专利名称：一种羟基积雪草甙的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种羟基积雪草甙的制备方法，属于药用活性成分的提取技术领域。
背景技术：
积雪草为双子叶植物伞形科植物积雪草的全草或带根全草，具有清热利湿，消肿 解毒之功效；用于治疗湿热黄疸，痢疾风疹、喉肿、肿毒和跌打损伤等。积雪草总甙是积雪草 的活性成分，羟基积雪草甙是积雪草总甙的主要成分之一。已有研究发现，羟基积雪草甙具 有较好的抗抑郁药用，是较有发展前途的天然抗抑郁剂。目前已公开的从积雪草中提取分离出羟基积雪草甙的方法不多，具体有1、公开号为CN1377649的发明专利中公开了可以制得羟基积雪草甙的方法，具体 是先将积雪草总甙溶于甲醇后，进行硅胶正相色谱层析，以氯仿和甲醇的混合液为洗脱溶 剂，收集其中氯仿甲醇=2 1比例部分的洗脱液，减压回收洗脱液，得到白色晶体状单 一化合物羟基积雪草甙。这种方法制得的羟基积雪草甙的纯度不够理想，而且洗脱溶剂中 含有氯仿，不够环保，危害操作人员的健康。2、公开号为CN101210039的发明专利，公开了一种羟基积雪草甙化学对照品的分 离制备方法，它是以重量含量30 97%的羟基积雪草甙提取物为原料，以制备型高效液相 色谱为分离手段，以甲醇_水溶液为洗脱体系，获得纯度98%以上羟基积雪草甙化学对照 品。该方法虽然可获得高纯度的羟基积雪草甙单品，但它是以重量含量30 97%的积雪草 甙提取物为原料进行分离提纯的，必须先从积雪草中提取出一定含量的积雪草甙提取物； 此外，该方法所用设备制备型高效液相色谱价格较高，导致产品的生产成本偏高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种成本低廉、操作简单且所得产品纯度高的羟 基积雪草甙的制备方法。为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案一种羟基积雪草甙的制备方法，其步骤如下1)取积雪草，粉碎，用50 80%乙醇的加热回流提取1 3次，每次30 90min， 合并提取液；2)提取液经陶瓷膜过滤后进大孔树脂柱层析，水洗树脂柱至流出液清澈，再依次 用30 40%乙醇和70 80%乙醇洗柱，收集70 80%乙醇洗脱液，浓缩至浸膏；3)浸膏用90 100%乙醇醇沉，抽滤，滤液加水使其中的乙醇含量为70 80%， 然后进脱色树脂柱脱色，收集流出液；4)流出液浓缩至乙醇含量为10 15%，放冷析晶，抽滤，母液进大孔树脂柱层析， 水洗树脂柱至流出液清澈，再依次用10 20%乙醇和35 45%乙醇洗柱，收集35 45% 乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得羟基积雪草甙。上述制备方法中
步骤1)中，50 80%乙醇的用量为原料重量的6 12倍。步骤2)中，所述陶瓷膜为孔径为0. 25 1 μ m的氧化铝陶瓷膜。30 40%乙醇的 用量为树脂柱床体积的1. 5 2. 5倍，70 80%乙醇的用量为树脂柱床体积的2 3倍。步骤3)中，90 100%乙醇的用量为浸膏重量的8 12倍。所述脱色树脂柱可 为大孔型脱色树脂柱、中性氧化铝树脂柱或活性炭柱。步骤4)中，10 20%乙醇的用量为树脂柱床体积的1. 5 3倍，35 45%乙醇 的用量为树脂柱床体积的2 3倍。步骤2)和4)中，所述大孔树脂的型号可为D101、D130或AB-8。上述方法中所述的浓缩和干燥均可采用与现有制备羟基积雪草甙方法中相同的 操作。与现有技术相比，本发明的优点在于1、提取液先用陶瓷膜除杂后再用大孔树脂柱层析，减少了大孔树脂的工作负荷， 也即减少了后续洗脱用的水、乙醇的用量，降低了生产成本；2、两次柱层析时均采用由低到高不同浓度的乙醇进行洗脱，可以在洗脱步骤即用 低浓度的乙醇除去更多的不溶于水的醇溶性杂质，从而提高产品的纯度，另一方面也避免 了只用同一浓度的乙醇洗脱而造成的高成本费用；3、采用普通大孔树脂实现羟基积雪草甙的分离，与采用制备型高效液相色谱相 比，其成本大幅降低，从而进一步降低了产品的生产成本；4、整个方法简单易操作，而且所制得的羟基积雪草甙纯度高，可达95 %以上 (HPLC 测定)。
具体实施例方式以下各实施例中，乙醇的浓度均为体积浓度。实施例11)取积雪草，粉碎，置于提取罐中，加入10倍原料重量的65%乙醇回流提取，温度 控制在90°C，第一次回流提取90min，滤出药液，再加入10倍原料重量的65%乙醇，回流提 取30min，合并提取液；2)提取液用孔径为0. 25 μ m的氧化铝陶瓷膜过滤，然后进DlOl大孔树脂柱层析， 水洗树脂柱至流出液清澈，再依次用2倍树脂柱床体积的30%乙醇和2. 5倍树脂柱床体积 的70%乙醇洗柱，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩至浸膏；3)浸膏用于其重量10倍的95%乙醇醇沉，抽滤，滤液加水使其中的乙醇含量为70%，然后进活性炭柱脱色，收集流出液；4)流出液减压浓缩至乙醇含量为10%，4°C放置20h，析出大量晶体后抽滤，母液 进AB-8大孔树脂柱层析，水洗树脂柱至流出液清澈，再依次用2倍树脂柱床体积的15%乙 醇和2. 5倍树脂柱床体积的40 %乙醇洗柱，收集40%乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得羟
基积雪草甙。经测定，所得羟基积雪草甙的纯度为98. 2%。实施例21)取积雪草，粉碎，置于提取罐中，加入12倍原料重量的80%乙醇回流提取90min，温度控制在95 °C，收集提取液；2)提取液用孔径为0. 5 μ m的氧化铝陶瓷膜过滤，然后进AB_8大孔树脂柱层析，水 洗树脂柱至流出液清澈，再依次用1. 5倍树脂柱床体积的40%乙醇和3倍树脂柱床体积的 75%乙醇洗柱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩至浸膏；3)浸膏用于其重量8倍的100%乙醇醇沉，抽滤，滤液加水使其中的乙醇含量为 75%，然后进中性氧化铝树脂柱脱色，收集流出液；4)流出液减压浓缩至乙醇含量为15%，6°C放置24h，析出大量晶体后抽滤，母液 进AB-8大孔树脂柱层析，水洗树脂柱至流出液清澈，再依次用3倍树脂柱床体积的10%乙 醇和3倍树脂柱床体积的40 %乙醇洗柱，收集40%乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得羟基
积雪草甙。经测定，所得羟基积雪草甙的纯度为96. 7%。实施例31)取积雪草，粉碎，置于提取罐中，加入10倍原料重量的70%乙醇回流提取，温度 控制在100°C，第一次回流提取60min，滤出药液，再加入8倍原料重量的70%乙醇，回流提 取30min，滤出药液，第三次加入6倍原料重量的70%乙醇，回流提取30min，合并提取液；2)提取液用孔径为Iym的氧化铝陶瓷膜过滤，然后进D130大孔树脂柱层析，水 洗树脂柱至流出液清澈，再依次用2. 5倍树脂柱床体积的30%乙醇和2倍树脂柱床体积的 70%乙醇洗柱，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩至浸膏；3)浸膏用于其重量12倍的90%乙醇醇沉，抽滤，滤液加水使其中的乙醇含量为 80%，然后进大孔脱色树脂柱脱色，收集流出液；4)流出液减压浓缩至乙醇含量为12%，3°C放置15h，析出大量晶体后抽滤，母液 进DlOl大孔树脂柱层析，水洗树脂柱至流出液清澈，再依次用1. 5倍树脂柱床体积的20% 乙醇和2倍树脂柱床体积的35%乙醇洗柱，收集35%乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即得羟
基积雪草甙。经测定，所得羟基积雪草甙的纯度为96. 5%。实施例41)取积雪草，粉碎，置于提取罐中，加入12倍原料重量的50%乙醇回流提取，温度 控制在95°C，第一次回流提取60min，滤出药液，再加入10倍原料重量的50%乙醇，回流提 取60min，合并提取液；2)提取液用孔径为0. 8 μ m的氧化铝陶瓷膜过滤，然后进DlOl大孔树脂柱层析， 水洗树脂柱至流出液清澈，再依次用2倍树脂柱床体积的35%乙醇和3倍树脂柱床体积的 80%乙醇洗柱，收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩至浸膏；3)浸膏用于其重量9倍的95%乙醇醇沉，抽滤，滤液加水使其中的乙醇含量为 70%，然后进活性炭柱脱色，收集流出液；4)流出液减压浓缩至乙醇含量为10%，常温下放置65h，析出大量晶体后抽滤， 母液进DlOl大孔树脂柱层析，水洗树脂柱至流出液清澈，再依次用2. 5倍树脂柱床体积的 20 %乙醇和3倍树脂柱床体积的45%乙醇洗柱，收集45 %乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，即
得羟基积雪草甙。经测定，所得羟基积雪草甙的纯度为98. 7%。
权利要求
一种羟基积雪草甙的制备方法，其特征在于步骤如下1)取积雪草，粉碎，用50～80％乙醇加热回流提取1～3次，每次30～90min，合并提取液；2)提取液经陶瓷膜过滤后进大孔树脂柱层析，水洗树脂柱至流出液清澈，再依次用30～40％乙醇和70～80％乙醇洗柱，收集70～80％乙醇洗脱液，浓缩至浸膏；3)浸膏用90～100％乙醇醇沉，抽滤，滤液加水使其中的乙醇含量为70～80％，然后进脱色树脂柱脱色，收集流出液；4)流出液浓缩至乙醇含量为10～15％，放冷析晶，抽滤，母液进大孔树脂柱层析，水洗树脂柱至流出液清澈，再依次用10～20％乙醇和35～45％乙醇洗柱，收集35～45％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得羟基积雪草甙。
2.根据权利要求1所述的羟基积雪草甙的制备方法，其特征在于步骤1)中，50 80%乙醇的用量为原料重量的6 12倍。
3.根据权利要求1所述的羟基积雪草甙的制备方法，其特征在于步骤2)中，所述陶 瓷膜为孔径为0. 25 1 μ m的氧化铝陶瓷膜。
4.根据权利要求1所述的羟基积雪草甙的制备方法，其特征在于步骤2)中，30 40%乙醇的用量为树脂柱床体积的1. 5 2. 5倍，70 80%乙醇的用量为树脂柱床体积的 2 3倍。
5.根据权利要求1所述的羟基积雪草甙的制备方法，其特征在于步骤3)中，90 100%乙醇的用量为浸膏重量的8 12倍。
6.根据权利要求1所述的羟基积雪草甙的制备方法，其特征在于步骤3)中，所述脱 色树脂柱为大孔型脱色树脂柱、中性氧化铝树脂柱或活性炭柱。
7.根据权利要求1所述的羟基积雪草甙的制备方法，其特征在于步骤4)中，10 20%乙醇的用量为树脂柱床体积的1. 5 3倍，35 45%乙醇的用量为树脂柱床体积的 2 3倍。
8.根据权利要求1所述的羟基积雪草甙的制备方法，其特征在于步骤2)和4)中，大 孔树脂的型号为D101、D130或AB-8。
全文摘要
本发明公开了一种羟基积雪草甙的制备方法，它以积雪草为原料，用乙醇加热回流提取，所得提取液经陶瓷膜过滤后进大孔树脂柱层析，水洗树脂柱至流出液清澈，再依次用30～40％乙醇和70～80％乙醇洗柱，收集70～80％乙醇洗脱液，浓缩至浸膏；浸膏用90～100％乙醇醇沉，抽滤，调节滤液中的乙醇含量为70～80％，然后进脱色树脂柱脱色，收集流出液；流出液浓缩至乙醇含量为10～15％，析晶，抽滤，母液进大孔树脂柱层析，水洗树脂柱至流出液清澈，再依次用10～20％乙醇和35～45％乙醇洗柱，收集35～45％乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得。与现有技术相比，本发明所述方法操作简单，生产成本低，所得产品纯度高。
文档编号C07J63/00GK101948501SQ201010269888
公开日2011年1月19日 申请日期2010年9月1日 优先权日2010年9月1日
发明者孙步祥, 宋云飞, 张志朋, 梁远盛, 汤凌志 申请人:桂林莱茵生物科技股份有限公司