专利名称：用于制备fmoc基可水解连接体的方法
技术领域：
本发明涉及可水解连接体的制备，该连接体可用于蛋白质和多肽药物的修饰。
背景技术：
大多数多肽和蛋白质药物在体内是短寿命的并且通常具有较短的循环半衰期。考虑到多肽和蛋白质药物不能口服吸收，故治疗性活性药物在循环中的长期保持是具有明显临床意义的优选特征。 用于提高蛋白质或多肽药物的临床性能的有吸引力的策略是用聚合物比如聚亚烷基氧化物(Roberts等，Advan Drug Rev. 54， 459-476 (2002))或多糖比如聚唾液酸(Fernandes等，Biochim Biophys Acta 1341 ， 26-34 (1997))、葡聚糖或羟乙基淀粉修饰蛋白质或多肽药物。目前已知的有用聚(乙二醇)(PEG)修饰。然而，用PEG修饰蛋白质通常导致蛋白质活性的降低。因此，人们开发出替代方案以通过使用可水解的或可降解的化学连接体来使聚合物对蛋白质或多肽药物形成可释放的联结(US6， 515， 100、 US 7， 122， 189、W0 04/089280、W006/138572)。蛋白质_聚合物结合体可看作前体药物，并且活性蛋白质可经由可控的释放机制由结合体中释放出来。通过使用该方案，可获得药学动力学性能得到改善的药物(赵等，Bioconj卿te Chem 17， 341-351 (2006))。 因此，W004/089280建议使用可水解的PEG连接体。(将说明书中引用的所有文献引入本文以作参考)。 Tsubery等(J Biol Chem 279， 38118-38124 (2004))描述了一种基于Fmoc (9-荷基氨基甲酸甲酯)基团的用于蛋白质衍生的可水解的PEG连接体。芴基与马来酰亚氨-丙酸酐以及N-羟基琥珀酰亚胺反应，进一步通过它们的氨基与聚(乙二醇)(PEG)和蛋白质反应。然而，可水解的连接体，B卩，MAL-FMS-0SU(9-羟甲基-2-(氨基-3-马来酰亚氨-丙酸)-7-磺基芴基N-羟基琥珀酰亚胺碳酸酯)的合成，具有较低的产率和降低的重复性。根据Tsubery等的合成中的关键问题在于通过9_羟甲基_2氨基芴基与马来酰亚氨丙酸酸酐的反应来引入马来酰亚胺基。在该步骤中，出现了不希望有的副反应比如9位的OH基的酯化。因此，包含用于保护OH基的额外步骤的改善的合成被开发。
发明内容
本发明提供了一种新的用于合成通式1的化合物的方法
<formula>formula see original document page 5</formula> (通式l) 其中PG为保护基，并且位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一个与自由基Y结合。
Y是包含N-马来酰亚胺基部分的自由基。 除了与自由基Y结合之外，通式1的化合物在可用位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一个处可选地与自由基X结合。
X*-S03-R3。 W选自于由氢、(C「C8)-烷基和(C「C8)-烷基-RA构成的组。
W为聚合物。 本发明的化合物根据多步骤方案制备，其中用于芴环系中的9-羟甲基基团的保护基将被使用。这些衍生物可被进一步修饰以产生活性酯比如琥珀酰亚胺酯。
具体实施例方式
本发明通过使用保护基以产生通式1的化合物的合成可解决上述问题。通式1的化合物对产生可水解的连接体的后续反应步骤来说是合适的前体物，并且提供了高产率和高纯度的预期产物，该水解的连接体为比如MAL-FMS-OSU以及包含活性马来酰亚胺(MAL)和N-羟基琥珀酰亚胺(0SU = NHS)基的其他MAL-Fmoc-OSU衍生物。这些连接体可进一步用一种以上聚合物修饰，然后可用于修饰多肽或蛋白质药物。 通式1的化合物由氨基取代的芴开始制备。该新的合成方案在如下所示的方案中
的步骤4中在芴的9位引入了用于羟甲基的保护基。如下合成方案作为例子说明了通式1
的化合物的制备。
<formula>formula see original document page 6</formula>
进一歩的反应歩骤:
<formula>formula see original document page 6</formula>
<formula>formula see original document page 7</formula> 在第一步骤(参见上述方案)中，例如通过与B0C-酸酐等反应，用BOC (叔丁氧羰基)基团保护氨基取代的芴的胺基。可以使用任何其他合适的用于胺基的保护基(Greene等，有机合成中的保护基，Jon Willey&Son，Inc.，第三版，纽约(1999))。另一例子是Z(苄氧羰基)基团。 为了合成在位置1、2、3、4、5、6、7或8处具有超过1个自由基Y的通式1的化合物，
在类似的反应中可使用多个氨基取代的芴衍生物。
歩骤2 : 在第二步骤中，例如，通过与NaH或二异丙基酰胺锂(LDA)和甲酸乙酯反应、并接着在MeOH中与NaBH4或其他还原剂比如DIBAL (氢化二异丁基铝盐)反应，在荷核的9位引入羟甲基。
歩骤3 : 在第三步骤中，例如，用HC1 CF3 COOH或对甲苯磺酸断开BOC保护基。
歩骤4 : 在第4步骤中，例如，9-羟甲基通过与甲硅烷基卤化物比如tBDMS-Cl (Corey等，J.AmChem Soc. 94， 6190-6191 (1972))或4，4' _三甲氧基三苯甲基氯反应而被保护。
在一个实施方式中，甲硅烷基卤化物为tB匿S-Cl (叔丁基二甲基甲硅烷基氯)。优选与tB匿S-Cl的反应在DMF(二甲基甲酰胺)中与咪唑一起进行。甲硅烷基保护基的使用使分子更具亲脂性，从而促进与超过1个自由基Y结合的化合物的制备。
歩骤5 : 在第5步骤中，例如，通过使氨基与马来酰亚氨烷酸或马来酰亚氨烷酸酸酐反应来引入N-马来酰亚胺部分。 马来酰亚胺基对硫醇基是反应性的。因此，经修饰的聚合物比如PEG-SH可共价结
合到可水解的连接体上从而产生聚合物修饰的可水解的连接体。
歩骤6 : 在该可选的步骤中，自由基X(-S(^R3)被引入到芴环系中。该酸性基团使化合物更具亲水性从而允许在水溶剂中进行随后的偶联反应。此外，磺酸基通过与聚合物中的0H基的酯化允许第二聚合物的偶联。 该步骤允许引入自由基X以产生通式1的化合物，该化合物除了包括在位置1、2、3、4、5、6、7或8处的自由基Y之外，还包括在可用位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一个处的自由基X。
7
在一个实施方式中，至少一个自由基X被结合到位置2、4、5和/或7上。在另一 实施方式中，自由基X被结合到7位上。 在另一实施方式中，自由基X(-S(^R3)在步骤4之后被引入到芴环系中。如 果-S03R3是-S03H，那么-S03H基可通过酯化被保护。
讲一歩的反应歩骤: 在与马来酰亚氨烷酸縮合后，通过去除保护基(PG)而使9-羟甲基去保护，从而产
生通式2的化合物。去保护优选用BF3比如BF3 Et20(三氟化硼乙醚)进行。
OH (通式2) 通过使通式2的化合物与N-羟基琥珀酰亚胺或其衍生物比如N， N' - 二琥珀酰亚
胺碳酸酯反应可合成MAL-FMS-OSU或其衍生物。用于形成琥珀酰亚胺酯的反应条件在本领
域是已知的。用于通式2的琥珀酰亚胺基修饰的化合物可通过与SH-聚合物反应而被进一
步修饰，随后将其与多肽或蛋白质药物中的氨基反应，从而产生具有包含聚合物的可水解
连接体的多肽或蛋白质药物的偶联物。 上述例举的方案产生了通式1的化合物 (通式1) 其中PG为保护基，并且位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一个与自由基Y结合。
Y为包含N-马来酰亚胺基的部分。 被至少一个自由基Y取代的通式1的化合物还可以在可用位置1、2、3、4、5、6、7或 8中的至少一个处与自由基X结合。
X*-S03-R3。 R3独立地选自于由氢、(C「Cs)-烷基和(CrC8)-烷基-R4。" (C「C8)-烷基"是指具有l-8个碳原子的一价烷基。其例子包括甲基、乙基、丙基、丁基、己基等。包括直链烷基和支链烷基。 R4是聚合物。该聚合物的例子包括聚乙二醇(PEG)、多聚唾液酸(PSA)、羟烷基淀 粉(HAS)等。 在另一实施方式中，本发明涉及通式1的化合物，其中PG为甲硅烷基。甲硅烷基
的例子为三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基或叔丁基二苯基甲硅烷基。 在另一实施方式中，PG为叔丁基二甲基甲硅烷基。 在一个实施方式中，Y为<formula>formula see original document page 9</formula> &在每次出现时独立地为(CrC8)-烷基。 在一个实施方式中，！^在每次出现时独立地选自于由甲基、乙基、丙基、丁基和己 基构成的组。 R2独立地选 自 于 由-C (0) NR-、 -C (0) NR-(C「C8)-烷 基-NR-、-NRC (0)-和-NRC (0) - (C「C8)-烷基-NR构成的组，其中R独立地为氢或(C「C8)-烷基。 在一个实施方式中，R2为-C(O)NH-。
在另一实施方式中，R2为-NHC(O)-。 在一个实施方式中，通式1的化合物在位置1、2、3或4中的至少一个处与自由基 Y结合。 在另一实施方式中，通式1的化合物在位置1、2、3或4中的至少一个处与自由基 Y结合，并在位置5、6、7或8中的至少一个处与自由基X结合。 在另一实施方式中，在位置2或3中的至少一个处被至少一个自由基Y取代的通 式1的化合物还在位置7或8中的至少一个处与自由基X结合。 在另一实施方式中，在被至少一个自由基Y取代的通式1的化合物中，自由基X被 结合到7位上。 在另一实施方式中，通式1的化合物在位置2禾P 7处与自由基Y结合。 在另一实施方式中，通式1的化合物在位置2和7处分别与自由基Y和自由基X
^口 口 。 在另一实施方式中，通式1的化合物为下述 本发明通过下述例子进行说明，但并不限于此。
<formula>formula see original document page 10</formula><formula>formula see original document page 11</formula><formula>formula see original document page 12</formula>实施例 MAL-Fmoc-OSu可根据如下方案(实施例1-8)被合成。 实施例1 :2-(Boc-氨基)芴的合成(Albericio等，Synth Commun. 31，
225-32(2001)) 在145ml用冰浴冷却的二噁烷-1120(2 : 1/V : V)和42. 5ml 2N Na0H的混合物 中，在缓慢搅拌下制备2-氨基芴的悬浮液(14.4g，79.7mmo1)。然后添加Boc20(19. lg， 87.7mmol，l.l当量)并在25。C下连续搅拌。接着用TLC[对于2-(Boc-氨基)芴为 Rf = 0.75， CHCl3_Me0H-H0Ac (95 : 5 : 3)]进行反应跟踪，并通过添加2N Na0H来 将PH保持在9-10之间。在24小时后，TLC分析显示存在2-氨基芴[Rf = 0. 60， CHCl3_Me0H-H0Ac (95 : 5 : 3)]，因此添加另一个5. 2g Boc20(23. 8mrno1，0. 3当量)，并且反 应继续进行额外的3小时，直至初始产物完全消失为止。用1M KHS04将悬浮液酸化到pH 3。 过滤、并用30ml冷却水、30ml二噁烷-H20(2 : 1) 、30ml己烷洗涤固体，并在真空中干燥。该 产物(浅黄色粉末)(30. lg，90X产率)用TLC(Rf = 0. 75 ;CHCl3/MeOH/HOAc 95 : 5 : 3) 显示是纯的，并且通过NMR表征。 力画R(200MHz/DMS0) S = 9， 45 (1H ;s ;NH) ;7， 84-7， 77 (3H ;m ;H1 ， H4， H5);7， 59-7， 17(4H ;m ;H2， H6-H8) ;3， 86 (2H ;s ;CH2) ;1， 49 (9H， s， t_Bu) 13C匪R(50MHz/DMS0) S = 152， 8 (Amid-C) ;143，8(C9a) ;142，6(C8a); 141，2(C4b) ;138，7(C2) ;135，2(C4a) ;126，7(C6) ;125，8(C7) ;124，9(C8) ;120， 0(C4); 119，2(C5) ;116，9(C3) ;114，8(C1) ;79，02(CH2) ;39，5(Cq t-Bu) ;28，2(3xCH3 t-Bu)
实施例2 :9-羟甲基-2-(Boc-氨基)芴的合成(Albericio等，Synth Commun. 31， 225-32(2001))
在氩气保护下，将140ml干THF(用钠新蒸馏的)中2-(Boc-氨基)芴(13. 49g， 47.9mmo1)的溶液仔细添加到20ml干THF中6. 3g 60 % NaH(160mmo1， 3. 3当量)的悬 浮液中。观察到气体析出和自发热。在完成2-(Boc-氨基)芴的添加之后，在4(TC下 搅拌反应混合物1小时。然后将反应混合物冷却到室温，并缓慢添加9. 7ml甲酸乙酯 (120mmo1，2. 5当量)以避免剧烈的氢气泡。初始混浊的浅棕色悬浮液在添加甲酸乙酯时 迅速澄清为暗褐色溶液，接着搅拌1小时。接着通过TLC[对于中间产物为Rf = 0. 52， CHCl3-Me0H-H0Ac(95 : 5 : 3)]进行反应跟踪。用碎冰使反应终止，并且通过旋转蒸发除 去100ml水和有机溶剂。向液相中添加10ml 2N NaOH，并用3X 50ml 二乙醚洗涤，在冰浴中 冷却并用25ml冰冷的HOAc酸化直至pH 5为止。将随后出现的灰白色沉淀溶解在300ml EtOAc中。用50ml EtOAc萃取液相，用2 X 75ml饱和NaHC03和1 X 75ml盐水洗涤有机相， 并用化2504充分干燥。然后减压除去溶剂。 9-甲酰基-2-(Boc-氨基)荷被悬浮在100ml甲醇中，并且2. 0g NaBH4[52. 9mmo1， 对应于初始2-(Boc-氨基)芴的1. 1当量]被分批添加。在室温下，磁力搅拌迅速澄清的 悬浮液4小时，直至初始产物消失为止[TLC，Rf = 0. 57，PE : MTBE(l : 2)]。用300ml水 稀释反应混合物，并用15ml冰冷的HOAc将其酸化至pH 5. 0，接着将沉淀直接溶解在150ml EtOAc中。用3 X 50ml饱和NaHC03和1 X 50ml盐水洗涤有机相，并用无水Na2S04充分干燥。 旋转蒸发溶剂以获得不需要进一步纯化即可使用的固体。通过NMR分析产物(13. lg，88% 产率)。 力NMR(200MHz/DMS0) S = 9， 42 (1H ;s ;NH) ;7， 87 (1H ;s ;H1) ;7， 79-7， 66 (2H ;m ;
H4， H5) ;7， 61 (1H ;d ; J = 7， 71Hz ;H8) ;7， 48-7， 15 (3H， m， H3， H6， H7 ;) ;5， 07 (1H， t， J =
4，80Hz;0H) ;4， 00-3， 88(1H ;m ;H9) ;3， 82-3， 63 (2H ;m ;CH2) ; 1， 49 (9H ;s ;t-Bu) 13C画R(50MHz/DMS0) S = 152， 88 (Amid-C) ;146，05(C9a) ;144，90(C8a);
140，81(C4b) ;138， 64(C2) ;134，90(C4a) ;127， 13(C6) ;125，85(C7) ;125， 05(C8);
119， 93(C4) ;119， 16(C5) ;117，47(C3) ;115， 24(Cl) ;79，00(Cq t_Bu) ;63，85(CH2);
50， 19(C9) ;28，20(3x CH3 t_Bu) 实施例3 :9-羟甲基-2-氨基芴的合成<formula>formula see original document page 14</formula>
将13. 0g 9-羟甲基-2-(Boc-氨基)芴溶解在110ml乙腈中并进行回流搅拌。滴 加42ml 2NHC1(2.0当量，84mmo1)。回流搅拌反应混合物45分钟。将反应混合物冷却至室 温并通过TLC(Rf = 0. 1 PE-MTBE(l : 2))监测反应。通过旋转蒸发部分地除去溶剂，并且 将残留物溶解在70ml 2N HC1中。用2X50ml MTBE仔细洗涤溶液。用Na2C03将液相调节 到pH 9并用2 X 70ml EtOAc萃取。用50ml盐水洗涤有机相，并用Na2S04充分干燥。通过 旋转蒸发除去溶剂。该产物未经进一步纯化而被使用。通过NMR证实结构一致性(S.76g， 99%产率)。 4画R(200MHz/DMS0) S = 7， 69-7， 40 (3H ;m ;3xAr-H) ;7， 37-7， 02 (2H ;m ; 2xAr-H) ;6， 87(1H ;s ;Ar-H) ;6，68(lH;d;J = 8， 3他；Ar-H) ;5， 19 (2H ;s ;NH2) ;5，03(1H; t ; J = 4， 93Hz ;0H) ;3， 93-3， 58 (3H ;m ;H9， CH2) 13C NMR (50MHz/DMS0) S = 148， 36 (Ar-Cqu) ; 146， 81 (Ar-Cqu) ; 143， 97 (Ar-Cqu); 141， 87(Ar-Cqu) ; 129， 03 (Ar-Cqu) ; 126， 92 (Ar-CH) ; 124， 85 (Ar-CH) ; 124， 24 (Ar-CH); 120， 40(Ar-CH) ;117， 81 (Ar-CH) ;113， 00 (Ar-CH) ;110， 76 (Ar-CH) ;64，27(CH2) ;49，90(CH)
实施例4 :叔丁基二甲基甲硅烷氧基-9-甲基-2-氨基芴的合成
将5. 91g咪唑(86. 8mmo1，2. 1当量)溶于24ml干DMF中，并在氩气保护下，在冰 浴中搅拌10分钟。7.47g溶于干DMF中的叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(49.6mmo1，1.2 当量)被添加。在冰上搅拌15分钟后，在冷却条件以及氩气保护下，逐滴添加8.73g溶于 40ml干DMF中的9-羟甲基-2-氨基荷(41. 3mmo1)。该反应在冰上进行15分钟，接着移至 室温下进行。通过TLC[目标产物Rf = 0.6， PE-MTBE(l : 2)]监测反应。两小时后，初始 产物[Rf = 0. IPE-MTBE(I : 2)]已经消失，接着用400ml CH2C12稀释反应混合物，并添加 100ml 5%NaHC03。用5X 200ml水洗涤有机相，并用Na2S04充分干燥。通过旋转蒸发除去 CH2Cl2，并且通过共沸蒸馏用甲苯除去DMF。残余的棕色油(13.4g，99X产率)用NMR分析 并未经进一步的纯化而被使用。 力画R(200MHz/DMS0) S = 7， 67-7， 40 (3H ;m ;3x Ar-H) ;7， 34-7， 00 (2H ;m ;2x Ar-H) ;6，81(lH;s ;lx Ar-H) ;6， 59 (lx ;dd ;J = 8， 02Hz & 1，83Hz;lx Ar-H) ;5，19(2H;s;NH2) ;3， 97-3， 76(2H ;m ;CH2) ;3， 75-3， 57 (1H ;m ;CH) ;0， 88 (9H ;s ;3x CH3) ;0， 03 (6H ;s ;2x
CH3) 13C NMR(50MHz/DMS0) S = 148， 40 (Ar-Cqu) ; 145， 81 (Ar-Cqu) ; 143， 67 (Ar-Cqu);
141， 88(Ar_Cqu) ; 129， 08 (Ar_Cqu) ;127， 10 (Ar_CH) ; 124， 97 (Ar_CH) ; 124， 16 (Ar_CH);
120， 47(Ar_CH) ; 117， 87 (Ar_CH) ; 113， 22 (Ar_CH) ; 110， 58 (Ar_CH) ;66， 04 (CH2_OH);
49， 60 (C9) ;25， 88 (3xCH3 ;t-Bu) ;18， 04(Cqu ;t-Bu) ;_5， 04(2CH3 ;Si_CH3) 实施例5 :叔丁基二甲基甲硅烷氧基_9-甲基_2-(氨基-3-马来酰亚氨丙酸)芴
的合成
<formula>formula see original document page 15</formula> 向干THF(用钠新蒸馏的)中13.5g的9-叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基-2-氨基 芴的溶液中添加9. 42gN，N'-二环己基碳二亚胺(75. 7mmo1，1. 1当量)和651mg 1-羟基苯 并三唑(4. 8mmo1，0. 1当量)。将13. 5g(41. 5mmo1， 1. 1当量)3-马来酰亚氨丙酸溶于50ml 干THF中并逐滴添加。在氩气保护下，在室温下搅拌反应混合物过夜，并通过TLC监测产物 形成[初始材料Rf = 0. 6，目标产物Rf = 0. 18， PE-MTBE (1 : 2)]。 —旦检测不到初始材料，就滤出二环己基脲，并通过旋转蒸发除去THF。将残余的 固体溶于200ml CH2Cl2，ffi 50ml 5% NaHC03和50ml盐水洗涤，并用Na2S04充分干燥。将棕 色晶体溶于20ml的MTBE中。在过滤之后，用小部分MTBE洗涤残余物，直至洗涤溶液保持 无色为止。通过NMR分析黄色晶体(10. 5g，53X产率)。 力NMR(200MHz/DMS0) S = 10， 06 (1H ;s ;NH) ;7， 92 (1H ;s ;Hl) ;7， 82-7， 70 (2H ; m;H4&H5) ;7，62(lH;d;J = 7，20Hz;H3) ;7，49(lH;d;J = 8，08Hz;H8) ;7， 41—7， 18 (2H ; m ;H6&H7) ;7， 03(2H ;s ;2x Mal-CH) ;4，02(lH;t;J = 6，63Hz;H9) ;3， 95-3， 66 (4H ;m ; Prop-CH2-N&CH2-OTBDMS) ;2，61(2H;t;J = 7， 07Hz ;Prop-CH2_C = 0) ;0， 84 (9H ;s ;3x t-BuCH3) ;0， 10—0， 56 (6H ;m ;2x CH3_Si) 13C画R(50MHz/DMS0) S = 170，81(C = 0 Mai) ;168，30(C = 0 Amid); 145，12(C9a) ;144，62(C8a) ;140，68(C4b) ;138，05(C2) ;136，02(C4a) ;134，62(2xCH Mal) ;127， 34(C6) ;126， 02(C7) ;125， 15(C8) ;119， 99(C4) ;119，37(C5) ;118， 63(C3); 116，31(Cl) ;65， 54(CH20TBDMS) ;49，85(C9) ;35， 01 (Prop-CH2_N) ;33， 91 (Prop-CH2_CO); 25，84(3x CH3(t-Bu) ;18，01(Cqu t_Bu) ;_5， 40 (CH3_Si) ;_5， 44 (CH3_Si)
实施例6 :9-羟甲基-2-(氨基-3-马来酰亚氨丙酸)芴的合成
在氩气保护下，将10. 3g叔丁基二甲基甲硅烷氧基-9-甲基-2-(氨基-3-马来酰 亚氨丙酸)芴(21. 6mmo1)溶于230ml CH2C12中。逐滴添加35ml三氟化硼醚化物30分钟。 通过TLC监测反应[初始材料Rf = 0. 6，目标产物Rf = 0. 38， CH2C12-甲醇(10 : 1)]。 一 旦初始材料已经消失，就用饱和NaHC03溶液对溶液进行水解。过滤制得的晶体。蒸发母液 中的有机相。将残余物和滤渣重新溶于250ml EtOAc和120ml 5%腿〇03中。用lX50ml 5% NaHC03、50ml水和50ml盐水洗涤有机相，并用Na2S04充分干燥。通过旋转蒸发除去溶 剂。通过NMR和质谱验证产物的结构。 力NMR(200MHz/DMS0) S = 10， 09 (1H ;s ;NH) ;7， 88 (1H ;s ;Hl) ;7， 82-7， 69 (2H ; m;H4&H5) ;7， 66-7， 52 (2H ;m ;H3&H8) ;7， 41-7， 17 (2H ;m ;腿H7) ;7， 03 (2H ;s ;2x Mal-CH) ;5，09(lH;t;J = 4，93Hz;0H) ;5，08(lH;t;J = 6，06Hz;H9) ;3， 97-3， 53(4H ;m ; Prop-CH2-N&CH2-OH) ;2， 61 (2H ;t ;J = 6， 82Hz ;Prop-CH2_C = 0) 13C画R(50MHz/DMS0) S = 170， 82 (C = 0 Mai) ;168， 38 (C = 0 Amid); 146，00(C9a) ;144，89(C8a) ;140，63(C4b) ;138，05(C2) ;135，92(C4a) ;134，62(2xCH Mal) ;127， 16(C6) ;126， 09(C7) ;125， 03(C8) ;119， 93(C4) ;119， 33(C5) ;118， 39(C3); 116， 36(Cl) ;63， 86(CH2OH) ;50， 14(C9) ;35， 07 (Prop-CH2_N) ;33， 92 (Prop-CH2_CO)
ESI-MS :发现:(M+Na)+ :385. 2 ;计算值:(M+Na)+ :385 实施例7 :9-羟甲基-2-(氨基-3-马来酰亚氨丙酸)芴-N-羟基琥珀酰亚胺基碳 酸酯的合成 将7. 3ml绝对THF(溶剂THF)中1. 8g妣啶的溶液中的1. 7ml (5. 1,1)逐滴添加 到在75ml干THF(用钠新蒸馏的)中0. 93g 9-羟甲基-2-(氨基-3-马来酰亚氨丙酸)芴 (2. 6,1)和1. lg三光气(triphosgene) (3. 6,1， 1. 4当量)的搅拌溶液中。40分钟后， 沉淀的吡啶盐酸盐经塞里塑料滤出，并通过旋转蒸发除去THF。将获得的油状物溶于75ml 具有1. lgN-羟基琥珀酰亚胺(13. 6mmo1，5. 3当量)的干四氢呋喃中。然后添加2. 6ml吡 啶溶液(8. 2mmo1)，并搅拌溶液40分钟。用塞里塑料将一些额外的沉淀的吡啶盐酸盐滤出，并通过旋转蒸发除去THF。将获得的油状物溶于70ml氯仿中，并用4X40ml 0. IN HCl、 3 X 50ml5% NaHC03水溶液、接着用IX 40ml水、40ml盐水洗涤，并用化2504充分干燥。通过 旋转蒸发除去氯仿。通过NMR和质谱验证结构一致性。 力NMR(500MHz/CDCl3) S = 8， 35 (1H ; s ;NH) ; 8， 00-7， 95 (1H ;m ;H3); 7， 71-7， 65(2H ;m ;H4&H5) ;7， 50-7， 46 (1H ;d ; J = 7， 25Hz ;H8) ;7， 42-7， 36 (2H ;m ;H1&H6); 7， 30-7， 25(1H ;m ;H7) ;6， 69 (2H ;s ;2x Mal-CH) ;4， 66 (1H ;dd ; J = 10， 40Hz&5， 99Hz ; Ha-CH20) ;4，14(lH;t;J = 10， 09Hz ;Hb_CH20) ;4， 27(1H ;dd ;J = 9， 46Hz&5， 99Hz ;H9); 3，95(2H;t;J = 7， 09Hz ;Prop-CH2-N) ;2， 86 (4H ;s ;2x Succ_CH2) ;2， 80-2， 54 (2H ;m ; Prop-CH2-C = 0) 13C NMR(125MHz/CDCl3) S = 170， 53 (C = 0 Mai) ;168， 21 (C = 0 Amid);
151， 41 (C = 0碳酸酯);143，79(C2) ;141，13(C9a) ;140，94(C8a) ;137，36(C4b);
137，11(C4a) ;134，20(2xCH Mal) ;128，33(C6) ;126，82(C7) ;124，62(C8) ;120，63(C4);
120， 23(C3) ;119， 96(C5) ;116， 50(C1) ;72，67(CH20) ;46，49(C9) ;35， 62 (Prop-CH2_N);
34， 15(Prop-CH2-C0) ;25，47(2x Succ_CH2)ESI-MS(计算值):(M+H)+ :504 ; (M+Na)+ :526ESI-MS(观察值):(M+H)+:504. 1 ; (M+Na) + :526. 1 实施例8 :9-羟甲基_2-(氨基-3-马来酰亚氨丙酸)-7-硫代荷-N-羟基琥珀酰 亚胺碳酸酯的合成 向在60ml三氟乙酸中1.2g 9_羟甲基_2_ (氨基_3_马来酰亚氨丙酸)芴_N_羟 基琥珀酰亚胺碳酸酯(2. lmmol)的溶液中添加7ml氯磺酸。30分钟后，将反应混合物冷却 到4°C ，并添加350ml冷的二乙醚。将沉积产物滤出，并用二乙醚洗涤两次，并且在真空中干 燥。 通过质谱验证结构一致性。
ESI-MS(观察值)(M+H)+:583. 9
ESI-MS(计算值)(M+H)+:583 由2， 7- 二氨基芴开始合成MAL2-Fmoc-0su在实施例9中被说明。 实施例9 :9-羟甲基-2，7-二-(氨基-3-马来酰亚氨丙酸)芴-N-羟基琥珀酰亚
胺碳酸酯的合成
<formula>formula see original document page 18</formula> 在如实施例1-8所述的条件下制备9-羟甲基-2， 7- 二 _(氨基-3-马来酰亚氨 丙酸)芴-N-羟基琥珀酰亚胺碳酸酯。按照Albericio等所述的方法(Synth Commun，31， 25-32(2001))，2，7-二氨基芴中的氨基被B0C20保护。然后，通过二异丙酰胺锂(LDA)与 甲酸乙酯的反应，在9位引入甲酰基。用硼氢化钠将获得的醛类还原成相应的醇，从而形 成9-羟甲基-2，7-二-(Boc-氨基)芴。随后用CH3CN中的2N HC1断开BOC保护基，从而 获得9-羟甲基-2， 7- 二氨基芴。然后按照实施例5所述的方法与叔丁基二甲基甲硅烷基 氯化物反应来保护011基，从而形成叔丁基二甲基甲硅烷氧基-9-甲基-2，7-二氨基芴。然 后，在存在N， N' -二环己基碳二亚胺和羟基苯并三唑下，进行游离氨基与马来酰亚氨丙酸 的反应，从而获得了叔丁基二甲基甲硅烷氧基_9-甲基_2， 7- 二 -(氨基-3-马来酰亚氨丙 酸)芴。在用三氟化硼醚化物对9位的0H基去保护之后，形成了9-羟甲基-2，7-二-(氨 基-3-马来酰亚氨丙酸)芴。最后，进行与三光气和N-羟基琥珀酰亚胺的反应，从而制得 9-羟甲基-2， 7- 二 -(氨基-3-马来酰亚氨丙酸)芴-N-羟基琥珀酰亚胺碳酸酯。
权利要求
一种制备根据通式1的化合物的方法(通式1)其中PG为保护基，位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一个与自由基Y结合；Y是包含N-马来酰亚胺基部分的自由基；以及可用位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一个可选地与自由基X结合；X为-SO3-R3；R3独立地选自于由氢、(C1-C8)-烷基和(C1-C8)-烷基-R4构成的组；以及R4为聚合物；所述方法包括使通式2的化合物中的9-羟甲基与引入PG的保护剂反应、以及随后将所述化合物与N-马来酰亚胺衍生物反应的步骤(通式2)其中位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一个与胺结合。F2008800218767C00011.tif,F2008800218767C00012.tif
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述保护剂为甲硅烷基卤化物。
3. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述甲硅烷基卤化物为叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物。
4. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，与叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物的反应在DMF中与咪唑一起进行。
5. 如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述N-马来酰亚胺衍生物为马来酰亚氨烷酸。
6. 如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述PG为甲硅烷基衍生物。
7. 如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PG为叔丁基二甲基甲硅烷基。
8. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，可用位置1 、2、3、4、5、6、7或8中的至少一个可选地与自由基X结合。
9. 如权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述Y为 2-一N其中&在每次出现时独立地为(C「Cs)-烷基，以及尺2独立地选 自 于 由-C(0)NR-、-C(0)NR-(C「C8)-烷基-NR-、-NRC (0)-和-NRC (0) - (C「C8)-烷基-NR构成的组，其中R独立地为氢或(C「C8)-烷基。
10. —种通式1的化合物(通式1)其中PG为保护基，并且位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一个与自由基Y结合；可用位置1、2、3、4、5、6、7或8中的至少一个可选地与自由基X结合；Y是包含N-马来酰亚胺基部分的自由基；X为-S03-R3 ;R3独立地选自于由氢、(C「C8)-烷基和(C「C8)-烷基-RA构成的组。
11.如权利要求10所述的化合物，其特征在于，所述PG为甲硅烷基，Y为Ri在每次出现时独立地为(C「Cs)-烷基，以及尺2独立地选 自 于 由-C(0)NR-、-C(0)NR-(C「C8)-烷基-NR-、-NRC (0)-和-NRC (0) - (C「C8)-烷基-NR构成的组，其中R独立地为氢或(C「C8)-烷基。
12.如权利要求11所述的化合物，其特征在于，所述PG为叔丁基二甲基甲硅烷基。
全文摘要
提供了一种新颖的用于制备Fmoc(9H-芴-9-基甲氧羰基)化合物的工艺，其中用于芴环系中的9-羟甲基的保护基被使用。这些化合物可用于蛋白质和多肽药物的修饰。
文档编号C07D207/448GK101754951SQ200880021876
公开日2010年6月23日 申请日期2008年6月25日 优先权日2007年6月26日
发明者于尔根·西克曼, 克里斯蒂安·诺埃, 格哈德·施托伊贝尔, 皮特·图雷切克 申请人:巴克斯特国际公司;巴克斯特保健股份有限公司