专利名称：一种转移因子制备的新工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种制备兽药转移因子的工艺
背景技术：
转移因子(Transfer factor)，是机体内白细胞中有免疫活性的淋巴细胞所释放 的一种能够转移免疫致敏信息的因子，它能够特异地将供体某一细胞免疫的功能转移给受 体，非特异性地增强受体免疫功能，是一种新型免疫激发剂，近年来在动物的研究与应用引 起了人们的重视。传统转移因子的制备方法是取正常脾解冻，用自来水清洗血迹和污渍后，以灭菌 生理盐水清洗3次，去出系膜、脂肪称重，用绞肉机绞碎后，组织重量(g)按w/v加等量的灭 菌生理盐水混勻，用胶体磨破碎120秒，倒入经处理过的不锈钢容器内，置-20°C以下冻存。 采用反复冻融(3次)的方法进行裂解(融化温度不超过37°C)，离心取上清液。将上清液 装入截留12000 14000分子量的透析袋中，对体积比为1 1的灭菌生理盐水透析48 72小时，收集透析外液为原液。除菌，分装。传统工艺具有加工繁琐、产率低、生产周期长等缺点，为此对转移因子的制备进行 了新工艺改革。本发明的目的就是提供一种新颖的制造转移因子的方法，它应克服现有的技术缺 点，具有优异的经济效益和社会效益。
发明内容
经过深入、广泛的研究，本发明人研究出一种新颖的超声波裂解和超滤法制备转 移因子。新工艺的采用，将克服传统的转移因子制备工艺的技术缺点。新工艺为取正常脾解冻，用自来水清洗血迹和污渍后，以灭菌生理盐水清洗3次， 去出系膜、脂肪称重。用绞肉机绞碎后，组织重量(g)按w/v加等量的灭菌生理盐水混勻， 用胶体磨破碎120秒，倒入经处理过的不锈钢容器内，置-20°C以下冻存。取出经勻浆后的 脾脏，解冻后，用超声波裂解120秒，反复20次，在此操作中温度不超过15°C。经4摄氏度， BOOOrpm离心15分钟，收集上清夜。将上清液经5um滤柱预滤后，再通过30KD的中空纤维 柱进行超滤。再经过6000分子量的中空纤维柱超滤即为原液。灭菌，分装。
具体实施例方式实施案例一取正常脾解冻，用自来水清洗血迹和污渍后，以灭菌生理盐水清洗3次，去出系膜、脂肪称重。用绞肉机绞碎后，组织重量(g)按w/v加等量的灭菌生理盐水混勻，用胶体 磨破碎120秒，倒入经处理过的不锈钢容器内，置-20°C以下冻存。取出经勻浆后的脾脏，解 冻后，用超声波裂解90秒，反复30次，在此操作中温度为15°C。经4摄氏度，6000rpm离心 15分钟，收集上清夜。将上清液经5um滤柱预滤后，再通过30KD的中空纤维柱进行超滤。再经过6000分子量的中空纤维柱超滤即为原液。灭菌，分装。实施案例二取正常脾解冻，用自来水清洗血迹和污渍后，以灭菌生理盐水清洗3次，去出系膜、脂肪称重。用绞肉机绞碎后，组织重量(g)按W/V加等量的灭菌生理盐水混勻，用胶体 磨破碎120秒，倒入经处理过的不锈钢容器内，置-20°c以下冻存。取出经勻浆后的脾脏，解 冻后，用超声波裂解120秒，反复20次，在此操作中温度不超过10°C。经4摄氏度，6000rpm 离心15分钟，收集上清夜。将上清液经5um滤柱预滤后，再通过30KD的中空纤维柱进行超 滤。再经过6000分子量的中空纤维柱超滤即为原液。灭菌，分装。实施案例三取正常脾解冻，用自来水清洗血迹和污渍后，以灭菌生理盐水清洗3次，去出系 膜、脂肪称重。用绞肉机绞碎后，组织重量(g)按w/v加等量的灭菌生理盐水混勻，用胶体 磨破碎120秒，倒入经处理过的不锈钢容器内，置-20°C以下冻存。取出经勻浆后的脾脏，解 冻后，用超声波裂解120秒，反复20次，在此操作中温度不超过15°C。经4摄氏度，6000rpm 离心15分钟，收集上清夜。将上清液经5um滤柱预滤后，再通过30KD的中空纤维柱进行超 滤。再经过6000分子量的中空纤维柱超滤即为原液。灭菌，分装。上述所得的转移因子与传统工艺制备的转移因子进行工艺效果、活性因子测定、 紫外分光光度计扫描、氨基酸测定等试验。1.传统工艺制备的转移因子与改良后的新工艺制备的转移因子进行对照，在工艺 效果无任何变化(见表1)表1 不同生产工艺效果对照 2.将传统工艺制备的转移因子与改良后的新工艺制备出的转移因子进行活性对 照，结果表明改良后的新的工艺比传统工艺的活性因子总量提高了 5mg/ml。(见表2)表2 不同生产工艺活性因子对照 3.将改良后的新工艺制备出的转移因子与传统方法制备的转移因子经紫外分光 光度仪扫描，图谱一样，证明成份基本相同。(见图1、图2)4.将改良工艺制备的转移因子与传统工艺制备的转移因子中氨基酸总量相比较， 总数有所增加，各种氨基酸量成正相关增加。(见表3、表4)表3 改良后新工艺制备的TF氨基酸分析结果 表4 传统工艺制备的TF氨基酸分析结果 17种氨基酸中谷氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、赖氨酸、六种含量较
高。改良的生产工艺不仅大大地节省原料、降低成本、提高效率、而且显著地提高了活性因
子总量。上述实施例，包括超声波裂解的时间、温度、重复次数及滤柱中空纤维柱的选用，
对本发明进行了描述，这些描述是说明性的而非限定性的，可按照所限定范围列举出若干
个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
图1改良后新工艺制备的转移因子紫外分光光度计扫描的图谱图2传统工艺制备的转移因子紫外分光光度计扫描的图谱
权利要求
制备转移因子的新工艺为取正常脾解冻，用自来水清洗血迹和污渍后，以灭菌生理盐水清洗3次，去出系膜、脂肪称重。用绞肉机绞碎后，组织重量(g)按w/v加等量的灭菌生理盐水混匀，用胶体磨破碎120秒，倒入经处理过的不锈钢容器内，置-20℃以下冻存。取出经匀浆后的脾脏，解冻后，用超声波裂解120秒，反复20次，在此操作中温度不超过15℃。经4摄氏度，6000rpm离心15分钟，收集上清夜。将上清液经5um滤柱预滤后，再通过30KD的中空纤维柱进行超滤。再经过6000分子量的中空纤维柱超滤即为原液。灭菌，分装。
2.根据权利要求1，所述用超声波裂解120秒，反复20次，在此操作中温度不超过 15°C。
3.根据权利要求1，裂解后的脾脏勻浆经4摄氏度，6000rpm离心15分钟，收集上清夜。
4.根据权利要求1，将上清液经5um滤柱预滤后，再通过30KD的中空纤维柱进行超滤。 再经过6000分子量的中空纤维柱超滤即为原液，灭菌，分装。
5.根据权利要求1 5，一种转移因子制备的新工艺，其特征是用超声波裂解和超滤法 制备转移因子。
全文摘要
本发明涉及一种制备兽药转移因子的工艺，其特征是转移因子制备新工艺采用超声波裂解和超滤等方法，对传统的转移因子制备工艺进行改良。结果改良工艺后平均活性因子总量明显高于传统工艺平均活性因子总量。新工艺不仅大大地节省原料、降低成本、提高效率、而且显著地提高了活性因子总量，具有很好的推广和应用价值。
文档编号C07K14/47GK101838324SQ20091001993
公开日2010年9月22日 申请日期2009年3月20日 优先权日2009年3月20日
发明者张凤, 王云军 申请人:菏泽普恩药业有限公司