专利名称：能够结合血清白蛋白的肽，以及包含其的化合物、构建体和多肽的制作方法
技术领域：
本发明涉及能够结合血清蛋白的氨基酸序列，涉及包含所述氨基酸序列或基本由 其组成的肽；涉及包含所述氨基酸序列的化合物和构建体(如融合蛋白和多肽)；涉及编码 所述氨基酸序列、肽、融合蛋白或多肽的核酸序列；涉及这样的组合物，具体地涉及药物组 合物，其包含所述氨基酸序列、肽构建体、化合物、融合蛋白或多肽；并且涉及所述氨基酸序 列、肽构建体、化合物、融合蛋白或多肽的应用。本发明的其它方面、实施方案、优势和应用将从本文的其它描述中显而易见。
背景技术：
未预先公开的国际申请PCT/EP2007/063348 (题为 “P印tides capable of binding to serum proteins (能够结合血清蛋白的肽)”)描述了用于产生能够结合血清 蛋白的肽的方法，所述肽可以结合或融合于治疗性结构部分、化合物、蛋白或其它治疗性实 体从而增加其半衰期。PCT/EP2007/063348还描述了许多具体的氨基酸序列，其能够结合于人血清白蛋 白并且可以连接或融合于治疗性结构部分、化合物、蛋白或其它治疗性实体从而增加其半 衰期。这些氨基酸序列包括氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO :1)，其在PCT/ EP2007/063348 中被称为 “ 17D12”，并且在 PCT/EP2007/063;348 中列举为 SEQ ID NO :3。本发明的一个目的是提供这样的氨基酸序列，其与氨基酸序列 AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO 1)相比较，具有提高的与血清白蛋白的结合。具体地，本 发明的一个目的是提供这样的氨基酸序列，其-与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO :1)相比较，更好地与人血清白 蛋白结合(如本文定义)，禾口/ 或-可以特异性地与人血清白蛋白结合(如本文定义)，并且还可以与来自至少一个 其它哺乳动物物种的血清白蛋白特异性结合(如来自小鼠、大鼠、兔子、狗或灵长类动物物 种如狒狒或猕猴的血清白蛋白)，并且具体地可以特异性结合于人血清白蛋白以及结合于 来自食蟹猴的血清白蛋白；和/或-可以结合于(人)血清白蛋白并且与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO 1)相比较，具有其他用于药用的提高的性质，如提高的稳定性，提高的蛋白酶抗性等；和/或-当与治疗性结构部分、化合物、蛋白或其它治疗性实体连接或融合时，与SEQID NO 1的氨基酸序列相比较，提供血清半衰期或其它药理学相关性质的更大增加(当与相同 治疗剂连接或融合时)。本发明的目的还在于提供这样的氨基酸序列，其可以与治疗性结构部分、化合 物、蛋白或其它治疗性实体连接或融合，从而使得到的化合物或构建体与包含氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO 1)的相应化合物或构建体相比较具有提高的半衰期。发明概述本发明的目的是提供这样的氨基酸序列，其是在PCT/EP2007/063348中所述的血 清蛋白-结合的氨基酸序列的备选的氨基酸序列，并且特别是提高的备选氨基酸序列。一般而言，本发明通过提供本文所述的氨基酸序列实现该目标。这些氨基酸序列 可以结合于(并且特别地，如本文定义特异性结合于)血清白蛋白(并且特别是人血清白 蛋白)，可以用作用于与治疗性化合物(如治疗性蛋白或多肽)连接或融合从而增加其半衰 期的小肽或肽结构部分。这些氨基酸序列(其在本文也称为“本发明的氨基酸序列”)在本 文中进一步定义。因此，根据第一方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其a)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP (SEQ ID NO 1)具有至少50 %，优选地至少 65 %，更优选地至少70 %，甚至更优选地至少75 %，如至少80 %，如至少90 %，但是非100 % 的序列同一性(如本文定义)；以及b)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDreP (SEQ ID NO 1)比较，更好地与人血清白蛋
H 5口口。本发明的另一个方面涉及这样的氨基酸序列，其a)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP (SEQ ID NO 1)相比较，具有不超过9个， 优选地不超过8个，具体地不超过7个，如6，5，4，3，2或1个氨基酸差异(如本文定义)；以及b)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDreP (SEQ ID NO 1)相比较，更好地与人血清白
蛋白结合。在另一个方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其a)包含下列序列基序的一个或多个DYDV (SEQ ID NO :116)，YDVF (SEQ ID NO: 117),DVFG(SEQ ID NO :118)，VFGG(SEQ ID NO :119)，FGGG (SEQ ID NO :120)和 / 或GGGT (SEQ ID NO 121)；b)具有5-50个，优选地7-40个，更优选地10_35个，如约15，20，25或30个氨基 酸残基的总长度；以及c)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDreP (SEQ ID NO 1)相比较，更好地与人血清白
蛋白结合；所述氨基酸序列不是序列AA SYSDYDVFGGGTDFGP (SEQ ID NO :1)。在另一个方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其a)包含下列序列基序的一个或多个DYDVF (SEQ ID NO :122)，YDVFG (SEQ ID NO 123), DVFGG (SEQ ID NO :124)，VFGGG (SEQ ID NO :125)和 / 或 FGGGT (SEQ ID NO :126)；b)具有5-50个，优选地7-40个，更优选地10_35个，如约15，20，25或30个氨基 酸残基的总长度；以及c)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDreP (SEQ ID NO 1)相比较，更好地与人血清白蛋白结合；所述氨基酸序列不是序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO :1)。优选地，这样的
氨基酸序列如本文进一步所述。在另一个方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其a)包含下列序列基序的一个或多个DYDVFG(SEQ ID NO 127)，YDVFGG(SEQ ID NO 128), DVFGGG(SEQ ID NO :129)和 / 或 VFGGGT(SEQ ID NO :130)；b)具有6-50个，优选地7-40个，更优选地10-35个，如约15，20，25或30个氨基 酸残基的总长度；以及c)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDreP (SEQ ID NO 1)相比较，更好地与人血清白
蛋白结合；所述氨基酸序列不是序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO :1)。优选地，这样的
氨基酸序列如本文进一步所述。在另一个方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其a)包含下列序列基序的一个或多个DYDVFGG (SEQ ID NO :131)，YDVFGGG (SEQ ID NO 132)和 / 或DVFGGGT(SEQ ID NO :133)；b)具有7-50个，优选地8-40个，更优选地10_35个，如约15，20，25或30个氨基 酸残基的总长度；以及c)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDreP (SEQ ID NO 1)相比较，更好地与人血清白
蛋白结合；所述氨基酸序列不是序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO :1)。优选地，所述氨 基酸序列如本文进一步所述。在另一个方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其 a)包含下列序列基序的一个或多个DYDVFGGG (SEQ ID NO : 134)和/或 YDVFGGGT(SEQ ID NO :135)；b)具有8-50个，优选地9-40个，更优选地10-35个，如约15，20，25或30个氨基 酸残基的总长度；以及c)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDreP (SEQ ID NO 1)相比较，更好地结合于人血
清白蛋白；所述氨基酸序列不是序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO :1)。优选地，所述氨 基酸序列如本文进一步所述.在另一个方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其a)包含下列序列基序DYDVFGGGT(SEQ ID NO :136)；b)具有9-50个，优选地9-40个，更优选地10-35个，如约15，20，25或30个氨基 酸残基的总长度；以及c)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDreP (SEQ ID NO 1)相比较，更好地与人血清白蛋白结合；所述氨基酸序列不是序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO :1)。优选地，所述氨 基酸序列如本文进一步所述。本发明的氨基酸序列(如本文进一步所述)优选地(至少)包含(i) Arg(R)残基，具体地是这样的Arg(R)残基，其能够与人血清白蛋白的氨基 酸残基Asn(N) 133和Asn(N) 135形成氢键和/或能够与人血清白蛋白的Pro (P) 134和 Leu(L) 136残基的主链氧原子形成静电相互作用；和/或(ii) Trp (W)残基，具体地是这样的Trp (W)残基，其能够与人血清白蛋白的 Arg(R) 138残基形成静电相互作用；和/或(iii)序列基序 GGG ；并且优选地(i)，(ii)和(iii)的至少任意两项和更优选地所有三项。本发明的氨基酸序列(如本文进一步所述)优选地(至少)包含(i)序列基序RXWD，其中X可以是任何氨基酸序列但优选是W，Y，F，S或D ；和/或(ii)序列基序GGG，优选序列基序FGGG，更优选序列基序DVFGGG(SEQ ID NO 1四)，并且特别是序列基序DVFGGGT (SEQ ID NO 133)；并且最优选这些序列基序⑴和 (ii)两种。本发明的优选的氨基酸序列还可以例如包含序列基序DAFGGG (SEQ ID NO :192)， 而非序列基序DVFGGG(SEQ ID N0:129)o另外，本发明的优选的氨基酸序列例如还可以 包含序列基序 DVFGGGS(SEQ ID NO 193)或 DAFGGGT(SEQ ID NO 194)，而非序列基序 DVFGGGT(SEQ ID N0:133)。基本本文的公开内容，可以在本发明的氨基酸序列中存在的 其它类似序列基序对于熟练技术人员来说将是显而易见的(如在表II和表V中提到的序 列)。因而，在另一方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其a)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO :1)具有至少50 %，优选至少 65 %，更优选至少70 %，甚至更优选至少75 %，如至少80 %，如至少90 %，但并非100 %的序 列同一性(如本文定义)；并且其b)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDreP (SEQ ID NO 1)相比，更好地结合于人血清 白蛋白；并且其c)包含Arg(R)残基，特别是能够与人血清白蛋白的氨基酸残基Asn(N) 133和 Asn(N) 135形成氢键和/或能够与人血清白蛋白的Pro (P) 134和Leu(L) 136残基的主链氧 原子形成静电作用的Arg(R)残基。该氨基酸序列优选地还包含(i)序列基序RXWD，其中X可以是任何氨基酸序列， 但优选地是W，Y，F，S或D;和/或(ii)序列基序GGG，优选序列基序FGGG，更优选序列基序 DVFGGG (SEQ ID NO :1 )，并且特别是序列基序DVFGGGT (SEQ ID NO :133)；并且最优选地是 这两种序列基序。以上氨基酸序列还优选地如本文进一步所述。在另一方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其
a)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP (SEQ ID NO 1)具有至少50 %，优选地至少 65 %，更优选地至少70 %，甚至更优选地至少75 %，如至少80 %，如至少90 %，但并非100 % 的序列同一性(如本文定义)；并且其b)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDreP (SEQ ID NO 1)相比，更好地结合于人血清 白蛋白；并且其c)包含Trp(W)残基，特别是能够与人血清白蛋白的Arg(R) 138残基形成静电作用 的Trp (W)残基。这一氨基酸序列优选地还包含⑴序列基序RXWD，其中X可以是任何氨基酸序列 但优选地W，Y，F，S或D ；和/或(ii)序列基序GGG，优选序列基序FGGG，更优选序列基序 DVFGGG (SEQ ID NO :1 )，并且特别是序列基序DVFGGGT (SEQ ID NO :133)；并且最优选地是 这两种序列基序。以上氨基酸序列还优选地如本文进一步所述。在另一方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其a)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP (SEQ ID NO 1)相比，具有至少50 %，优选 地至少65 %，更优选地至少70 %，甚至更优选地至少75 %，如至少80 %，如至少90 %，但并 非100%的序列同一性(如本文定义)；并且其b)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDreP (SEQ ID NO 1)相比，更好地结合于人血清 白蛋白；并且其c)包含Arg(R)残基，特别是能够与人血清白蛋白的氨基酸残基Asn(N) 133和 Asn(N) 135形成氢键和/或能够与人血清白蛋白的Pro (P) 134和Leu(L) 136残基的主链氧 原子形成静电作用的Arg(R)残基；并且其d)包含Trp(W)残基，特别是能够与人血清白蛋白的Arg(R) 138残基形成静电作用 的Trp (W)残基。该氨基酸序列优选地还包含⑴序列基序RXWD，其中X可以是任何氨基酸序列但 优选地是W，Y，F，S或D ；和/或(ii)序列基序GGG，优选地序列基序FGGG，更优选地序列基 序DVFGGG (SEQ ID NO 129)，并且特别是序列基序DVFGGGT (SEQ ID NO :133)；并且最优选 地包含这两种序列基序。以上氨基酸序列还优选地如本文进一步所述。可以存在于本发明的氨基酸序列中的一些优选的，但并非限制性的序列基序是-氨基酸序列RXWD)(DVFGGG(SEQ ID NO :171)，其中通过X表示的第一(从N末端 计)氨基酸残基选自Y，S或D ；通过X表示的第二氨基酸残基选自Y或F。-氨基酸序列RXWD)(DVFGGGT(SEQ ID NO :172)，其中通过X表示的第一(从N末端 计)氨基酸残基选自Y，S或D ；通过X表示的第二氨基酸残基选自Y或F。-氨基酸序列RXWD)(DVFGGGTP(SEQ ID NO : 173)，其中通过X表示的第一(从N末端计)氨基酸残基选自Y，S或D ；通过X表示的第二氨基酸残基选自Y或F。-氨基酸序列RXWD)(DVFGGGTPG(SEQID NO :174)，其中通过X表示的第一(从N末 端计)氨基酸残基选自Y，S或D ；通过X表示的第二氨基酸残基选自Y或F。-氨基酸序列RXWD)(DVFGGGTPGG(SEQ ID NO 175)，其中通过X表示的第一(从N 末端计)氨基酸残基选自Y，S或D ；通过X表示的第二氨基酸残基选自Y或F。-选自 RYffDYDVFGGG (SEQ ID NO :176) ；RDffDFDVFGGG (SEQ ID NO :177)； RSffDFDVFGGG(SEQ ID NO :178)或 RYWDFDVFGGG(SEQ ID NO :179);特别是选自 RDffDFDVFGGG (SEQ ID NO :177) ； RSffDFDVFGGG (SEQ ID NO :178)或 RYWDFDVFGGG(SEQ ID NO: 179)的氨基酸序列。-选自RYWDYDVFGGGT(SEQ ID NO :180) ；RDTOFDVFGGGT(SEQ ID NO :181)； RSffDFDVFGGGT(SEQ ID NO :182)或 RYWDFDVFGGGT(SEQ ID NO 183)；特别是选自 RDffDFDVFGGGT(SEQ ID NO :181) ；RSffDFDVFGGGT(SEQ ID NO 18 或RYWDFDVFGGGT(SEQ ID NO 183)的氨基酸序列。-选自RYWDYDVFGGGTP(SEQ ID NO :184) ；RDffDFDVFGGGTP(SEQ ID NO :185)； RSffDFDVFGGGTP(SEQ ID NO :186)或 RYWDFDVFGGGTP(SEQ ID NO :187)；特别是选自 RDffDFDVFGGGTP(SEQ ID NO 185) ；RSffDFDVFGGGTP(SEQ ID NO 186)或RYWDFDVFGGGTP(SEQ ID NO 187)的氨基酸序列。-选自 RYffDYDVFGGGTPV (SEQ ID NO :188) ； RDffDFDVFGGGTPV (SEQ ID NO: 189) ；RSffDFDVFGGGTPV(SEQ ID NO :190)或 RYffDFDVFGGGTPV(SEQ ID NO :191)；特 别是选自 RDWDFDVFGGGTPV(SEQ ID NO :189) ；RSffDFDVFGGGTPV(SEQ ID NO :190)或 RYffDFDVFGGGTPV (SEQ ID NO :191)的氨基酸序列。在本发明上下文中，在下列情形中认为本发明的氨基酸序列比SEQ ID NO 1的氨 基酸序列“更好地结合”于血清白蛋白(如人血清白蛋白或来自其它哺乳动物物种的血清 白蛋白，如食蟹猴的血清白蛋白)-当它以比SEQID NO 1的氨基酸序列更高的特异性结合到所述血清白蛋白上 时；和/或-当它以比SEQID NO :1的氨基酸序列更高的亲和性(如本文定义，并且表示为 速率，并且使用本文所述的方法之一进行测定)结合于所述血清白蛋白时；
和/或-当它在下面的实施例2中所述的噬菌体-ELISA测定中，比SEQID NO=I的氨基 酸序列更强地结合于所述血清白蛋白时；和/或-当它在下面的实施例3中所述的溶液结合的竞争ELISA中，比SEQID NO=I的 氨基酸序列更好地结合于所述血清白蛋白时；-当它在下面的实施例5中所述的溶液结合的竞争性ELISA中，比SEQID N0:1的 氨基酸序列更好地结合于所述血清白蛋白时；-当它与SEQID NO 1的氨基酸序列相比以更高的抗体亲抗原性(即，当本发明 的氨基酸序列用作多连体(concatamer)时)结合于所述血清白蛋白时(即，当其以可比较 的多连体形式使用时)；和/或-当包含一种或多种本发明的所述氨基酸序列的本发明的化合物(如本文定义)以比包含一种或多种SEQ ID NO :1的氨基酸序列的本发明的相应化合物更高的特异性、 亲和性和/或抗体亲抗原性结合于所述血清白蛋白时(例如，如使用在实施例6中使用的 BIAcore 测量确定的)。例如，但不限于，当其中相关氨基酸序列融合于(任选地通过适合 的接头)纳米抗体2D3(SEQ ID NO 137)的融合蛋白以比其中纳米抗体2D3融合(任选地 通过相同的适合的接头)于氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO 1)的相应融合蛋 白更高的特异性、亲和性和/或抗体亲抗原性结合血清白蛋白时(例如，如使用在实施例6 中所用的BIAcore 测量所测定的)，认为本发明的氨基酸序列更好地结合于血清白蛋白。 为了该比较目的，相关氨基酸序列和氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO :1)可以 例如(但不限于)连接于2D3的C端(任选地通过相同的适合的接头)。作为其具体但非 限制性的实例，对应于在SEQ ID而139中给出的203-56!15融合蛋白(其中所述氨基酸序 列56H5已经被相关的氨基酸序列替换)的融合蛋白对血清白蛋白的特异性、亲和性和/或 抗体亲抗原性可以与在SEQ ID而138中给出的相应融合蛋白203-17012对血清白蛋白的 特异性、亲和性和/或抗体亲抗原性进行比较(例如，如使用在实施例6中所用的BIAcore 测量所确定的)。具体地，“结合”如本文所述可以使用在实施例3或实施例9中所述的溶液结合竞 争测定法确定；或当所述氨基酸序列表达为与纳米抗体2D3的融合蛋白时，如在实施例7或 10中所述，以这些实施例中所述的Biacore测定法确定。优选地，本发明的氨基酸序列是这样的，以致它们与本发明的氨基酸序列 56E4(SEQ ID NO :14)相比，同等好地或优选更好地结合于人血清白蛋白。为此目的，所述 本发明的氨基酸序列可以例如是本发明的氨基酸序列56E4(SEQ ID NO :14)或氨基酸序列 56E4的这样的变体，所述变体与氨基酸序列56E4 (如氨基酸序列56E4的亲和性成熟形式) 相比，同等好地或优选更好地结合于人血清白蛋白。本发明的所述氨基酸序列的一些优选， 但非限制性的实例在实施例9和表V中给出，并且包含氨基酸序列59E4(SEQ ID NO :14)； 59A5(SEQ ID NO :147) ； 59C8(SEQ ID NO :148) ；59F2(SEQ ID NO :149) ； 59B3(SEQ ID NO: 150) ； 59B2(SEQ ID NO :151) ；60E6 (SEQ ID NO :152) ；60F1(SEQ ID NO :153) ；60G5(SEQ ID NO 154) ；59H12(SEQ ID NO :155) ；59C2(SEQ ID NO :156)；和 59H10(SEQ ID NO :157)，其中 特别优选 59F2(SEQ ID NO :149) ；59C2(SEQ ID NO :156)和 59H12(SEQ ID NO :155)。因此，在另一个方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其a)是序歹Ij AARYffDYDVFGGGTPVGG (56E4 ；SEQ ID NO 14)；或b)与氨基酸序列 AARYWDYDVFGGGTPVGG(56E4 ;SEQ ID NO :14)相比较具有至少 65 %，更优选地至少70 %，甚至更优选地至少75 %，如至少80 %，例如至少85 %或至少90 % 的序列同一性；和/或c)与氨基酸序列 AARYWDYDVFGGGTPVGG(56E4 ；SEQ ID NO 14)相比，具有不超过 6 个，优选不超过5个，具体地不超过4个，如3，2或1个氨基酸差异(如本文定义)，并且优选地d)与氨基酸序列 AARYWDYDVFGGGTPVGG(56E4 ；SEQ ID NO 14)相比，同等好地且优
选更好地结合于人血清白蛋白。此外，所述氨基酸序列以其在本文中最广泛的意义结合在术语“本发明的氨基酸 序列”的含义中；并且它们优选地如本文进一步所述。因此，例如，所述氨基酸序列优选地包含(i)Arg(R)残基，具体地是这样的Arg (R)残基，其能够与人血清白蛋白的氨基酸残基 Asn (N) 133和Asn (N) 135形成氢键和/或能够与人血清白蛋白的Pro (P) 134和Leu (L) 136 残基的主链氧原子形成静电相互作用；和/或(ii)Trp(W)残基，具体地是这样的Trp (W)残 基，其能够与人血清白蛋白的Arg(R) 138残基形成静电相互作用；和/或(iii)序列基序 GGG;并且优选地(i)，(ii)和(iii)的至少任意两项和更优选地所有三项。具体地，本发 明的所述氨基酸序列优选地(至少)包含(i)序列基序RXWD，其中X可以是任何氨基酸序 列，但是优选是W，Y，F，S或D ；和/或(ii)序列基序GGG，优选地序列基序FGGG，更优选地 序列基序DVFGGG (SEQ ID NO 1 )，并且具体地是序列基序DVFGGGT (SEQ ID NO :133)；并 且最优选地是这些序列基序(i)和(ii)两种。在另一个方面中，本发明涉及这样的氨基酸序列，其a)是氨基酸序列 59A5(SEQ ID NO :147) ；59C8(SEQ ID NO :148) ；59F2(SEQ ID NO 149) ； 59B3(SEQ ID NO :150) ； 59B2(SEQ ID NO :151) ；60E6 (SEQ ID NO :152) ；60F1(SEQ ID NO 153) ；60G5 (SEQ ID NO :154) ；59H12(SEQ ID NO :155) ； 59C2(SEQ ID NO :156)；或 59H10(SEQ ID NO :157)中的一禾中；或b)与氨基酸序列 59A5 (SEQ ID NO :147) ； 59C8(SEQ ID NO :148) ； 59F2 (SEQ ID NO: 149) ；59B3(SEQ ID NO :150) ；59B2(SEQ ID NO :151) ；60E6(SEQ ID NO :152) ；60F1(SEQ ID NO 153) ；60G5(SEQ ID NO :154) ；59H12(SEQ ID NO :155) ； 59C2(SEQ ID NO :156)；禾口 / 或 59H10(SEQ ID NO :157)中的至少一种氨基酸序列具有至少65%，更优选地至少70%，甚至 更优选地至少75%，如至少80%，例如至少85%或至少90%的序列同一性；和/或c)与氨基酸序列 59A5 (SEQ ID NO :147) ； 59C8(SEQ ID NO :148) ； 59F2 (SEQ ID NO: 149) ；59B3(SEQ ID NO :150) ； 59B2(SEQ ID NO :151) ；60E6 (SEQ ID NO :152) ；60F1(SEQ ID NO 153) ；60G5(SEQ ID NO :154) ；59H12(SEQ ID NO :155) ； 59C2(SEQ ID NO :156)；禾口 / 或 59H10(SEQ IDNO 157)中的至少一种氨基酸序列相比，具有不超过6个，优选地不超过5个， 具体地不超过4个，如3，2或1个氨基酸差异(如本文定义)；和优选地d)与氨基酸序列 AARYWDYDVFGGGTPVGG(56E4 ；SEQ ID NO 14)相比，同等好地并且 优选更好地结合于人血清白蛋白。此外，将所述氨基酸序列以其在本文中所用最广泛的意义结合在术语“本发明的 氨基酸序列”的含义中；并且它们优选地如本文进一步所述。在另一个方面中，本发明涉及这样的氨基酸序列，其a)是氨基酸序列 59F2 (SEQ ID NO :149) ；59H12(SEQ ID NO :155)；或 59C2(SEQ ID NO 156)之一；或b)与氨基酸序列 59F2(SEQ ID NO :149) ；59H12(SEQ ID NO :155)；和/或59C2(SEQ ID NO 156)中的至少一种氨基酸序列具有至少65%，更优选地至少70%，甚至更优选地至 少75%，如至少80%，例如至少85%或至少90%的序列同一性；和/或c)与氨基酸序列 59F2 (SEQ ID NO :149) ；59H12(SEQ ID NO :155)；和 / 或 59C2(SEQ ID NO 156)中的至少一种氨基酸序列相比，具有不超过6个，优选地不超过5个，具体地不 超过4个，如3，2或1个氨基酸差异(如本文定义)；并且优选地d)与氨基酸序列 AARYWDYDVFGGGTPVGG(56E4 ；SEQ ID NO 14)相比，同等好地并且优选更好地结合于人血清白蛋白。此外，将所述氨基酸序列以其在本文中所用的最广泛的意义结合在术语“本发明 的氨基酸序列”的含义中；并且它们优选地如本文进一步所述。根据另一个方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其与氨基酸序列 AASYSDYDVFGGGTDFGP (SEQ ID NO 1)具有至少50 %，优选地至少65 %，更优选地至少70 %， 甚至更优选地至少75 %，如至少80 %，如至少90 %，但是非100 %的序列同一性(如本文定 义)；其中所述氨基酸序列是这样的是，以致，当其与治疗性结构部分、化合物、蛋白或其它 治疗性实体连接或融合时，由此获得的本发明的化合物(如本文定义)与其中所述治疗性 结构部分、化合物、蛋白或其它治疗性实体连接或融合于SEQ ID NO :1的氨基酸序列(即， 而不是本发明的氨基酸序列)的相应化合物或构建体相比，具有更长的半衰期(如本文定 义)。根据另一个方面，本发明涉及这样的氨基酸序列，其与氨基酸序列 AASYSDYDVFGGGTDFGP (SEQ ID NO :1)相比，具有不超过9个，优选地不超过8个，具体地不 超过7个，如6，5，4，3，2或1个氨基酸差异(如本文定义)；其中所述氨基酸序列是这样 的，以致，当其与治疗性结构部分、化合物、蛋白或其它治疗性实体连接或融合时，由此获得 的本发明的化合物(如本文定义)与其中所述治疗性结构部分、化合物、蛋白或其它治疗实 体连接或融合于氨基酸序列SEQ ID NO :1( S卩，而不是本发明的氨基酸序列)的相应化合物 或构建体相比具有更长的半衰期(如本文定义)。本发明的其它方面，实施方案，应用和优势通过本文的进一步描述将变得清楚。本发明的氨基酸序列的一些代表性、但非限制性的实例列举为下表II中的SEQ ID NO，s :2-115,以及下表V中的SEQ ID NO，s 147-157 (其中一些优选的代表性实例以粗体 和下划线标记)。本发明的氨基酸序列的一些特别优选的代表性实例是氨基酸序列PMP56G11 (SEQ ID NO 68) ；PMP56E4(SEQ ID NO 14) ；PMP54H4(SEQ ID NO :106) ；PMP54H5(SEQ ID NO 33)； PMP56H1(SEQ ID NO 31) ；PMP56E2(SEQ ID NO 47) ；PMP56G3(SEQ ID NO 35) ；PMP54G1(SEQ ID NO 38) ；PMP56F1(SEQ ID NO 30) ；PMP54H2(SEQ ID NO 40) ；PMP56H9(SEQ ID NO :100)； PMP56F2 (SEQ ID NO 51) ；PMP26A3 (SEQID NO :26)和 01B3 (SEQ ID NO :115)；并且具体地 是 59E4(SEQ ID NO :14) ； 59A5(SEQ ID NO :147) ；59C8(SEQ ID NO :148) ； 59F2(SEQ ID NO: 149) ；59B3(SEQ ID NO :150) ；59B2(SEQ ID NO :151) ；60E6(SEQ ID NO :152) ；60F1 (SEQ ID NO 153) ；60G5 (SEQ ID NO :154) ；59H12(SEQ ID NO :155) ； 59C2(SEQ ID NO :156)；和 59H10(SEQ ID NO :157)；其中特别优选 59F2 (SEQ ID NO :149) ；59C2(SEQ ID NO :156)和 59H12(SEQ ID NO :155)。一般地，本发明的氨基酸序列与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP (SEQ ID NO :1) 相比，将包含(在本文提出的总的限定中)一个或多个“氨基酸差异”(如本文定义)，从而 使得到的本发明的氨基酸序列与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP (SEQ ID NO 1)相比，更 好地结合(如本文定义)于人血清白蛋白。一般地，并且在本文提出的总的限定中，与SEQ ID NO 1的序列比较，所述氨基酸 差异可以在一个或多个位置包含一个或多个氨基酸残基的插入、缺失或取代。通常，与SEQ ID NO :1的序列比较，本发明的氨基酸序列包含至少一个氨基酸取代(如本文提及的那些)；和任选地还包含一个或多个氨基酸插入和/或一个或多个氨基酸缺失。基于本文的公开内容，适合的取代，插入和/或缺失(及其组合)对于技术人员是 清楚的，并且例如包含在SEQ ID NOs :2-115的氨基酸序列和在SEQ ID NO，s 147-157的氨 基酸序列(和具体地在这样的氨基酸序列中，其优选地在SEQ ID NOs :2-115的氨基酸序列 和/或在SEQ ID NO’ s :147-157的氨基酸序列中)中存在的取代、插入和/或缺失的一个 或多个，或这些取代、插入和/或缺失的任何适合的组合。为此目的，在
图1和在表V中给 出SEQ ID NO :1的序列和SEQ ID NOs :2-115的序列的比对，并且将SEQ ID NO's :147-157 的序列与SEQ ID NO 14的序列进行比较。将可以在本发明的氨基酸序列(与SEQ ID NO 1的氨基酸序列比较)中存在的一 些优选、但非限制性的可能的取代的实例在下面的表I中列举(要理解，本发明的氨基酸序 列，在本文提出的限定中，包含一个或多个其它适合的氨基酸取代、插入或缺失)。要注意，在本发明的最优选的氨基酸序列中，位置3最优选地是R，位置5是W (优 选地与位置6的D组合)；位置7优选地是F (但是也可以是Y或W)；位置15是P并且位置 16 是 V。通过比较，在SEQ ID NO :1的序列中，位置3是S ；位置5是S ；位置7是Y ；位置 15是D，位置15是D ；位置16是F。本发明的最优选的氨基酸序列与SEQ ID NO=I的序列共有下列残基在位置4的 Y (尽管，在本发明的序列中，这也可以是F，W，S或D)；在位置6的D ；在位置8-13的DVFGGG 基序(尽管在本发明的优选序列中这也可以是DAFGGG)，和在位置14的T ；以及在位置17 的G。表I 可以在本发明的氨基酸序列中存在的可能的取代的实例。
权利要求
1.氨基酸序列，其a)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQID NO 1)相比，具有至少50%，优选地至 少65%，更优选地至少70%，甚至更优选地至少75%，如至少80%，如至少90%，但是非 100%的序列同一性(如本文定义)；并且其b)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO 1)相比，更好地结合于人血清白蛋白。
2.氨基酸序列，其a)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO 1)相比，具有不超过9个，优选地 不超过8个，具体地不超过7个，如6，5，4，3，2或1个氨基酸差异(如本文定义)；并且其b)与氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO 1)相比，更好地结合于人血清白蛋白。
3.根据前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中，与SEQID NO. 1的氨基酸序列比较-在SEQ ID NO 1的位置3的丝氨酸残基⑶被选自精氨酸(R)，脯氨酸⑵，芳族氨 基酸残基(F，Y，W或H ；特别是F，Y或W)或疏水性氨基酸残基(L，I，V或M)的氨基酸残基 取代；和/或-在SEQ ID NO 1的位置5的丝氨酸残基⑶被选自精氨酸(R)，脯氨酸⑵，或芳族 氨基酸残基(F，Y，W或H ；特别是F，Y或W)的氨基酸残基取代； 和/或-在SEQ ID NO :1的位置15的天冬氨酸残基⑶被选自脯氨酸⑵或小氨基酸残基 (A，G，S或T)的氨基酸残基取代； 和/或-在SEQ ID NO 1的位置16的苯丙氨酸残基(F)被脯氨酸(P)，疏水性氨基酸残基(L， I，V或M)，或小氨基酸残基(A，G，S或T)取代； 和/或-在SEQ ID NO 1的位置18的脯氨酸残基(P)保持不变或被(部分)带负电荷氨基 酸残基(D，E，Q或N)或小氨基酸残基(A，G，S或T)取代；并且所述氨基酸序列任选地包含一个或多个其它适合的氨基酸插入、缺失和/或取代。
4.根据前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中，与SEQID NO. 1的氨基酸序列比 较，在SEQ ID NO 1的位置3的丝氨酸残基⑶被精氨酸(R)取代。
5.根据前述权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含(i)Arg(R)残基，具体地是这样的Arg(R)残基，其能够与人血清白蛋白的氨基酸残基 Asn (N) 133和Asn (N) 135形成氢键和/或能够与人血清白蛋白的Pro (P) 134和Leu (L) 136 残基的主链氧原子形成静电相互作用；和/或(ii)Trp(ff)残基，具体地是这样的Trp(W)残基，其能够与人血清白蛋白的Arg (R) 138残基形成静电相互作用；和/或(iii)序列基序GGG ；并且优选地(i)，(ii)和(iii)的至少任意两项和更优选地所有三项。
6.根据前述权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含⑴序列基序RXWD，其中X可以是任何氨基酸序列但优选是W，Y，F，S或D ；和/或(ii)序列基序GGG，优选序列基序FGGG，更优选序列基序DVFGGG (SEQ ID NO :1 )，并 且特别是序列基序DVFGGGT (SEQ ID NO :133)；并且最优选这些序列基序(i)和(ii)两种。
7.根据权利要求1-3中任一项的氨基酸序列，并且优选地也根据权利要求4，权利要求 5或权利要求6所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列是SEQ ID NO :2-115的氨基酸序列之 一，或是与SEQ ID NO :2-115的氨基酸序列之一具有不超过3个，如3，2，或1个氨基酸差 异的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-3中任一项的氨基酸序列，并且优选地也根据权利要求4、权利要求 5或权利要求6所述的氨基酸序列，所述按氨基酸序列是SEQ ID NO 14或147-157的氨基 酸序列之一，或与SEQ ID NO: 14或147-157的氨基酸序列之一具有不超过3个，如3，2，或 1个氨基酸差异的氨基酸序列。
9.氨基酸序列，其a)是序列AARYWDYDVFGGGTPVGG(56E4 ;SEQ ID NO :14)；或b)与氨基酸序列AARYWDYDVFGGGTPVGG(56E4 ;SEQ ID NO :14)具有至少 65%，更优选 地至少70%，甚至更优选地至少75%，如至少80%，例如至少85%或至少90%的序列同一 性；和/或c)与氨基酸序列AARYWDYDVFGGGTPVGG(56E4 ； SEQ ID NO: 14)具有不超过6个，优选地 不超过5，具体地不超过4，如3，2或1个氨基酸差异(如本文定义)，并且优选地d)与氨基酸序列AARYWDYDVFGGGTPVGG(56E4;SEQ ID NO :14)相比相等好地并且优选 更好地结合于人血清白蛋白。
10.一种氨基酸序列，其a)是氨基酸序列59A5(SEQ ID NO :147) ； 59C8(SEQ ID NO :148) ； 59F2(SEQ ID NO: 149) ；59B3(SEQ ID NO :150) ；59B2(SEQ ID NO :151) ；60E6 (SEQ ID NO :152) ；60F1 (SEQ ID NO 153) ；60G5(SEQ ID NO :154) ；59H12(SEQ ID NO :155) ；59C2(SEQ ID NO :156)；或 59H10(SEQ ID NO :157)之一；或b)与氨基酸序列59A5(SEQ ID NO :147) ；59C8(SEQ ID NO :148) ；59F2(SEQ ID NO: 149) ； 59B3(SEQ ID NO :150) ；59B2(SEQ ID NO :151) ；60E6(SEQ ID NO :152) ；60F1(SEQ ID NO 153) ；60G5(SEQ ID NO :154) ；59H12(SEQ ID NO :155) ； 59C2(SEQ ID NO :156)；禾口 / 或 59H10(SEQ ID NO 157)中的至少一种氨基酸序列具有至少65%，更优选地至少70%，甚至 更优选地至少75%，如至少80%，例如至少85%或至少90%的序列同一性；和/或c)与氨基酸序列59A5(SEQ ID NO :147) ；59C8(SEQ ID NO :148) ；59F2(SEQ ID NO: 149) ； 59B3(SEQ ID NO :150) ； 59B2(SEQ ID NO :151) ；60E6 (SEQ ID NO :152) ；60F1(SEQ ID NO 153) ；60G5(SEQ ID NO :154) ；59H12(SEQ ID NO :155) ； 59C2(SEQ ID NO :156)；和 / 或59H10(SEQ ID NO 157)中的至少一种氨基酸序列具有不超过6个，优选地不超过5个，具 体地不超过4个，如3，2或1个氨基酸差异(如本文定义)；并且优选地d)与氨基酸序列AARYWDYDVFGGGTPVGG(56E4 ；SEQ ID NO 14)相比，同等好地结合于人 血清白蛋白并且优选更好地结合于人血清白蛋白。
11.一种氨基酸序列，其a)是氨基酸序列59F2 (SEQ ID NO :149) ；59H12(SEQ ID NO :155)；或 59C2(SEQ ID NO: 156)中的一种；或b)与氨基酸序列59F2 (SEQ ID NO :149) ；59H12(SEQ ID NO :155)；和 / 或 59C2(SEQ ID NO 156中的至少一种氨基酸序列具有至少65%，更优选地至少70%，甚至更优选地至少 75%，如至少80%，例如至少85%或至少90%的序列同一性；和/或c)与氨基酸序列59F2 (SEQ ID NO :149) ；59H12(SEQ ID NO :155)；和 / 或 59C2(SEQ ID NO 156)中的至少一种氨基酸序列相比，具有不超过6个，优选地不超过5个，具体地不超 过4个，如3，2或1个氨基酸差异(如本文定义)；并且优选地d)与氨基酸序列AARYWDYDVFGGGTPVGG(56E4；SEQ ID NO 14)相比，同等好地结合于人 血清白蛋白并且优选更好地结合于人血清白蛋白。
12.氨基酸序列，其特异于人血清白蛋白并且包含Arg(R)残基，其能够与人血清 白蛋白的氨基酸残基Asn (N) 133和Asn (N) 135形成氢键和/或能够与人血清白蛋白的 Pro(P) 134和Leu (L) 136残基的主链氧原子形成静电相互作用；Trp (W)残基，其能够与人血 清白蛋白的Arg(R) 138残基形成静电相互作用；和序列基序DVFGGG(SEQ ID NO :1 )，特别 是序列基序 DVFGGGT (SEQ ID NO 133)
13.氨基酸序列，和具体地根据权利要求12所述的氨基酸序列，其特异于人血清白蛋 白并包含序列基序RXWD (其中X选自W，Y，F，S或D)和序列基序FGGG ；并且优选地序列基 序 DVFGGG(SEQ ID NO :129)。
14.根据前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列是这样的，以致当 其连接或融合于治疗性结构部分、化合物、蛋白或其它治疗性实体时，由此获得的化合物与 其中所述治疗性结构部分、化合物、蛋白或其它治疗性实体连接或融合于SEQ ID N0:1的氨 基酸序列的相应化合物或构建体相比具有更长的半衰期；并且优选地与其中所述治疗性结 构部分、化合物、蛋白或其它治疗性实体连接或融合于SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的相应 化合物或构建体相比具有相同或更长的半衰期。
15.根据前述权利要求中任一项的氨基酸序列，所述氨基酸序列与来自食蟹猴(食蟹 猴(Macaca fascicularis))的血清白蛋白交叉反应。
16.化合物或构建体，其包含至少一种治疗性结构部分和至少一种根据前述权利要求 中任一项所述的氨基酸序列。
17.化合物或构建体，其包含至少一种治疗性结构部分和至少两种根据前述权利要求 中任一项所述的氨基酸序列。
18.化合物或构建体，其包含至少一种串联重复和至少一种治疗性结构部分，所述串联 重复含有至少两种根据前述权利要求中任一项所述的氨基酸序列。
19.化合物或构建体，其包含至少一种治疗性结构部分和至少一种根据前述权利要求 中任一项所述的氨基酸序列，其中本发明的所述化合物与相应化合物相比，具有更长的半 衰期(如本文定义)，所述相应化合物包含氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP(SEQ ID NO 1) 而不是所述氨基酸序列；并且优选地与相应化合物相比具有相等或更长的半衰期(如本文 定义)，所述相应化合物包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列而不是所述氨基酸序列。
20.根据权利要求11或12的化合物或构建体，其是融合蛋白或多肽。
21.根据权利要求11-13中任一项的化合物或构建体，其中所述至少一种治疗性结构 部分优选地包含免疫球蛋白序列或其抗原结合片段，如免疫球蛋白可变结构域或其抗原结 合片段，或基本由免疫球蛋白序列或其抗原结合片段、如免疫球蛋白可变结构域或其抗原 结合片段组成。
22.根据权利要求14所述的化合物或构建体，其中所述至少一种治疗性结构部分优选 地包含(单)结构域抗体，“dAb”，或纳米抗体 ，或基本由(单)结构域抗体、“dAb”、或纳 米抗体 组成。
全文摘要
本发明涉及能够结合于人血清白蛋白的氨基酸序列；涉及包含所述氨基酸序列或基本由其组成的化合物、蛋白、多肽、融合蛋白或构建体；涉及编码所述氨基酸序列、化合物、蛋白、多肽、融合蛋白或构建体的核酸；涉及这样的组合物，具体地是药物组合物，其包含所述氨基酸序列、化合物、蛋白、多肽、融合蛋白或构建体；并且涉及所述氨基酸序列、化合物、蛋白、多肽、融合蛋白或构建体的应用。
文档编号C07K16/18GK102089325SQ200980122941
公开日2011年6月8日 申请日期2009年4月16日 优先权日2008年4月17日
发明者卡罗·布东, 希尔德·阿迪·皮埃雷特·勒韦兹, 彼得·维尔希森, 斯特凡妮·斯塔埃朗 申请人:埃博灵克斯股份有限公司