专利名称：三肽类似物，其制备方法，含它们的药物组合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有抗肺瘤活性的三肽类似物，其制备方法，含它们 的药物组合物及它们在治疗癌症中的用途。
背景技术：
多肽类化合物是海洋生物活性成分之一，具有结构新颖，作用专 一，活性显著的特点。经过多年的探索和积累，发现海洋多肽类化合 物的生物活性主要集中于抗肿瘤和抗真菌方面。它们常常含有结构特 异的氨基酸或氨基酸衍生物，形成特殊的线状或环状结构，具有广泛
和强效的生物活性。Hemiasterlin是从自巴布亚新几内亚海绵 6y顶力a"e7asp.中分离得到的抗有丝分裂三肽，具有很强的细胞毒性， 它可能是通过抑制纺锤体微管动力学产生细胞毒性，从而引起细胞凋 亡。
发明目的
本发明的目的是寻找新的抗肿瘤多肽类化合物或其先导化合物。 发明简述
本发明人经研究现已发现式(I)的三肽类似物
A-B-C ( I)
或其立体异构体具有良好的抗肿瘤活性，因此式(I)三肽类似物 或其立体异构体有可能作为药物用于治疗癌症。
本发明涉及式(I)三肽类似物或其立体异构体，其包括
A-B-C ( I)
其中
A为L-型或D-型芳香性天然或非天然氨基酸，芳香性部分选自有 一个或多个取代基的吲哚环、苯环、萘环、蒽环、菲环、四氢喹啉环、四氬异喹啉环、苯并四氢异喹啉环，取代基包括但不限于卣素、硝 基、羟基、甲氧基、亚甲二氧基、氨基、胺甲基、N， N-二(C广C4直链 或支链烷基)胺甲基、C3-C7环胺甲基、C3-C 含氮、氧、硫杂原子的环 胺甲基、磺酸甲基、磷酸酯甲基。氨基酸中的氨基部分可被取代，取 代基包括但不限于d-C4直链或支链烷基、C3-C7环烷基、各种氨基保 护基，氨基保护基包括千基、取代千基、叔丁氧羰基、苯氧羰基、千
氧羰基、芴甲氧羰基、d-Cs羧酯基、d-C4直链或支链烷基、C3-C7环烷
基；
B为选自Gly、 Ala、 Val、 Leu、 Nle、 Ile、 Pro、 Tle、 MeVal的天 然或非天然亲脂性氨基酸；
C为C「C4直链或支链烷基取代的y-氨基丁酸、d-C4直链或支链烷 基取代的y-氨基丁烯酸及其插烯同系物、 一个或多个取代基的3-氨基 笨甲酸、l-(d-C4直链或支链烷基取代的3-氨基环己烯)甲酸，或为 d-C4直链或支链烷基取代的y-氨基丁酸、d-C4直链或支链烷基取代的 y-氨基丁烯酸及其插烯同系物、 一个或多个取代基的3-氨基笨甲酸、 l-(d-C4直链或支链烷基取代的3-氨基环己烯)甲酸与天然或非天然 亲脂性氨基酸形成的二肽，氨基上的氲可被d-C4直链或支链烷基取代 或不被取代；苯环上的取代基包括但不限于卣素、硝基、羟基、羧 基、三氟甲基、亚甲二氧基、亚甲二硫基、d-Cs直链或支链烷基、C3-C7 环烷基、C「Cs烷氧基、氨基、C「Cs酰胺基，亲脂性氨基酸可为下列氨 基酸Gly、 Ala、 Val、 Leu、 Nle、 Ile、 Pro、 Tle、 MeVal。
本发明涉及含至少一个式(I)三肽类似物或其立体异构体，及药 用载体或赋形剂的药物组合物，
A-B-C ( I)
其中
A为L-型或D-型芳香性天然或非天然氨基酸，芳香性部分逸自有 一个或多个取代基的吲哚环、苯环、萘环、蒽环、菲环、四氢喹啉环、 四氢异喹啉环、苯并四氢异喹啉环，取代基包括但不限于卣素、硝 基、羟基、甲氧基、亚甲二氧基、氨基、胺甲基、N, N-二(C「C4直链或支链烷基)胺甲基、C3-C 环胺甲基、C3-G含氮、氧、硫杂原子的环
胺甲基、磺酸甲基、磷酸酯甲基。氨基酸中的氨基部分可被取代，取
代基包括但不限于d-C4直链或支链烷基、C3-G环烷基、各种氨基保 护基，氨基保护基包括千基、取代千基、叔丁氧羰基、苯氧羰基、千 氧羰基、芴甲氧羰基、d-Cs羧酯基、d-C4直链或支链烷基、03-(:7环烷
基；
B为选自Gly、 Ala、 Val、 Leu、 Nle、 Ile、 Pro、 Tle、 MeVal的天
然或非天然亲脂性氨基酸;
C为d-C4直链或支链烷基取代的y-氨基丁酸、d-"直链或支链烷 基取代的Y-氨基丁烯酸及其插烯同系物、 一个或多个取代基的3-氨基 笨甲酸、1-(C厂Ca直链或支链烷基取代的3-氨基环己烯)甲酸，或为 d-C4直链或支链烷基取代的y-氨基丁酸、d-G直链或支链烷基取代的 广氨基丁烯酸及其插烯同系物、 一个或多个取代基的3-氨基笨甲酸、 l-(d-C4直链或支链烷基取代的3-氨基环己烯)甲酸与天然或非天然 亲脂性氨基酸形成的二肽，氨基上的氢可被d-C4直链或支链烷基取代 或不被取代；苯环上的取代基包括但不限于卣素、硝基、羟基、羧 基、三氟甲基、亚甲二氧基、亚甲二硫基、C「Cs直链或支链烷基、C3-C7 环烷基、d-Cs烷氧基、氨基、d-Cs酰胺基，亲脂性氨基酸可为下列氨 基酸Gly、 Ala、 Val、 Leu、 Nle、 Ile、 Pro、 Tle、 MeVal。
本发明还涉及制备式(I)三肽类似物或其立体异构体的方法，其 包括
1) 将化合物Boc-B-OH与C-0P在DMF-DCM, N画，DCC-H0Bt中 反应，生成Boc-B-C-OP,其中B, C如上所述定义，P为d-4烷基；
2) 将1)中所得产物在盐酸/二氧六环中脱去氨基保护基，生成 HC1.B-C-0PS
3) 将2)中产物HC1.B-C-0P与Boc-A-OH在DMF, DCM， N醒， DCC-H0Bt中反应，生成Boc-A-B-C-0P;
4) 将3)中产物Boc-A-B-C-0P在氢氧化锂/甲醇-四氢呋喃溶液 中皂化，然后用柠檬酸酸化，生成Boc-A-B-C-0H;5) 将4)中产物Boc-A-B-C-0H如2)中所述进行反应，生成脱 去氨基保护基的HC1.A-B-C-0H。
本发明还涉及式(I)三肽类似物或其立体异构体在制^^用于治疗 癌症的药物中的用途。涉及的胂瘤细胞如成纤维细胞MRC5CV1、膀胱 癌细胞T24、鼠白血病细胞L1210、鼠白血病细胞P388、人肺癌细胞 A549、人结肠癌细胞HT29、人结肠癌细胞L0V0、猴肾成纤维细胞CV1、 人乳腺癌细胞MCF7、人恶性胶质瘤/星形细胞瘤细胞U373、人卵巢癌 细胞HEY、表皮样瘤细胞系KB、黑素瘤细胞B16、 MDA-MB-435乳腺癌 细胞、HeLa S3子宫颈癌细胞、人红白血病细胞K562、人卵巢癌细胞 0VCA2780、人胃印戒癌细胞Kato-III等。
发明详述
术语d-4烷基"指含1-4个碳原子的直链或支链烷基，如甲基， 乙基，丙基，异丙基，丁基，仲丁基，异丁基，叔丁基。
本发明所用术语^ ( I)三肽类似物立体异构体"是指其相应的 D-或L-立体构型。
在本发明中使用的缩写具有下面的含义
Ala -丙氨酸，
Gly -甘氨酸，
lie -异亮氨酸，
Nle -正亮氨酸，
Tie -叔丁基甘氨酸，
Leu 一亮氨酸，
Val -缬氨酸，
MeVal -甲基缬氨酸，
Phe —笨丙氨酸，
Pro -脯氨酸，
mAB - 3-氨基苯甲酸，
MAB — 3-氨基-4-甲基笨甲酸，
/-Abu — y-氨基丁酸，BA -苯甲胺，
BEA —苯乙胺，
DEA — 二乙胺，
DCHA - 二环己胺，
Mpl -吗啡啉，
NMM — N-甲基吗啡啉，
Prd -旅咬，
TEA -三乙胺，
Thp —四氢欢咯，
DCM - 二氯甲烷，
DMF - 二甲基甲酰胺，
DCC — 二环己基碳二亚胺，
H0Bt - 1-羟基笨并三唑，
Boc -叔丁氧羰基，
THF —四氢吹喃。
根据本发明，本发明化合物的可药用盐包括其无机或有机酸盐或 碱盐，其包括但不限于三氟醋酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、 硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、礴酸盐、磷酸氬盐、乙酸盐、丙酸盐、 丁酸盐、草酸盐、三甲基乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、乳酸盐、柠檬 酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、苦味酸盐、天冬 氨酸盐、葡萄酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、笨磺酸盐、对 甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐；碱盐包括但不限于铵盐、碱金属盐如钠 和钾盐、碱土金属盐如钓和镁盐、有机碱盐如二环己胺和N-甲基-D-葡糖胺盐、以及氨基酸盐如精氨酸和赖氨酸盐.
根据本发明，式(I)三肽类似物或其立体异构体可按本领域已知 方法、文献方法或下面所示的反应路线1制备<formula>formula see original document page 10</formula>反应路线1
在反应路线1中，化合物Boc-B-0H (B如上所定义)与C-OP (C 如上所定义，P为CH烷基，其可选自甲基，乙基，异丙基，丁基，仲 丁基，异丁基，叔丁基，优选甲基和乙基)在DMF-DCM, NMM, DCC-HOBt 中反应，生成Boc-B-C-0P。将Boc-B-C-OP经4摩尔盐酸/二氧六环脱 保护基，生成HC1.B-C-0P。将HCl.B-C-0P与Boc-A-OH( A如上所定义) 在DMF-DCM, NMM, DCC-H0Bt中反应，生成Boc-A-B-C-OP。将 Boc-A-B-C-OP经1摩尔氢氧化锂/甲醇-四氢呋喃皂化，生成 Boc-A-B-C-0H。将Boc-A-B-C-0H经4摩尔盐酸/二氧六环脱保护基， 生成HC1.A-B-C-0H。
根据本发明，式(I)三肽类似物的立体异构体包括D-和/或L-构型。
根据本发明，式(I)三肽类似物及其立体异构体在人癌症细胞筛 选中显示较好的抑制细胞生长的活性。
本发明涉及含有作为活性成分的有效剂量的至少一种式(I)三肽 类似物和/或其立体异构体以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。 通常本发明药物组合物含有0. 1 ~ 90%的式(I)三肽类似物和/或其立 体异构体。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时， 如果需要，可将式(I)三肽类似物和/或其立体异构体与一种或多种 固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用 形式或剂量形式。
本发明式(I)三肽类似物及其立体异构体或含有它的药物组合物 可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、 胶嚢、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、 脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、 緩释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成 片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子，如稀 释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、硫酸
钙、氯化钠、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润 剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、 糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、 紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干燥淀 粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钓、聚 氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维 素等；崩解抑制剂，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等； 吸收促进剂，如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，如滑石粉、二 氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可 以将片剂进一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片， 或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域 公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄 糖、乳糖、淀粉、可可脂、氲化植物油、聚乙埽吡咯烷酮、Gelucire、 高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、 米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基 磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成松剂，可 以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二 醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。 为了将给药单元制成胶嚢，将有效成分式(I)三肽类似物或其立体异 构体与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬胶嚢或软 胶嚢中。也可将有效成分式(I)三肽类似物或其立体异构体制成微嚢 剂，混悬于水性介质中制成混悬剂，亦可装入硬胶嚢中或制成注射剂 应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，如水、乙醇、聚乙 二醇、1， 3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧基化的异硬脂醇、聚 氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射 用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规
的助溶剂、緩冲剂、pH调节剂等。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、 矫味剂、甜味剂或其它材料。
实施例
下面的实例及生物活性实验用来进一步说明本发明，但这并不意 味着对本发明的任何限制。
实施例化合物熔点由RY-1型熔点仪测定，温度未经校正；1HNMR 图谱由Bruker ARX 400型或US Varian Unity I請a 600型核磁仪 测定；FAB质谱由Zabspect高分辨磁质谱仪测定；元素分析由Carlo Erba 1106型元素分析仪测定；紫外光谱由UV-260紫外可见分光光度 计测定；红外光谱由Magna IRTM 550红外仪测定。实施例制备所用反 应试剂均为商品化产品。
实施例1: N-Ac-p-Nal-Va卜mAB ( QTP-007 ) N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸乙酯的制备
2-溴甲基萘的制备2-甲基萘71克(0. 5mol)用400毫升四氯化 碳溶解，加入N-溴代丁二酰亚胺(NBS) 89克(0. 5mol)，搅拌，NBS 不溶解。假如偶氮二异丁腈2. 5克，油浴緩慢加热，~95€时，反应 液剧烈沸腾，上冲，立即停止加热，水浴冷却，反应立即緩和，继续 油浴加热，液面上有泡沫状物质悬浮。补加偶氮二异丁腈8. 5克，回 流3.5小时(98t: ±3)。反应液于冰水浴中冷却，滤除白色固体(丁 二酰亚胺)，四氯化碳洗两次。滤液浓缩，得黄色液体，冰浴，析出 黄色结晶。滤集得淡黄色结晶78. 2克(70. 7%) ， m.p. 48~51TC。N-乙酰-(2-萘甲基)丙二酸二乙酯的制备将钠8. 14(0.354mol) 克在400亳升绝对无水乙醇中回流(98 ±3C )，至钠完全溶解。冷却 至室温(为白色混浊液体)后，加入乙酰氨基丙二酸二乙酯76.9克 (0. 354mol)，搅拌溶解。加入2-溴甲基萘78. 2克(0. 354mol), 反应液中逐渐出现固体，油浴回流(100n ±3) 3小时。减压蒸出乙 醇约300毫升后，于冰水浴条件下，加入500亳升水，立即有淡黄色 固体析出。滤集结晶，水洗三次，室温干燥，称重得103. 3克(81. 7%), m.p. 123~125*C。 TLC检测石油醚-乙酸乙酯(3: 1), Rf=0.30。
N-乙酰-(2-萘甲基)丙二酸单乙酯的制备N-乙酰-(2-萘甲基) 丙二酸二乙酯50. 0克(0. 14mol)，用450毫升乙醇溶解，室温滴加 6N氲氧化钠30毫升，TLC监测至初始反应物消失(2. 5小时)。水 水浴条件下，滴加6N盐酸(-30毫升)调pH~3,得白色混悬液。 浓缩得白色糊状雾，加入420毫升水，抽滤，得白色粉状固体，水洗 四次，室温干燥。称重得35. 82克(77. 2%)。
N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸乙酯的制备N-乙跣-(2-萘甲基) 丙氨酸乙酯17. 9克(0. 054mol)用150毫升二氧六环溶解，油浴回流 (108"C ±3) 3.5小时。反应液浓缩得黄色油状液体，加入100毫升 乙酸乙酯和100亳升水，振摇分液，乙酸乙酯层分别用饱和碳酸氬钠、 饱和氯化钠洗两次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，滤 液浓缩，得黄色油状液体，放置，有结晶析出。滤集结晶，石油醚洗 两次，室温干燥。称重得12.7克(82. 3%) ， m.p. 123~125匸。TLC 检测石油醚乙酸乙酯(l: 1)， Rf=0. 56。
拆分称量N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸乙酯11. 0克(38. 6mmo1), 于研钵中研成细粉，混悬于280亳升水中(含氯化钠2.0克)，水浴 (37t: ±1)，饱和碳酸氢钠调pH 7. 60，溶液呈白色混悬状。加入枯 草杆菌蛋白酶A 2. 0亳克，pH值迅速下降，用0.5N氢氧化钠调pH 7.60左右。2. 5小时后，pH值下降緩慢，补加a-糜蛋白酶 5亳克， pH值迅速下降，继续用0.5N氢氧化钠调pH7.40左右。5.5小时后， pH值基本保持恒定，继续搅拌1.0小时。反应液用乙酸乙酯萃取至紫外灯下(入二254nm)无吸收为止，乙酸乙酯层用饱和氯化钠洗两次，无 水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩，得无色块状结晶5.38克
(97.8%) (D- N-乙酰-(2_萘甲基)丙氨酸乙酯)，m.p. 149. 0 ~ 149.5X:， [ct]D25= -11. 8 。 ( C=2， MeOH:DMF=l :2 );水层于水水浴 中用浓盐酸调pH~2，滴加过程中不断析出白色固体，滤集得白色针 状结晶3.85克(77.696)(L-N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸)，迈.p. 183 ~ 184.0X:, [ct]D25= +37. 7° (C=2， MeOH:,=l:2)。
L-N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸的1HNMR(DMS0) : S 7. 3 ~ 8. 1 (m, 4H, Ar-g)， 5. 8(d, 1H, -,0-)， 4.9(t, 1H, -CgCH2-)， 3. 5~3. 7(m， 2H， -C胆CH-)， 2,0(s， 3H, -COC胆)。
水解对上述所得(L) -N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸、(D)-N-乙酰-(2-萘甲基)丙氨酸乙酯用6N盐酸回流水解，得到(L) - (2-萘甲基)丙氨酸盐酸盐，[a]D25= -8. 0 ° ( C=2， 1M HC1) ; (D)-
(2-萘甲基)丙氨酸盐酸盐，[a]D25= +7.5° ( C二2， 1M HC1)。
3-氨基笨甲酸甲酯盐酸盐的制备
将无水甲醇30毫升用水盐浴冷却至-10^，滴加二氯亚砜7. 8毫 升，滴加过程中保持反应液内温-8 -10t:，滴加完毕后，加入3-氨 基苯甲酸4. 1克(30毫摩尔)，室温避光搅拌两天，得到浅紫色透明 溶液。减压蒸去溶剂，得到浅紫色结晶。用无水乙醇-乙醚重结晶，得 到类白色固体5. 58克(99.2%) 。 TLC检测氯仿-甲醇-醋酸(16: 1: 0.5), Rf=0.86， FAB-MS: [M+H]+=152， m. p. 195.0- 200"。
L-N-Ac-P-Nal-Val-mAB ( QTP-007 )的制备
将3-氨基苯甲酸甲酯盐酸盐3. 75克(20,ol)，溶于20亳升二 氯甲烷中，水浴搅拌下加入N-甲基吗啡啉2.22亳升(20mmol) , 10 分钟后，加入Boc-Va卜OH 4. 35克(20mmol ),溶解。加入HOBt 2. 84 克(21mmol)的DMF溶液6ml,水浴10分钟后，加入DCC 4.33克 (21mmol)。继续保持冰浴2小时后，室温反应12小时。浓缩，加入乙酸乙酯50毫升，水洗一次后，分别用10%柠檬酸、饱和碳酸氢钠和 饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干 燥剂，浓缩滤液，得黄色油状物。于冰水浴中，加入石油醚，刮出固 体。取该固体O. 35克(l迈mol)，加入4M盐酸/二氧六环约5毫升， 溶解，室温搅拌1小时。浓缩，得黄色油状液体。二氯甲烷溶解，水 浴搅拌下，加入N-甲基吗啡啉O. 11亳升(l咖ol) ， IO分钟后，加入 L-N-乙酰-(l-萘甲基)丙氨酸0. 26克(lmmol),溶解。加入HOBt 0. 14 克(1. 05mrno1 )的DMF溶液，冰浴10分钟，加入DCC 0. 22克(1. 05mmo1 )。 冰浴2小时后，室温反应12小时。浓缩，加入乙酸乙酯10亳升，水 洗后，分别用10%柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙 酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得黄色 油状物。加入石油醚20毫升，水浴条件下研磨，得类白色固体。将此 固体用甲醇-四氢呋喃5毫升溶解，水水浴条件下，滴加1M氢氧化锂， 30分钟后，室温反应10小时。水水浴中，滴加O. 5M盐酸水溶液，调 节pH ~3. 0,乙酸乙酯提取三次(10亳升x3),乙酸乙酯层用水、 饱和氯化钠洗两次，用无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，浓缩滤液，得 到呈白色固体的标题化合物。ESI-MS: [M+H]+=476. 3,纯度95. 0%。
依据与实施例相同或相似的方法制备得到了以下化合物
L-N-Ac-P-Nal-Va卜Va卜mAB ( QTP-OOl ) 分子量574.6 纯度95% L-N-Ac-a-Nal-Val-Val-mAB ( QTP-002) 分子量574.6 纯度95% L-N-Ac-p-Nal-Va卜Leu-mAB ( QTP-003 ) 分子量588.6 纯度95% L-N-Ac-a-Nal-Leu-Leu-mAB ( QTP-004) 分子量602.6 纯度92% L-N-Ac-a-Nal-Pro-mAB ( QTP-005) 分子量473.3 纯度85% L-N-Ac-p-Nal-Leu-Va1-mAB ( QTP-006) 分子量574.6 纯度92% L-N-Ac女Na1-Val-mAB ( QTP-007 ) 分子量475. 3纯度95% L-N-Ac-a-Nal-Val-mAB ( QTP-008 ) 分子量475.3 纯度92% L-N-Ac-P-Nal-Leu-mAB ( QTP-009 ) 分子量489. 3 纯度90% L一N—Ac—a-歸一Val-Leu—mAB ( QTP-OIO) 分子量574.6 纯度91%L-N-Ac-a-Nal-Leu-mAB ( QTP-Oil) 分子量489.3 纯度88% L一N-Ac-p-Na卜Leu-Leu-mAB ( QTP-012) 分子量602.6 纯度85%
-N--Ac-a-Nal-Gly-raAB ( QTP-025)分子量433.3 纯度98%
L--N--Boc-(p-Mm)Phe-Pro-mAB HCl (QTP-026)分子量616.8纯度85%
-N--Boc-(p-Mm)Phe-Va1-mAB HCl ( QTP-027 )分子量618.8纯度88%
-N--Boc-(p-Pym)Phe-Val_mAB HCl ( QTP-028 )分子量602.8纯度:80%
-N-画Boc-(p-DiEm)Phe-Val-mAB HCl ( QTP-029 )分子量604.8纯度:80%
D--N--Boc-(p-DiEm)Phe-Val-幽HCl (QTP-030)分子量604.8纯度:85%
L--N--Boc-(p-DiMm)Phe-Gly-mAB HCl ( QTP-031 )分子量571.3纯度85%
-N--Ac-P-Nal-Val-Va卜MAB ( QTP-032 ) 分子量588. 6 纯度90%
-N--Ac-a-歸-Va卜Val-MAB ( QTP-033 ) 分子量588. 6 纯度90%
-N--Ac-p-Na卜Val-Leu-MAB ( QTP-034 ) 分子量616.6 纯度85%
-N--Ac_a-Nal-Pro-MAB ( QTP-035 )分子量487.3 纯度85%
-N--Ac-p-Na卜Val-MAB ( QTP-036 ) 分子量489.3纯度90%
*-Ac-a-Na卜Val-MAB ( QTP-037) 分子量489.3 纯度92%
L画-N--Ac-P-Na卜Leu-MAB ( QTP-038 ) 分子量503,3 纯度85%
L一N-Ac-a—Nal—Leu—MAB ( QTP-039 ) 分子量503.3 纯度85%
-N--Ac-a-Nal-Gly-MAB ( QTP-040)分子量447.3 纯度:95%
-N--Boc-(p-Mm)Phe-Pro-MAB HCl ( QTP-041 )分子量630.8纯度80%
-N--Boc_(p-Pym)Phe-Val-MAB HCl ( QTP-042 )分子量616. 8纯度:85%
D--N--Boc-(p-DiEra)Phe-Va卜MAB HCl ( QTP-043 )分子量630. 8纯度85%
-N--Boc-(p-DiMm)Phe-Gly-MAB HCl ( QTP-044 )分子量585. 3纯度85%
L--N--Boc —(p-Chfm)Phe-Pro-MAB HCl ( QTP—045 )分子量:580. 3纯度:80%
L-N-Ac-a-Na卜Gly-ABE (QTP-046 ) 分子量445.3 纯度95% L一N-Boc-Tic—Tie—ABE ( QTP-047) 分子量473. 6纯度90%
实施例2: L-N-Boc- (p-Mm) Phe-Pro- (m) Abu ( QTP-024)
L-N-Boc-(对-吗啉甲基)苯丙氨酸盐酸盐的制备
将L-N-Ac-Phe0Et白色结晶10克(43. 5亳摩尔)溶于80亳升氯甲醚中，冰水浴控制反应液内温0t:,加入新炒制的氯化锌25克(180 亳摩尔)，搅拌，使氯化锌分散均匀。保持反应液内温0t:，反应50 小时。减压抽尽溶剂后，冰水浴条件下加入水100亳升，乙酸乙酯萃 取(25亳升x4)液合并后，分别用饱和碳酸氲钠、饱和氯化钠、水 洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠进行干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩， 得到淡黄色油状液体。加入少量乙酸，于水水浴中析出白色针状结晶。 取该结晶1.0克(3.52亳摩尔)，无水乙醇3. 5毫升溶解，加入吗啡 啉0.70毫升(7.04亳摩尔)，室温反应过夜。滤除固体，浓缩滤液， 加入水10亳升，乙酸乙酯萃取(10亳升x3),乙酸乙酯层分別用水、 饱和氯化钠洗两次，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩，得到 无色祐稠液体，放置后析出白色固体。m.p. 78 81t:。该白色固体用 6M盐酸水溶液回流6小时，浓缩，得到白色固体。取该白色固体0.34 克(1.0亳摩尔)，用水-二氧六环(l: 1)10亳升溶解，加入碳酸钾 0. 30克(2. 2毫摩尔)，溶解，加入叔丁氧酐0. 24克(1. 1亳摩尔)。 室温反应22小时。浓缩反应液，加入水10毫升，乙醚萃取(10毫升 x4)。水相于水水浴条件下，用柠檬酸酸化至pH ~ 2.0，用正丁醇 萃取(15毫升x4)，正丁醇层用水洗两次，浓缩，得到油状液体， 加入乙醚，水水浴条件下刮出固体，[a]D25= +17.5。 (C=0.6, 95%EtOH)。元素分析(％) : C 56. 54, H 7.67, N 6.72。 ESI—MS: [M+H]+= 365。
4-氨基丁酸甲酯盐酸盐的制备
将无水甲醇50毫升用水盐浴冷却至-10^,滴加二氯亚砜13毫升， 滴加过程中保持反应液内温-8 -10X:,滴加完毕后，加入3-氨基笨 甲酸5. 16克(50毫摩尔)，室温搅拌两天，得到无色透明溶液。減 压蒸去溶剂，得到白色结晶。用无水乙醇-乙醚重结晶，得到白色固体 7.63克(99.3%) ， m.p. 73~75*C， FAB-MS: [M+H]+=118。
L-N-Boc-(p-Mm)Phe—Pro-(m)Abu (QTP-024)的制备将4-氨基丁酸甲酯盐酸盐1. 54克(lOmmol)，溶于10毫升二氯 甲烷中，水浴搅拌下加入N-甲基吗啡啉1. 11毫升(lO,ol) , 10分 钟后，加入Boc-Pro-0H 2. 17克(lOmmol)，溶解。加入H0Bt 1. 42 克(10. 5mmo1)的DMF溶液2ml，水浴10分钟后，加入DCC 2. 21克
(10.5mmo1)。继续保持水浴2小时后，室温反应12小时。浓缩，加 入乙酸乙酯20亳升，水洗一次后，分别用10%柠檬酸、饱和碳酸氢钠 和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除 干燥剂，浓缩滤液，得黄色油状物。于冰水浴中，加入石油醚，刮出 固体2.4克(76.3%)。取该固体O. 32克(lmmol)，加入4M盐酸/ 二氧六环约5毫升，溶解，室温搅拌l小时。浓缩，得黄色油状液体。 二氯甲烷溶解，冰浴搅拌下，加入N-甲基吗啡啉O. 22毫升(2mmo1), 10分钟后，加入L-N-Boc-(对-吗啉甲基)苯丙氨酸盐酸盐0.40克
(lmmol),溶解。加入H0Bt 0. 14克(1. 05mmo1)的DMF溶液，水 浴10分钟，加入DCC 0. 22克(1.05m迈o1)。水浴2小时后，室温反 应12小时。浓缩，加入乙酸乙酯10毫升，水洗后，分别用10%柠檬 酸、饱和碳酸氬钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠 干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得黄色油状物。加入石油醚20 毫升，水浴条件下研磨，得类白色固体。将此固体用甲醇-四氢呋喃5 亳升溶解，水水浴条件下，滴加1M氢氧化钠，30分钟后，室温反应 3小时。水水浴中，滴加O. 5M盐酸水溶液，调节pH ~3.0,正丁醇 提取三次(10亳升x3),正丁醇层用水、饱和氯化钠洗两次，浓缩， 得到白色固体。ESI-MS: [M+]=546,纯度88%。
依据与实施例2相同或相似的方法制备得到了以下化合物:
L-N-Ac-a-NAla-Val-Abu ( QTP-013) 分子量441.4纯度98% L-N-Ac-P-NAla-Val-Abu ( QTP-014) 分子量441.4纯度95% L-N-Ac-a-NAla-Va卜Val-Abu ( QTP-015)分子量540.7纯度90% L-N-Ac-P-NAla-Va卜Va卜Abu (QTP-016)分子量540,7纯度90% L-N-Ac-a-NAla—Val—Leu—Abu ( QTP-017)分子量554.7纯度95%L-N-Ac-p-NAla-Val化eu-Abu ( QTP-018 )分子量554.7纯度90% L-N-Ac-a-NAla-Leu-Val-Abu ( QTP-019)分子量554.7纯度95% L-N-Ac-p-NAla-Uu-Val-Abu ( QTP-020)分子量554-7纯度95% L-N-Ac-a-NAla-Leu-Leu-Abu ( QTP-021)分子量568.7纯度90% L-N-Ac-p-NAla-Leu-Leu-Abu ( QTP-022)分子量568.7纯度95% L-N-Ac-a-Nal-Pro-Abu ( QTP-023 ) 分子量439. 4纯度88% L-N-Boc-(p-Mm)Phe-Pro-(m)Abu HC1 ( QTP-024) 分子量650.7纯度85% L-N-Boc-Phe-Tle-(ffl)Abu ( QTP-048)分子量463.8纯度95% L-N-Boc-(p-Chf)Phe-Val-Abu ( QTP-049) 分子量484.3纯度90% L一N-Boc-Tic-Tle-Abu (QTP-050) 分子量475.6纯度95%
其余各化合物可依据上述方法和途径制备而成。 实施例3: MTT显色法检测体外抗癌活性。 肿瘤细胞悬液的制备
取传代培养72小时的K562、 0VCA2780、 Kato-III细胞抹，用0.4% 台盼兰与细胞悬液l: 1 ( 50^1加50^1)混匀，立即按白细胞计数法 计数活细胞数，每毫升的活细胞数=计数值x5000。然后用10%小牛血 清RPMI1640液将细胞浓度调整到3. 125"05个/毫升，备用。
加样培养
在无菌条件下，向96孔细胞培养板中每孔加入以调整好的3. 125 xl05个/毫升162细胞悬液80^1和已设定好的本发明化合物浓度 20pl，每个化合物浓度设3 6个复孔，然后置37X:, 5%C02,饱和湿 度孵温箱中培养48小时，加O. 25WMTT液20nl/孔，继续培养4小时， 然后加入10%SDS100jilAL，置孵温箱培养过夜。
OD值测定:
将上述含有培养物加入SDS在孵温箱中培养过夜的96孔板置多孔 扫描分光光度计Multiskan MCC/340 MKII中，选用单波长570nm测 定OD值，计算OD值的百分率及化合物IC50。
od值(％)=给化合组0D/溶剂对照组0D xiqo%ICs。值是以化合物浓度对OD百分率的对数值做线性回归后得出的。
化合物号 OD值(X:ts)
0VCA278QKato-IIIQTP--0010.6303 : ) 02521.1628巧.05351.2093^0.0436
QTP--0020.6705 a.01751.2180^.07081.24031051
QTP--0030.5930^0.02821.1588氛07251.2423 JO.0398
QTP--0040.7128 :JO.01571.2448 JO.03211.2573劝.0691
QTP--0050.7183:80.06081.306803681.2234劝.0773
QTP--0060.7070:80.03581.3495巧.02171.3458 :JO.0959
QTP--0070.6835^0.03861.2345巧.08381.27806092
QTP--0080.7165 i0.02901.3155W.03621.3095 iO.0179
QTP--0090.7025 A13071.3075劝.05001.2908劝.0917
QTP--0100.5謂劝,04411.2688^0.01451.2093劝.0466
QTP--Oil0.670010811.258802001,19280474
QTP--0120.6860".04711.2233:10.06191.2178劝.024权利要求
1. 式(I)三肽类似物或其立体异构体或可药用盐A-B-C(I)其中A为L-型或D-型芳香性天然或非天然氨基酸，芳香性部分选自有一个或多个取代基的吲哚环、苯环、萘环、蒽环、菲环、四氢喹啉环、四氢异喹啉环、苯并四氢异喹啉环，取代基包括但不限于卤素、硝基、羟基、甲氧基、亚甲二氧基、氨基、胺甲基、N，N-二(C1-C4直链或支链烷基)胺甲基、C3-C7环胺甲基、C3-C7含氮、氧、硫杂原子的环胺甲基、磺酸甲基、磷酸酯甲基。氨基酸中的氨基部分可被取代，取代基包括但不限于C1-C4直链或支链烷基、C3-C7环烷基、各种氨基保护基，氨基保护基包括苄基、取代苄基、叔丁氧羰基、苯氧羰基、苄氧羰基、芴甲氧羰基、C1-C5羧酯基、C1-C4直链或支链烷基、C3-C7环烷基；B为选自Gly、Ala、Val、Leu、Nle、Ile、Pro、Tle、MeVal的天然或非天然亲脂性氨基酸；C为C1-C4直链或支链烷基取代的γ-氨基丁酸、C1-C4直链或支链烷基取代的γ-氨基丁烯酸及其插烯同系物、一个或多个取代基的3-氨基苯甲酸、1-(C1-C4直链或支链烷基取代的3-氨基环己烯)甲酸，或为C1-C4直链或支链烷基取代的γ-氨基丁酸、C1-C4直链或支链烷基取代的γ-氨基丁烯酸及其插烯同系物、一个或多个取代基的3-氨基苯甲酸、1-(C1-C4直链或支链烷基取代的3-氨基环己烯)甲酸与天然或非天然亲脂性氨基酸形成的二肽，氨基上的氢可被C1-C4直链或支链烷基取代或不被取代；苯环上的取代基包括但不限于卤素、硝基、羟基、羧基、三氟甲基、亚甲二氧基、亚甲二硫基、C1-C6直链或支链烷基、C3-C7环烷基、C1-C5烷氧基、氨基、C1-C5酰胺基，亲脂性氨基酸可为下列氨基酸Gly、Ala、Val、Leu、Nle、Ile、Pro、Tle、MeVal。
2. 根据权利要求1的化合物或其可药用盐，其中A为L-型或D-型芳香性天然或非天然氨基酸，芳香性部分选自有 一个或多个取代基的吲哚环、苯环、萘环、蒽环、菲环、四氢喹啉环、 四氢异喹啉环、笨并四氢异喹啉环，这些取代基包括但不限于卣素、 硝基、羟基、甲氧基、亚甲二氧基、氨基、胺甲基、N， N-二(C「C4 直链或支链烷基)胺甲基、C3-C7环胺甲基、C3-C7含氮、氧、硫杂原子 的环胺甲基、磺酸甲基、磷酸酯甲基，氨基酸中的氨基部分可被取代， 取代基包括但不限于d-C4直链或支链烷基、(V"C7环烷基、各种氨基 保护基，氨基保护基包括千基、取代千基、叔丁氧羰基、笨氧羰基、 千氧羰基、芴甲氧羰基、d-Cs羧酯基、C广C4直链或支链烷基、C3-C7 环烷基；B为选自Gly、 Ala、 Val、 Leu、 Nle、 Ile、 Pro、 Tle、 MeVal的天 然或非天然亲脂性氨基酸；C为d-C4直链或支链烷基取代的r"氨基丁酸、d-C4直链或支链烷 基取代的y-氨基丁烯酸及其插烯同系物、 一个或多个取代基的3-氨基 苯甲酸、1-(d-C4直链或支链烷基取代的3-氨基环己烯)甲酸，或为 d-C4直链或支链烷基取代的y-氨基丁酸、d-C4直链或支链烷基取代的 y-氨基丁烯酸及其插烯同系物、 一个或多个取代基的3-氨基笨甲酸、 1-(d-C4直链或支链烷基取代的3-氨基环己烯)甲酸与天然或非天然 亲脂性氨基酸形成的二肽，氨基上的氢可被d-C4直链或支链烷基取代 或不被取代；笨环上的取代基包括但不限于卣素、硝基、羟基、羧 基、三氟甲基、亚甲二氧基、亚甲二硫基、d-Ce直链或支链烷基、C3-C7 环烷基、C厂Cs烷氧基、氨基、d-Cs酰胺基，亲脂性氨基酸可为下列氨 基酸Gly、 Ala、 Val、 Leu、 Nle、 Ile、 Pro、 Tle、 MeVal。
3.式(I)三肽类似物或其立体异构体的制备方法，其包括1) 将化合物Boc-B-OH与C-OP在DMF-DCM， N醒，DCC-HOBt中反 应，生成Boc-B-C-0P,其中B, C如权利要求l中定义，P为d—4烷基；2) 将1)中所得产物在盐酸/二氧六环中脱去氨基保护基，生成 HCl.B-C-OPi3) 将2)中产物HC1.B-C-0P与Boc-A-OH在DMF-DCM， NMM，DCC-H0Bt中反应，生成Boc-A-B-C-OP;4) 将3)中产物Boc-A-B-C-0P在氢氧化锂/甲醇-四氢呋喃溶液 中急化，然后用柠檬酸酸化，生成Boc-A-B-C-OH;5) 将4)中产物Boc-A-B-C-0H如2 )中所述进行反应，生成脱去 氨基保护基的HC1，A-B-C-0H。
4. 一种药物组合物，其包括至少一种式(1)权利要求1~3任一 要求所述的三肽类似物或其立体异构体及药用载体或赋形剂。
5. 式(I)三肽类似物在制备用于治疗癌症药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及具有抗肿瘤活性的三肽类似物，其制备方法，含它们的药物组合物及它们在治疗癌症中的用途。
文档编号C07K5/00GK101544687SQ20091000549
公开日2009年9月30日 申请日期2002年7月10日 优先权日2002年7月10日
发明者刘克良, 梁远军, 赵修南, 郄建坤 申请人:中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所