制作方法
技术领域：
：此项发明涉及包含佐剂和抗原的大分子装配物(macromolecularassembly),比如融合蛋白，与单独的抗原相比，这类装配物能够引起增强的对抗原的免疫应答。
背景技术：
：改善现有的疫苗和创造新的疫苗都需要改进的免疫接种方法。同时，也需要最小化或避免佐剂的使用，因为只有很有限数量的佐剂被准许在人身上使用，为了减少动物的痛苦，也广泛期望将动物中佐剂的使用降至最低。近期的专利申请描述了使用哺乳动物C4bp寡聚化结构域来提高哺乳动物中抗原的免疫原性。这些申请包括PCT/IB2004/002717和PCT/EP03/08926。一个更早些的专利W091/11461讨论了C4bp蛋白融合物用于免疫接种的应用，但是没有证明成功的免疫接种。PCT/EP03/08928描述了生产哺乳动物C4bp融合蛋白的方法。但是到目前为止，尚未知晓用于非哺乳动物物种的CMbp寡聚化结构域。由于对非哺乳动物的疫苗接种有相当的兴趣，比如为鸟类接种疫苗以对抗禽流感，源自这些物种的C4bp寡聚化结构域将会有相当可观的实用性。Oshiumi等人(2005J.Immunol.175，1724-1734)已经表征了鸡中补体活化位点(complementactivationlocus)的调节物，并鉴定了三个蛋白质，他们将这三个蛋白质称为CREM、CREG和CRES。每个基因的转录物的表征，促使了整个蛋白质序列的推导。其中的一个蛋白质，CRES,被描述为鸡C4bp基因。发明概述我们已经发现了一个同样在鸡RCA位点中找到的DNA序列编码的新蛋白质序列，但是与Oshiumi等人描述过的任何序列都截然不同。这种189个核苷酸的DNA序列及其编码的62个氨基酸的蛋白质结构域示于表1。我们把这一结构域称为鸡C4bp寡聚化结构域。本发明因此提供一种产物，其包含作为第一组分的SEQIDNO:l的C4bp结构域或其变体；和作为第二组分的抗原。我们也鉴定了SEQIDNO:l的禽类同源序列，其氨基酸序列示于SEQIDNO:23。因此，在本发明的另一个方面中提供一种产物，其包含作为第一组分的SEQIDNO:23的C4bp结构域或其变体；和作为第二组分的抗原。我们也发现了CRES(鸡的补体调节性分泌蛋白(complementregulatorysecretoryprotein))结构域具有增加抗原免疫原性的能力。因此，在另一方面，本发明提供一种产物，其包含作为第一组分的C4bp结构域，和作为第二组分的抗原，其中所述C4bp结构域包含SEQIDNO:37中所示的CRES结构域或其变体。第一组分和第二组分可能是以融合蛋白的形式。在一种可供选择的情况下，它们也可能是化学偶联的，通过任一第一组分的氨基酸侧链，或者通过为了能够与第二组分进行化学偶联而特别添加到第一组分上的氨基酸侧链。第一组分和第二组分也可以非共价地与彼此结合。比如，对第一组分的氨基酸的侧链进行修饰以使其具有额外的生物素基团，而这种生物素可以用来和链霉抗生物素蛋白(streptavidin)结合(当链霉抗生物素蛋白是第二组分的情况)，或者和链霉抗生物素蛋白融合的抗原能够通过这种生物素与第一组分结合。另一种可能性是，通过加入链霉抗生物素蛋白并且纯化产生的复合物，能够将生物素化的抗原和生物素化的第一组分牢固而非共价地结合。这些非共价结合的实例只是说明性的，本领域的那些技术人员将理解可以釆用其他类型的非共价结合，理想的是导致两组分紧密非共价结合的类型。为了避免疑问，"第一"和"第二"组分的指定并不暗示或者明示两种组份在产物中的特定线性顺序。两种组分可以按照任何顺序结合。虽然在优选的方面，产物将包含1:1比率的第一组分和第二组分，但是同样在本发明的范围之内的是，可以将多于一个的第一组分和一个第二组分结合，或者反之亦然。比如，第一和第二组份的比率可以是1:4,1:3,1:2,1:1,2:1，3:1或者4:1。当比例不是1:1时，更优选第二组分过量。因此，当两种组分都是多肽并且将产物制备为融合蛋白时，两种组分的N末端至C末端的顺序可以按任意排列。本发明进一步提供编码所述第一和第二组分的融合蛋白的核酸。本发明还提供包含所述核酸的载体和携带所述载体的宿主细胞。在另一个实施方式中，本发明提供制备包含下列组分的产物的方法作为第一组分的SEQIDNO:1、23或37的C4bp结构域，或其变体；和作为第二组分的多肽抗原，所述方法包含以融合蛋的形式表达编码所述两种组分的核酸，和回收产物。在另一个实施方式中，本发明提供制备包含下列组分的产物的方法作为第一组分的SEQIDNO:1、23或37的C4bp结构域，或其变体；和作为第二组分的多肽或非多肽抗原，所述方法包含表达编码第一组分的核酸，连接所述第一组分和抗原，和回收产物。制备产物的方法可以在真核和原核细胞中进行。本发明还提供诱导对抗原的免疫应答的方法，所述方法包含对受试者施用有效量的本发明的产物。本发明还提供本发明的产物在治疗人体和动物体的方法中的用途，特别是诱导免疫应答的方法。本发明进一步提供药物组合物，其包含本发明的产物，所述产物和可药用的载体或稀释剂结合。本发明进一步提供在针对传染剂的被动免疫接种中使用的保护性免疫血清的制备方法，所述方法包含用本发明的产物接种包括人在内的动物受试者，从所述动物包括人回收抗血清。其后这种抗血清可以使用在对受试者的被动免疫接种方法中。所述受试者可以是受到该传染剂传染或面临该传染剂传染的风险的受试者。动物受试者尤其可以是哺乳动物受试者，包括人。本发明的优点是尽管本发明的产物在哺乳动物(比如小鼠和兔)中诱导对抗第一组分的抗体，但是这些抗体却不会和内源的哺乳动物C4bp蛋白交叉反应。因此本发明的产品可以不仅用在人类应用中，也可以用在脊推动物应用中，例如用于治疗家养的哺乳动物，包括家畜(如牛，绵羊，猪，山羊，马)和宠物(如猫，狗，啮齿动物)，或者用于治疗野生的哺乳动物，如动物园中圈养的那些哺乳动物。在另一方面中，本发明的产物可以用来治疗非哺乳动物受试者，包括家禽，如鸡，火鸡，鸭，鹅等。在这个方面中，第二组分可能包括传染性细菌或病毒生物的抗原，如沙门氏菌属(Sa/wo"e〃a)菌种、埃希氏菌属(Esc/2en'c/2/a)菌种类(特别是大肠杆菌)、弯曲杆菌属(Cflw/^/oZ)ac^O菌种、流感病毒等的抗原。其他抗原的实例在下面讨论。附图描述图1显示本发明中C4bp结构域的DNA和蛋白质序列。图2显示本发明的C4bp结构域、CRES的推定C4bp结构域和人C4bp的比对。图3是显示本发明的纯化蛋白(AVD259)的凝胶。图4显示AVD262蛋白在存在或缺失还原剂P-巯基乙醇时在SDS-PAGE胶上的特性。发明详述SEQIDNO:l的C4bp结构域或其变体。SEQIDNO:l的C4bp结构域包含62个氨基酸。这种蛋白质的变体有形成多聚体的能力。所述变体应与SEQIDNO:l的62个氨基酸的序列具有至少45%序列同一性，更优选至少50%，更优选至少60%，更优选至少70%，更优选至少80%，甚至更优选至少90%，比如至少95%或最优选至少98%序列同一性。SEQIDNO:l的变体包括具有一个或多个氨基酸取代、缺失或插入的蛋白质。取代是特別期望的，同样期望的是N末端缺失和C末端缺失。因此，变体优选应包含下列中的一个或多个N末端缺失l-8，例如l-4个氨基酸残基；C末端缺失1-8,例如1-4个氨基酸残基；1-8个，如2,3，4，5,6或7个氨基酸的取代。SEQIDNO:23的C4bp结构域或其变体。SEQIDNO:23的C4bp结构域包含50个氨基酸。这种蛋白质的变体有形成多聚体的能力。所述变体应与SEQIDNO:23的50个氨基酸的序列具有至少45%序列同一性，更优选至少50%，更优选至少60%,更优选至少70%，更优选至少80%,甚至更优选至少90%,比如至少95%或最优选至少98%序列同一性。SEQIDNO:23的变体包括具有一个或多个氨基酸取代、缺失或插入的蛋白质。取代是特别期望的，同样期望的是N末端缺失和C末端缺失。因此，变体优选包含下列中的一个或多个N末端缺失1-8，例如1-4个氨基酸残基；C末端缺失1-8，例如1-4个氨基酸残基；1-8个，如2，3，4，5,6或7个氨基酸的取代。SEQIDNO:37的C4bp结构域或其变体。SEQIDNO:37的C4bp结构域包含58个氨基酸。这个序列代表CRES(鸡的补体调节性分泌蛋白)蛋白的结构域。CRES已经由Oshiumi等人(2005J.Immunol.175,1724-1734)描述，并被描述为鸡C4bp基因。SEQIDNO:37的蛋白质的变体有形成多聚体的能力。所述变体应与SEQIDNO:37的58个氨基酸的序列具有至少45%序列同一性，更优选至少50%，更优选至少60%，更优选至少70%，更优选至少80%,甚至更优选至少90%，比如至少95%或最优选至少98%序列同一性。SEQIDNO:37的变体包括具有一个或多个氨基酸取代、缺失或插入的蛋白质。取代是特别期望的，同样期望的是N末端缺失和C末端缺失。因此，变体优选包含下列中的一个或多个N末端缺失1-8,例如1-4个氨基酸残基；C末端缺失1-8，例如1-4个氨基酸残基；1-8个，如2,3,4，5,6或7个氨基酸的取代。M酸取代SEQIDNO:l,23或37的变体中的取代包括保守取代。保守取代的实例包括涉及相似氨基酸组的那些，这些组通常称为JDayhoff组。这些组如下第l组D,E，N，Q第2组I,L，V，M第3组F，Y，W<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>一方面来说，SEQIDNO:1的变体保留了一些SEQIDNO:1的氨基酸残基，例如至少3个，例如至少6个，或者下面全部的SEQIDNO:l的氨基酸残基Cys22,Leu33,Glu34，Lys37，Leu38,Leu40，Glu41,11e42和Leu45。理想的是，当一些或者全部这些残基出现的时候，此变体将会保持这些残基之间的相对间距。变体和SEQIDNO:l，23或37之间的序列同一性程度可以用算法GAP来决定，算法GAP是本领域广泛使用的算法"Wisconsin程序包，，的一部分，可以从Accelrys(先前为基因计算机研究组(GeneticsComputerGroup),Madison，WI)得到。GAP使用Needleman和Wunsch算法来排列两个完整序列，使相匹配的残基数最大而缺口数最小。GAP对相似长度的紧密相关的短序列比对有用，因而对于决定序列是否符合以上提到的同一性水平适用。GAP可以使用缺省参数。可以制备并测试它们形成多聚体的能力的C4bp结构域变体的实例包括SEQIDNO:5-14和SEQIDNO42和43，示于下面的表1:表1:<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>A=SEQIDNO，B二序列，C-参照SEQIDNO:1计算的％同一性(最近似的整数)。当序列的缺失产生时，除N末端或C末端的截短(truncation)之外，优选将它们限制在不超过一个，两个或三个连续或者不连续的缺失。当序列的插入产生时，也期望对插入数目进行限制以使蛋白质的大小不超过野生型序列长度多于20个氨基酸，特别是不多于15个，更优选不多于10个氨基酸。因此，就SEQIDNO:1来说，当通过插入修饰蛋白时，期望所述蛋白在长度上将不超过82个氨基酸。SEQIDNO:1，23或37的变体形成多聚体的能力可以如下测试通过在原核宿主细胞中表达变体(如所附实施例中阐述的)，回收变体，和决定变体是否形成多聚体，例如用凝胶过滤。在另一个方面，SEQIDNO:1,23或37的C4bp结构域的变体包括这类序列的其他非哺乳动物同源物，特别是鸟类和爬虫类同源物。以上提到过，使用非哺乳动物蛋白的好处是避免针对宿主的天然C4bp蛋白的抗体。将同源物定义为有共同祖先证据的蛋白质，即很有可能是源于进化趋异的结果。鸟类同源物通常与SEQIDNO:l,23或37具有高度的序列同一性，并且这类同源物和它们能够形成多聚体的变体同样也可以用在本发明中。这些4支术包括用编码本发明中SEQIDNO:1，23或37的核酸或其片段作为探针来回收和确定其他物种内的C4bp同源物的序列。多种技术可以为此使用，如用合适来源的mRNA(如从胚胎或者活跃分裂的已分化细胞或肿瘤细胞)进行PCR扩增和同源物的克隆，或者用包含以下步骤的方法从动物得到cDNA文库，比如从以上提到的来源得到的cDNA文库，用编码SEQIDNO:1,23或37的核酸在严紧条件下探测(probe)所述文库，和回收编码全部或部分这种动物的SEQIDNO:1,23或37同源物的cDNA。当获得部分cDNA时，全长的编码序列可以用引物延伸技术来确定。或者，当可以获得所述动物的全部或部分基因组序列时，用SEQIDNO:l，23或37进^f亍的同源性搜索可以用来确定合适的同源物。例如，通过使用SEQIDNO:l的数据库同源搜索已在斑胸草雀(zebrafinch)(拉丁名为rae"/o;7_yg/o中鉴定出同源物，如实施例8中所列。同源氨基酸序列示于SEQIDNO:23。SEQIDNO:1和SEQIDNO:23的序列比对显示了48%的同一性。在另一方面中，本发明涉及SEQIDNO:l，23或37和同样能够形成多聚体的它们的变体，所述变体具有至少45%,更优选至少50%，更优选至少60%，更优选至少70%，更优选至少80%，更优选至少90%,更优选至少95%,最优选至少98%序列同一性。本发明还涉及SEQIDNO:l,23或37和异源蛋白的融合蛋白，所述异源蛋白与其N末端或C末端中的任一融合。异源蛋白可以是哺乳动物蛋白。SEQIDNO:1，23或37的蛋白及其变体，以及本发明的产物可以以基本上分离的形式提供，不含或基本不含与其天然结合(naturallyassociated)的物质，比如细胞中存在的其他多肽。当然，本发明的蛋白、其变体以及产物可以是用稀释剂(diluents)或佐剂(adjuvants)配制的，并且更因实际用途而可以是分离的，比如如果用来涂覆(coat)在免疫测定(immunoassays)中使用的孩i量滴定平板，则通常将多肽与明胶或其他载体混合。本发明的蛋白质、其变体以及产物可以是天然糖基化的，或者可以是通过异源真核细胞的系统糖基化的，或者它们也可以(比如当通过在原核细胞中表达来产生时)是未糖基化的。本发明的蛋白质、其变体以及产物可以任选地是磷酸化和/或乙酰化的。所述蛋白质、其变体和产物还可以是基本上纯化的形式，这种情况下蛋白质、变体或产物将通常包含在制备物中，在所述制备物中大于90%，如95%，98%或99%的所述蛋白质、变体或产物是本发明的多肽。产物的更多特性本发明的产物可以包含，并且期望其应包含柔性接头，所述接头在第一组分和第二组分之间。通常这类接头有几个氨基酸长，比如1到20个，例如2-10个氨基酸长。这类接头在本领域中是公知的，通常由主要选自甘氨酸、丝氨酸和丙氨酸的残基组成。一个这类接头是(Glym-Ser)n接头，其中m和n各自独立地是从1到4。这些接头在本领域中用来使蛋白质结构域彼此附接。因此可以通过这样的接头将第一组分连接到第二组分。当第一组分是C4bp结构域而产物是融合蛋白的形式时，第一组分优选在产物的C末端。当C4bp结构域在产物的N末端时(或者抗原没有和C4bp以融合蛋白的形式表达)，有必要为了蛋白质的表达而并入合适的氨基酸序列。这将至少包含一个N末端的甲硫氨酸。在细菌中表达时，第二个氨基酸(在曱硫氨酸之后)期望是丙氨酸。N末端序列可以包含用于化学去除或酶促去除所述序列的全部或部分的切割位点。当本发明的产物中抗原位于第一组分的C末端方向时，这样的N末端区域期望不超过20个氨基酸，例如不超过10个氨基酸。抗原抗原是任何可以被抗体或T细胞受体识别的分子。然而，并非所有的抗原都是免疫原(immunogens)。免疫原是任何可以引起免疫应答的物质。在一个方面中，本发明可以使不是免疫原的抗原成为免疫原，使原本为弱免疫原的抗原成为更好的免疫原。本发明的一个重要特点是，当抗原是通过与C4bp遗传融合而产生时，非常优选单体抗原，因为单体抗原不会妨碍C4bp结构域装配成寡聚的、因而有功能的形式。不过另一方面，抗原也可以是非单体抗原。可能特别是当将它们化学地或非共价地偶联到C4bp结构域的时候。因此单体抗原可以分为两个主要的组1)抗原是亲本蛋白的片断或者变体，所述亲本蛋白在其天然状态是多聚体(即二聚体或更高次的多聚体)，但是抗原本身在亲本蛋白确实形成多聚体的条件下却不形成多聚体。2)抗原在其天然状态下是单体。这两种类型抗原的实例都会在下面进一步讨论。单体抗原的共同点是它们都可以编码在单独一条DNA上，当这个DNA融合到编码C4bp结构域的DNA上并且继而翻译成为蛋白时，抗原通过其上的独特(unique)位点连接到单个C4bp结构域链。这种抗原的一个筒单例子就是鸡蛋白中的溶菌酶(lysozyme)。可以将编码全长溶菌酶开放阅读框架(叩enreadingframe)的cDNA以这样一种方式融合到C4bp开放阅读框架，所述融合方式不阻碍得到的融合蛋白中C4bp部分的装配。生物合成之后，可以对融合到C4bp的单一多肽链进行加工，比如使用蛋白酶，从而在多肽链中产生新的N末端和C末端。如果由蛋白水解切割产生的两条或更多条链通过如二碌^t波此保持附4妄在一起，则在加工之后C4bp融合蛋白将有通常认为不是单体的蛋白与之附接。但是，就本发明而言，将这类蛋白质认为是单体，因为它们在单个开放阅读框架中编码为单个融合蛋白。此类的一个例子是胰岛素原，生物合成后经加工而有两条称为A和B的链，它们通过二硫键相连。在对前体融合蛋白进行蛋白水解加工后，将胰岛素原的一个称为C肽的片断去除。单体抗原可以源自在其天然状态不一定是单体的蛋白质。因此可以对很多自然界中以多聚体状态存在的抗原进行修饰，比如通过蛋白质工程技术，从而使其成为单体。存在三个实例。这种抗原的例子是一种源自流感病毒血凝素蛋白的抗原。在其自然状态下，公知它会形成复杂的三聚体结构(Wilsonetal.Nature289，366-373，1981)。但是，通过除去造成分子聚合成三聚体的巻曲螺旋结构，有可能得到单体片断。特别的例子是由Joen和Amon的工作提供的(ViralImmunology15，165-176，2002)。这些作者仅用了血凝素的残基96-261来得到只包含了血凝素球形区的片断。另一个例子是痴原虫属裂歹直子表面蛋白1(Plasmodiummerozoitesurfaceprotein1;MSP1)。这个巨大(大约200kDa)的蛋白质装饰在裂殖子的表面，所述裂殖子是导致疟疾感染的血液阶段的因素。通常它通过C末端GPI锚着点固定在裂殖子的表面(GPI是糖基磷脂酰肌醇)。这种GPI锚着点前面是一段疏水性的氨基酸序列。由于这个锚着点的存在，无论全长的MSP1,还是被称为MSP1.19的C末端片断(在裂殖子侵入红血球时它仍然与膜结合)在自然界都不以单体状态存在。同样的情况也发生在很多具有单个疏水性跨膜区(singlehydrophobictransmembraneregion)的月莫蛋白上。本发明在除去jt匕类疏7jc性序列段以后实施最佳。请参看下面对融合MSPU9蛋白和C4bp结构域的描述。因此在本发明的一个优选方面，发明的产物是痴原虫(Plasmodium)MSP1抗原片断和C4bp结构域融合的融合物。痴原虫属MSP1可能包含大约50到大约200个氨基酸，优选大约50到大约150个氨基酸。抗原片断可以来自任何痴原虫属的种，比如恶性症原虫(Plasmodiumfalciparum)或间日痗原虫(Plasmodiumvivax)或卵开j症原、虫(Plasmodiumovale)或三日症原虫(Plasmodiummalariae)(以上都能够引起人类疾病)或约氏疟原虫(Plasmodiumyoelii)。虽然缺失是使本身的聚合体成为单体的最简单的方法，但是在某些情况下，突变一个或多个氨基酸也可实现。这样的例子是CpnlO蛋白质，天然状态下它是七聚体蛋白，就像处于其主要亚型(principalisoforms)的C4bp。CpnlO中的单氨基酸突变将其转变为单体突变体，从而使其适用于和C4bp结构域的融合(Guidryetal.BMCBiochemistry4,14-26,2003)。单体化这种蛋白的一个替代方法是缺失N末端或C末端氨基酸(Llorcaetal.Biochem.BiophysicaActa1337,47-56，1997;SealeandHorowitz,J.Biol.Chem.270，30268-30270，1995)由此使负责亚基间相互作用的区域缺失。通常情况下，对于有强烈倾向装配为多聚体结构，从而破坏与其融合的C4bp结构域装配的蛋白质(如病毒壳体蛋白)，缺失负责蛋白-蛋白相互作用的区域或突变界面上的残基的原则可以用来得到单体蛋白。抗原可以分为两类，两类抗原均适用于本发明。第一类是外源抗原(exogenousantigens),包括感染性有机体中存在的所有分子。细菌免疫原，寄生性免疫原和病毒性免疫原可以用作多肽部分(moieties)来制造用作疫苗的多聚或异源多聚C4bp融合蛋白。这些免疫原的细菌来源包括引起细菌性肺炎，脑膜炎，霍乱，白喉，百日咳，破伤风，结核病和麻风病的那些细菌来源。寄生性来源的免疫原包括疾原虫(malarialparasites),如疾原虫属(Plasmodium),以及4偉虫类(trypanosomal)和矛H十曼原虫类(leishmaniaspecies)。病毒来源包4舌痘病毒，如天花病毒，牛痘病毒和口掩病毒；疱渗病毒，如单纯疱渗病毒1和2,B-病毒，水痘带状疱渗病毒，巨细胞病毒和EB病毒；A泉病毒,如乳腺腺病毒(mastadenovirus);乳多S病毒(papovaviruses)，如乳头瘤病毒，例如HPV16，和多瘤病毒，例如BK和JC病毒；细小病毒，如腺病毒相关病毒；呼肠病毒(reovirus)，如呼肠病毒1、2和3;环状病毒，如科罗拉多壁虱热(Coloradotickfever);轮状病毒，如人轮状病毒；曱病毒，如东方脑炎病毒(Easternencephalitisvirus)和委内瑞才立脑炎病毒；风渗病毒(mbivirus),如风渗；黄病毒，如黄热病病毒，登革热病毒，日本脑炎病毒，蜱传脑炎病毒和丙型肝炎病毒；冠状病毒，如人冠状病毒；副粘病毒，如副流感病毒l、2、3和4，以及流行性腮腺炎；麻渗病毒(morbillivirus),如麻渗病毒(measlesvirus);肺病毒，如呼吸道合胞病毒；水泡性病毒，如水泡性口膜炎病毒；狂犬病病毒(lyssavirus)，^口狂犬病毒(rabiesvirus);正粘病毒,^口A型流感和B型流感；布尼病毒，如LaCrosse病毒；白虫务病毒，如立夫特山谷热病毒；纳伊罗病毒(nairovirus)，如刚果出血热病毒；嗜肝DNA病毒(hepadnaviridae),i口乙型肝炎；沙、并立病毒，长口lcm病毒,^立沙、病毒(Lassovirus)和胡宁病毒(Juninvirus);反转录病毒，如HTLVI,HTLVII，HIV-1和HIV-2;肠道病毒，如脊髓灰质炎病毒l、-2和3，柯萨奇病毒，艾柯病毒，人肠道病毒，曱型肝炎病毒，戊型肝炎病毒和诺沃克病毒；鼻病毒，如人鼻病毒；以及丝状病毒(filoviridae),如马尔堡(病)病毒和依波拉病毒(Ebolavirus)。这些来自细菌性，病毒性和寄生性来源的抗原可以用来生产用作疫苗的多聚蛋白。所述多聚体可能包含带有不同抗原的单体的混合物。可以将这些来自细菌性，病毒性和寄生性来源的抗原视为外源抗原，因为通常它们不在宿主体内出现，也不由宿主基因组编码。相反地，内源抗原通常在宿主体内存在或者在宿主基因组中编码，或者既在宿主体内出现又在宿主基因组中编码。对内源抗原产生免疫应答的能力对治疗具有这一抗原的肺瘤或中和肿瘤的生长因子有用。第一类内源抗原的例子是HER2，其是称为赫赛汀(Herceptin)的单克隆抗体的耙。第二类，也就是生长因子类的内源抗原的例子是促性腺激素释放激素(称为GnRH),它对前列腺的某些癌有营养作用。因此本发明的产物可以单独使用或与其他抗肿瘤的治疗一起使用，所述其他抗肿瘤治疗如治疗或预防癌症的化疗。例如，治疗可以引起肺瘤在生长速率或生长量上的降低。治疗还包括减少或改善不期望的癌症症状。现有的抗肿瘤治疗包括例如化疗(CT)、；故射疗法(RT)和手术，以及它们的组合，还有专门化的疗法，如使用血管发生抑制剂，生物疗法，包括增强(boost)患者免疫系统的佐剂疗法，抗体疗法，疫苗疗法和光动力疗法。化疗(CT)是指使用抗癌药物的治疗方法。这个术语涵盖了数量众多的药剂类型，这些药剂类型包括基于铂的药物，烷化剂，抗代谢药，抗减数分裂齐寸(anti-mioticagent)，抗微管剂，植物碱，和抗肿瘤抗生素，激酶抑制剂，蛋白酶体抑制剂，EGFR抑制剂，HER二聚体化抑制剂，VEGF抑制剂，和反义分子，并且包括抗体。这些药物包括但不限于阿霉素(adriamycin)，苯丙氨酸氮芥(melphalan)，阿糖胞香，BiCNU，白消安(busulfan),CCNU，喷司他丁，基于铂的药物碳铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)和奥沙利铂(oxaliplatin)，环磷酰胺，柔红霉素(daunorubicin)，表柔比星(epirubicin)，达卡巴噪(dacarbazine)，5-氟尿嗜啶(5-FU)，氟达拉滨(fludarabine),羟基脲(hydroxyurea),伊达比星(idarubicin)，异环磷酰胺(ifosfamide)，氨曱喋呤，六曱密胺(altretamine)，光神霉素(mithramycin),丝裂霉素(mitomycin),博来霉素(bleomycin),苯丁酸氮齐(chlorambucil)，米托,蒽酉昆(mitoxantrone)，氮界，统u嘌呤(mercaptopurine),米托蒽醌(mitozantrone)，紫杉醇(Taxo1⑧)，长春化石威(vinblastine),长春4bl斤石威(vincristine),脱乙酰长春花石威(vindesine)，表鬼臼毒素吡喃葡糖苷(etoposide),双氟去氧胞苷(gemcitabine),单克隆抗体例如Herceptin(赫赛、汀)、Rituxan、Campath⑧、Zevelin⑧和Bexxar,伊立替康(irinotecan),克^立立平(leustatin)，长春瑞滨(vinorelbine)，STI-571(Gleevac)，三苯氧胺(tamoxifen),多西紫杉醇(docetaxel)，托泊替康(topotecan),卡培他滨(capecetabine)(Xeloda),雷替曲塞(raltitrexed)，链脲菌素(streptozodn),替加氟联用尿嘧啶(tegafiirwithuracil),替莫唑胺(temozolomide)，硫鸟嘌呤(thioguanine)，塞替派(thiotepa)，鬼臼毒素(podophyllotoxin)，filgristim,p卜吟姆钠(profimersodium),来曲哇(letrozole)，氨磷汀(amifostine),阿那曲唾(anastrozole)，替莫p坐胺(temozolomide)，三氧4匕二石申(arsenictrioxide)，epithalonesA和B维生素A酸(epithalonesAandBtretinioin),白细胞介素(interleukin)(例如2和12)和干扰素，例如a和y干扰素，硼替佐米(bortezomib)，huBr-E3，Genasense，硝酸镓(Ganite),FIT-3配体，MLN491RL，MLN2704,MLN576和MLN518。抗血管生成剂包括但不限于BMS-275291,达肝素(Dalt印arin)(Fragmin⑧(法安明))，2-曱氧基雌二醇(2-ME)，thalodmide，CC-5013(沙利度胺(thalidomide)类似物)，maspin,考布他汀A4磷酸酯(combretastatinA4phosphate),LY317615,大豆异黄酮(染料木黄酮(genistein);大豆蛋白分离物)，AE-941(Neovastat(新伐司他)；GW786034),抗-VEGF抗体(Bevacizumab(贝伐单抗)；AvastinTM)，PTK787/ZK222584，VEGF-trap，ZD6474,EMD121974，抗-anb3整联蛋白抗体(Medi-522;VitaxinTM),羧基酰胺三唑(carboxyamido,CAI),塞来考昔(Celebrex(西乐葆))，氢溴酸卣夫酮(halofbginonehydrobromide)(TempostatinTM),和罗非考昔(VIOXX⑧)。"化疗"这个术语也包括使用例如干扰素和白细胞介素等作用剂的基因疗法，即施用编码干扰素或白细胞介素基因的载体。参见例如Helleretal.,TechnolCancerResTreat.2002;1(3):205-9。使用本发明制备的免疫原可以供研究和治疗的目的使用。例如，研究用途包括对基因组序列数据中预测的基因产物产生抗血清。这项要求(requirement)适用于原核生物，如细菌的和包括真菌和哺乳动物在内的真核生物的基因产物。抗原可以是在本领域中常规用于疫苗的任何大小，范围从较短的肽到非常大的蛋白质不等。非多肽免疫原可以是例如碳水化合物(carbohydrates)或核酸。奈瑟氏菌属(7Ve^en'a)菌种或肺炎链3求菌(5Vre;tococcz^/wewwom'ae)菌种的多糖夕卜壳(coat)就是可以用作本发明目的的碳水化合物的例子。当非多肽免疫原是本发明产物的一个部分时，此免疫原可以用常规的合成方法共价地附接到产物的第一组分上。通常免疫原可以附接到包含第一组分的C4bp结构域或其变体的N末端或C末端，或者附接到氨基酸的侧链基团(如赖氨酸的s-氨基，或半胱氨酸的巯基)，或者它们的组合。每个融合蛋白可以添加多于一个免疫原。为了促进偶联，半胱氨酸残基可以添加到C4bp结构域或其变体，例如作为N末端或C末端。本发明在产生免疫应答方面有很多优点。例如，多聚体的使用能够让多个抗原同时呈递至免疫系统成为可能。这将允许制备可以对多个表位(epitope)产生免疫应答的多价疫苗，它可以使用在单个生物体中或多个不同的生物体中。因此，在进一步的方面单体抗原可以是包含两个不同表位的合成抗原，这两个表位可以来自两种不同的生物体或来自同一生物体的两种不同的蛋白。后者的一个例子是子孢子抗原序列的融合物，如与MSP1序列结合的来自环子孢子蛋白的两个或多个NANP重复序列。后者的另一个例子是Neirynck等人描述过的M2e序列和单体流感血凝素片段融合的融合物。因此，根据本发明形成的疫苗可以用于同时针对多于一种疾病的接种，或者同时耙向给定病原体上的多个表位。这些表位可以出现在同一单体单位上，或者出现在结合成异源多聚体(heteromultimer)的不同单体单位上。核酸本发明的C4bp结构域和包含这类结构域的产物(这两种情况都包括它们的变体)可以如下产生在原核或真核宿主细胞中，使用编码融合蛋白的核酸构建体来表达该融合蛋白。当抗原是多肽时，可以通过>^人核酸序列表达融合蛋白来生产本发明的产物。因此本发明提供编码本发明的蛋白的核酸构建体，通常是DNA或RNA。通常构建体以可复制载体的形式存在，其中将编码蛋白的序列与适合用于在宿主细胞中表达该蛋白的启动子可操作地连接。提供的载体可以具有复制原点，并且任选地具有启动子的调控子(regulator)。载体可能携带一个或多个可选择的标记基因。有许多本领域公知的这样的原核和真核表达载体，而本发明可根据本领域技术人员的个人偏好(individualpreference)使用任何载体。大量原核宿主细胞可以在本发明的方法中使用。这些宿主可包括以下的菌抹埃希氏菌属(Escherichia),假单胞菌属(Pseudomonas)，芽孢杆菌属(Bacillus),乳杆菌属(Lactobacillus),嗜热菌属(Thermophilus)，沙门氏菌属(Salmonella),肠杆菌科(Enterobacteriacae)或链霉菌属(Streptomyces)的菌抹。例如，如果将埃希氏菌属(generaEscherichia)的大肠杆菌在本发明的方法中使用，那么优选使用的这种细菌的菌抹应当包括BL21(DE3)的衍生菌抹，包括C41(DE3)、C43(DE3)或C0214(DE3)，如W098/02559中描述和可以提供的那样。甚至更优选的是，当启动子不是T7启动子时，可以使用这些菌抹缺少原噬菌体DE3的衍生菌抹。原核载体包括载体细菌质粒，如源自大肠杆菌的质粒，包括ColEI、pCRl、pBR322、pMB9和它们的衍生物；更广范围宿主质粒，如RP4;噬菌体DNA，如噬菌体X的数种衍生物，例如，NM989;和其他DNA噬菌体，如M13和丝状真菌单链DNA噬菌体。对这些载体和其他载体可以使用标准的重组DNA的方法进行操作，以将本发明的核酸引入，使其与启动子可操作地连接。启动子可以是可诱导的启动子。适合的启动子包括T7启动子，tac启动子，trp启动子，、启动子PL或PR以及其他本领域技术人员公知的启动子。许多真核宿主细胞也可以^使用，包括例如酵母，昆虫和哺乳动物细胞。哺乳动物细胞包括CHO和小鼠细胞，非洲绿《美(Africangreenmonkey)细胞，如COS-l,和人细胞。有许多公知的适合表达蛋白质的真核载体。可以将这些载体设计为以染色体插入的方式进入真核细胞基因组，或保持在染色体外，或者仅仅是暂时保持在真核细胞中。可以将核酸可操作地连接到合适的启动子，比如强力的病毒启动子，包含CMV启动子，和SV40T-抗原启动子或反转录病毒LTR。为了得到本发明的产物，可以在适合表达蛋白质的条件下培养携带本发明载体的宿主细胞，并且将所得的蛋白质从培养基中的细胞中回收。细胞培养编码根据本发明的融合蛋白的质粒可以用常规转化方法导入宿主细胞中，并且在促进所述融合蛋白表达的条件下培养该细胞。当使用可诱导的启动子时，细胞可以先在无诱导物的情况下培养，然后一旦其生长到较高密度时，加入诱导物以便使蛋白质的回收最大化。细胞培养条件是本领域公知的，并且可以参照同样也是本领域公知的方法来使用这些条件。虽然W091/11461建议原核宿主细胞可以在生产基于C4bp的蛋白质时使用，但是并没有对这种生产的实验证明。近来，已经发现在原核表达系统中生产的与C4bp融合的蛋白质保持了它们的功能活性。这点公开在WO2004/020639中，将其内容作为参考并入本文。这些方法可以用来生产本发明的融合蛋白。从培养液中回收蛋白质当细胞生长到允许蛋白质的产生时，就可以从细胞中回收蛋白质。因为我们惊奇地发现蛋白质保持水溶性，所以通常可以例如将细胞离心(spindown)和超声裂解，而保持蛋白质级分可溶，并且允许该级分在进一步的更高速离心(例如15,000rpm持续1小时)之后存在于上清。我们还惊奇地发现C4bp结构域的截短和/或变异可能会影响融合蛋白的溶解性。截短可以在C末端或N末端。特别是C端截短可改进融合蛋白的溶解性。例如，实施例11显示缺失如SEQIDNO:l所示的C4bp结构域的最后七个C末端氨基酸可改进融合蛋白的水溶性。在上清蛋白质级分里的融合蛋白可以用任何适合的标准蛋白质层析技术的组合来进一步纯化。我们使用了离子交换层析，凝胶过滤层析和亲和层析。根据蛋白质计划的用途(intendeduses)，蛋白质可以进行进一步的纯化步骤，如透析或浓缩步骤，例如冻干，已经发现如融合蛋白的纯化。特别是发现C末端可以促进融合蛋白与纯化基质如纯化柱(如镍亲和层析柱)的结合。例如，在实施例11中所示，SEQIDNO:l中C4bp结构域的最后7个C末端氨基酸(FLEHILH)促进融合蛋白和镍亲和柱的结合。最后7个C末端氨基酸只包含2个组氨酸。而公知的广泛应用的六组氨酸标记(也叫多组氨酸标记)包含6个连续的组氨酸，其显示出对镍柱的高亲和性，我们显示(并且相信是首次显示)两个组氨酸就足以使结合成为可能。这两个组氨酸还可以被一些插入的氨基酸分开。插入氨基酸可以有一个，两个或更多个。因此能够想像SEQIDNO:l的C末端或其变体可以用作纯化标记。它可以通过如融合的方式附接到另一个蛋白质来帮助这个蛋白质的纯化。它可以附接到蛋白质的任何部位。可以附接到N末端或C末端。特别地，序列FLEHILH(SEQIDNO:44)或其变体可以用作其它蛋白质的纯化标记。FLEHILH的变体包括有一个或多个氨基酸取代、缺失或插入的多肽。变体能够结合到镍亲和层析柱。变体的两个组氨酸之间可以由一个，两个，三个，四个或更多个插入氨基酸间隔开来。组合物及其用途可将本发明的蛋白质和产物制备为药物组合物的形式。产物会和一种或多种可药用的载体或稀释剂一起存在。组合物将会根据设定的产物的用途和给药途径来制备。因此本发明提供包含多聚体形式的本发明的产物和一种或多种可药用的载体或稀释剂的组合物，同时也提供这种组合物用在治疗或预防人或动物受试者的免疫疗法中的用途。些，所述施用方式包括口服，直肠，鼻，局部(topical)(包括口腔(buccal)和舌下)，阴道或胃肠外(包括皮下，肌内，静脉内，真皮内，鞘内和硬膜外)。制剂可以方便地制备为单位剂型(unitdosageform)，可以用制药学领域公知的任何方法进行制备。例如，制药学上可以施用的液体组合物可以如下制备将本发明的融合蛋白和任选的药剂学佐剂在载体中进行溶解、分散等，所述载体例如水、盐水、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等，由此形成溶液或悬液。如果需要，待施用的组合物可以辅以pH緩沖剂等物质。实际制备这些剂型的方法在本领域技术人员中是公知的，或者应该是显而易见的；例如，参见Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCompany,Easton，Pennsylvania,19thEdition,1995。本发明的组合物可能额外包含一种或多种佐剂，如矿物盐，如氢氧化铝或磷酸钩，或者细胞因子(cytokines)如IL-12或GM-CSF。SinghandO，Hagan,NatureBiotechnology,17,1075-1081，1999中的表1给出了更全面的合适佐剂的列表，将其公开的内容并入本文作为参考。依据本发明的产物，期望的是以组合物或制剂形式的产物，可以通过对人或动物受试者施用所述产物或其组合物，而将其使用在本文描述的治疗方法中。医师将根据病人和治疗情况来决定可有效缓解待治疗受试者的症状的剂量。剂型或组合物含有的有效成分在2.5-95%之间，剩余部分再辅以无毒载体，由此进行制备。胃肠外施用的特征通常在于注射，为皮下注射、肌肉内注射或静脉内注射。注射剂(injectables)可以方便地制备为常规形式，如溶液或悬液；制备为固体形式，其适合于在注射之前溶解或悬浮在液体中；或制备为乳剂(emulsions)。适合的赋形剂有例如水，盐水，葡萄糖(dextrose),甘油，乙醇等。一项最新发明的胃肠外施用方法应用了緩释或持续释放(sustained-release)系统的植入，因此可以保持恒定水平的剂量。参见实例美国专利3，710，795。产物的剂量决定于抗原的性质，也会参照目前施用在常规疫苗剂型中的该抗原的实践来决定。坤皮动免疫在进一步的方面，本发明提供用含有抗体的免疫血清来被动免疫受试者的方法，所述抗体是通过对宿主受试者接种本发明的产物的方式得到的。宿主受试者可以是人或非人哺乳动物。因此，在进一步的方面中，本发明提供通过此方法得到的免疫血清，以及这种免疫血清在治疗人体或动物体的方法中的用途。DNA疫苗在另一个方面，本发明提供真核表达载体，所述载体包含编码用来治疗人体或动物体的本发明融合蛋白产物的核酸序列。效果。核酸的递送可以使用质粒载体("棵露的(naked)"形式或配方的(formulated)形式)或重组表达载体来实现。对于DNA疫苗接种综述，参见AdaG.andRamshawI，inExpertOpinioninEmergingDrugs8,27-35，2003。可以用在基因递送中的多种病毒载体包括腺病毒，疱渗病毒，痘苗病毒或RNA病毒如反转录病毒。反转录载体可以是鼠科动物(murine)或鸟类反转录病毒。单个外来基因可以插入的反转录病毒载体的实例包括但不限于，莫洛尼鼠白血病病毒(Moloneymurineleukaemiavirus)(MoMuLV)、。合维鼠肉瘤病毒(Harveymurinesarcomavirus)(HaMuSV)、鼠乳腺癌病毒(murinemammarytumourvirus)(MuMTV)和劳斯肉瘤病毒(RousSarcomaVirus)(RSV)。当受试者是人时，可以使用如长臂猿白血病病毒(gibbonapeleukaemiavirus)(GaLV)等作为载体。载体将包括转录调控序列，特别是足以指导RNA合成起始的启动子区域。适用的真核启动子包括小鼠金属>5克蛋白I基因的启动子(HamerWfl/.,1982,J.Molec.Appl.Genet.1:273)，疱渗病毒的TK启动子(McKnight,1982，Cell31:355),SV40早期启动子(Benoist"a/.,1981，Nature290:304)，劳斯肉瘤病毒启动子(Gorman"a/.，1982,Proc.Natl.Acad,Sci.USA79:6777)，和巨细胞病毒启动子(Foecking"a/.，1980,Gene45:101)。论是将载体作为质粒载体还是作为病毒载体的一部分来施用。对于直接或间接施用，质粒DNA可以是"棵露的"，或配以阳离子和中性的脂质(脂质体(liposomes)),或是微胶嚢化的(microencapsulated)。DNA序列也可以包含在病毒(如腺病毒，反转录病毒，疱渗病毒和痘病毒)载体中用于直接或间接递送。递送途径包括但不限于口服、肌肉内、真皮内(Sato,Y.Wa/.，1996,Science273:352-354)、静脉内、动脉内、鞘内、肝内、吸入、阴道内滴注(Bagarazzida/.,1997，JMed.Primatol.26:27)、直肠内、月中瘤内(intratumour)或腹膜内。因此本发明包括此处描述的作为药物组合物的载体，所述药物组合物用于允许用DNA载体转染某些细胞，从而将使治疗多肽得到表达，具有治疗效果，即诱导对抗原的免疫应答。本发明的药物组合物是通过使用溶剂、载体(carrier),递送体系、赋形剂，以及添加剂或辅助剂，将本发明的构建体(construct)制备为适合对受试者施用的形式来制备。经常使用的溶剂包括无菌水和盐水(緩冲的或无緩冲的)。一种载体包括金颗粒，其通过生物射弹递送(即在一定气压下)。其他经常使用的载体或递送系统包括阳离子脂质体，蜗形剂(cochleates)和微胶嚢(microcapsules),其可以作为液体溶液给予，可以包埋在递送胶嚢中，或者可以并入食物中。用于施用基因递送载体的一种可供选择的形式包括脂质体。脂质体的胶嚢化提供用于施用多核苷酸和表达载体的一种可供选择的剂型。脂质体是由脂质双层包围的一个或多个含水小室组成的微小嚢泡。概括而言，参见Bakker-Woudenbergefa/,1993，Eur,J.Clin.Microbiol.Infect.Dis.12(Suppl.1):S61，andKim，1993，Drugs46:618。在组成上，脂质体类似于细胞膜，因此脂质体可以安全地施用，并且是生物可降解的。根据制备方法，脂质体可以是单层或多层的，而且脂质体直径大小从0.02[iM到超过10pM不等。请参见例如Machya/.,1987，LIPOSOMESINCELLBIOLOGYANDPHARMACOLOGY(JohnLibbey),andOstroWa/,，1989,AmericanJ.Hosp.Pharm.4G:15了&通过标准的技术，可以将表达载体包裹在脂质体里。多种不同的脂质体组合物与合成方法已经为本领域技术人员所熟知。参见例如美国专利4,844,904、美国专利5,000,959、美国专利4,863,740、美国专利5,589,466、美国专利5,580，859，和美国专利4,975,282，将它们在此处并入作为参考。通常情况下，施用的脂质体包裹的载体的剂量根据如下因素的不同而不同如患者的年龄，体重，身高，性别，综合医疗状况(generalmedicalcondition)和先前医疗史。特定剂型的剂量范围可以经由合适的模式动物来决定。本发明将通过以下实施例进行阐述。实施例1鸡C4bp寡聚化(oligomerisation)结构域的克隆和表达编码鸡C4bp寡聚化(oligomerisation)结构域的DNA片段是利用如下的寡聚核苷酸引物从鸡基因组DNA中扩增的(内切酶位点用下划线标出)oAVD469:5，GGGGGGATCCAAGAAGCAAGGTGATGCTGATGTGTGCGG3,(SEQIDNO:15)和oAVD470:5，GGGGGAATTCTTATTAGTGCAGAATGTGCTCCAGGAACTC3，(SEQIDNO:16)并且将它作为质粒载体上位于翻译增强子序列和T7启动子下游的BamHI/EcoRI片4史克隆，由此制备质粒pAVD259。SEQIDNO:17为该质粒表达的蛋白AVD259的序列，而SEQIDNO:18为编码该蛋白的核苦酸序列SEQIDNO:17:AVD259蛋白MALKKHHENEISHHGSKKQGDADVCGEVAYIQSVVSDCHVPTEDVKTLLEIRKLFLE耶LKVELQGLSKEFLEHILHSEQIDNO:18:编码AVD259蛋白的DNA序列ACTGAGCAAGGAGTTCCTGGAGCACATTCTGCACTAA实施例2AVD259蛋白的纯化和表征表达将编码鸡C4bp寡聚化结构域的质粒pAVD259在大肠杆菌菌株C41(DE3)中表达。将转化后的细胞在LB培养基中在37。C培养至OD600大约为0.6，然后用终浓度为0.5mM的IPTG诱导表达，将培养物继续在37。C培养4个小时后，用离心的方式收获培养物。AVD259蛋白质的纯化从1升C41(DE3)细胞中纯化蛋白AVD259。将细胞在含有20mMTrispH8.0的緩冲液中超声裂解后，全部蛋白质都存在于可溶级分中。将离心后的上清加样至^^亲和柱。亲和柱纯化将柱子用20mMTrispH8.0平衡(緩沖液A)。将蛋白质用緩沖液B(緩冲液A加上300mMNaCl和300mM。米峻)洗出。凝胶过滤柱(Superdex20026/60制备等级(prepgrade))用20mM，pH8.0的Tris緩冲溶液来平衡Superdex20026/60柱，将来自亲和柱的浓缩AVD259蛋白加到Superdex20026/60柱上。以200ml的体积洗脱蛋白质。确定生物物理特征可以通过在存在和缺失还原剂p-巯基乙醇(BME)的条件下比较蛋白质在SDS-PAGE凝胶上的特性，来检查C4bp寡聚化结构域融合蛋白的寡聚状态。图3显示了新鲜纯化的AVD259蛋白质的特性，此蛋白经快速纯化(少于48小时)，因此暴露在空气中时自动发生的二碌^键的形成还不完全。(二碌b键在细菌细胞溶胶的还原性环境中不会形成)。每条胶道(lane)l含有3|ig,每条胶道2含有5昭，每条胶道3含有8pg。在P-巯基乙醇(标为+Pme)的存在下，蛋白质全部作为单体存在，表观大小约为8kDa。没有(3-巯基乙醇(标为-pme)存在时，单体、二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体和七聚体的条带都清晰可见。实施例3约氏疾原虫(Plasmodiumvoelii)MSP1.19-鸡C4bp融合蛋白(AVD262)的表达为了测试把鸡C4bp寡聚体结构域和抗原融合的效果，将来自约氏疾原虫的MSP1.19抗原与鸡C4bp寡聚体结构域融合。这一实验是用来自pAVD259的BamHI-EcoRI片段(在实施例1中描述)来代替质粒pAVD108中编码鼠C4bp蛋白的BamHI-EcoRI片段而实现的，由此构建了质粒pAVD262。质粒pAVD108在先前的PCT/IB2004/002717的实施例4中已经描述。被称为AVD262的融合蛋白在细菌菌抹C41(DE3)中表达，并且从中纯化。将纯化过的融合蛋白在不添加任何佐剂的情况下用来免疫小鼠、兔和鸡。编码AVD262融合蛋白的核香酸序列为如下的SEQIDNO:19:CTGCACTAA由这个构建体编码的融合蛋白AVD262的氨基酸序列为如下的SEQIDNO:20:MRSHIAS工AL丽LNKSGLVGEGESKKILAKML丽DGMDLLGVDPKHVCVDTRD工PKNAGCFRDDNGTEEWRCLLGYKKGEGNTCVEN丽PTCDI丽GGCDPTASC，AESTENSKKIICTCKEPTPNAYYEGVFCSSSGSKKQGDADVCGEVAYIQSVVSDCHVPTEDVKTLLEIRKLFLEIQKLKVELQGLSKEFLEH工此序列的残基4-138对应于约氏疾原虫MSP1的残基1619-1753，此序列的残基141-202对应于鸡C4bp寡聚化结构域的62个残基。两个部分之间是一个GS接头序列。表达将编码约氏痴原虫-鸡C4bp寡聚体结构域的质粒在大肠杆菌菌抹C41(DE3)中表达。将转化的细胞在LB培养基中在37。C培养至OD600约为0.6，然后用终浓度0.5mM的IPTG来诱导表达，将培养物在37。C继续培养4小时后通过离心收获。AVD262融合蛋白的纯化从一升C41(DE3)细胞中纯化蛋白AVD262。在含有20mMMESpH6.5、5mMEDTA和蛋白酶抑制剂混合物(acocktailofproteaseinhibitors)(Roche)的緩沖液中，全部融合蛋白均出现在细胞超声裂解后的可溶性级分里。将离心后的上清加样至HitrapS柱。阳离子柱(HiTrapS)将柱子用20mMMESpH6.5、5mMEDTA緩沖液(缓冲液A)来平衡。将蛋白质用从緩冲液A到B(緩冲液A加1MNaCl)的10倍于柱体积的梯度洗出。将含有AVD262的HiTrapS级分用Millipore浓缩器(截留值30K)浓缩，其后上样至凝胶过滤柱，之前在终体积为10ml的含有50mMTrispH8和8M尿素的緩沖液中过夜变性。存在尿素的第一凝皎过滤柱(Superdex20026/60制备等级)将Superdex20026/60柱用20mMTris緩沖液8.0、150mMNaCl和8M尿素来平衡，将来自HiTrapS级分的浓缩AVD262蛋白随后上样至Superdex20026/60柱。洗出蛋白的体积为186毫升，将其上样至在PBS中平衡的第二Superdex20026/60柱。第二凝胶过滤柱(S叩erdex20026/60制备等级)将来自第一Superdex20026/60柱的浓缩AVD262蛋白上柱。将蛋白(不再为变性的)以164毫升的体积洗出，对AVD108蛋白进行一样的处理。确定生物物理特征可以通过在存在和缺失还原剂p-巯基乙醇(BME)的条件下比较AVD262蛋白在SDS-PAGE凝胶上的特性，来检查AVD262蛋白的寡聚状态。如图4所示，在无BME时(亚基内二硫键在暴露到空气中子后已经形成)，AVD262蛋白的表观大小约为140kDa;而当有BME存在时，将AVD262蛋白还原，该蛋白质运行出的表观大小仅比20kDa稍大(因为二硫键在细菌溶胶的还原性环境中无法形成)。在图4中，每个胶道l含有2.5jag纯化的蛋白，每个胶道2含有5jug。可以清楚地看到在BME的存在下(标有+(3me的胶道)蛋白质以稍大于20kDa表观大小的单体运行。无(3-巯基乙醇存在时(标记为-卩me)蛋白质以大约140kDa的七聚体运行。实施例4小鼠的免疫将纯化的AVD262蛋白用来免疫三只BALB/c小鼠。未使用佐剂，并且蛋白质存'在于緩沖的等渗的盐水溶液中。每次注射使用40微克(2纳摩尔)蛋白质。每只小鼠皮下注射两次，之间间隔4周(也就是在第O和第29天)。将三只BALB/c小鼠用40微克(也是2纳摩尔)AVD108蛋白进行免疫，AVD108蛋白与AVD262相同，但是具有鼠C4bpC-末端54个氨基酸。每只小鼠在第O和第29天皮下注射两次。最后，将三只小鼠接受在弗氏佐剂中的40微克AVD108(对于第0天的第一次注射使用完全弗氏佐剂，对于第29天的第二次注射使用不完全弗氏佐剂)。在第43天，取所有小鼠的血液，并且针对重组约氏痴原虫抗原测量它们的抗体效价。仅注射了AVD108的小鼠抗体效价为25，600或51,200。接受弗氏佐剂中的AVD108蛋白的小鼠抗体效价为102,400，与接受了无佐剂的AVD262蛋白的小鼠相同。实施例5兔的免疫将纯化的AVD262蛋白用来免疫三只新西兰白(NZW)兔。免疫时间表如下每只兔子接受三次注射，每次间隔两周(换句话说，在第0，14和28天注射)。每次皮下注射100微克(或4.5纳摩尔)蛋白质，蛋白质在緩冲的等渗盐水溶液中，且不添加任何已知的佐剂。作为平行对照，将三只NZW兔根据同样的时间表用20纳摩尔AVD263蛋白免疫。AVD263蛋白和AVD262蛋白除C4bp寡聚化结构域不同外其余都相同，即用兔的C4bp代替了鸡的C4bp寡聚化。它的氨基酸序列SEQIDNO:21^口下戶斤示KMALEVYKLSLEIEIAEiLQRDKARKSSVLRQL在第35天，从每只动物都抽取血液，并用ELISA测量针对重组约氏疾原虫抗原的抗体效价。结果如下接种了AVD262蛋白的兔的抗体效价为25,600,而接种了AVD263蛋白的抗体效价为6,400。这一结果是惊人的，因为AVD262蛋白的用量比注射的AVD263蛋白要少。实施例6鸡的免疫将纯化的AVD262蛋白用来免疫三只鸡。免疫时间表如下每只鸡接受三次注射，每次间隔十天(换句话说，在第0，10和20天)。每次皮下注射含有132微克(或6纳摩尔)的蛋白，蛋白在緩冲的等渗盐水溶液中，不添加任何已知的佐剂。作为平行对照，根据相同的时间表，对三只鸡用6纳摩尔AVD108蛋白来进行免疫。在第35天，/人每只动物抽取血液，并用ELISA测量针对重组约氏症原虫抗原的抗体效价。结果如下接种了AVD262蛋白的鸡具有400的抗体效价，而接种了AVD108的鸡的抗体效价为1,600。实施例7针对C4bp寡聚化结构域的抗体效价对用AVD108和AVD262蛋白免疫过的小鼠和鸡，都进行抗鼠和鸡C4bp寡聚化结构域的抗体效价测试。用AVD108蛋白免疫过的小鼠通过ELISA测量的抗重组小鼠C4bp寡聚化结构域的抗体效价为1600,但是却不能检测到抗重组AVD259蛋白的抗体效价(在免疫前和第43天的效价之间无差异)。AVD262蛋白免疫过的小鼠在第43天时抗鼠C4bp结构域的效价为O(即免疫前和第43天的血清之间无差异)，但这些小鼠在第43天时抗AVD259蛋白的效价为12,800。这说明用非哺乳动物C4bp结构域融合蛋白免疫的小鼠不产生抗内源鼠C4bp结构域的抗体，而用鼠C4bp寡聚化结构域来免疫小鼠的确会诱导抗内源结构域的抗体。用同样的两种蛋白(AVD108和AVD262)免疫的鸡显示了互补的结果。即用AVD262蛋白免疫的鸡具有102,000的抗AVD259蛋白的抗体效价，但抗鼠C4bp寡聚化结构域的效价却为0。不过用AVD108蛋白免疫的鸡没有可检测到的抗AVD259蛋白的抗体，而抗鼠C4bp寡聚化结构域的抗体效价为800。在免疫前血清中无法检测到抗鼠结构域的抗体。实施例8另一个非哺乳动物C4bp序列的分离利用NCBI^是供的非连续性兆级blast(discontinuousmegablast)程序(http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/tracemb.shtml)，使用编码鸡C4bp寡聚化结构域的核苷酸序列(图1所示)来搜索斑胸草雀(Taeniopygiaguttata)的不完全基因组DNA序列。找到了几个编码斑胸草雀C4bp寡聚化结构域的痕迹序列(tracesequence),所述痕迹序列包含完全相同的153个核苷酸的序列。斑胸草雀C4bp寡聚化结构域的核酸序列SEQIDNO:22如下所示斑胸草雀C4bp寡聚化结构域的氨基酸序列SEQIDNO:23如下所示:斑胸草雀C4bp寡聚化结构域和鸡C4bp寡聚化结构域的比对(alignment)显示只有48%的比对氨基酸残基是相同的(以粗体强调)。因此，即使在不成熟的(raw)DNA序列数据库中，用鸡的DNA序列来鉴定同源的C4bp寡聚化结构域是可行的。变体〇DKKQGDADVCGEVAYIQSVVSDCHVPTEDVKTLLEIRKLFLEI斑胸草雀MKEGDGDVCQEVHY工KSTFECGVPVEEVK工LLEIQKLLLEI变体ODQKIiKVEIiQGLSKEFLEHILH*斑胸草雀NKIiEMEIiEN*实施例9鸡C4bp结构域的截短突变体的活性证明实施例3中描述的AVD262蛋白是通过缺失最后7个C末端氨基酸得到的。使用以下寡核苷酸引物通过PCR来扩增编码C4bp结构域截短版本的基因(SEQIDN〇24)T7F:TAATACGACTCACTATAGGG(SEQIDNO:25)PCR产物通过限制性内切酶BamHI和EcoRI消化，并重新克隆到pAVD262载体上的相同位点之间，由此形成质粒pAVD317。此构建体编码的蛋白AVD317的氨基酸序列是SEQIDNO:26，如下MRSHIASIAL丽LNKSGLVGEGESKKILAKMLNMDGMDLLGVDPKHVCVDTRDIPKNAGCFRDDNGTEEWRCLLGYKKGEGNTCVEN丽PTCDI丽GGCDPTASCQNAESTENSKKIICTCKEPTPNAYYEGVFCSSSGSKKQGDADVCGEVAY工QSVVSDCHVPTEDVKTLLEIRKLFLE工QKLKVELQGLSKE使用用于蛋白AVD262的纯化流程来纯化AVD317蛋白。使用与实施例4中相同的免疫时间表来免疫小鼠，即对三只BALB/c小鼠进行免疫，且不添加任何佐剂。纯化的蛋白在緩冲的等渗盐水溶液中。每次注射使用2纳摩尔蛋白质，每只小鼠皮下注射两次，每次间隔4周(换句话说即在第0天和第29天)。在第43天从所有小鼠抽取血液，并用ELISA测量它们抗重组约氏痴原虫抗原的抗体效价。注射了不含任何佐剂的AVD317的小鼠抗体效价为104,000，表明截短并没有减弱鸡C4bp结构域的生物学活性。实施例10实施例9的截短突变体使不溶性融合蛋白变为可溶性蛋白AVD290和AVD291是通过将GnRH(促性腺激素释》文激素)分别和所述结构域的长形式或短形式进行融合而得到的。AVD290是通过下列2个寡核苦酸的退火来制备oAVD607:5fTATGGAACATTGGAGCTATGGCCTGCGTCCGGGCG3'(SEQIDN〇27)oAVD608:5'GATCCGCCCGGACGCAGGCCATAGCTCCAATGTTCCA3'(SEQIDNO:28〉将退火的寡核苷酸克隆到pAVD262质粒的Ndel和BamHI位点之间。将同样的2个寡核苷酸克隆到pAVD317质粒的NdeI和BamHI位点之间，形成pAVD291质粒。编码AVD2卯融合蛋白的核香酸序列SEQIDNO:29所示如下TGCACTAA由此构建体编码的AVD290融合蛋白的氨基酸序列SEQIDNO:30所示如下ME丽SYGLRPGGSKKQGDADVCGEVAYIQSVVSDCHVPTEDVKTLLEIRKLFLEIQKLKVELQGLSKEFLEHILH编码AVD291融合蛋白的核苷酸序列SEQIDNO:31所示如下CAAAAACTGAAGGTGGAATTGCAAGGACTGAGCAAGGAGTAA由此构建体编码的AVD291融合蛋白的氨基酸序列SEQIDNO:32所示如下MEHWSYGLRPGGSKKQGDADVCGEVAY工QSVVSDCHVPTEDVKTLLEIRKLFLEIQKLKVELQGLSKE当AVD290蛋白的表达在菌林C41(DE3)中诱导时，发现大于90%的表达产物不溶，使用的诱导条件如下当OD600达到0.5时，加入0.5mMIPTG,继续温育3小时后收获细菌。将细菌通过用Emulsiflex仪器破坏来裂解。在相同的诱导条件下，AVD291蛋白是可溶的。甚至在将裂解细菌的提取物在75。C加热15分钟后，AVD291蛋白仍然保持可溶，而此条件导致大部分细菌蛋白质不溶。这些结果说明缺失鸡结构域的最后7个氨基酸会剧烈地改变融合蛋白的溶解性。因此，纯化被大大简化了。纯化中的最后步骤是通过在20mMTrisHCl、pH7.0緩沖液中的DEAE上的离子交换层析(洗脱时使用盐浓度梯度，10倍柱体积的含有1MNaCl的相同緩沖溶液)和在SuperdexS7526/60柱上的大小排阻凝胶层析来进行的。实施例11未截短的鸡C4bp结构域的C末端促进蛋白质纯化如前面实施例所讨i仑的，AVD262和AVD317蛋白的不同之处仅在于有无C末端处的7个氨基酸。将AVD262蛋白用它所结合的镍亲和层析柱(来自GE的Ni-NTA)来纯化，并且能够通过在结合用的緩冲液中加入咪唑来将AVD262蛋白从该柱洗脱。AVD317在相同条件下不与柱子结合。表达AVD262蛋白的细菌在仅含有10mMTrisHClpH7.0的緩冲液中裂解，并且通过在SorvallS34转子中以10,000rpm离心将不溶性材料除去。向新的上清中加入NaCl至终浓度为300mM,将溶液与Ni-NTA在4。C温育1小时。然后将全部溶液倒入柱子，先用含有50mMNaP04、300mMNaCl和0.1%TritonX-100,pH7.5的溶液洗涤，然后用不含Triton-XlOO的同样的緩沖溶液来洗涤。将AVD262蛋白用含有200mM咪唑，150mMNaClpH8.0的溶液洗脱。实施例12与鸡C4bp结构域的融合使内源抗原具有高免疫原性当GnRH与截短的结构域融合后(AVD291),通过用AVD291蛋白免疫小鼠来测试GnRH的免疫原性。将三只BALB/c小鼠用2纳摩尔的AVD291蛋白来免疫。每只小鼠在第0天和第29天皮下注射两次。所有小鼠在第43天抽血，并测定它们抗重组蛋白的抗体效价，此融合蛋白是通过把GnRH抗原融合到谷胱甘肽S转移酶(GST)蛋白的C末端而得到的。两只小鼠的抗体效价为5,120，而第三只的抗体效价为10,240。另外的三只小鼠根据相同的免疫方案接种了AVD291蛋白，但第一次注射的AVD291蛋白包含在完全弗氏佐剂中，而第二次注射的AVD291蛋白包含在不完全弗氏佐剂中，这三只小鼠的抗体效价分别是5，120，10,240和20,480。此结果说明与截短的鸡C4bp结构域的融合使GnRH非常有免疫原性，而且可通过添加佐剂进一步增加免疫原性。实施例13连续4个氨基酸的突变不会削弱鸡C4bp结构域的生物学活性将pAVD317质粒用Stratagene的含有PfbUltra的定点诱变试剂盒和以下的两个寡核苷酸来突变CGAAAACTC(SEQIDNO:33)GGCAATCGG(SEQIDNO:34)。编码AVD313融合蛋白的核香酸序列SEQIDNO:35所示如下此构建体编码的融合蛋白AVD313的氨基酸序列SEQIDNO:36所示如下MRSHIAS工AL丽LNKSGLVGEGESKKILAKML腿DGMDLLGVDPKHVCVDTRDIPKNAGCFRDDNGTEEWRCELGYKKGEGNTCVEN丽PTCDI丽GGCDPTASCQNAESTENSKKIICTCKEPTPNAYYEGVFCSSSGSKKQGDADVCGEVAYIQSWSDCHVPTAELRTLLEIRKLFLEIQKLKVELQGLSKE使用与AVD262蛋白所用的相同緩沖液和柱子来纯化AVD313蛋白。将六只BALB/c小鼠用2纳摩尔的AVD313蛋白进行免疫。每只小鼠在第0天和第29天皮下注射两次。将所有小鼠在第43天取血，并且测量它们抗重组约氏疾原虫抗原的抗体效l介。所有仅注射了AVD313的小鼠的抗体效价为204,000,说明鸡C4bp结构域的截短和突变没有减弱其生物活性。与AVD317相比，AVD313中的四个氨基酸改变以下划线标注在SEQIDNO:36所示的AVD313的氨基酸序列中。AVD313融合蛋白中的修饰过的鸡C4bp结构域与人C4bp结构域相比具有小于20%的同一性，因此修饰过的鸡C4bp结构域在人的免疫中高度优选，因为它引起与人C4bp交叉反应的抗体的可能性4艮小。实施例14CRES结构域共有鸡C4bp结构域的生物学活性我们检测了CRES结构域(图1所示)是否也使抗原的免疫原性增加。图1所示的CRES结构域具有氨基酸序列如下SEQIDNO37:WWP使用如下两种寡核苷酸引物从鸡的基因组DNA中扩增编码CRES结构域的核苷酸序列AGG(SEQ工DNO:38)oAVD468:GGGGGAATTCTTATTACGGCCACCAGCGGCCTCCTTTGGC(SEQIDNO:39)将PCR产物用限制性内切酶BamHI和EcoRI消化，再克隆到pAVD262载体中的相同位点之间，从而形成质粒pAVD314。编码AVD314融合蛋白的核苷酸序列是SEQIDNO:40，如下AGCTGGGAGCCAAAGGAGGCCGCTGGTGGCCGTAATAAGAATTC由此构建体编码的融合蛋白AVD314的氨基酸序列是SEQIDNO:41，如下MRSHIAS工AL丽LNKSGLVGEGESKK工LAKML丽DGMDLLGVDPKHVCVDTRD工PKNAGCFRDDNGTEEWRCLLGYKKGEGNTCVE丽NPTCDI丽GGCDPTASCQNAESTENSKK工ICTCKEPTPNAYYEGVFCSSSGSKTFYVRKKIDQIKETFDCGLPLAELRTLLEVQKLYLEIQKLEKELGAKGGRWWP使用与AVD262蛋白所用相同的緩沖液和柱子来纯化AVD314蛋白。将三只BALB/c小鼠用2纳摩尔AVD314蛋白来免疫。每只小鼠在第0天和第29天皮下注射两次。所有小鼠在第43天抽血，并且测量它们抗重组约氏痴原虫抗原的抗体效价。所有仅注射了AVD314的小鼠的抗体效价为51,200，与之对比的是注射了AVD262蛋白的小鼠的抗体效价为204,000。这说明CRES结构域像鸡C4bp结构域一样有生物学活性，并能显著地增强抗原的免疫原性。权利要求1.以基本上分离的形式存在的SEQIDNO:1的C4bp结构域或其变体。2.根据权利要求1的C4bp结构域，其由SEQIDNO:l的残基1-62组成。3.根据权利要求1的C4bp结构域，其中所述变体是SEQIDNO:l中至少48个连续氨基酸的片段。4.根据权利要求1的C4bp结构域，其中所述变体与SEQIDNO:l具有至少70%氨基酸序列同一性。5.根据权利要求1或4的C4bp结构域，其中所述变体包含N末端缺失1-8个氨基酸的SEQIDNO:l。6.根据权利要求1、4或5的C4bp结构域，其中所述变体包含C末端缺失1-8个氨基酸的SEQIDNO:l。7.根据权利要求6的C4bp结构域，其中所述变体具有SEQIDNO:42所示的氨基酸序列。8.根据权利要求1或3-6中任一项的C4bp结构域，其中所述变体包含1-8个氨基酸取代。9.根据权利要求6或8的C4bp结构域，其中所述变体具有SEQIDNO:43所示的氨基酸序列。10.根据权利要求1、3-6或8中任一项的C4bp结构域，其中所述变体含有SEQIDNO:l中的下列氨基酸残基Cys22,Leu33,Glu34，Lys37,Leu38,Leu40，Glu41,11e42和Leu45。11.以基本上分离的形式存在的SEQIDNO:23的C4bp结构域或其变体。12.根据权利要求11的C4bp结构域，其中所述变体与SEQIDNO:23具有至少70%氨基酸序列同一性。13.根据权利要求11或12的C4bp结构域，其中所述变体包含N末端缺失1-8个氨基酸的SEQIDNO:23。14.根据权利要求11或12的C4bp结构域，其中所述变体包含C末端缺失1-8个氨基酸的SEQIDNO:23。15.根据权利要求11-14中任一项的C4bp结构域，其中所述变体包含1-8个氨基酸取代。16.产物，其包含非哺乳动物C4bp结构域或其变体；和抗原。17.根据权利要求16的产物，其中所述C4bp结构域是SEQIDNO:l的C4bp结构域或其变体。18.根据权利要求17的产物，其中所述结构域是如权利要求2-10任一项中所定义的。19.根据权利要求11的产物，其中所述C4bp结构域是SEQIDNO:23的C4bp结构域或其变体。20.根据权利要求19的产物，其中所述结构域是权利要求12-15任一项中所定义的。21.根据权利要求11的产物，其中所述C4bp结构域包含如SEQIDNO:37所示的CRES(鸡的补体调节性分泌蛋白)结构域,或其变体。22.根据权利要求21的产物，其中所述变体与SEQIDNO:37具有至少70%氨基酸序列同一性。23.根据权利要求21或22的产物，其中所述变体包含N末端缺失1-8个氨基酸的SEQIDNO:37。24.根据权利要求23的产物，其中所述变体含有N末端缺失4个氨基酸的SEQIDNO:37。25.根据权利要求21或22的产物，其中所述变体包含C末端缺失1-8个氨基酸的SEQIDNO:37。26.根据权利要求21-25中任一项的产物，其中所述变体包含l-8个氨基酸取代。27.根据权利要求16-26中任一项的产物，其中所述抗原与所述C4bp结构域的N末端或C末端融合。28.根据权利要求27的产物，其中所述融合是通过柔性接头。29.根据权利要求16-28中任一项的产物，其中所述抗原是痴原虫属裂殖子表面蛋白1的单体抗原性片段。30.根据权利要求16-28中任一项的产物，其中所述抗原是流感病毒血凝素蛋白或流感M2e肽的单体抗原性片段。31.根据权利要求16-28中任一项的产物，其中所述抗原是人体内源性的。32.根据权利要求31的产物，其中所述抗原促进肿瘤生长。33.根据权利要求32的产物，其中所述抗原是促性腺激素释放激素(GnRH)。34.组合物，其含有前述权利要求中任一项所述的产物和可药用的稀释剂、载体或佐剂。35.根据权利要求16-33中任一项的产物或权利要求34中所述的组合物在治疗人体或动物体的方法中的用途。36.疟疾的免疫治疗方法，包括对个体施用有效量的根据权利要求29的产物。37.权利要求36的方法，其中所述个体被疰原虫所感染。38.权利要求36的方法，其用于预防性接种。39.根据权利要求29的产物，其用来治疗或预防疾疾。40.根据权利要求29的产物在生产治疗或预防痴疾的药物中的用途。41.生产抗疟原虫属寄生物的抗体的方法，所述方法包括将权利要求29的产物引入非人哺乳动物，和从所述哺乳动物收集免疫血清。42.针对受试者疾病的被动免疫方法，所述方法包括对所述受试者施用含有抗体的免疫血清，所述免疫血清通过用权利要求16-33中任一项的产物接种宿主受试者获得。43.在人受试者中被动免疫治疗疾疾的方法，所述方法包括对所述人施用有效量的根据权利要求41生产的免疫血清。44.根据权利要求41中的方法得到的免疫血清，用于在人受试者中免疫治疗痴疾的方法。45.流感的免疫治疗方法，包括对个体施用有效量的根据权利要求30的产物。46.权利要求45的方法，其中所述个体被流感病毒感染。47.权利要求45的方法，其用于预防性接种。48.根据权利要求30的产物，其用以治疗或预防流感。49.根据权利要求30的产物在生产治疗或预防流感的药物中的用途。50.生产抗流感抗体的方法，所述方法包括将权利要求30的产物引入非人哺乳动物，和从所述哺乳动物收集免疫血清。51.在人受试者中被动免疫治疗流感的方法，所述方法包括对所述人施用有效量的根据权利要求50生产的免疫血清。52.通过权利要求50的方法得到的免疫血清，用于在人受试者中免疫治疗流感的方法。53.生产抑制肿瘤生长的抗体的方法，所述方法包括将权利要求31-33中任一项的产物引入非人哺乳动物，和从所述哺乳动物收集免疫血清。54.制备包含以下组分的产物的方法作为第一组分的非哺乳动物C4bp结构域或其变体；和作为第二组分的多肽或非多肽抗原，所述方法包括表达编码第一组分的核酸，结合所述第一组分和第二组分，和回收产物。55.制备包含下列组分的融合物的产物的方法作为第一组分的非哺乳动物C4bp结构域或其变体；和作为第二组分的多肽抗原，所述方法包括表达编码融合物的核酸，和回收产物。56.权利要求54或55的方法，其中核酸在原核宿主细胞中表达。57.根据权利要求56的方法，其中将融合蛋白以多聚体形式回收。58.增加抗原免疫原性的方法，所述方法包括将所述抗原与非哺乳动物C4bp结构域或其变体结合。59.权利要求54-58中任一项的方法，其中所述C4bp结构域是如权利要求1-10的任一项中定义的SEQIDNO:l的C4bp结构域或其变体。60.权利要求54-58中任一项的方法，其中所述C4bp结构域是SEQIDNO:23的C4bp结构域或其变体。61.权利要求54-58中任一项的方法，其中所述C4bp结构域包含如SEQIDNO:37中所示的CRES结构域或其变体。62.权利要求54-61中任一项的方法，其中抗原是人体内源性的。63.权利要求62的方法，其中所述抗原促进肿瘤生长。64.权利要求63的方法，其中所述抗原是GnRH。65.表达载体，其含有编码如下组分的融合蛋白的核酸序列非哺乳动物C4bp结构域或其变体；和多肽抗原，所述核酸序列与在宿主细胞中有功能的启动子可操作地连接。66.权利要求65的表达载体，其中所述C4bp结构域是如权利要求1-15的任一项中所定义的。67.权利要求65或66的表达载体，其中所述抗原是如权利要求27-33的任一项中所定义的。68.用权利要求65-67中任一项的表达载体转化的细菌宿主细胞。69.用权利要求65-67中任一项的表达载体转化的真核宿主细胞。70.权利要求65-67中任一项的表达载体，用于治疗人体或动物体的方法。71.纯化含有氨基酸序列FLEHILH或其变体的多肽的方法，所述方法包括下列步骤i)提供所述的多肽，单独提供或与其他组分混合提供，ii)在所述氨基酸序列与镍亲和层析柱结合的条件下将所述多肽和柱接触，iii)洗涤结合部件以去除任何未结合的组分，和iv)从所述结合部件洗脱多肽。72.权利要求71的方法，其中将所述氨基酸序列FLEHILH或其变体置于所述多肽的C末端。73.权利要求71或72的方法，其中所述变体包含2个组氨酸。74.权利要求71-73的方法，其中所述多肽是融合蛋白。75.权利要求71-74中任一项的方法，其中所述多肽或融合蛋白包含如SEQIDN0:1中所示的C4bp结构域或其变体。76.纯化蛋白的肽标记，所述肽标记包含氨基酸序列FLEHILH或其变体。77.根据权利要求31-33中任一项的产物用来治疗或预防癌症。78.根据权利要求31-33中任一项的产物用于生产治疗或预防癌症的药物中的用途。79.根据权利要求77或权利要求78的产物或产物的用途，其中所述治疗是与附加的抗肿瘤治疗组合实施的。80.根据权利要求79的产物或产物的用途，其中所述的附加的抗肿瘤治疗是化疗。81.根据权利要求77-80的产物或产物的用途，其中所述抗原与所述C4bp结构域的N末端或C末端融合。全文摘要本发明涉及包含C4bp结构域和抗原的产物，所述C4bp结构域为非哺乳动物来源的C4bp结构域，特别是SEQIDNO1、SEQIDNO23或SEQIDNO37的C4bp结构域，或者是其变体。在理想状态下产物是融合蛋白的形式。也对SEQIDNO1和SEQIDNO23的鸡C4bp结构域进行了描述。抗原包括单体抗原，如疟疾和流感抗原。C4bp结构域提供给抗原的多聚体复合物或其混合物的装配。这些复合物可以用作疫苗。文档编号C07K19/00GK101384617SQ200680052074公开日2009年3月11日申请日期2006年11月29日优先权日2005年11月30日发明者劳伦斯·杜蒙,让-巴普蒂斯特·马钱德,费加尔·希尔申请人:艾马克西奥公司