专利名称：以hp-20大孔树脂分离纯化厚朴酚与和厚朴酚的方法
技术领域：
本发明涉及一种分离纯化中药材植物中药用活性成分的绿色化学工艺技术，尤指 一种采用HP-20大孔吸附树脂分离纯化厚朴植物中的厚朴酚与和厚朴酚的绿色分离纯化 方法。
背景技术：
厚朴为木兰科落叶乔木植物厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.或凹叶 厚朴M. officinalis Rehd. et Wils. var. biloba Rehd. et Wils的干燥干皮、枝皮及根皮。 是我国特有的常用中药材，被誉为三本药材，系国家计划与管理的麝香、甘草、杜仲、厚朴四 种重要中药材之一。在我国云南、四川、贵州、云南、浙江、福建、湖南等省有大量分布。现有 以厚朴为原料的中成药配方有数十种，具有显著的燥湿、行气、除满功效，临床用于治疗湿 滞伤中、脘脾吐泻、食积气滞、痰水喘咳等症。目前市面上的开胸顺气丸、藿香正气丸、木香 顺气丸、鳖甲煎胶囊、保济丸、香砂养胃丸等传统中药或新药中均以厚朴及其功能提取物为 主药。研究证实，厚朴主体功能成分主要为苯丙素酚类化合物厚朴酚及和厚朴酚，其含量约 为厚朴干皮的3 5%。因此分离纯化厚朴酚及和厚朴酚具有重要意义，从而使其更有效 的应用于制药工业，提高厚朴资源的利用率。目前分离纯化厚朴酚与和厚朴酚的主要方法 有 水提法根据厚朴酚类物质溶于碱的性质，通过加入5-10倍量水使厚朴粗粉中挥 发油发油后，用NaOH调成0. 2mol/L的碱溶液，滤液用乙醚反复萃取，合并醚层后，用2 % Na2C03洗涤并用无水乙醇Na2S04干燥，过夜，挥去醚层得结晶，结晶用水重结晶一次，产物得 率4%左右。 碱提酸沉法取厚朴粗粉，加入1/5量(W/W)的生石灰粉，搅拌均匀后，用15 20 倍量的蒸馏水渗漉，得渗漉液。加入HC1溶液调至pH2 3，静置，收集析出的沉淀，用蒸馏 水洗涤沉淀物至pH 6 7。得粗提物干燥后，用环己烷，索氏提取，提取液浓縮后放冷析出 白色结晶。 聚酰胺分离纯化法取药材粉末，用乙醇提取，回收乙醇得稠膏。经过聚酰胺柱，先 用0. 5 % 、0. 8 % 、 1 % Na0H梯度冲洗，洗液用稀HC1溶液调至酸性，析出结晶，可将厚朴酚和 厚朴酚分离。 超临界C02萃取法采用萃取压力25MPa、萃取温度35°C _40°C 、物料粒度40目、萃
取时间6h的工艺技术，萃取率达到90X以上，萃取物颜色浅黄，品质好，无溶剂残留。将提
取物用适量石油醚溶解，静置24h，滤过，滤液回收石油醚后用石油醚和乙酸乙酯(17 : 4)
重结晶，得厚朴酚晶体，母液回收后用石油醚重结晶得和厚朴酚晶体，由于采用气体做溶
剂，导致不同研究人员得出的适宜工艺稍又不同，有待进一步研究确定。 高速逆流色谱法厚朴药材粉经有机溶剂反复萃取后，真空减压浓縮成浸膏后，用
石油醚、乙酸乙酯、四氯化碳、甲醇和水按照i :i:8:6: i配成两相溶剂，分液漏斗静
置分层，分出上下相，开启逆流色谱仪，转速为300转，以5ml/min的流速注入流动相分部收集，其纯度分别为99. 68%，99. 63%。厚朴化学成分复杂，既含有易溶于乙醇等极性溶剂的 酚类活性成分，也含有易溶于水或缓冲液的蛋白质、酶、多糖等水溶性生物大分子杂质和鞣 质、有机酸、低聚糖等不溶性生物小分子杂质，甚至还含有易溶于石油醚等非极性溶剂的叶 绿素、脂类、树胶等脂溶性杂质成分。显然上述有关厚朴酚与和厚朴酚提取、分离纯化方法 虽能制备具有一定纯度和得率的厚朴酚与和厚朴酚提取物，但由于受到技术手段的限制以 及加工过程中使用了大量的有毒有机溶剂或化学制剂，使得产品明显存在安全性欠佳或者 纯度与得率不高、易吸湿、功效不明显、产品的品质和市场竞争力不足等缺陷。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术的不足，提供一种高效、绿色安 全、低成本、高得率、高纯度、适用于工业生产的以HP-20大孔树脂分离纯化厚朴酚与和厚 朴酚的方法。 为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是一种以HP-20大孔树脂分 离纯化厚朴酚与和厚朴酚的方法，包括以体积浓度为50 70%的食用乙醇于80-9(TC下提 取厚朴粗提物；其特点是还包括将所述厚朴粗提物以HP-20大孔吸附树脂分离纯化的步 骤 按300 500克上述厚朴粗提物加200 400毫升体积浓度为40 80%的食用 乙醇的比例溶解厚朴粗提物，然后采用HP-20大孔吸附树脂吸附至饱和；先用2 5BV的 水(是相对于树脂量而言的，是体积为2 5倍树脂量的水，简写为2 5BV ;以下的所有 BV均是相对于树脂量而言的)以1 3BV/小时的流速冲洗，再用1 5BV的体积浓度为 60 70%食用乙醇以1 3BV/小时的流速冲洗，接着再分别采用1 5BV的体积浓度为 76 80%及1 5BV的体积浓度为84 90%的食用乙醇以1 3BV/小时的流速依次进 行洗脱，分部收集，洗脱液分别在-O. 05 -0. 09MPa、40 7(TC条件下，减压浓縮回收乙醇、 真空冷冻干燥便得纯化的厚朴酚与和厚朴酚。 上述的食用乙醇提取的厚朴粗提取物的制备方法是将厚朴烘干后粉碎过30目 筛，用体积浓度为50 70%的食用乙醇，按1公斤厚朴粉加12 20升食用乙醇的比例分 两次在80 9(TC下浸提，每次浸提时间为2. 0 3. 0小时，合并两次浸提的粗滤液并过200 目尼龙布，并用高速离心机进离心澄清，取澄清液；将澄清液在40 45t:下减压浓縮，回收 食用乙醇溶剂后真空冷冻干燥，即得粗提物。 其中，上述分两次浸提是先按1公斤厚朴粉加10升食用乙醇提取2. 0-3. 0小时后 过滤，再用2-10升食用乙醇提取2. 0-3. 0小时后过滤。 HP-20大孔吸附树脂的处理试验所用新购树脂需先用体积浓度为80 95%食 用乙醇浸泡20 30小时，充分溶胀后装柱，用体积浓度为80 95%的食用乙醇清洗至流 出液加等量蒸馏水无白色浑浊为止，再用蒸馏水洗至无醇味即可。已使用过树脂则需采用 1 5% NaOH浸泡1 5小时后水洗至中性，再用1 5%柠檬酸浸泡1 5h后水洗至中 性即可。 上述步骤中，采用经静态吸附与解吸筛选出来的大孔吸附树脂吸附厚朴酚与和厚 朴酚，对未被大孔吸附树脂吸附部分，经减压浓縮回收乙醇。对上述步骤中吸附在大孔吸附 树脂的厚朴酚与和厚朴酚进行洗脱回收，先用水洗去极性杂质和小部分色素，再用较低浓度的食用乙醇洗去大部分的色素等杂质，最后采用较高浓度的食用乙醇依次洗脱厚朴酚、和厚朴酚。 与现有技术相比，本发明的优点是 1、集成采用食用乙醇安全无毒地提取厚朴活性成分、HP-20大孔树脂分离纯化厚朴酚与和厚朴酚等方法，不仅能工业化生产安全有效的不同纯度规格的厚朴酚提取物以及和厚朴酚提取物，用于后续的抗氧化、抗腹泻等功能产品的研发，从而真正地安全、简便、合理、经济地实现厚朴资源的高值化利用和系列产品的工业化生产，充分体现出绿色化学生产的理念和循环经济的策略。因而，本发明具有理论新颖、技术科学、操作及产品安全、工艺简便、经济可行、环境友好等特点。 2、采用天然产物化学及中药现代化生产技术提取、分离纯化厚朴主要活性成分厚朴酚与和厚朴酚，将其制成国际通行的各种纯度规格的厚朴提取物以及和厚朴酚提取物，较好地顺应和满足现代功能食品、保健品、药品、食品添加剂、饲料添加剂、日化用品等健康领域对其天然、安全、有效、方便的需求，同时，符合国家中药现代化与国际化的产业政策。
具体实施例方式
以湖南江华落叶乔木厚朴为研究对象。 首先制备厚朴粗提物将厚朴烘干后粉碎过30目筛，称取5公斤的厚朴粉，用50升体积浓度为60%食用乙醇于85t:下提取2. 5小时后趁热过滤，滤液快速冷却，渣再用30升体积浓度60%的食用乙醇于85t:下提取2. 5小时后趁热过滤，滤液快速冷却，合并滤液过200目尼龙布，并用高速离心机进行离心澄清，取澄清液于4(TC下减压浓縮，回收食用乙醇溶剂后真空冷冻干燥，制得厚朴酚与和厚朴酚的粗提物773. 4克，用高效液相色谱法测得提取物中厚朴酚与和厚朴酚的含量分别为12. 49%及8. 95%，厚朴酚与和厚朴酚的提取率以烘箱法测得分别为86. 78%及89. 34%。
实施例1 : 选用已清洗干净的HP-20大孔吸附树脂作为厚朴酚与和厚朴酚的分离纯化树脂，将400克上述厚朴粗提物溶解于300毫升体积浓度为60%的食用乙醇中配制成厚朴粗提溶液，将溶液上柱、HP-20大孔树脂吸附饱和并稳定后，先用3BV的水以2BV/小时的流速洗去极性杂质和小部分色素，再用3BV的体积浓度为65% (以下所有乙醇的浓度皆为体积浓度)食用乙醇以2BV/小时的流速洗去大部分的色素等杂质，最后再先后采用3BV的78 %食用乙醇以2BV/小时的流速以及3BV的87 %食用乙醇以2BV/小时的流速依次进行洗脱，分部收集①收集78%食用乙醇洗脱的第2. 0 3. 0BV部分，并在-0. 07MPa、58。C条件下，减压浓縮回收乙醇、真空冷冻干燥成大孔树脂分离后的和厚朴酚提取物产品，其纯度为90. 4%，得率为86. 5% ;②收集87%食用乙醇洗脱的第1. 0 3. OBV部分，并在_0. 07MPa、5『C条件下，减压浓縮回收乙醇、真空冷冻干燥成大孔树脂分离后的厚朴酚提取物产品，其纯度为96. 7 % ，得率为87.5%。
实例2 : 选用已清洗干净的HP-20大孔吸附树脂作为厚朴酚与和厚朴酚的分离纯化树脂，将400克上述厚朴粗提物溶解于300毫升体积浓度为60%的食用乙醇中配制成厚朴粗提溶液，将溶液上柱、HP-20大孔树脂吸附饱和并稳定后，先用3BV的水以2BV/小时的流速洗去
5极性杂质和小部分色素，再用3BV的65X食用乙醇以2BV/小时的流速洗去大部分的色素等杂质，最后再先后采用3BV的76 %食用乙醇以2BV/小时的流速以及3BV的85 %食用乙醇以2BV/小时的流速依次进行洗脱，分部收集①收集76%食用乙醇洗脱的第2. 0 3. 0BV部分，并在-0. 09MPa、42t:条件下，减压浓縮回收乙醇、真空冷冻干燥成大孔树脂分离后的和厚朴酚提取物产品，其纯度为87.4%，得率为82. 5 % ;②收集85 %食用乙醇洗脱的第1. 0 3. OBV部分，并在-0. 09MPa、42t:条件下，减压浓縮回收乙醇、真空冷冻干燥成大孔树脂分离后的厚朴酚提取物产品，其纯度为90. 7%，得率为81. 5% 。
实例3 : 选用已清洗干净的HP-20大孔吸附树脂作为厚朴酚与和厚朴酚的分离纯化树脂，将400克上述厚朴粗提物溶解于300毫升体积浓度为60%的食用乙醇中配制成厚朴粗提溶液，将溶液上柱、HP-20大孔树脂吸附饱和并稳定后，先用3BV的水以2BV/小时的流速洗去极性杂质和小部分色素，再用3BV的65X食用乙醇以2BV/小时的流速洗去大部分的色素等杂质，最后再先后采用3BV的80%食用乙醇以2BV/小时的流速以及3BV的89%食用乙醇以2BV/小时的流速依次进行洗脱，分部收集①收集80%食用乙醇洗脱的第2. 0 3. OBV部分，并在-0. 05MPa、7(TC条件下，减压浓縮回收乙醇、真空冷冻干燥成大孔树脂分离后的和厚朴酚提取物产品，其纯度为91.3%，得率为85.9%;@收集89%食用乙醇洗脱的第1.0 3. OBV部分，并在-0. 05MPa、7(TC条件下，减压浓縮回收乙醇、真空冷冻干燥成大孔树脂分离后的厚朴酚提取物产品，其纯度为92. 8%，得率为86. 7% 。
对比实验 选用已清洗干净的聚酰胺树脂作为厚朴酚与和厚朴酚的分离纯化树脂，将400克上述厚朴粗提物溶解于300毫升体积浓度为60%的食用乙醇中配制成厚朴粗提溶液，将溶液上柱、聚酰胺树脂吸附饱和并稳定后，用0. 5 % 、0. 8 % 、 1 % NaOH梯度冲洗，洗液用稀HC1溶液调至酸性，析出结晶，可将厚朴酚和厚朴酚分离。和厚朴酚提取物产品，其纯度为62. 1%，得率为70. 2% ;厚朴酚提取物产品，其纯度为52. 8%，得率为65. 4% 。
权利要求
一种以HP-20大孔树脂分离纯化厚朴酚与和厚朴酚的方法，包括以体积浓度为50～70％的食用乙醇于80-90℃下提取厚朴粗提物；其特征在于还包括将所述厚朴粗提物以HP-20大孔吸附树脂分离纯化的步骤按300～500克上述厚朴粗提物加200～400毫升体积浓度为40～80％的食用乙醇的比例溶解厚朴粗提物，然后采用HP-20大孔吸附树脂吸附至饱和；先用2～5BV的水以1～3BV/小时的流速冲洗，再用1～5BV的体积浓度为62～68％食用乙醇以1～3BV/小时的流速冲洗，接着再分别采用1～5BV的体积浓度为76～80％及1～5BV的体积浓度为84～90％的食用乙醇以1～3BV/小时的流速依次进行洗脱，分部收集，洗脱液分别在-0.05～-0.09MPa、40～70℃条件下，减压浓缩回收乙醇、真空冷冻干燥便得纯化的厚朴酚与和厚朴酚。
2. 如权利要求1所述的以HP-20大孔树脂分离纯化厚朴酚与和厚朴酚的方法，其特征 在于所述以体积浓度为50 70%的食用乙醇于80-9(TC下提取厚朴粗提物的方法是将 厚朴烘干后粉碎过30目筛，用体积浓度为50 70%的食用乙醇，按1公斤厚朴粉加12 20升食用乙醇的比例分两次在80 9(TC下浸提，每次浸提时间为2. 0 3. 0小时，合并两 次浸提的粗滤液并过200目尼龙布，并用高速离心机进行离心澄清，取澄清液；将澄清液在 40 45t:下减压浓縮，回收食用乙醇溶剂后真空冷冻干燥，即得粗提物。
全文摘要
一种以HP-20大孔树脂分离纯化厚朴酚与和厚朴酚的方法，包括以体积浓度为50～70％的食用乙醇于80-90℃下提取厚朴粗提物；还包括将所述厚朴粗提物以HP-20大孔吸附树脂分离纯化的步骤，以食用乙醇溶解厚朴粗提物，然后采用HP-20大孔吸附树脂吸附至饱和；先后用水、低浓度食用乙醇、高浓度食用乙醇依次进行洗脱，分部收集，洗脱液减压浓缩回收乙醇、真空冷冻干燥便得纯化的厚朴酚与和厚朴酚。该方法从工业化生产安全有效分离纯化厚朴酚及和厚朴酚。
文档编号C07C37/82GK101735021SQ200810143728
公开日2010年6月16日 申请日期2008年11月26日 优先权日2008年11月26日
发明者傅冬和, 李园莉, 肖文军 申请人:湖南农业大学