专利名称：从金银花中提取绿原酸和常春藤皂苷元的方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离技术领域，尤其是涉及一种从金银花中提取绿原酸和常春藤皂苷元的方法。
背景技术：
绿原酸，分子式为C16H18O9, 3-咖啡酰奎尼酸，半水合物为针状结晶(水)，110°C变为无水化合物。易溶于水、乙醇及丙酮，极微溶于醋酸乙酯。常春藤皂甙元，分子式为C3tlH48O4, (3beta，4alpha)-3，23_ 二羟基齐墩果-12-烯-28-酸，溶于乙醇、甲醇、乙酸、氢氧化物碱溶液，不溶于水、乙醚、苯、氯仿和石油醚。金银花是忍冬科植物忍冬的干燥花蕾，具有清热解毒，凉散风热的功效。用于痈肿疔疮，喉痹丹毒，热毒，血痢，风热感冒，瘟病发热，是临床常用的中药材之一。金银花化学成分研究表明，其含有机酸、三萜皂苷类等。绿原酸是有机酸类主要有效成分，而三萜皂苷以常春藤皂苷为主。绿原酸具有抗氧化、清除自由基、抗菌活性，同时还具有增香和护色功能， 可用于食品和果品的保鲜防腐。在抗氧化方面，绿原酸随浓度增加抗氧化能力增强，高纯度强于低纯度的绿原酸。在清除自由基方面，绿原酸具有较强的清除能力，具有选择性，纯度不同清除能力相差较大。在抗菌活性方面，绿原酸对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有较强的抑制作用。常春藤皂苷元属于五环三萜类成分，具有利胆、保肝、抗肿瘤作用。目前绿原酸来源主要为金银花和杜仲，如专利(申请号200910115669.4) “一种绿原酸提取的方法”，该专利公开的方法是从金银花、杜仲叶、杜仲皮中提取和制备绿原酸； 现有的提取方法主要为水提法、超临界流体萃取、膜分离法、铅盐沉淀法和大孔树脂柱吸附法，如专利(申请号031四007.8) “绿原酸、异绿原酸的组合物及它的医学用途”，该专利公开的方法是从金银花经水煎两次，煎液减压浓缩至一定体积，稀石灰乳悬浊液调PH到碱性，离心分离，沉淀物与2倍乙醇研勻搅拌加入稀酸调pH至3，离心，上清液加碱结晶即得绿原酸。水提石灰乳沉淀法绿原酸得率不高，纯度低；超临界流体萃取法费用较高，不利于工业化生产；膜分离法对孔径大小有一定的限制；铅盐沉淀使用了有毒的重金属，对绿原酸有污染。而常春藤皂苷元多来源于红毛五加叶、金银花和维药瘤果黑种草籽，主要采用酸水解后再大孔树脂吸附，如专利(申请号200710146725. 1) “常春藤皂苷元及其制备方法和用途”，该专利公开的方法是从维药瘤果黑种草籽中采用脱脂、萃取及大孔树脂吸附的方法提取的常春藤皂苷元。而从金银花中同时提取分离得到绿原酸和常春藤皂苷元两种物质的方法却很少。
发明内容
本发明要解决技术问题是提供一种从金银花中提取绿原酸和常春藤皂苷元的方法。为了解决上述问题，本发明采用以下技术方案来实现的
一种从金银花中提取绿原酸和常春藤皂苷元的方法，其特征在于包含以下步骤1)制备把原料粉碎，加入10-15倍量70-90%乙醇溶液加热提取2_3次，提取液减压回收乙醇溶液，浓缩液加水分散，再加入大孔树脂柱吸附，水洗糖反应阴性，再用5-7 倍量60-80%乙醇溶液洗脱，减压回收乙醇，浓缩液加水饱和正丁醇萃取3-5次，回收正丁醇，得浓缩液；2)分离上述浓缩液加水分散调节PH4-6加生物酶酶解，浓缩酶解液过滤，固体物为常春藤皂苷元粗提物，母液为绿原酸液体；3)常春藤皂苷元纯化将上述常春藤皂苷元粗提物用无水乙醇回流溶解结晶2-3 次，真空干燥即得常春藤皂苷元产品；4)绿原酸纯化将上述母液加入乙酸乙酯萃取3-5次，乙酸乙酯萃取液加入活性炭脱色，滤过浓缩至1/6-1/15，加入适量乙醚，结晶1-2次，真空干燥结晶物得绿原酸产品。所述步骤1)中提取温度50-70°C，大孔树脂型号可选AB-8、SPD-100、LSA-21和 HZ806中的一种。所述步骤2~)中生物酶可选淀粉酶、纤维素酶和β -葡聚糖苷酶中的一种或几种， 酶解温度40-55°C，酶解时间不少于M小时，调节pH的酸可选有机酸或无机酸。综上所述本发明的优点是1)本发明从金银花中同时提取绿原酸和常春藤皂苷元两种活性物质，提高了原料的利用率，降低了成本。2)本发明采用酶解，条件温和，不会破坏苷元结构，收率高，同时也利于绿原酸纯化。
具体实施例方式实施例1 把金银花粉碎，取1kg，投入提取罐，加入15kg90%乙醇溶液加热到55°C提取2小时，抽滤液体，再加10kg90%乙醇溶液提取1次，提取液减压回收乙醇溶液后得到浓缩液， 浓缩液加4L水分散，加入IL SPD-100大孔树脂柱吸附，流速lL/h，吸附结束后，水洗糖反应阴性，再用7L60%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇，加入IL水饱和正丁醇萃取5 次，回收正丁醇，得浓缩液加适量水用盐酸调节PH4，加入5g纤维素酶，550C的温度下酶解 30h，浓缩酶解液过滤，固体物用500ml无水乙醇回流溶解滤过，放置结晶，结晶物再用无水乙醇回流溶解结晶2次，滤出结晶真空干燥即得常春藤皂苷元产品4. lg，含量99. 1% ；酶解母液加入600ml乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃取液加入IOg活性炭回流脱色，滤过浓缩至原体积的1/6，加入25ml乙醚，放置结晶，重复结晶2次真空干燥结晶物得绿原酸产品 7. 2g，含量 94. 7%0实施例2 把金银花粉碎，取1kg，投入提取罐，加入15kg70%乙醇溶液加热到70°C提取1小时，抽滤液体，再加15kg70%乙醇溶液提取2次，提取液减压回收乙醇溶液后得到浓缩液， 浓缩液加IL水分散，加入IL AB-8大孔树脂柱吸附，流速^^作，吸附结束后，水洗糖反应阴性，再用5L80%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇，加入4L水饱和正丁醇萃取4次， 回收正丁醇，浓缩液加适量水柠檬酸调节PH5，加入5g纤维素酶40°C的温度下酶解Mh，浓缩酶解液过滤，固体物用600ml无水乙醇回流溶解，滤过放置结晶，结晶物再用无水乙醇回流溶解结晶，滤出结晶真空干燥即得常春藤皂苷元产品4. 5g，含量97% ；上述酶解母液加入300ml乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯萃取液加入15g活性炭脱色，滤过浓缩至原体积的 1/10，加入15ml乙醚，放置结晶，真空干燥结晶物得绿原酸产品8. 7g，含量91%。实施例3 把金银花粉碎，取1kg，投入提取罐，加入12kg80%乙醇溶液加热到60°C提取1小时，抽滤液体，再加15kg80%乙醇溶液提取2次，提取液减压回收乙醇溶液后得到浓缩液， 浓缩液加2L水分散，加入IL LSA-21大孔树脂柱吸附，流速lkg/h，吸附结束后，水洗糖反应阴性，再用6L70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇，加入5L水饱和正丁醇萃取3 次，回收正丁醇，加适量水用硫酸调节PH4，加入2gi3 -葡聚糖苷酶50°C的温度下酶解48h， 浓缩酶解液过滤，固体物用500ml无水乙醇回流溶解，放置结晶，结晶物再用无水乙醇回流溶解结晶，滤出结晶真空干燥即得常春藤皂苷元产品5g，含量98. 2% ；上述酶解母液加入200ml乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯萃取液加入30g活性炭脱色，滤过浓缩至原体积的 1/12，加入IOml乙醚，放置结晶，真空干燥结晶物得绿原酸产品8. 9g，含量94.2%。实施例4 把金银花粉碎，取1kg，投入提取罐，加入12kg80%乙醇溶液加热到60°C提取1小时，抽滤液体，再加IOkgSO%乙醇溶液提取2次，提取液减压回收乙醇溶液后得到浓缩液， 浓缩液加2L水分散，加入IL HZ806大孔树脂柱吸附，流速1. ^g/h，吸附结束后，水洗糖反应阴性，再用6L70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇，加入3L水饱和正丁醇萃取5次，回收正丁醇，浓缩液加适量水用柠檬酸调节pH5，加入5g β -葡聚糖苷酶和纤维素酶，50°C的温度下酶解30h，浓缩酶解液过滤，固体物用500ml无水乙醇回流溶解，放置结晶，结晶物再用无水乙醇回流溶解结晶，滤出结晶真空干燥即得常春藤皂苷元产品5g，含量 98.2% ；上述酶解母液加入200ml乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯萃取液加入15g活性炭脱色，滤过浓缩至原体积的1/12，加入IOml乙醚结晶，结晶2次，真空干燥结晶物得绿原酸产品6. 5g，含量97%。实施例5 把金银花粉碎，取10kg，投入提取罐，加入100kg80%乙醇溶液加热到60°C提取1 小时，抽滤液体，再加IOOkgSO%乙醇溶液提取2次，提取液减压回收乙醇溶液后得到浓缩液，浓缩液加20L水分散，加入IOL LSA-21大孔树脂柱吸附，流速13kg/h，吸附结束后，水洗糖反应阴性，再用60L70%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液减压回收乙醇，加入40L水饱和正丁醇萃取4次，回收正丁醇，浓缩液加适量水盐酸调节pH4，加入50gi3 -葡聚糖苷酶和淀粉酶，50°C的温度下酶解36h，浓缩酶解液过滤，固体物用5L无水乙醇回流溶解，放置结晶，结晶物再用无水乙醇回流溶解结晶2次，滤出结晶真空干燥即得常春藤皂苷元产品49g，含量 98. 5% ；上述酶解母液加入4L乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯萃取液加入200g活性炭脱色， 滤过浓缩至原体积的1/15，加入IOOml乙醚，结晶2次，真空干燥结晶物得绿原酸产品70g， 含量96%。
权利要求
1.从金银花中提取绿原酸和常春藤皂苷元的方法，其特征在于包含以下步骤1)制备把原料粉碎，加入10-15倍量70-90%乙醇溶液加热提取2-3次，提取液减压回收乙醇溶液，浓缩液加水分散，再加入大孔树脂柱吸附，水洗糖反应阴性，再用5-7倍量 60-80%乙醇溶液洗脱，减压回收乙醇，浓缩液加水饱和正丁醇萃取3-5次，回收正丁醇，得浓缩液；2)分离上述浓缩液加水分散调节PH4-6加生物酶酶解，浓缩酶解液过滤，固体物为常春藤皂苷元粗提物，母液为绿原酸液体；3)常春藤皂苷元纯化将上述常春藤皂苷元粗提物用无水乙醇回流溶解结晶2-3次， 真空干燥即得常春藤皂苷元产品；4)绿原酸纯化将上述母液加入乙酸乙酯萃取3-5次，乙酸乙酯萃取液加入活性炭脱色，滤过浓缩至1/6-1/15，加入适量乙醚，结晶1-2次，真空干燥结晶物得绿原酸产品。
2.如权利要求1所述从金银花中同时提取绿原酸和常春藤皂苷元的方法，其特征在于所述步骤1)中提取温度50-70°C，大孔树脂型号可选AB-8、SPD-100、LSA-21和HZ806中的一种。
3.如权利要求1所述从金银花中同时提取绿原酸和常春藤皂苷元的方法，其特征在于所述步骤幻中生物酶可选淀粉酶、纤维素酶和β-葡聚糖苷酶中的一种或几种，酶解温度 40-55°C，酶解时间不少于M小时，调节pH的酸可选有机酸或无机酸。
全文摘要
本发明涉及了一种从金银花中提取绿原酸和常春藤皂苷元的方法，其特征在于把金银花粉碎，用70-90％乙醇溶液提取，提取液减压回收乙醇，浓缩液加水分散，再加入大孔树脂柱吸附，40-70％乙醇溶液洗脱，洗脱液回收乙醇后加正丁醇萃取，回收正丁醇，浓缩液调pH4-6加生物酶酶解，浓缩酶解液，过滤，得固体物和滤液再分别纯化，得常春藤皂苷元产品和绿原酸产品。本发明工艺操作简单、原料利用率高，适合工业化生产。
文档编号C07C69/732GK102443619SQ20101050016
公开日2012年5月9日 申请日期2010年10月9日 优先权日2010年10月9日
发明者刘东锋, 李法庆, 杨成东 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司