专利名称：三联复合免疫增强剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，是以动物血为原料，应用现代生物过程集成化技术，在同一生产工艺流程中，可生产出血清胸腺因子(FTS)、免疫球蛋白(Ig)、超氧化物歧化酶 (SOD) 3种功能成份，并以这3种成份为主要原料，通过合理配方制成一种三联复合免疫增 强剂，可广泛应用于人类和动物医药治疗、预防保健业。
背景技术：
随着现代医学、细胞生物学及分子生物学的发展，人们逐渐认识到许多疾病的发 生、发展与机体免疫系统功能缺陷和功能失调有着密切的联系。影响机体正常免疫系统功 能的原因有①各种先天或后天自身免疫功能缺陷；②各种急慢性细菌、病毒感染 ’③人为 因素，环境因素、药物引发的不良反应等原因导致的继发性免疫功能下降。针对以上原因， 调节或增强机体免疫功能，已成为预防和治疗疾病的重要途径。血清胸腺因子(英文缩写FTS)，是一种九肽，即由九个氨基酸残基构成一级结构 的小分子肽，分子量为857。大量体内外实验研究均已证明血清胸腺因子(FTS)是促进淋 巴细胞分化并增强其功能的重要因子，它具有激发免疫细胞活性、调节免疫功能、增强机体 非特异性细胞免疫等作用，且分子量小、无毒、无抗原性、不引起过敏反应等优点。部分实验 文献报导在抗肿瘤方面，用FTS2. 5mg或1. 25mg剂量均可以明显增强和恢复实验小鼠NK 细胞对舯瘤细胞的杀伤作用，而且使用的高剂量也比胸腺肽要小50多倍，大大减小了药物 的副作用。因而，血清胸腺因子作为一种新型而又安全的免疫制剂广泛应用于人类和动物 疾病防治。是一种很有开发和应用前景的生物产品。免疫球蛋白(IG)是直接参与免疫反应的抗体蛋白的总称。动物血内含有大量免 疫球蛋白，是体液免疫的主要物质，它能凝集细菌、中和细菌毒素，并能在体内其他因素的 参与下彻底杀死细菌和病毒，增强机体的免疫功能，预防消化道等疾病，促进营养吸收。据有关资料报导，美国一家公司与新西兰合作，用免疫的方法使乳牛产生富含免 疫球蛋白的牛奶，生产出一种功能性奶粉，经体外试验，其中所含的免疫球蛋白可对抗人体 24种常见致病菌和病毒。免疫球蛋白可作为婴幼儿食品添加剂，促进婴幼儿营养吸收、增强 免疫力。同时，免疫球蛋白也可以作为幼畜饲料添加剂，特别是集约化养殖基地，将免疫球 蛋白应用于早期断奶幼畜，可减少幼畜疾病，促进生长发育。超氧化物歧化酶英文缩写为S0D，是从动物或植物中提取出的一种酶蛋白。它能有 效地清除超氧阴离子自由基，具有保护机体免疫功能受损伤的作用。其主要药理作用是抗 衰老、抗辐射、抗炎症、抗肿瘤等。研究表明，生物机体在生命活动中由于各种原因会产生大 量的自由基，尤其是超氧阴离子自由基，其化学性质活泼，有极高的氧化性能，机体的衰老、 病变和辐射伤害都同自由基的大量存在有关。SOD具有及时清除体内超氧阴离子自由基的 作用，它使机体保持正常的生理状态。当机体处于疾病状态时，体内产生的自由基会越来越 多，而SOD含量却越来越少，因此及时向体内补充SOD是保证机体健康和促进疾病痊愈的必 要途径。SOD的临床应用，目前国内外主要集中在抗辐射、抗肿瘤、抗衰老及治疗自身免疫性疾病。SOD还可作为罐头食品、啤酒、果汁、饲料等产品的天然抗氧剂，防止食品变质及腐 败，又可作为食品营养强化剂。目前生产血清胸腺因子、免疫球蛋白、超氧化物歧化酶的方法很多，但将3者科学 配方制成一种既能提高机体体液免疫又能提高细胞免疫的复合免疫增强剂产品至今未见 报导。三联免疫增强剂中含有的这三种生物活性成份，均为人和动物机体内重要的免疫功 能成份，正常情况下，它们在体内相辅相成地共存，使机体保持正常的生理状态。当由于种 种原因遭受到侵害时，这三种活性成份的含量会显著降低，致使机体处于低免疫功能状态 而发病。因此，及时向体内补充血清胸腺因子、免疫球蛋白、超氧化物歧化酶三种具有不同 免疫功能的生物活性成份是预防和治疗疾病的有效途径。可主要用于体弱幼儿、老人、病人 和动物体液免疫、细胞免疫的双向调节及保健，并能有效地清除体内超氧阴离子自由基，具 有保护机体免疫功能受损伤的作用。动物血中含有丰富的生物活性物质，特别是富含免疫球蛋白、血清胸腺因子和超 氧化物歧化酶。动物血资源丰富，以猪为例，我国每年屠宰生猪近5亿头，以此推算，每年至 少有450万吨猪血资源待充分开发利用，提高其附加值。
发明内容
本发明的目的正是针对上述现有技术状况而研制的一种三联复合免疫增强剂及 其制备方法，本发明以动物血为资源，应用现代生物集成化技术，采用联产工艺，同时提取 出血清胸腺因子(FTS)、免疫球蛋白(IG)和超氧化物歧化酶(SOD)，经科学配方制成复合免 疫增强剂，可使制作成本大大降低，也可在对抗甲型Him流感等病毒中会获得相应的市场 空间，具有重要的社会效益和经济效益。本发明所依据的技术原理是动物血中富含FTS、IG、S0D等成份，依据它们具有不 同的结构、分子量、等电点、理化特性、生物活性等，应用盐溶、盐析、透析、超滤、层析等现代 生化技术和生物集成技术，制定出适合工业化生产的联产工艺。本发明依据免疫球蛋白的 功能主要是提高机体体液免疫能力，血清胸腺因子的功能主要是提高机体细胞免疫能力的 不同免疫机理，它们在机体内作用途径不同但具有相辅相成的协调作用，SOD具有及时清除 体内超氧阴离子自由基的作用，它使机体保持正常的生理状态，同时SOD具有抗氧化和保 鲜作用，将这3种成份科学配比，制成三联免疫增强剂产品，各成分配伍合理，相互协同，功 能更强，目前未见文献报道。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的本发明的三联复合免疫增强剂由血清胸腺因子(FTS)、免疫球蛋白(Ig)、超氧化 物歧化酶(SOD)配制而成，增强剂中含有三种物质的有效成分如下血清胸腺因子(FTS)每毫升FTS含量10ug-100ug免疫球蛋白(Ig)每毫升IG含量2mg-10mg超氧化物歧化酶(SOD) 每毫升酶活性100U-500U。本发明的三联复合免疫增强剂的制备方法，包括以下步骤1)分别将血清胸腺因子(FTS)精制液、免疫球蛋白(Ig)精制液、超氧化物歧化酶 (S0D)精制液放45-57°C的水浴锅中加热30-60分钟除热原，待降至室温后放在冰箱冷藏室 1-2周后离心分别取其上清液；
2)分别检测FTS、IG、SOD精制液中有效成分含量，按有效成分含量配比将三者混 合；3)用生物膜除菌；4)在混合液中加稳定剂，所述稳定剂为甘露醇或木糖醇，加入量为混合液体积的 5-20%。本发明所述血清胸腺因子(FTS)精制液、免疫球蛋白(Ig)精制液、超氧化物歧化 酶(SOD)精制液是通过以下联产工艺制备的1)取新鲜动物血(如猪血、牛血或羊血)。加抗凝剂，离心，分别收集血浆和血球；2)将血浆按体积加硫酸铵至饱和度50-70%，待硫酸铵完全溶解后，静置1_2小 时，过滤或离心，收集上清液(I)和沉淀，沉淀经超滤透析脱盐即得免疫球蛋白粗品液；3)将上清液(I)先通过截留分子量6000的超滤装置系统，分别收集截留液(I)和 透析液⑴；4)将透析液(I)通过截留分子量1000的超滤装置系统，收集透析液(II)，透析液 (II)即为血清胸腺因子粗品液；5)将血清胸腺因子粗品液和免疫球蛋白粗品液分别通过超滤、层析纯化系统，制 成免疫球蛋白精制液和血清胸腺因子精制液；6)将血球加等体积去离子水，搅拌，使红血球充分溶血，然后按体积加硫酸铵至饱 和度60-70%，搅拌、静置，离心，收集离心液和沉淀。向离心液中依次加入离心液体积0. 15 倍的乙醇、0. 08倍的氯仿，搅拌，水浴加热至60-65度，保温10-15分钟，离心，收集离心液， 即得SOD粗品溶液，通过层析纯化进一步制成精品；7)上述3)步骤中的截留液(I)、和6)步骤中的沉淀为杂蛋白，将其混合，经加热 变性、脱盐处理即得动物蛋白饲料。本发明创新点如下1、本发明将血清胸腺因子、免疫球蛋白、超氧化物歧化酶3种成份科学配比，制成 一种三联复合免疫增强剂产品，具有生产成本低、使用方便，应用领域广泛等特点，且各成 分配伍合理，相互协同，功能更强，目前未见有文献报道。该产品为纯天然生物制剂，可显著 提高人和动物机体的体液免疫和细胞免疫功能，并能有效地清除体内超氧阴离子自由基， 具有保护机体免疫功能受损伤的作用，可广泛应用于人和动物真菌、细菌、病毒性疾病的预 防和治疗。特别对解决当前养殖业存在滥用抗生素预防疾病的问题是一项有效措施。我们将三联复合免疫增强剂试制品於2008年-2009年先后经郑州德福恩生物技 术有限公司、郑州诺必隆生物科技有限公司、郑州炎黄动物保健品有限公司应用于动物保 键和疾病治疗试验均取得显著效果；如将其口服液应用于初生仔猪(每头5-10毫升)和断 奶仔猪(每头10-20毫升)，在仔猪成活率、日增重、防治腹泻等方面明显高于目前传统保 键法(每头仔猪注射三次抗生素预防疾病)；配合疫苗应用于预防鸡新城疫，给3日龄雏鸡 每只饮用0. 2-0. 5毫升，连用3-7天，保护率高达97. 3%，经检测可显著提高雏鸡外周血液 T淋巴细胞百分率，免疫器官脾和法氏囊的相对湿重明显增加。在人的保键方面，我们选了 约50多个自愿者用口服液(大部分是60岁以上老人、儿童和癌症化疗患者)，一般每人每 次10毫升(儿童2-5毫升)，一日1-2次，连用一周(化疗患者1-3个月)，在防治感冒、腹 泻、无名高烧、减轻化疗副反应等方面反应良好，无一人出现不良反应。
2、该工艺采用传统工艺与现代工艺相结合，简易设备与现代设备相结合，可操作 性强，规模可大可小，生产成本低，经济效益显著。3、本发明工艺对提取血清胸腺因子、免疫球蛋白、超氧化物歧化酶后的废液和废 渣，采取加热变性、脱盐、干燥处理制成优质的动物蛋白饲料，有效解决了废料的排放问题。 做到了绿色环保。
附图为本发明三种原料的联产工艺流程图。
具体实施例方式本发明以下结合附图将具体实施方式
描述如下1、取新鲜猪血(也可为牛血或羊血)加抗凝剂，离心，分别收集血浆和血球。2、将血浆按体积加硫酸铵至饱和度60 %，待硫酸铵完全溶解后，静置2小时，过滤 或离心，收集滤液(I)和沉淀，沉淀经透析脱盐即得免疫球蛋白粗品溶液；3、将滤液(I)先通过截留分子量6000的超滤装置系统，分别收集截留液(I)和透 析液(I)，4、将透析液(I)通过截留分子量1000的超滤装置系统，分别收集截留液和透析液 (II)，透析液(II)即为血清胸腺因子粗品液。5、将血清胸腺因子粗品液和免疫球蛋白粗品液分别通过层析纯化系统，制成免疫 球蛋白精制液和血清胸腺因子精制液；6、将血球加等体积去离子水，搅拌，使红血球充分溶血，然后按体积加硫酸铵至饱 和度65%，搅拌、静置，离心，收集离心液和沉淀。向离心液中依次加入离心液体积0. 15倍 的乙醇、0. 08倍的氯仿，搅拌，水浴加热至65度，保温10分钟，离心，收集离心液，即得SOD 粗品溶液，通过层析纯化进一步制成精品。7、上述3步骤中的截留液(I)和6步骤中的沉淀为杂蛋白，将其混合，经加热变 性、脱盐处理即得动物蛋白饲料，8、三联免疫增强剂生产步骤(1)除热源分别将FTS、IG和SOD精制液放45°C的水浴锅中加热40分钟除热原，待降至室温 后放在冰箱冷藏室一周后离心分别取其上清液。(2)配比分别检测FTS、IG、SOD精制液中有效成分含量，复合增强剂中各成分按 以下含量标准进行配比血清胸腺因子(FTS) 每毫升FTS含量50ug免疫球蛋白(Ig)每毫升IG含量5mg超氧化物歧化酶(SOD) 每毫升酶活性200U(3)生物膜除菌选择生物滤膜，将FTS、IG、S0D复合配比液先用0. 65 y m的滤膜粗滤，再用0. 22 y m
的滤膜除菌。(4)加稳定剂-木糖醇，加入量为药液体积的10%。
(5)制作成品根据市场需求选择合适规格的瓶消毒灭菌灌装成口服液，也可经 冷冻干燥制成粉剂或胶囊。
权利要求
一种三联复合免疫增强剂，其特征在于该免疫增强剂由血清胸腺因子(FTS)、免疫球蛋白(Ig)、超氧化物歧化酶(SOD)配制而成，增强剂中含有这三种物质的有效成份配比如下血清胸腺因子(FTS)每毫升FTS含量10ug-100ug免疫球蛋白(Ig) 每毫升IG含量2mg-10mg超氧化物歧化酶(SOD) 每毫升酶活性100U-500U。
2. —种权利要求1所述的三联复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)分别将血清胸腺因子(FTS)精制液、免疫球蛋白(Ig)精制液、超氧化物歧化酶 (SOD)精制液放45-57°C的水浴锅中加热30-60分钟除热原，待降至室温后放在冰箱冷藏室 1-2周后离心分别取其上清液；2)分别检测FTS、IG、SOD精制液中有效成分含量，按有效成分含量配比将三者混合；3)用生物膜除菌；4)在混合液中加稳定剂，加入量为药液体积的5-20%。
3.根据权利要求2所述的三联复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于血清胸腺因 子(FTS)精制液、免疫球蛋白(Ig)精制液、超氧化物歧化酶(SOD)精制液是通过以下联产 工艺制备的1)取新鲜动物血加抗凝剂，离心，分别收集血浆和血球；2)将血浆按体积加硫酸铵至饱和度50-70%，待硫酸铵完全溶解后，静置1-2小时，过 滤或离心，收集上清液(I)和沉淀，沉淀经超滤透析脱盐即得免疫球蛋白粗品液；3)将上清液(I)先通过截留分子量6000的超滤装置系统，分别收集截留液(I)和透析 液⑴；4)将透析液(I)通过截留分子量1000的超滤脱盐浓缩系统，收集透析液(II)，透析液 (II)即为血清胸腺因子粗品液；5)将血清胸腺因子粗品液和免疫球蛋白粗品液分别通过层析纯化系统，制成免疫球蛋 白精制液和血清胸腺因子精制液；6)将血球加等体积去离子水，搅拌，使红血球充分溶血，然后按体积加硫酸铵至饱和度 60-70%，搅拌、静置，离心，收集离心液和沉淀，向离心液中依次加入离心液体积0. 15倍的 乙醇、0. 08倍的氯仿，搅拌，水浴加热至60-65度，保温10-15分钟，离心，收集离心液，即得 SOD粗品溶液，通过超滤、层析进一步纯化成精品；7)上述3)步骤中的截留液(I)和6)步骤中的沉淀为杂蛋白，将其混合，经加热变性、 脱盐处理即得动物蛋白饲料。
4.根据权利要求2所述的三联复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于所述稳定剂 为甘露醇或木糖醇。
5.根据权利要求2所述的三联复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于所述动物血 为猪血、牛血或羊血。血清胸腺因子(FTS) 免疫球蛋白(Ig) 超氧化物歧化酶(S0D)每毫升FTS含量10ug-100ug 每毫升IG含量2mg-10mg 每毫升酶活性100U-500U。
全文摘要
一种三联复合免疫增强剂，由血清胸腺因子(FTS)、免疫球蛋白(Ig)、超氧化物歧化酶(SOD)配制而成。本发明以动物血为资源，应用现代生物集成化技术，采用联产工艺，同时提取出FTS、IG和SOD，经科学配方制成复合免疫增强剂，可应用于人和动物保健和疾病防治，具有生产成本低、使用方便，应用领域广泛等特点，且各成分配伍合理，相互协同，功能更强。该工艺采用传统工艺与现代工艺相结合，简易设备与现代设备相结合，可操作性强，实现规模化生产，且有效解决了废料的排放问题，做到了绿色环保，具有重要的社会效益和经济效益。
文档编号C07K1/36GK101797384SQ20101011957
公开日2010年8月11日 申请日期2010年3月9日 优先权日2010年3月9日
发明者吴学军, 张俊英, 李海波, 王德亮, 王斌 申请人:张俊英