专利名称：用于纯化多不饱和脂肪酸的模拟移动床色谱分离方法
用于纯化多不饱和脂肪酸的模拟移动床色谱分离方法本发明涉及用于纯化多不饱和脂肪酸(PUFA)及其衍生物的改进的色谱分离方法。具体地，本发明涉及用于纯化PUFA及其衍生物的改进的模拟的或实际的移动床色谱分离方法。脂肪酸，特别是PUFA，及它们的衍生物是生物学上重要分子的前体，其在调节比如血小板聚集、炎症及免疫响应的生物功能中发挥着重要的作用。因此，在大范围的病理学病症(包括CNS病症)、神经病变(包括糖尿病神经病变)、心血管疾病、全身免疫系统和炎症病症(包括炎症性皮肤病)的治疗中，PUFA及它们的衍生物可能是治疗上有用的。在天然原料比如植物油和深海鱼油(marine oil)中发现了 PUFA。然而,存在于这样的油中的此类PUFA经常掺合了饱和脂肪酸和许多其它杂质。因此，在营养或药物使用之前，期望PUFA应该是纯化的。
遗憾地是，PUFA极其脆弱。因此，当在氧气的存在下加热时，它们易于异构化、过氧化和寡聚化。因此，分离和纯化PUFA产物以制备纯的脂肪酸是困难的。蒸馏，甚至在真空下，也能够导致不可接受的产物降解。模拟的和实际的移动床色谱是为本领域的技术人员所熟知的已知技术。工作原理涉及液体洗脱液相和固体吸附剂相的逆流移动。该操作允许最少的溶剂用量，使得方法在经济上是可行的。这样的分离技术已经在不同领域中中获得了数种应用，包括烃、工业化学制品、油、糖及API。这样的分离技术还被用来纯化PUFA及其衍生物。众所周知，在传统的固定床色谱系统中，使组分待分离的混合物渗透通过容器。容器为大体圆柱形的，且被典型地称作柱。柱包含表现出高的流体渗透性的多孔材料(通常称为固定相)的填充物。混合物的每一种组分的渗透速率取决于该组分的物理性能，使得组分相继且选择性地从柱中离开。因此，一些组分趋向于牢固地固定到固定相上且因此将缓慢地渗透，而其它组分趋向于弱固定且更快速地从柱中离开。已提出了许多不同的固定床色谱系统且出于分析和工业生产两者的目的使用。相反，模拟移动床系统由包含吸附剂的许多单独的柱构成，所述柱被串联到一起。洗脱液在第一方向穿过柱。通过一系列的阀，周期性地改变系统中的进料和洗脱液的注入点及分离后的组分的收集点。整体效果是为了模拟包含固体吸附剂的移动床的单一柱子的操作。因此，模拟移动床系统由柱组成，所述柱和在传统的固定床系统一样包含洗脱液从其中穿过的固体吸附剂的固定床，但在模拟移动床系统中，这样的操作以模拟连续逆流的移动床。用于模拟移动床色谱的方法和设备被描述在几个专利中，包括US2，985，589、US3，696，107、US 3，706，812、US 3，761，533、FR-A-2103302、FR-A_2651148 和 FR-A-2651149，本文通过引用并入这些专利的全部内容。主题还被详细描述在“Preparative andProduction Scale Chromatography，，，由 Ganetsos 和 Barker 编辑,Marcel Dekker Inc,纽约，1993中，本文通过引用并入其全部内容。实际的移动床系统在操作上类似于模拟移动床系统。然而，不是通过阀的系统改变进料混合物和洗脱液的注入点及分离后组分的收集点，而是使一系列的吸附装置(即，柱)相对于进料点和取出点物理地移动。此外，这样的操作以模拟连续逆流移动床。用于实际的移动床色谱的方法和设备被描述在几个专利中，包括US6，979，402,US5，069，883和US 4，764，276，本文通过引用并入这些专利的全部内容。模拟和实际的移动床技术通常仅适用于分离二元混合物。因此，较强极性的组分将与洗脱液一起移动，并作为提余液流(raffinate stream)收集,且较弱极性的组分将与吸附剂一起移动，并作为抽取液流(extract stream)收集。因此，难于用模拟的或实际的移动床技术来使期望的产物与包含极性杂质和非极性杂质两者的粗混合物分离。这限制了此类技术在从例如鱼油中纯化PUFA产物的适用性。因此，在以往中，当用模拟的或实际的移动床技术来使PUFA与天然油分离时，在用模拟的或实际的移动床技术纯化所得到的中间产物之前，通常需要首先使天然油经过初步分离步骤(例如，固定柱色谱)(参见，例如EP-A-0697034)。通常，初始纯化步骤除去了极性或非极性组分，从而产生基本上二元混合物，然后使所述二元混合物经过移动床色谱。
参考图I阐述这种分离二元混合物的方法。通过考虑包含固定相S的垂直色谱柱来解释模拟的或实际的连续逆流色谱分离方法的概念，所述固定相S划分成多个部分，更精确地说，从柱的底部到顶部划分成4个叠加的亚区I、II、III和IV。通过泵P在IE处从底部引入洗脱液。在亚区II和亚区III之间的1A+B处引入待分离的组分A和组分B的混合物。在亚区I和亚区II之间的SB处收集主要包含B的抽取液，且在亚区III和亚区IV之间的SA处收集主要包含A的提余液。在模拟移动床系统的情况下，通过引入点和收集点相对于固定相的移动，引起固定相S的模拟向下移动。在实际的移动床系统的情况下，由多个色谱柱相对于引入点和收集点的移动引起固定相S向下移动。在图I中，洗脱液向上流动且在亚区II和亚区III之间注入混合物A+B。根据各组分与固定相的色谱相互作用例如在多孔介质上的吸附，各组分将移动。对固定相表现出较强亲和力的组分B(较慢的流动组分)将更为缓慢地由洗脱液带出且将延迟地跟随洗脱液。对固定相表现出较弱亲和力的组分A(较快的流动组分)将容易地由洗脱液带出。如果准确地估计并控制参数的正确组合，尤其是每个区中的流速，将在亚区III和亚区IV之间收集对固定相表现出较弱亲和力的组分A作为提余液，且将在亚区I和亚区II之间收集对固定相表现出较强亲和力的组分B作为抽取液。因此，将理解，图解地阐述在图I中的传统的移动床系统限于二元分离。因此，存在对可使PUFA或其衍生物与较快的流动组分和较慢的流动组分(即较强极性的杂质和较弱极性的杂质)分离的单一模拟的或实际的移动床色谱分离方法的需要，以生产基本上纯的PUFA或其衍生物。还期望的是，方法应涉及在标准温度和压力条件下操作的便宜的洗脱液。现在，意外地发现用使用含水醇洗脱液的单一模拟的或实际的移动床设备可有效地纯化PUFA产物。因此，本发明提供用于从进料混合物中回收多不饱和脂肪酸(PUFA)产物的色谱分离方法，方法包括将进料混合物引入到模拟的或实际的移动床色谱设备中，色谱设备具有多个相连的色谱柱，所述色谱柱包含作为洗脱液的含水醇，其中设备具有包括至少第一区和第二区的多个区，每一个区具有抽取液流和提余液流，从抽取液流和提余液流可收集来自多个相连的色谱柱的液体，且其中(a)从第一区中的柱中收集包含PUFA产物连同较强极性的组分的提余液流并将其引入到第二区中的不相邻的柱中，和/或(b)从第二区中的柱中收集包含PUFA产物连同较弱极性的组分的抽取液流并将其引入到第一区中的不相邻的柱中，在每一个区中使所述PUFA产物与进料混合物的不同组分分离。还提供通过本发明的方法可得到的PUFA产物。以高收率生产通过本发明的方法所生产的PUFA产物，且PUFA产物具有高纯度。而且，通常由PUFA的蒸馏所产生的特殊杂质的含量是非常低的。如本文所使用的，用术语“同分异构杂质”来表示通常在含PUFA的天然油的蒸馏过程中所产生的那些杂质。这些杂质包括PUFA同分异构体、过氧化产物和寡聚化产物。图I阐述了用于分离二元混合物的模拟的或实际的移动床方法的基本原理。图2阐述了本发明的第一个优选实施方式，该实施方式适用于使EPA与较快流动的组分和较慢流动的组分(即，较强极性的杂质和较弱极性的杂质)分离。
图3阐述了本发明的第二个优选实施方式，该实施方式适用于使DHA与较快流动的组分和较慢流动的组分(即，较强极性的杂质和较弱极性的杂质)分离。图4更为详细地阐述了本发明的第一个优选实施方式，该实施方式适用于使EPA与较快流动的组分和较慢流动的组分(即，较强极性的杂质和较弱极性的杂质)分离。图5更为详细地阐述了本发明的第二个优选实施方式，该实施方式适用于使DHA与较快流动的组分和较慢流动的组分(即，较强极性的杂质和较弱极性的杂质)分离。图6更为详细地阐述了用于本发明的第一个优选实施方式的可选择的方法，该方法适用于使EPA与较快流动的组分和较慢流动的组分(即，较强极性的杂质和较弱极性的杂质)分尚。图7更为详细地阐述了用于本发明的第二个优选实施方式的可选择的方法，该方法适用于使DHA与较快的流动组分和较慢的流动组分(即，较强极性的杂质和较弱极性的杂质)分尚。图8阐述了本发明的特别优选的实施方式，该实施方式用于从较快流动的组分和较慢流动的组分(即，较强极性的杂质和较弱极性的杂质)中纯化EPA。图9阐述了本发明的特别优选的实施方式的可选择的方法，该方法用于从较快流动的组分和较慢流动的组分(即，较强极性的杂质和较弱极性的杂质)中纯化EPA。
图10阐述了本发明的特别优选的实施方式，该方法用于从较快流动的组分和较慢流动的组分(即，较强极性的杂质和较弱极性的杂质)中纯化EPA。图11显示了根据本发明生产的EPA产物的GC分析。图12显示了根据本发明得到的第一抽取液流和提余液流的GCFAMES图。图13显示了根据本发明得到的第二抽取液流和提余液流的GCFAMES图。图14显示了根据本发明生产的DHA产物的GCFAMES图。图15显示了通过蒸馏所生产的DHA产物的GC FAMES图。术语“多不饱和脂肪酸”(PUFA)是指包含多于一个双键的脂肪酸。这样的PUFA是本领域的技术人员所熟知的。如本文所使用的，PUFA衍生物是呈甘油一酯、甘油二酯或甘油三酯，酯，磷脂，酰胺，内酯或盐的形式的PUFA。优选甘油三酯和酯。更优选酯。酯通常为烷基酯，优选地C1-C6烷基酯，更优选地C1-C4烷基酯。酯的实例包括甲酯和乙酯。乙酯是最优选的。如本文所使用的，术语“PUFA产物”是指包含一种或多种多不饱和脂肪酸(PUFA)和/或其衍生物的产物，其通常具有营养或药物的重要性。通常，PUFA产物为单一的PUFA或其衍生物。可选择地，PUFA产物为两种或更多种PUFA或其衍生物的混合物，例如两种。如本文所使用的，术语“区”是指多个相连的色谱柱，该色谱柱包含作为洗脱液的含水醇，且具有用于进料混合物流的一个或多个注入点、用于水和/或醇的一个或多个注入点、提余液离开流(通过其可从所述多个相连的色谱柱中收集液体)及抽取液离开流(通过其可从所述多个相连的色谱柱中收集液体)。通常，每一个区仅具有一个用于进料混合物的注入点。在一个实施方式中，每一个区仅具有一个用于含水醇洗脱液的注入点。在另一个实施方式中，每一个区具有用于水和/或醇的两个或更多个注入点。术语“提余液”是本领域的技术人员所熟知的。在实际的和模拟的移动床色谱的背景中，它是指比固体吸附剂相更快地与液体洗脱液相一起移动的组分的流。因此，与进料流相比，提余液流通常富含较强极性的组分且不含较弱极性的组分。术语“抽取液”是本领域的技术人员所熟知的。在实际的和模拟的移动床色谱的背景中，它是指比液体洗脱液相更快地与固体吸附剂相一起移动的组分的流。因此，与进料 流相比，抽取液流通常富含较弱极性的组分且不含较强极性的组分。如本文所使用的，在应用于相同设备中的柱时，术语“不相邻”是指由一个或多个柱，优选地3个或更多个柱，更优选地5个或更多个，最优选地约5个柱隔开的柱。因此，当(a)从第一区中的柱收集包含PUFA产物连同较强极性的组分的提余液流并将其引入到第二区中的不相邻的柱时，从第一区收集的提余液流为用于第二区的进料混合物。当(b)从第二区的柱收集包含PUFA产物连同较弱极性的组分的抽取液流并将其引入到第一区中的不相邻的柱时，从第二区收集的抽取液流为用于第一区的进料混合物。通常，PUFA产物包含至少一种ω-3或ω-6PUFA，优选地至少一种(0-3PUFA。co-3PUFA的实例包括α -亚麻酸(ALA)、十八碳四烯酸(SDA)、二十碳三烯酸(ETE)、二十碳四烯酸(ETA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。优选SDA、EPA、DPA和DHA。更优选EPA和DHA。ω -6PUFA的实例包括亚油酸(LA)、Y -亚麻酸(GLA)、二十碳二烯酸、双高-Y-亚麻酸(DGLA)、花生四烯酸(ARA)、二十二碳二烯酸、肾上腺酸和二十二碳五烯(ω-6)酸。优选LA、ARA、GLA和DGLA。在一个实施方式中，PUFA产物为EPA和/或EPA乙酯(EE)。在另一个实施方式中，PUFA产物为DHA和/或EPA乙酯(EE)。在又一个实施方式中，PUFA产物为EPA和DHA和/或EPA EE和DHAEE的混合物。用于通过本发明的方法分离的合适的进料混合物可从以下得到天然来源，包括植物油和动物油以及植物脂肪和动物脂肪；及合成来源，包括从转基因植物、动物及微生物(包括酵母)得到的油。实例包括鱼油、海藻和微藻油及植物油，例如玻璃苣油、蓝蓟属(Echium)油及月见草油。在一个实施方式中，进料混合物为鱼油。在另一个实施方式中，进料混合物为海藻油。当期望的PUFA产物为EPA和/或DHA时，海藻油是特别合适的。当期望的PUFA产物为GLA时，转基因红花油是特别合适的。当期望的PUFA产物为EPA时，转基因酵母是特别合适的。在通过本发明的方法分镏之前，进料混合物可经历化学处理。例如，其可经历甘油酯酯交换或甘油酯水解，在某些情况下跟随着选择性的过程比如结晶、分子蒸馏、尿素分镏(urea fractionation)、用硝酸银或其它金属盐溶液提取、碘内酯化或超临界流体分离。
进料混合物通常包含PUFA产物和至少一种较强极性的组分及至少一种较弱极性的组分。与PUFA产物相比，较弱极性的组分对于用于本发明的方法的吸附剂具有更强的吸附。在操作的过程中，这样的较弱极性的组分通常优先于液体洗脱液相与固体吸附剂相一起移动。与PUFA产物相比，较强极性的组分对于用于本发明的方法的吸附剂具有较弱的吸附。在操作的过程中，这样的较强极性的组分通常优先于固体吸附剂相与液体洗脱液相一起移动。通常，较强极性的组分将被分成提余液流，且较弱极性的组分将被分成抽取液流。较强极性的组分和较弱极性的组分的实例包括(I)存在于天然油中的其它化合物(例如，深海鱼油或植物油)；(2)在存储、精制和在先的浓缩步骤的过程中形成的副产物 '及(3)来自于之前的浓缩或纯化步骤过程中所使用的溶剂或试剂的污染物。(I)的实例包括其它不想要的PUFA ;饱和脂肪酸；甾醇类，例如胆甾醇；维生素；及环境污染物，比如多氯联苯(PCB)、多芳香烃(PAH)杀虫剂、氯化杀虫剂、二噁英及重金属。PCB、PAH、二噁英及氯化杀虫剂都是高度非极性组分。(2)的实例包括来自PUFA产物的同分异构体及氧化产物或分解产物，例如脂肪酸 或其衍生物的自行氧化的聚合产物。(3)的实例包括为从进料混合物中除去饱和或单饱和的脂肪酸而可能添加的尿素。优选地，进料混合物为含PUFA的深海鱼油，更优选地为包含EPA和/或DHA的深
海鱼油。用于通过本发明的方法制备浓缩的EPA的典型的进料混合物包含50-75%的EPA、0-10%的DHA及含其它必需ω-3和ω-6脂肪酸的其它组分。用于通过本发明的方法制备浓缩的EPA的优选的进料混合物包括55%的ΕΡΑ、5%的DHA及含其它必需ω-3和ω-6脂肪酸的其它组分。DHA的极性要小于ΕΡΑ。用于通过本发明的方法制备浓缩的DHA的典型的进料混合物包括50-75%的DHA、0-10%的EPA及含其它必需ω-3和ω-6脂肪酸的其它组分。用于通过本发明的方法制备浓缩的DHA的优选的进料混合物包括75%的DHA、5%的EPA及含其它必需ω-3和ω-6脂肪酸的其它组分。EPA的极性要大于DHA。用于通过本发明的方法制备EPA和DHA的浓缩混合物的典型的进料混合物包括大于33 %的EPA及大于22 %的DHA。本发明的方法需要在所述色谱设备中的多个区。通常，使用两个或更多个区。未具体限定区的数目，但通常为2-5个区。优选地，有2个或3个区，更优选地，有2个区。通常，在用于本发明的方法的设备的每一个区中分离的组分具有不同的极性。通常，a)存在于每一个区中的含水醇洗脱液具有不同的水醇比；和/或(b)调节经由每一个区中的抽取液流和提余液流所收集的液体再循环回到相同的区的速度，使得在每一个区中PUFA产物可与进料混合物的不同组分分离。当用于本发明的方法的设备具有两个区时，本发明通常提供用于从进料混合物中回收多不饱和脂肪酸(PUFA)产物的色谱分离方法，方法包括将进料混合物引入到模拟的或实际的移动床色谱设备中，该色谱设备具有多个相连的色谱柱，所述色谱柱包含作为洗脱液的含水醇，其中设备具有第一区和第二区，每一个区具有抽取液流和提余液流，从抽取液流和提余液流可收集来自所述多个相连的色谱柱的液体，且其中(a)从第一区中的柱中收集包含PUFA产物连同较强极性的组分的提余液流并将其引入到第二区中的不相邻的柱中，和/或(b)从第二区中的柱中收集包含PUFA产物连同较弱极性的组分的抽取液流并将其引入到第一区中的不相邻的柱中，在每一个区中使PUFA产物与进料混合物的不同组分分离。通常，当用于本发明的方法的设备包含两个区时，第一区中的洗脱液比第二区中的洗脱液包含更多的醇，且其中相对于洗脱液在系统中的流动，第二区在第一区的下游。因此，系统中的洗脱液通常从第一区移动到第二区。相反地，固体吸附剂相通常从第二区移动到第一区。通常，两个区并不重叠，即，没有同时在两个区中的色谱柱。在本发明的另外的实施方式中，设备具有第一区、第二区和第三区。存在于第一、第二和第三区中的含水醇洗脱液的水醇比通常是不同的。正如对本领域的技术人员来说将是明显的一样，这具有以下结论具有不同极性的杂质可在每一个区中被除去。优选地，当设备具有三个区时，第一区中的洗脱液比第二区和第三区中的洗脱液包含更多的醇，且相对于洗脱液在系统中的流动，第一区在第二区和第三区的上游。通常， 第二区中的洗脱液比第三区中的洗脱液包含更多的醇，且相对于洗脱液在系统中的流动，第二区在第三区的上游。通常，在第一区中，使所述PUFA产物与极性不如PUFA产物的进料混合物的组分分离。通常，在第二区中，使所述PUFA产物与极性不如PUFA产物但极性比在第一区中所分离的组分强的进料混合物的组分分离。通常，在第三区中，使所述PUFA产物与极性比PUFA产物强的进料混合物的组分分离。在另一个实施方式中，在第一区中，使所述PUFA产物与极性不如PUFA产物的进料混合物的组分分离，在第二区中，使所述PUFA产物与极性比PUFA产物强的进料混合物的组分分离，且在第三区中，使所述PUFA产物与极性比PUFA产物强且极性还比第二区中所分离的组分强的进料混合物的组分分离。具有三个区的这样的设置将适合用于使EPA和DHA与包含极性不如DHA和EPA的杂质且还包含极性比EPA强的杂质的混合物分离。在第一区中，除去作为抽取液流的极性不如DHA和EPA的组分，且收集包含DHA、EPA和极性比EPA强的组分的提余液流并将其引入到第二区。在第二区中，除去作为抽取液流的DHA，且收集包含EPA和极性比EPA强的组分的提余液流并将其引入到第三区。在第三区中，除去作为提余液流的极性比EPA强的组分且收集作为抽取液流的纯化的EPA。在这个实施方式中，纯化的EPA为纯化的PUFA产物。这样的设置具有以下优势还可回收第二 PUFA。在这种情况下，第二 PUFA为作为抽取液流从第二区收集的DHA。通常，除了所述PUFA产物外，在本发明的色谱分离方法中还收集额外的第二 PUFA产物。优选地，PUFA产物为EPA且额外的第二 PUFA产物为DHA。在本发明的另一个实施方式中，设备被配置成收集PUFA产物，所述PUFA产物为EPA和DHA的浓缩混合物。因此，使用包含EPA、DHA、极性比EPA和DHA强的组分及极性不如EPA和DHA的组分的进料混合物。在第一区中，除去极性不如EPA和DHA的材料。在第二区中，除去极性比EPA和DHA强的材料，且收集作为PUFA产物的EPA和DHA的浓缩混合物。任意已知的模拟的或实际的移动床色谱设备都可用于本发明的方法的目的，只要设备配置有多个区尤其是两个区，这是本发明的方法的特征。只要根据本发明的方法配置，在 US 2，985，589、US 3，696，107、US 3，706，812、US 3，761，533、FR-A-2103302、FR-A-2651148、FR-A-2651149、US 6，979，402、US 5，069，883 和 US 4，764，276 中所描述的
那些设备都可使用。未具体限定设备中所使用的柱的数目。技术人员将能够容易地确定要使用的柱的合适数目。柱的数目通常为8或更多，优选地15或更多。在更优选的实施方式中，使用15个或16个柱。在另一个更优选的实施方式中，使用19个或20个柱。在其它更优选的实施方式中，使用30个或更多个柱。通常，不多于50个柱，优选地不多于40个。每一个区通常由总数目的大约相等份额的柱构成。因此，在设备配置有两个区的情况下，系统中的每一个区通常由大约一半的总数目的色谱柱构成。因此，第一区通常包含4个或更多个，优选地8个或更多个，更优选地约8个柱。第二区通常包含4个或更多个，优选地7个或更多个，更优选地约7个或8个柱。
未具体限定用于设备的柱的尺寸，且所述尺寸将取决于待纯化的进料混合物的体积。技术人员将能够容易地确定要使用的合适尺寸的柱。每一个柱的直径通常在IOmm和500mm之间，优选地在25mm和250mm之间，更优选地在50mm和IOOmm之间，且最优选地在70mm和80mm之间。每一个柱的长度通常在IOcm和200cm之间，优选地在25cm和150cm之间，更优选地在70cm和I IOcm之间，且最优选地在80cm和IOOcm之间。每一个区中的柱通常具有相同的尺寸，但对于特定的应用，可具有不同的尺寸。柱中的流速受到一系列柱的两端之间的最大压力的限制且将取决于柱的尺寸和固相(solid phase)的粒径。本领域的技术人员将能够容易地确立用于每一个柱尺寸的流速，以保证充分解吸。较大直径的柱通常将需要更高的流量，以维持线性流过柱。对于上文所列出的典型的柱尺寸，且对于具有两个区的设备，洗脱液进入第一区的流速通常为1-4. 5L/min，优选地I. 5-2. 5L/min。通常，来自第一区的抽取液的流速为O. 1-2. 5L/min，优选地O. 5-2. 25L/min。在来自第一区的一部分抽取液再循环回到第一区的实施方式中，再循环的流速通常为O. 7-1. 4L/min，优选地约lL/min。通常，来自第一区的提余液的流速为O. 2-2. 5L/min,优选地O. 3-2. OL/min。在来自第一区的一部分提余液再循环回到第一区的实施方式中，再循环的流速通常为O. 3-1. OL/min，优选地约O. 5L/min。通常，进料混合物引入第一区中的流速为5-150mL/min,优选地lO-lOOmL/min,更优选地20_60mL/min。对于上文所列出的典型的柱尺寸，且对于具有两个区的设备，洗脱液进入第二区的流速通常为l_4L/min，优选地1.5-3. 5L/min。通常，来自第二区的抽取液的流速为0. 5-2L/min，优选地0. 7-1. 9L/min。在来自第二区的一部分抽取液再循环回到第二区的实施方式中，再循环的流速通常为0. 6-1. 4L/min,优选地0. 7-1. lL/min,更优选地约0. 91/min。通常,来自第二区的提余液的流速为0. 5-2. 5L/min,优选地0. 7-1. 8L/min,更优选地约 I. 4L/min。正如技术人员将理解的，提及经由各种抽取液流和提余液流收集或除去液体的速度是指在时间量中除去的液体的体积，通常以升/分钟计。类似地，提及液体再循环回到相同区中，通常再循环至相同的区中的相邻柱中的速度是指在时间量中再循环的液体的体积，通常以升/分钟计。通常，使来自第一区的抽取液流、来自第一区的提余液流、来自第二区的抽取液流及来自第二区的提余液流中的一个或多个中的部分再循环回到相同的区，通常回到相同的区中的相邻柱中。这种再循环不同于抽取液流或提余液流供给到另一个区中的不相邻的柱中。而是，再循环涉及自区中离开的抽取液流或提余液流的一部分回到相同的区，通常回到相同的区中的相邻柱中。使经由来自第一或第二区的抽取液流或提余液流所收集的液体再循环回到相同的区的速度为使经由该流收集的液体供给回 到相同的区，通常进入相同的区中的相邻的柱中的速度。参考图9，可以看出这一点。抽取液在第一区中的再循环速度为使从柱2的底部所收集的抽取液供给到柱3的顶部的速度，即液体进入柱3的顶部的流速。抽取液在第二区中的再循环速度为使在柱10的底部所收集的抽取液供给到柱11的顶部的速度，即液体进入柱11的顶部的流速。抽取液流和/或提余液流的再循环通常受到以下的影响使经由该流所收集液体进入容器，且然后将来自容器的该液体的量泵送回到相同的区中。在这种情况下，经由特定的抽取液流或提余液流所收集的液体再循环(通常回到相同的区中的相邻柱中)的速度为将液体泵送出容器回到相同的区，通常进入相邻的柱的速度。如技术人员将理解的，经由洗脱液和原料流被引入到区中的液体的量与从区中除去且再循环回到相同的区的液体的量相平衡。因此，参考图9，对于抽取液流，洗脱液(解吸齐U)进入第一或第二区(D)的流速等于经由来自该区的抽取液流所收集的液体在容器(El/E2)中积累的速度加上使抽取液再循环回到相同的区(D-E1/D-E2)的速度。对于区中的提余液流，使抽取液再循环回到区(D-E1/D-E2)的速度加上将原料引入到区(F/R1)的速度等于经由来自该区的提余液流所收集的液体在容器(R1/R2)中积累的速度加上使提余液再循环回到相同的区(D+F-E1-R1/D+R1-E2-R2)的速度。从来自区的特定的抽取液流或提余液流所收集的液体在容器中积累的速度还可当做从该区除去该抽取液流或提余液流的净速度。通常，经由从第一区离开的抽取液流所收集的液体再循环回到第一区的速度与经由从第二区离开的抽取液流所收集的液体再循环回到第二区的速度不同，和/或经由从第一区离开的提余液流所收集的液体再循环回到第一区的速度与经由从第二区离开的提余液流所收集的液体再循环回到第二区的速度不同。改变经由每一个区中的抽取液流和/或提余液流所收集的液体再循环回到相同的区的速度具有改变存在于其它抽取液流和提余液流中的较强极性的组分和较弱极性的组分的量的作用。因此，例如，较低的抽取液再循环速度导致该区中更少的较弱极性的组分被携带直至该区中的提余液流中。较高的抽取液再循环速度导致该区中更多的较弱极性的组分被携带直至该区中的提余液流中。例如，这可在如图6所示的本发明的特定的实施方式中看到。经由第一区中的抽取液流所收集的液体再循环回到相同的区(D-El)的速度将影响任意的组分A被携带直至第一区(Rl)中的提余液流的程度。通常，经由来自第一区的抽取液流所收集的液体再循环回到第一区的速度要比经由来自第二区的抽取液流收集的液体再循环回到第二区的速度快。优选地，从第一区中的柱中收集包含PUFA产物连同较强极性的组分的提余液流并将其引入到第二区中的不相邻的柱中，且经由来自第一区的抽取液流所收集的液体再循环回到第一区的速度要比经由来自第二区的抽取液流所收集的液体再循环回到第二区的速度快。可选择地，经由来自所述第一区的抽取液流所收集的液体再循环回到第一区的速度要比经由来自第二区的抽取液流所收集的液体再循环回到第二区的速度慢。通常，经由来自第二区的提余液流所收集的液体再循环回到第二区的速度要比经由来自第一区的提余液流所收集的液体再循环回到第一区的速度快。优选地，从第二区中的柱中收集包含PUFA产物连同较弱极性的组分的抽取液流并将其引入到第一区中的不相邻的柱中，且经由来自第二区的提余液流所收集的液体再循环回到第二区的速度要比经由来自第一区的提余液流所收集的液体再循环回到第一区的速度快。可选择地，经由来自所述第二区的提余液流所收集的液体再循环回到第二区的速度要比经由来自第一区的提余液流所收集的液体再循环回到第一区的速度慢。未具体限定步长时间(step time)(即在改变进料混合物和洗脱液的注入点与所收集的部分的多个离开点之间的时间)，且步长时间将取决于所用的柱的数目和尺寸及通 过设备的流速。技术人员将能够容易地确定用于本发明的方法的合适的步长时间。步长时间通常为100-1000秒，优选地200-800秒，更优选地约250-约750秒。在一些实施方式中，100-400秒，优选地200-300秒，更优选地约250秒的步长时间是合适的。在其它实施方式中，600-900秒，优选地700-800秒，更优选地约750秒的步长时间是合适的。在本发明的方法中，实际的移动床色谱是优选的。本领域已知的用于实际的和模拟的移动床系统的常规吸附剂可用于本发明的方法中。每一个色谱柱可包含相同的或不同的吸附剂。通常，每一个柱包含相同的吸附剂。这样的常用材料的实例为聚合物珠，优选的填充有DVB(二乙烯基苯)的聚苯乙烯；及硅胶，优选地用C8或C18，尤其是C18链烷烃反相键合的硅胶。优选C18键合反相硅胶。用于本发明的方法的吸附剂优选地为非极性的。吸附剂固定相材料的形状可以为例如球形或非球形珠，优选地为基本上球形的珠。这样的珠通常具有40-500微米，优选地100-500微米，更优选地250-500微米，甚至更优选地250-400微米，最优选地250-350微米的直径。这些优选的粒径稍微大于以往用于模拟和实际的移动床方法的珠的粒径。使用较大的颗粒能够使较低压力的洗脱液用于系统中。反过来，这就成本节约、设备的效率和寿命而言具有优势。意外地发现，大粒径的吸附剂珠可用于本发明的方法中(具有它们的相关优势)，而不会损失溶解性。吸附剂通常具有10-50nm，优选地15_45nm，更优选地20_40nm，最优选地25_35nm的孔径大小。用于本发明的方法的洗脱液为含水醇。含水醇通常包含水和一种或更多种短链醇。短链醇通常具有1-6个碳原子。合适的醇的实例包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇及叔丁醇。优选甲醇和乙醇。更优选甲醇。通常，洗脱液并非处于超临界状态。通常，洗脱液为液体。通常，洗脱液在整个设备中的平均水醇比为O. I 99.9-9 91体积份，优选地O. 25 99.75-7 93体积份，更优选地O. 5 99.5-6 94体积份。每一个区中的洗脱液的洗脱能力通常是不同的。优选地，第一区中的洗脱液的洗脱能力大于第二区和后续区中的洗脱液的洗脱能力。具体地，这可通过改变每一个区中的水和醇的相对量来实现。与水相比，醇通常是更有力的解吸剂。因此，第一区中的洗脱液中的醇的量通常大于第二区和后续区中的洗脱液中的醇的量。在存在于每一个区中的含水醇具有不同的水醇含量的实施方式中，第一区中的洗脱液的水醇比通常为O : 100-5 95体积份，优选地O. I 99.9-2.5 97. 5体积份，更优选地O. 25 99.75-2 98体积份，且最优选地O. 5 99.5-1.5 98. 5体积份。在这些实施方式中，第二区中的洗脱液的水醇比通常为3 97-7 93体积份，优选地4 96-6 94体积份，更优选地4. 5 95.5-5.5 94. 5体积份。在存在于每一个区中的含水醇具有不同的水醇含量的特别优选的实施方式中，第一区中的洗脱液的水醇比为O. 5 99.5-1.5 98. 5体积份，且第二区中的洗脱液的水醇比为4. 5 95 5-5. 5 94. 5体积份。在调节经由每一个区中的抽取液流和提余液流所收集的液体再循环回到相同的区的速度，使得在每一个区中PUFA产物可以与进料混合物的不同组分分离的实施方式中，每一个区中的洗脱液的水醇比可以是相同的或不同的。通常，每一个区中的洗脱液的水醇比为O. 5 99.5-5.5 94. 5体积份。在一个实施方式中，第一区中的洗脱液的水醇比低于第二区中的洗脱液的水醇比。在另一个实施方式中，第一区中的洗脱液的水 醇比高于第二区中的洗脱液的水醇比。在另一个实施方式中，第一区中的洗脱液的水醇比与第二区中的洗脱液的水醇比相同。将理解，上文所提及的每一个区中的水和醇的比为整个区内的平均比。通常，通过将水和/或醇引入到区中的一个或多个柱中来控制每一个区中的洗脱液的水醇比。因此，例如，为了实现第一区的水醇比低于第二区中的水醇比，通常比第二区更缓慢地将水引入第一区中。在一些实施方式中，可在每一个区中的不同点处引入基本上纯的醇和基本上纯的水。这两个流的相对流速将决定整个区的整体溶剂分布。在其它实施方式中，可在每一个区中的不同点处引入不同的醇/水混合物。那将涉及将两种或更多种不同的醇/水混合物引入到区中，每一种醇/水混合物具有不同的醇水比。在这个实施方式中的醇/水混合物的相对流速和相对浓度将决定整个区的整体溶剂分布。在每一个区中的洗脱液的水醇比相同的其它实施方式中，可将相同的醇/水混合物引入到每一个区。通常，本发明的方法是在15_55°C，优选地在20_40°C下，更优选地在约30°C下进行。因此，方法通常是在室温下进行，但可以在高温下进行。本发明的方法涉及将进料流引入到一个区(例如第一区)，收集富含PUFA产物的第一中间流并将第一中间流引入到另一个区(例如第二区)。因此，当设备具有两个区时，方法涉及(a)从第一区收集第一中间流且将其引入到第二区，或(b)从第二区收集第一中间流并将其引入到第一区。以这种方式，可在单一方法中使PUFA产物与较强极性的组分和较弱极性的组分分尚。(a)从第一区中的柱收集包含PUFA产物连同较强极性的组分的提余液流并将其引入到第二区中的不相邻的柱，或(b)从第二区中的柱收集包含PUFA产物连同较弱极性的组分的抽取液流并将其引入到第一区中的不相邻的柱中。在特别优选的实施方式中，设备具有两个区，且本发明的方法包括⑴将进料混合物引入到第一区，且除去PUFA产物富集的第一提余液流和PUFA产物贫化的第一抽取液流，及
(ii)将第一提余液流引入到所述第二区，除去PUFA产物贫化的第二提余液流，且收集第二抽取液流以得到PUFA产物。该特别优选的实施方式适合用于从进料混合物中纯化EPA。该特别优选的实施方式阐述在图2中。将包含PUFA产物(B)和较强极性的组分
(C)及较弱极性的组分(A)的进料混合物F引入到第一区。在第一区中，较弱极性的组分(A)作为抽取液流El除去。PUFA产物(B)和较强极性的组分(C)作为提余液流Rl除去。然后，将提余液流Rl引入到第二区。在第二区中，较强极性的组分(C)作为提余液流R2除去。收集作为抽取液流E2的PUFA产物⑶。在图4中更为详细地描述了该实施方式。图4与图2相同，除了显示出醇吸附剂 (D)和水(W)引入到每一个区中的引入点。醇吸附剂⑶和水(W)—起组成了洗脱液。(D)相通常为基本上纯的醇，但在某些实施方式中，可以为主要包含醇的醇/水混合物。(W)相通常为基本上纯的水，但某些实施方式中，可以为主要包含水的醇/水混合物，例如98%水/2%甲醇混合物。该特别优选的实施方式的进一步阐述显示在图6中。这里没有单独的水注入点，且相反在(D)处注入含水醇吸附剂。通过改变每一个区内的洗脱液的解吸能力，可能有助于分离成提余液流和抽取液流。这可通过在每一个区中的不同点处引入洗脱液的醇(或富含醇)组分和水(或富含水)组分来实现。因此，相对于洗脱液在系统中的流动，通常在抽取液离开点的上游引入醇且在抽取液离开点和进料引入区中的引入点之间引入水。这显示在图4中。可选择地，可通过改变经由来自两个区的抽取液流和提余液流所收集的液体再循环回到相同的区的速度而有助于分离。通常，在这个特别优选的实施方式中，经由来自第一区的抽取液流所收集的液体再循环回到第一区的速度要比经由来自第二区的抽取液流所收集的液体再循环回到第二区的速度快；或第一区中的洗脱液的水醇比要比第二区中的水醇比低。在这个特别优选的实施方式中，相对于第一区中的洗脱液的流动，通常在将进料混合物引入到第一区中的点的下游处，除去第一区中的第一提余液流。在这个特别优选的实施方式中，相对于第一区中的洗脱液的流动，通常在将进料混合物引入到第一区中的点的上游处，除去第一区中的第一抽取液流。 在这个特别优选的实施方式中，相对于第二区中的洗脱液的流动，通常在将第一提余液流引入到第二区中的点的下游处，除去第二区中的第二提余液流。在这个特别优选的实施方式中，相对于第二区中的洗脱液的流动，通常在将第一提余液流引入到第二区中的点的上游处，收集第二区中的第二抽取液流。通常在这个特别优选的实施方式中，相对于第一区中的洗脱液的流动，在除去第一抽取液流的点的上游处，将醇或含水醇引入到第一区。通常在这个特别优选的实施方式中，当将水引入第一区时，相对于第一区中的洗脱液的流动，在引入进料混合物的点的上游但在除去第一抽取液流的点的下游处，将水引入到第一区。通常在这个特别优选的实施方式中，相对于第二区中的洗脱液的流动，在除去第二抽取液流的点的上游处，将醇或含水醇引入到第二区。
通常在这个特别优选的实施方式中，当将水引入第二区时，相对于第二区中的洗脱液的流动，在引入第一提余液流的点的上游但在除去第二抽取液流的点的下游处，将水引入到第二区。在另一个特别优选的实施方式中，设备具有两个区，且方法包括(i)将进料混合物引入到第二区，且除去PUFA产物贫化的第一提余液流和PUFA产物富集的第一抽取液流，及(ii)将第一抽取液流引入到第一区，除去PUFA产物贫化的第二抽取液流且收集第二提余液流以得到PUFA产物。这个特别优选的实施方式适合用于从进料混合物中纯化DHA。这个实施方式阐述在图3中。将包含PUFA产物(B)和较强极性的组分(C)及较弱极性的组分(A)的进料混合物F引入到第二区。在第二区中，较强极性的组分(C)作为提 余液流Rl除去。收集作为抽取液流El的PUFA产物(B)和较弱极性的组分(A)。然后，将抽取液流El引入到第一区。在第一区中，较弱极性的组分(A)作为抽取液流E2除去。收集作为提余液流R2的PUFA产物(B)。在图5中更为详细地描述了该实施方式。图5与图3相同，除了显示了引入到每一个区中的短链醇吸附剂⑶和水(W)的引入点。如上，⑶相通常为基本上纯的醇，但在某些实施方式中，可以为主要包含醇的醇/水混合物。(W)相通常为基本上纯的水，但某些实施方式中，可以为主要包含水的醇/水混合物，例如98%水/2%甲醇混合物。该特别优选的实施方式的进一步阐述显示在图7中。这里没有单独的水注入点，且相反在(D)处注入含水醇吸附剂。通常在这个实施方式中，经由来自第二区的提余液流所收集的液体再引入到第二区的速度要比经由来自第一区的提余液流所收集的液体再引入到第一区的速度快；或第一区中的洗脱液的水醇比低于第二区中的洗脱液的水醇比。在这个第二特别优选的实施方式中，相对于第二区中的洗脱液的流动，通常在将进料混合物引入到第二区的点的下游处，除去第二区中的第一提余液流。在这个第二特别优选的实施方式中，相对于第二区中的洗脱液的流动，通常在将进料混合物引入到第二区的点的上游处，收集第二区中的第一抽取液流。在这个第二特别优选的实施方式中，相对于第一区中的洗脱液的流动，通常在将第一抽取液流引入到第一区的点的下游处，收集第一区中的第二提余液流。在这个第二特别优选的实施方式中，相对于第一区中的洗脱液的流动，通常在将第一抽取液流引入到第一区的点的上游处，除去第一区中的第二抽取液流。通常在这个第二特别优选的实施方式中，相对于第二区中的洗脱液的流动，在除去第一抽取液流的点的上游处，将醇或含水醇引入到第二区。通常在这个第二特别优选的实施方式中，当将水引入第二区时，相对于第二区中的洗脱液的流动，在引入进料混合物的点的上游但在除去第一抽取液流的点的下游处，将水引入到第二区。 通常在这个第二特别优选的实施方式中，相对于第一区中的洗脱液的流动，在除去第二抽取液流的点的上游处，将醇或含水醇引入到第一区。通常在这个第二特别优选的实施方式中，当将水引入第一区时，相对于第一区中的洗脱液的流动，在引入第一提余液流的点的上游但在除去第二抽取液流的点的下游处，将水引入到第一区。在本发明的优选的实施方式中，模拟的或实际的移动床色谱设备由15个色谱柱构成。这些柱被称为柱I到15。使15个柱串联布置，使得柱I的底部连接到柱2的顶部，柱2的底部连接到柱3的顶部等。这可任选地是经由保持容器，且再循环流进入下一个柱。洗脱液穿过系统的流动是从柱I到柱2到柱3等。吸附剂穿过系统的流动是从柱15到柱14到柱13等。在最优选的实施方式中，第一区通常由8个相邻柱(柱I到柱8)构成，所述柱如上所述地连接。在这个最优选的实施方式中，第二区通常由7个柱(柱9到柱15)构成，所述柱如上所述地连接。为了避免疑问，第一区中的柱8的底部连接到第二区中的柱9的顶部。
最优选的实施方式阐述在图8中。将包含PUFA产物(B)和较强极性的组分(C)及较弱极性的组分(A)的进料混合物F引入到第一区中的柱5的顶部。将醇解吸剂引入到第一区中的柱I的顶部。将水引入到第一区中的柱4的顶部。在第一区中，较弱极性的组分(A)作为抽取液流El从柱2的底部除去。PUFA产物(B)和较强极性的组分(C)作为提余液流Rl从柱7的底部除去。然后，将提余液流Rl从柱13的顶部引入到第二区。将醇解吸剂引入到第二区中的柱9的顶部。将水引入到第二区中的柱12的顶部。在第二区中，较强极性的组分(C)作为提余液流R2从柱15的底部除去。在柱10的底部，收集作为抽取液流E2的PUFA产物⑶。在这个最优选的实施方式中，通常将醇引入到第一区中的柱I的顶部。在这个最优选的实施方式中，通常将水引入到第一区中的柱4的顶部。在这个最优选的实施方式中，通常将醇引入到第二区中的柱9的顶部。在这个最优选的实施方式中，通常将醇引入到第二区中的柱12的顶部。在这个最优选的实施方式中，通常将进料流引入到第一区中的柱5的顶部。在这个最优选的实施方式中，通常从第一区中的柱7的底部收集第一提余液流并将其引入到第二区中的柱13的顶部。在被引入到柱13之前，第一提余液流可任选地被收集在各器中。在这个最优选的实施方式中，通常从第一区中的柱2的底部除去第一抽取液流。第一抽取液流可任选地被收集在容器中且再引入到第一区中的柱3的顶部。在这个最优选的实施方式中，通常从第二区的柱15的底部除去第二提余液流。在这个最优选的实施方式中，通常从第二区的柱10的底部收集第二抽取液流。这个第二抽取液流通常包含纯化的PUFA产物。第二抽取液流可任选地被收集在容器中且再次引入到第二区的柱11的顶部。通常，在这个最优选的实施方式中，第一区中的水醇比要比第二区中的水醇比低。另一个最优选的实施方式阐述在图9中。将包含PUFA产物(B)和较强极性的组分(C)及较弱极性的组分(A)的进料混合物F引入到第一区中的柱5的顶部。将含水醇解吸剂引入到第一区中的柱I的顶部。在第一区中，较弱极性的组分(A)作为抽取液流El从柱2的底部除去。PUFA产物(B)和较强极性的组分(C)作为提余液流Rl从柱7的底部除去。然后，将提余液流Rl从柱12的顶部引入到第二区。将含水醇解吸剂引入到第二区中的柱9的顶部。在第二区中，较强极性的组分(C)作为提余液流R2从柱14的底部除去。在柱10的底部，收集作为抽取液流E2的PUFA产物⑶。在这个最优选的实施方式中，通常将含水醇引入到第一区中的柱I的顶部。在这个最优选的实施方式中，通常将含水醇引入到第二区中的柱9的顶部。在这个最优选的实施方式中，通常将进料流引入到第一区中的柱5的顶部。在这个最优选的实施方式中，通常从第一区中的柱7的底部收集第一提余液流并将其引入到第二区中的柱12的顶部。在被引入到柱12之前，第一提余液流可任选地被收集在各器中。在这个最优选的实施方式中，通常从第一区中的柱2的底部除去第一抽取液流。第一抽取液流可任选地被收集在容器中且将一部分再次引入到第一区中的柱3的顶部。经 由来自第一区的抽取液流所收集的液体再循环回到第一区的速度为将液体从该容器泵送到柱3的顶部的速度。在这个最优选的实施方式中，通常从第二区的柱14的底部除去第二提余液流。在这个最优选的实施方式中，通常从第二区的柱10的底部收集第二抽取液流。这个第二抽取液流通常包含纯化的PUFA产物。第二抽取液流可任选地被收集在容器中且将一部分再次引入到第二区的柱11的顶部。经由来自第二区的抽取液流所收集的液体再循环回到第二区的速度为将液体从该容器泵送到柱11的顶部的速度。在这个最优选的实施方式中，经由来自第一区的抽取液流所收集的液体再循环回到第一区的速度通常要比经由来自第二区的抽取液流所收集的液体再循环回到第二区的速度快。在这个最优选的实施方式中，含水醇洗脱液在每一个区中基本上是相同的。在本发明的另一个优选的实施方式中，模拟的或实际的移动床色谱设备由19个色谱柱构成。这些柱被称为柱I到19。使这15个柱串联布置，使得柱I的底部连接到柱2的顶部，柱2的底部连接到柱3的顶部等。洗脱液穿过系统的流动是从柱I到柱2到柱3等。吸附剂通过系统的流动是从柱19到柱18到柱17等。在这个实施方式中，第一区通常由10个相邻柱(柱I到柱10)构成，所述柱如上所述地连接。第二区通常由8个柱(柱11到柱19)构成，所述柱如上所述地连接。这个进一步优选的实施方式阐述在图10中。将包含PUFA产物(B)和较强极性的组分(C)及较弱极性的组分(A和A')的进料混合物F引入到第一区中的柱7的顶部。将包含100%醇的第一吸附剂(Dl)引入到第一区中的柱I的顶部。将包含水/醇混合物(优选地2%甲醇和98%水)的第二吸附剂(D2)引入到第一区中的柱5的顶部。在第一区中，分别从柱I和柱4的底部除去作为抽取液流El'和El的较弱极性的组分(k')和㈧。PUFA产物(B)和较强极性的组分(C)作为提余液流Rl从柱10的底部除去。然后，将提余液流Rl从柱17的顶部引入到第二区。将包含水/醇混合物(优选地2%甲醇和98%水)的第二吸附剂(D2)引入到第二区中的柱11的顶部。在第二区中，较强极性的组分(C)作为提余液流R2从柱19的底部除去。在柱14的底部，收集作为抽取液流E2的PUFA产物⑶。在这个优选的实施方式中，通常将醇引入到第一区中的柱I的顶部。在这个优选的实施方式中，通常将2% MeOH/98%水混合物引入到第一区中的柱5的顶部。在这个优选的实施方式中，通常将2% MeOH/98%水混合物引入到第二区中的柱11的顶部。在这个优选的实施方式中，通常将进料流引入到第一区中的柱7的顶部。在这个优选的实施方式中，通常从第一区中的柱10的底部收集第一提余液流并将其引入到第二区中的柱17的顶部。在被引入到柱17之前，第一提余液流可任选地被收集在各器中。在这个优选的实施方式中，通常从第一区中的柱I和柱4的底部除去抽取液流。从柱4的底部收集的抽取液流可任选地被收集在容器中且再次引入到第一区中的柱5的顶部。在这个优选的实施方式中，通常从第二区的柱19的底部除去第二提余液流。 在这个优选的实施方式中，通常从第二区的柱14的底部收集第二抽取液流。这个第二抽取液流通常包含纯化的PUFA产物。第二抽取液流可任选地被收集在容器中且再次引入到第二区的柱15的顶部。通常，在这个最优选的实施方式中，第一区中的水醇比要比第二区中的水醇比低。与用传统的色谱技术可能得到的PUFA产物相比，本发明的方法允许纯度要高得多的PUFA产物的实现。通过本发明的方法所生产的PUFA产物还具有杂质概况的特别优势，这种杂质概况完全不同于在通过已知技术所制备的油中所观察到那些杂质概况。因此，本发明还涉及包含PUFA产物的组合物，例如通过本发明的方法可得到的PUFA产物。因此，在一个实施方式中，本发明还提供包含PUFA产物的组合物，其中PUFA产物为EPA，I3UFA产物以大于93被％的量存在，且ω-6多不饱和脂肪酸的总含量最多至O. 40wt % ο如本文所使用的，组分的wt%是相对于组合物的总重量。任选地，PUFA产物和co-6PUFA呈它们的烷基酯的形式，通常为乙酯。优选地，EPAPUFA产物呈其乙酯的形式。通常，在这个实施方式中，EPAPUFA产物以大于94wt%，优选地大于95wt%，更优选地大于96wt%,甚至更优选地大于97wt%,且最优选地大于98wt%的量存在。在这个实施方式中，ω-6多不饱和脂肪酸的总含量最多至O. 40wt%。因此，通常，组合物包含最多至这个量的量的ω-6多不饱和脂肪酸。通常，ω-6多不饱和脂肪酸的总含量最多至O. 35wt%，优选地最多至O. 3wt%，更优选地最多至O. 25wt%，且最优选地最多至O. 22wt%。通常，ω-6多不饱和脂肪酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. Iwt%或更大。通常，在这个实施方式中，花生四烯酸的含量最多至O. 25wt%，优选地最多至O. 24wt%，更优选地最多至O. 23wt%，且最优选地最多至O. 22wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的花生四烯酸。通常，花生四烯酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. Iwt %或更大。通常，在这个实施方式中，ω-3多不饱和脂肪酸的总量大于97wt%，优选地大于97. 5wt%，更优选地大于97. 9wt%。在某些实施方式中，ω-3多不饱和脂肪酸的总量大于99wt %。通常，在这个实施方式中，DHA的总含量最多至Iwt %，优选地最多至O. 6|丨％，更优选地最多至O. 3wt%，最优选地最多至O. 2wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的DHA。通常，DHA的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. 1 丨％或更大。通常，在这个实施方式中，DHA的总含量最多至O. 2wt %，优选地最多至O. 175wt%，更优选地最多至O. 16wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的DHA。通常，DHA的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. Iwt %或更大。
通常，在这个实施方式中，α-亚麻酸的总含量最多至lwt%，优选地最多至O. 6wt%，更优选地最多至O. 3wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的α-亚麻酸。通常，α -亚麻酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. lwt%*更大。通常，在这个实施方式中，α-亚麻酸的总含量最多至O. 35wt%，优选地最多至O. 3wt%，更优选地最多至O. 29wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的α-亚麻酸。通常，α-亚麻酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. lwt%*更大。通常，在这个实施方式中，十八碳四烯酸的总含量最多至Iwt %，优选地最多至O. 6wt %，更优选地最多至O. 3wt %。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的十八碳四烯酸。通常，十八碳四烯酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. lwt%*更大。通常，在这个实施方式中，十八碳四烯酸的总含量最多至O. 4wt%，优选地最多至O. 35wt%，更优选地最多至O. 34wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的十八碳四烯酸。通常，十八碳四烯酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. lwt%*更大。通常，在这个实施方式中，二十碳四烯酸的总含量最多至lwt%，优选地最多至O. 75wt%,更优选地最多至O. 5wt %。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的二十碳四烯酸。通常，二十碳四烯酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. lwt%*更大。通常，在这个实施方式中，二十碳四烯酸的总含量最多至O. 5wt%，优选地最多至O. 475wt %，更优选地最多至O. 46wt %。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的二十碳四烯酸。通常，二十碳四烯酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. Iwt %或更大。通常，在这个实施方式中，二十二碳五烯酸的总含量最多至lwt%，优选地最多至O. 6wt%,更优选地最多至O. 3wt %。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的二十二碳五烯酸。通常，二十二碳五烯酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. lwt%*更大。通常，在这个实施方式中，二十二碳五烯酸的总含量最多至O. 4wt %，优选地最多至O. 35wt%，更优选地最多至O. 33wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量二十二碳五烯酸。通常，二十二碳五烯酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. lwt%*更大。在这个实施方式中，组合物优选地包含大于96. 5wt %的EPA，最多至Iwt %的DHA，最多至lwt%的α -亚麻酸,最多至lwt%的十八碳四烯酸,最多至lwt%的二十碳四烯酸，最多至Iwt%的二十二碳五烯酸及最多至O. 25wt%的花生四烯酸。在这个实施方式中，组合物优选地包含大于96. 5wt %的EPA，最多至O. 2wt %的DHA,最多至O. 3wt%的α -亚麻酸,最多至O. 4wt%的十八碳四烯酸,最多至O. 5wt%的二十碳四烯酸，最多至O. 35wt%的二十二碳五烯酸及最多至O. 25wt%的花生四烯酸。在这个实施方式中，组合物更优选地包含96. 5-99 七％的EPA，最多至O. 6 七％的DHA,最多至O. 6wt%的α -亚麻酸,O. 15-0. 6wt%的十八碳四烯酸,O. 1-0. 75wt%的二十碳四烯酸，最多至O. 6wt%的二十二碳五烯酸及最多至O. 6界1:%的花生四烯酸。在这个实施方式中，组合物更优选地包含96. 5-99 七％的EPA，最多至O. 2 七％的DHA,最多至O. 3wt%的α -亚麻酸,O. 15-0. 4wt%的十八碳四烯酸，O. 1-0. 5wt%的二十碳四烯酸，最多至O. 35wt%的二十二碳五烯酸及最多至O. 25wt%的花生四烯酸。在这个实施方式中，组合物最优选地包含98-99 七％的ΕΡΑ，0. 1-0. 3 七％的DHA，O. 3-0. 35wt%的十八碳四烯酸,O. 1-0. 3wt%的二十碳四烯酸,及O. 3-0. 35wt%的二十二碳五烯酸。在这个实施方式中，组合物最优选地包含96. 5_99 七％的EPA、0. 1-0. 5wt %的DHA, O. 1-0. 5wt%的十八碳四烯酸、O. 1-0. 5wt%的二十碳四烯酸、O. 1-0. 5wt%的二十二碳五烯酸及O. 1-0. 3界1:%的花生四烯酸。在这个实施方式中，组合物最优选地包含98-99界七％的ΕΡΑ，0. 1-0. 2界七％的DHA， O. 3-0. 35wt%的十八碳四烯酸,O. 1-0. 2wt%的二十碳四烯酸,及O. 3-0. 35wt%的二十二碳五烯酸。在这个实施方式中，组合物最优选地包含96. 5-97. 5界七％的EPA，0. 25-0. 35wt%的α -亚麻酸，O. 18-0. 24wt %的十八碳四烯酸,O. 4-0. 46wt %的二十碳四烯酸，及O. 15-0. 25界七％的花生四烯酸。通常，在这个实施方式中，同分异构杂质的含量最多至I. 5wt%。通常，同分异构杂质的含量最多至Iwt优选地最多至O. 5wt%,更优选地最多至O. 25wt%,甚至更优选地最多至O. 25wt%,且最优选地最多至O. Iwt %。在进一步的实施方式中，本发明还提供包含PUFA产物的组合物，其中PUFA产物为EPA和DHA的混合物，其中(i)EPA和DHA的总含量为80被％或更大，(ii)EPA的含量为41-6(^%且0拟的含量为16-48wt%，且(iii) ω-3多不饱和脂肪酸的总含量为94 丨％或更大和/或ω-6多不饱和脂肪酸的总含量最多至4wt%。任选地，PUFA产物、co-3PUFA和o-6PUFA呈它们的烷基酯的形式，通常为乙酯。优选地，EPA/DHAPUFA产物呈其乙酯的形式。因此，在这个另外的实施方式中，组合物通常为包含PUFA产物的组合物，其中PUFA产物为EPA和DHA的混合物，其中(i)EPA和DHA的总含量为80被％或更大，(ii)EPA的含量为41-60被％且0撤的含量为16-48wt%，且(iii) ω-3多不饱和脂肪酸的总含量为94wt%或更大。可选择地，在这个另外的实施方式中，组合物为包含PUFA产物的组合物，其中PUFA产物为EPA和DHA的混合物，其中(i)EPA和DHA的总含量为80被％或更大，(ii)EPA的含量为41-60被％且0撤的含量为16-48wt%，且(iii) ω-6多不饱和脂肪酸的总含量最多至4wt%。通常，在这个另外的实施方式中，EPA和DHA的总含量为82wt%或更大，优选地83wt%或更大，更优选地84wt%或更大，甚至更优选地85wt%或更大，且最优选地86wt%或更大。通常，在这个另外的实施方式中，EPA的含量为41_60wt%，优选地45_60wt%，更优选地47-60wt %，甚至更优选地47-57wt %，且最优选地50_55wt %。
通常，在这个另外的实施方式中，DHA的含量为16_48wt%，优选地20_45wt%，更优选地25-42wt %，甚至更优选地28-38wt %，且最优选地30_35wt %。通常，在这个另外的实施方式中，ω-3多不饱和脂肪酸的总含量为94wt%或更大，优选地95wt %或更大,更优选地96wt %或更大,且最优选地97wt %或更大。通常，在这个另外的实施方式中，α-亚麻酸的总含量最多至O. 4wt%，优选地最多至O. 35wt%，更优选地最多至O. 31wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的α-亚麻酸。通常，α -亚麻酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. Iwt %或更大，更优选地O. 2wt %或更大，且甚至优选地O. 2-0. 4wt %。通常，在这个另外的实施方式中，十八碳四烯酸的总含量最多至1.9Wt%，优选地最多至I. 5wt%，更优选地最多至1.25wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的十八碳四烯酸。通常，十八碳四烯酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. lwt%或更大。通常，在这个另外的实施方式中，二十碳四烯酸的总含量最多至2. 0wt%，优选地 最多至1.9Wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的二十碳四烯酸。通常，二十碳四烯酸的总含量为O. 05wt%或更大,优选地O. Iwt %或更大,更优选地I. Owt %或更大,且甚至更优选地L 0-1. 9wt%。通常，在这个另外的实施方式中，二十碳五烯酸的总含量最多至3. 0wt%，优选地最多至2.75wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的二十碳五烯酸。通常，二十碳五烯酸的总含量为O. 05wt%或更大,优选地O. lwt%或更大,更优选地2wt%或更大,且甚至更优选地2-2. 75wt%。通常，在这个另外的实施方式中，二十二碳五烯酸的总含量最多至6wt%，优选地最多至5. 5wt%，更优选地最多至5. 25wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的二十二碳五烯酸。通常，二十二碳五烯酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. Iwt %或更大，更优选地4wt %或更大,且甚至更优选地4-5. 25wt %。在这个另外的实施方式中，ω-6多不饱和脂肪酸的总含量通常最多至4wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的ω-6多不饱和脂肪酸。通常，ω-6多不饱和脂肪酸的总含量最多至3. 75wt%，优选地最多至3. 5wt%，更优选地最多至3. 25wt%，甚至更优选地最多至3wt%，最优选地最多至2. 85wt%。通常，ω-6多不饱和脂肪酸的总含量为O. 05wt %或更大，优选地O. Iwt %或更大。通常，在这个另外的实施方式中，亚油酸的总含量最多至O. 5wt%，优选地最多至O. 4wt%,更优选地最多至O. 25wt %。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的亚油酸。通常，亚油酸的总含量为O. 05wt%或更大,优选地O. Iwt %或更大,更优选地O. 15wt%或更大，且甚至更优选地O. 15-0. 25wt%。通常，在这个另外的实施方式中，Y-亚麻酸的总含量最多至O. 19wt%，优选地最多至O. 15wt%，更优选地最多至O. Iwt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的Y-亚麻酸。通常，Y-亚麻酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. lwt%*更大。通常，在这个另外的实施方式中，双高-Y-亚麻酸的总含量最多至O. lwt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的双高-Y -亚麻酸。通常，双高-Y -亚麻酸的总含量为O. 05被％或更大。通常，在这个另外的实施方式中，花生四烯酸的总含量最多至2. 5wt%，优选地最多至2. 25wt%，更优选地最多至2. Iwt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的花生四烯酸。通常，花生四烯酸的总含量为O. 05wt%或更大，优选地O. lwt%或更大。通常，在这个另外的实施方式中，肾上腺酸的总含量最多至O. lwt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的肾上腺酸。通常，肾上腺酸的总含量为O. 05wt%或更大。通常，在这个另外的实施方式中，二十二碳五烯(ω-6)酸的总含量最多至O. 9wt%，优选地最多至O. 75wt%。更优选地最多至O. 65wt%。因此，通常，组合物包含最多至这些量的量的二十二碳五烯(ω-6)酸。通常，二十二碳五烯(ω-6)酸的总含量为O. 05wt %或更大，优选地O. Iwt %或更大。在这个另外的实施方式中，组合物优选地包含50_55wt %的EPA，30_35wt %的DHA,最多至O. 4wt %的α -亚麻酸,最多至I. 25wt %的十八碳四烯酸,最多至I. 9wt %的二十碳四烯酸，最多至2. 75wt%的二十碳五烯酸,最多至5. 25wt%的二十二碳五烯酸,最 多至O. 25被％的亚油酸，最多至O. 1被％的Y-亚麻酸，最多至O. lwt%的双高-Y-亚麻酸，最多至2. lwt%的花生四烯酸,最多至O. Iwt %的肾上腺酸及最多至O. 75wt%的二十二碳五烯(ω-6)酸。在这个另外的实施方式中，组合物更优选地包含50-55 七％的EPA，30_35wt %的DHA, O. 2-0. 4wt%的α -亚麻酸,最多至I. 25wt%的十八碳四烯酸，I. 0-1. 9wt%的二十碳四烯酸,2-2. 75wt% 二十碳五烯酸,4-5. 25wt%的二十二碳五烯酸,0. 15-0. 25wt%的亚油酸，最多至O. Iwt %的Y-亚麻酸,最多至O. Iwt %的双高-γ -亚麻酸,最多至2. Iwt %的花生四烯酸，最多至O. lwt%的肾上腺酸及最多至O. 75wt%二十二碳五烯(ω-6)酸。通常，在这个另外的实施方式中，同分异构杂质的含量最多至I. 5wt%。通常，同分异构杂质的含量最多至Iwt 优选地最多至O. 5wt%,更优选地最多至O. 25wt%,甚至更优选地最多至O. 25wt%,且最优选地最多至O. Iwt %。发明人还意外地发现可生产具有与已知的油相比环境污染物的量减少的油。因此，在另外的实施方式中，本发明还提供包含PUFA产物的组合物，如本文所定义的，其中(a)组合物中的多芳香烃的总量最多至O. 89yg/kg, (b) 二噁英类、呋喃类、二苯并-对-二噁英及多氯代二苯并呋喃类的总量最多至O. 35pg/g，(c)多氯代联苯类的总量最多至O. 0035mg/kg,和/或(d) 二B,惡英类、呋喃类、二苯并-对-二卩惡英、多氯代二苯并呋喃类及二噁英样多氯代联苯类的总量最多至lpg/g。通常，本发明提供包含PUFA产物的组合物，如本文所定义的，其中(a)组合物中的多芳香烃的总量最多至0.89 μ g/kg，(b) 二噁英类、呋喃类、二苯并-对-二噁英及多氯代二苯并呋喃类的最多量最多至O. 35pg/g，和/或(d) 二噁英类、呋喃类及二噁英样多氯代联苯类的总量最多至lpg/g。还在这个另外的实施方式中，组合物中的多芳香烃的总量最多至O. 89 μ g/kg。因此，通常，组合物包含最多至此量的量的多芳香烃。通常，组合物中的多芳香烃的总量最多至O. 85 μ g/kg,优选地最多至O. 8 μ g/kg,更优选地最多至O. 7 μ g/kg,甚至更优选地最多至O. 6 μ g/kg,还更优选地最多至O. 5 μ g/kg,还更优选地最多至O. 4 μ g/kg,还更优选地最多至O. 3 μ g/kg,还更优选地最多至O. 2 μ g/kg,还更优选地最多至O. I μ g/kg,且最优选地最多至 O. 05 μ g/kg。典型的多芳香烃是本领域的技术人员所熟知的且包括二氢苊、苊、蒽、苯并[a]蒽、苯并[a]芘、苯并[b]芘、苯并[b]荧蒽、苯并[ghi]茈、苯并[j]荧蒽、苯并[k]荧蒽、屈、二苯并(ah)蒽、突蒽、氟、却并(1，2, 3-cd)花、菲、花、六苯并苯、碗烯(corannulene)、并四苯、萘、并五苯，苯并[9，10]菲及卵烯。通常，上面提及的量是指苯并[a]芘的含量。还在这个另外的实施方式中，二噁英类、呋喃类、二苯并-对-二噁英及多氯代二苯并呋喃类的总量最多至O. 35pg/g。因此，通常，组合物包含最多至这个量的量的二噁英类、呋喃类、二苯并-对-二噁英及多氯代二苯并呋喃类。通常，二噁英类、呋喃类、二苯并-对-二n惡英及多氯代二苯并呋喃类的总量最多至O. 325pg/g,优选地最多至O. 3pg/g,更优选地最多至O. 275pg/g,甚至更优选地最多至O. 25pg/g,还更优选地最多至O. 225pg/g，还更优选地最多至O. 2pg/g，且最优选地最多至O. 185pg/g。用WHO-毒性当量因子(TEF)，以世界卫生组织(WHO)毒性当量表示这些量。WHO-毒性当量因子是本领域的技术人员所熟知的。二噁英类、呋喃类、二苯并-对-二噁英(POTD)及多氯代二苯并呋喃类(POTF)是本领域的技术人员所熟知的。通常，这些被定义在社区管理(Community regulations) (EC) 第1881/2006和1883/2006号中，本文通过引用并入其全部。被定义在社区管理(EC)第1881/2006和1883/2006号中的PCDD、PCDF和二噁英样PCB连同它们的TEF值定义如下。
同种类物_TEF值同种类物_TEF值
权利要求
1.用于从进料混合物中回收多不饱和脂肪酸(PUFA)产物的色谱分离方法，所述方法包括将所述进料混合物引入到模拟的或实际的移动床色谱设备中，所述色谱设备具有多个相连的色谱柱，所述色谱柱包含作为洗脱液的含水醇，其中所述设备具有包括至少第一区和第二区的多个区，每一个区具有抽取液流和提余液流，能够从所述抽取液流和所述提余液流收集来自所述多个相连的色谱柱的液体,且其中(a)从所述第一区中的柱中收集包含PUFA产物连同较强极性的组分的提余液流并将该提余液流引入到所述第二区中的不相邻的柱中，和/或(b)从所述第二区中的柱中收集包含PUFA产物连同较弱极性的组分的抽取液流并将该抽取液流引入到所述第一区中的不相邻的柱中，在每一个区中使所述PUFA产物与所述进料混合物的不同组分分离。
2.根据权利要求I所述的方法，其中使来自所述第一区的所述抽取液流、来自所述第一区的所述提余液流、来自所述第二区的所述抽取液流及来自所述第二区的所述提余液流中的一个或多个中的部分再循环回到相同的区，通常再循环回到相同的区中的相邻柱中。
3.根据权利要求I或2所述的色谱分离方法，其中(a)存在于每一个区中的所述含水醇洗脱液具有不同的水醇比；和/或 (b)调节经由每一个区中的所述抽取液流和提余液流所收集的液体再循环回到相同的区的速度，使得在每一个区中所述PUFA产物能够与所述进料混合物的不同组分分离。
4.根据权利要求3所述的色谱分离方法，其中经由从所述第一区离开的所述抽取液流所收集的液体再循环回到所述第一区的速度与经由从所述第二区离开的所述抽取液流所收集的液体再循环回到所述第二区的速度不同，和/或经由从所述第一区离开的所述提余液流所收集的液体再循环回到所述第一区的速度与经由从所述第二区离开的所述提余液流所收集的液体再循环回到所述第二区的速度不同。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述设备具有第一区和第二区，在所述第一区中使所述PUFA产物与所述进料混合物的较弱极性的组分分离，且在所述第二区中使所述PUFA产物与所述进料混合物的较强极性的组分分离。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述PUFA产物包括至少一种co-3PUFA。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述PUFA产物包括EPA和/或DHA。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中除了所述PUFA产物外，在色谱分离方法中回收额外的第二 PUFA产物。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述PUFA产物为EPA且所述额外的第二PUFA产物为DHA。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述色谱柱包含作为吸附剂的基本上球形的珠。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述珠由C18键合硅胶形成。
12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述基本上球形的珠具有250-500μ m的直径。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述洗脱液为水和C1-C6醇的混合物。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述C1-C6醇为甲醇或乙醇。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一区中的所述洗脱液比所述第二区中的所述洗脱液包含更多的醇，且其中相对于所述系统中的洗脱液的流动，所述第二区在所述第一区的下游。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一区中的所述洗脱液的所述水醇比为O. 5 99. 5-1. 5 98.5体积份，且所述第二区中的所述洗脱液的所述水醇比为 4. 5 95. 5-5. 5 94. 5 体积份。
17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过将水和/或醇引入到所述第一区和所述第二区中的一个或多个柱中来控制所述第一区和所述第二区中的所述洗脱液的所述水醇比。
18.根据权利要求2-17中任一项所述的方法，其中经由来自所述第一区的所述抽取液流所收集的液体再循环回到所述第一区的速度比经由来自所述第二区的所述抽取液流所收集的液体再循环回到所述第二区的速度快。
19.根据权利要求5-18中任一项所述的方法，包括 (i)将所述进料混合物引入到所述第一区，且除去所述PUFA产物富集的第一提余液流和所述PUFA产物贫化的第一抽取液流，及 ( )将所述第一提余液流引入到所述第二区，除去所述PUFA产物贫化的第二提余液流，且收集第二抽取液流以得到所述PUFA产物
20.根据权利要求5-18中任一项所述的方法，包括 (i)将所述进料混合物引入到所述第二区，且除去所述PUFA产物贫化的第一提余液流和所述PUFA产物富集的第一抽取液流，及 ( )将所述第一抽取液流引入到所述第一区，除去所述PUFA产物贫化的第二抽取液流且收集第二提余液流以得到所述PUFA产物。
21.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述模拟的或实际的移动床色谱设备具有15个色谱柱I到15。
22.根据权利要求5-21中任一项所述的方法，其中所述第一区由8个相邻柱I到8构成。
23.根据权利要求5-22中任一项所述的方法，其中所述第二区由7个相邻柱9到15构成。
24.根据权利要求21-23中任一项所述的方法，其中(a)将醇引入到柱I中，和/或(b)将醇引入到柱9中，和/或(c)将水引入到柱4中，和/或(d)将水引入到柱12中。
25.根据权利要求21-23中任一项所述的方法，其中将含水醇引入到柱I和/或柱9中。
26.根据权利要求21-25中任一项所述的方法，其中从柱7收集第一提余液流且将该第一提余液引入到柱13中。
27.根据权利要求I所述的方法，其中所述设备具有第一区、第二区和第三区，且其中(a)所述第一区中的所述洗脱液比所述第二区和所述第三区中的所述洗脱液包含更多的醇，且相对于所述系统中的洗脱液的流动，所述第一区在所述第二区和所述第三区的上游，且(b)所述第二区中的所述洗脱液比所述第三区中的所述洗脱液包含更多的醇，且相对于所述系统中的洗脱液的流动，所述第二区在所述第三区的上游，在所述第一区中使所述PUFA产物与极性不如所述PUFA产物的所述进料混合物的组分分离，在所述第二区中使所述PUFA产物与极性不如所述PUFA产物但比在所述第一区中分离的所述组分强的进料混合物的组分分离，且在所述第三区中使所述PUFA产物与极性比所述PUFA产物强的所述进料混合物的组分分离。
28.—种包含PUFA产物的组合物，其中所述PUFA产物为EPA，所述PUFA产物以大于93被％的量存在，且ω-6多不饱和脂肪酸的总含量最多至O. 40wt%。
29.根据权利要求28所述的组合物，其中所述组合物包含96.5-99wt%的EPA、O.1-0. 5wt %的DHA、0. 1-0. 5wt %的十八碳四烯酸、O. 1-0. 5wt %的二十碳四烯酸、O.1-0. 5wt%的二十二碳五烯酸及O. 1-0. 3wt%的花生四烯酸。
30.一种包含PUFA产物的组合物，其中所述PUFA产物为EPA和DHA的混合物，其中(i)EPA和DHA的总含量为80被％或更大，(ii)EPA的含量为41_60被％且0撤的含量为16_48wt%，且(iii) ω-3多不饱和脂肪酸的总含量为94被％或更大和/或ω-6多不饱和脂肪酸的总含量最多至4wt%。
31.根据权利要求30所述的组合物，其中所述组合物包含50-55wt%的EPA、30-35wt%的DHA、0. 2-0. 4 七％的α -亚麻酸、最多至I. 25wt%的十八碳四烯酸、L 0-1. 9wt%的二十碳四烯酸、2-2. 75wt %的二十碳五烯酸、4-5. 25wt %的花生四烯酸、O. 15-0. 25wt%的亚油酸、最多至O. lwt%的Y-亚麻酸、最多至O. lwt%的双高-γ-亚麻酸、最多至2. lwt%的花生四烯酸、最多至O. lwt%的肾上腺酸及最多至O. 75界1:%的二十二碳五烯(ω-6)酸。
32.一种包含PUFA产物的组合物，如权利要求1、6、7及28-31中任一项所定义的，其中(a)所述组合物中的多芳香烃的总量最多至0.89yg/kg，(b)，二噁英类、呋喃类、二苯并-对-二噁英类及多氯代二苯并呋喃类的总量最多至O. 35pg/g，(c)多氯代联苯类的总量最多至O. 0035mg/kg，和/或(d) 二噁英类、呋喃类、二苯并-对-二噁英类、多氯代二苯并呋喃类及二噁英样多氯代联苯类的总量最多至lpg/g。
33.一种包含PUFA产物的组合物，其中同分异构杂质的含量最多至I. 5wt%。
34.一种用于控制如权利要求1-27中任一项所定义的色谱设备的计算机程序，所述计算机程序包括代码手段，在执行时，所述代码手段指示所述设备进行如权利要求1-27中任一项所述的方法。
全文摘要
本发明提供用于从进料混合物中回收多不饱和脂肪酸(PUFA)产物的色谱分离方法，所述方法包括将进料混合物引入到模拟的或实际的移动床色谱设备中，所述色谱设备具有多个相连的色谱柱，所述色谱柱包含作为洗脱液的含水醇，其中设备具有包括至少第一区和第二区的多个区，每一个区具有抽取液流和提余液流，从抽取液流和提余液流可收集来自所述多个相连的色谱柱中的液体，且其中(a)从所述第一区中的柱中收集包含PUFA产物连同较强极性的组分的提余液流并将其引入到所述第二区中的不相邻的柱中，和/或(b)从所述第二区中的柱中收集包含PUFA产物连同较弱极性的组分的抽取液流并引入到所述第一区中的不相邻的柱中，在每一个区中使所述PUFA产物与所述进料混合物的不同组分分离。
文档编号C07C51/487GK102811781SQ201080064359
公开日2012年12月5日 申请日期2010年12月24日 优先权日2009年12月30日
发明者亚当·凯利赫, 安格斯·莫里森, 阿尼尔·奥斯卡尔, 拉凯什·威拉曼·奈尔雷玛, 阿伯希莱什·阿加瓦尔 申请人:巴斯夫制药(卡兰尼什)公司