专利名称：一种酶法提取白芍中芍药苷的方法
技术领域：
本发明涉及中药有效成分提取技术领域，具体涉及一种酶法提取白芍中芍药苷的 方法。
背景技术：
白芍是毛茛科植物芍药(PaeonialactifloraPall)的干燥根，主要活性成分为芍 药苷。《中国药典》2000年版一部记载白芍具有养血柔肝，缓中止痛，敛阴收汗之功效。是 宋代经典名方四物汤(熟地黄、当归、白芍、川芎)中的主药之一，白芍的主要有效成分为芍 药苷(paeoniflorin)、芍药内酯苷(albiforin)、羟基芍药苷(oxypaeoniflorin)、苯甲酰 ^jM^t (benzoylpaeoniflorin)禾口苯甲酉先p圣基苟药昔(benzoyloxypaeoniflorin)等单 苷类化合物，简称芍药总苷，其中芍药苷(Paeoniflorin)约占70%以上。现代药理学研究表明，芍药苷具有抗炎、镇痛、抗惊厥和免疫调节等作用，临床应 用广泛，疗效确切，同时其还具有扩张冠状动脉，增加冠脉流量，对抗急性心肌缺血，抑制血 小板凝聚及降低血压等药理作用，而目前芍药苷提取方法是白芍原料经粉碎后用甲醇、乙 醇、水或含水醇溶液回流提取，浓缩回收醇后，将浓缩膏悬浮于水中，采用大孔树脂吸附，再 经醇溶液洗脱，洗脱液浓缩后得到芍药苷(Paeoniflorin)，然而此种方法存在的问题是 流程长，溶剂耗量大，温度高，收率低(2.0%左右)。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种酶法提取白芍中芍药苷的方法，以白芍为原 料，采用酶法进行提取、分离，以克服现有技术存在的流程长，溶剂耗量大，温度高，收率低 的问题。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是一种酶法提取白芍中芍药苷的 方法，依次包括下述步骤，
(1)提取
将白芍原料粉碎，溶于水中(固液比1:3 1:10)，在35-60°C，pH4-7条件下，添加纤维 素酶5-50u/g，果胶酶5-50u/g，处理l-3h ；
(2)离心分离
将酶解液放入离心机，5000rpm离心分离20min，取上清液；
(3)吸附
将所得上清液浓缩过滤，上大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用70%乙醇洗脱，收集3倍柱 体积乙醇洗脱液；
(4)浓缩
将收集的乙醇洗脱液减压浓缩并回收乙醇；
(5)真空干燥
将浓缩浸膏置于60°C真空干燥箱中，干燥12h，即得芍药总苷。
上述步骤(1)中白芍原料与水的固液比为1 :5，调整pH为5，加入纤维素酶IOu/ g，果胶酶30u/g，酶解温度45°C，酶解时间2. 5 h。效果较佳。与现有技术相比，本发明的优点是
1、本工艺简单，减少了传统的多次回流提取过程，只进行低温酶解释放芍药苷，从而使 得工艺过程简单。流程短。2、传统的回流提取方式，采用温度在100°C，处理时间也较长，因而可能对原料中 的有效成分会产生破坏作用，本发明的操作温度低，对有效成分破坏少。3、成本低；不需要加热回流，操作简单，并且主要溶剂为水，再用乙醇洗脱后可反 复回收利用，从而减少溶剂消耗，是的生产成本降低，易于实现工业化生产。4、本发明收率可达3. 5%，纯度可达97%。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明。实施例1
一种酶法提取白芍中芍药苷的方法，依次包括下述步骤，
(1)提取称取白芍原料0.8kg，将原料粉碎并过100目筛，溶于2.4kg水中，用lmol/L 盐酸调整PH值为6，添加纤维素酶5u/g，果胶酶15u/g，酶解温度40°C，酶解时间3 h后放 置室温，经高效液相(HPLC)检测，提取液中含有芍药苷0. 03g ；
(2)离心分离
将酶解液放入离心机离心分离，离心机转速为5000转/min，时间15min后，收集上清
液；
(3)吸附
将所得上清液浓缩过滤后，上DlOl大孔吸附树脂，先用水洗脱，洗脱速率1. 8mL/min, 再用70%乙醇洗脱，洗脱速率2. 2mL/min,收集3倍柱体积的乙醇洗脱液；
(4)浓缩
将所得乙醇洗脱液减压浓缩，回收乙醇；
(5)真空干燥
将浓缩浸膏置于60°C真空干燥箱中，干燥12h，即得芍药总苷。经高效液相(HPLC)检 测，芍药苷得率达到2. 8%，纯度为96%。实施例2: 一种酶法提取白芍中芍药苷的方法，依次包括下述步骤，
(1)提取称取白芍原料lkg，将原料粉碎并过100目筛，溶于5kg水中，用lmol/L盐酸 调整PH为5，加入纤维素酶10u/g，果胶酶30u/g，酶解温度45°C，酶解时间2. 5 h后放置室 温，经高效液相(HPLC)检测，提取液中含有芍药苷0. 03g ；
(2)离心分离
将酶解液放入离心机离心分离，离心机转速为5000转/min，时间15min后，收集上清
液；
(3)吸附
将所得上清液浓缩过滤后，上DlOl大孔吸附树脂，先用水洗脱，洗脱速率l.SmL/min，再用70%乙醇洗脱，洗脱速率2. 2mL/min,收集3倍柱体积的乙醇洗脱液；
(4)浓缩
将所得乙醇洗脱液减压浓缩，回收乙醇；
(5)真空干燥
将浓缩浸膏置于60°C真空干燥箱中，干燥12h，即得芍药总苷。经高效液相(HPLC)检 测，芍药苷得率达到3. 5%，纯度为97%。实施例3:
一种酶法提取白芍中芍药苷的方法，依次包括下述步骤，
(1)提取称取白芍原料1.5kg，将原料粉碎并过100目筛，溶于9kg水中，用lmol/L氢 氧化钠调整PH为7，加入纤维素酶25u/g，果胶酶35u/g，，酶解温度60°C，酶解时间2 h后 放置室温，经高效液相(HPLC)检测，提取液中含有芍药苷0. 04g ；
(2)离心分离
将酶解液放入离心机离心分离，离心机转速为5000转/min，时间15min后，收集上清
液；
(3)吸附
所得上清液浓缩过滤后，上D101大孔吸附树脂，先用水洗脱，洗脱速率1. SmL/min，再 用70%乙醇洗脱，洗脱速率2. 2mL/min,收集3倍柱体积的乙醇洗脱液；
(4)浓缩
将所得乙醇洗脱液减压浓缩，回收乙醇；(5)真空干燥
(5)真空干燥
将浓缩浸膏置于60°C真空干燥箱中，干燥12h，即得芍药总苷。经高效液相(HPLC)检 测，芍药苷得率达到3. 0%，纯度为95%。实施例4:
一种酶法提取白芍中芍药苷的方法，依次包括下述步骤，
(1)提取称取白芍原料1.5kg，将原料粉碎并过100目筛，溶于12kg水中，用lmol/L 盐酸调整PH为4，添加纤维素酶35u/g，果胶酶50u/g，酶解温度35°C，酶解时间1 h后放置 室温，经高效液相(HPLC)检测，提取液中含有芍药苷0. 05g ；
(2)离心分离
将酶解液放入离心机离心分离，离心机转速为5000转/min，时间15min后，收集上清
液；
(3)吸附
将所得上清液浓缩过滤后，上D101大孔吸附树脂，先用水洗脱，洗脱速率1. SmL/min， 再用70%乙醇洗脱，洗脱速率2. 2mL/min,收集3倍柱体积的乙醇洗脱液；
(4)浓缩
将所得乙醇洗脱液减压浓缩，回收乙醇；
(5)真空干燥
将浓缩浸膏置于60°C真空干燥箱中，干燥12h，即得芍药总苷。经高效液相(HPLC)检 测，芍药苷得率达到3. 2%，纯度为96%。上述实施例以实施例2为最佳。
权利要求
一种芍药苷的提取、分离方法，依次包括下述步骤，(1)提取将白芍原料粉碎，溶于水中(固液比1:3～1:10)，在35-60℃，pH4-8条件下，添加纤维素酶5-50u/g，果胶酶5-50 u/g，处理1-3h； (2)离心分离将酶解液放入离心机，5000rpm离心分离20min，取上清液；(3)大孔树脂吸附将所得上清液浓缩过滤，上大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用70%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，收集3倍柱体积；(3)浓缩将收集的乙醇洗脱液减压浓缩并回收乙醇； (4)真空干燥将浓缩浸膏置于60℃真空干燥箱中，干燥12h，即得芍药总苷。
2.根据权利要求1所述的一种芍药苷的提取、分离方法，其特征在于，所述步骤(1)中 白芍经粉碎后，过100目筛后105°C干燥24h，取一定量白芍粉用蒸馏水溶解，并加入5u/g 纤维素酶和30u/g果胶酶，调整pH5. 0，45°C条件下酶解2. 5h，得到白芍酶解液。
3.根据权利要求1所述的一种白芍中芍药苷的提取、分离方法，其特征在于，所述步骤 (3)中浓缩液上到大孔树脂柱上，进行吸附上样，上完后先用水洗脱杂质，洗脱2倍柱体 积，而后采用70%乙醇溶液洗脱并收集3倍柱体积洗脱液。
全文摘要
本发明涉及中药有效成分提取技术领域，具体涉及一种白芍中芍药苷的提取、分离方法。本发明要克服现有技术存在的工艺复杂、有机溶剂耗量大、操作困难、收率低的问题。其解决方案，依次包括下述步骤，(1)提取用纤维素酶-果胶酶双酶酶解白芍；(2)大孔树脂吸附收集70%乙醇洗脱液，进行真空浓缩；(3)干燥将经真空浓缩的芍药苷液，真空干燥12h，得到芍药苷(97%)产品。本发明的优点是工艺简单，流程短；操作温度低，有效成分损失少；操作简单，成本低，收率高，纯度好，易于实现工业化生产。
文档编号C07H17/04GK101875676SQ20101021616
公开日2010年11月3日 申请日期2010年7月2日 优先权日2010年7月2日
发明者吕欣, 张岗, 张瑜, 王玉堂 申请人:西北农林科技大学