专利名称：一种艾塞那肽的制备方法
技术领域：
本发明涉及多肽固相合成领域，尤其涉及艾塞那肽的固相合成方法。
背景技术：
艾塞那肽(exenatide)，是由39个氨基酸组成的多肽，是首个肠降糖素类药物。 肠降糖素类药物是针对II型糖尿病的一种新型疗法，它可以模仿人体内天然的胃肠激素的抗糖尿病反应或降低葡萄糖浓度的反应，这些反应包括在血糖升高时刺激体内产生胰岛素，在饭后抑制胰高血糖素的分泌，减慢血液摄取营养的速度和减少食物摄入量。艾塞那肽 (Exenatide)是全新类型的II型糖尿病治疗药物。皮下注射针剂，每日用药2次，用于二甲双胍、磺酰脲类或二甲双胍与磺酰脲类联合应用不能充分控制血糖的II型糖尿病患者。目前艾塞那肽的合成方法有固相法和固液相集合的方法，如申请号200910104990 报道了一种固相制备艾塞那肽的方法，该方法采用传统的固相合成法。申请号 200880112874报道了固相和液相合成艾塞那肽的方法，包括使用固相化学合成三个不同的肽中间片段。然后使用溶液相化学将另外的氨基酸物质添加至片段之一上。然后这些片段在溶液相中偶联在一起。液相合成艾塞那肽步骤复杂，GMP生产的控制项目多，不易稳定，且生产的副产物多。杂质的去除要多次洗涤或其他手段纯化，带来成本高的特点。因此本领域迫切需要一种新的固相合成艾塞那肽的工艺。
发明内容
本发明旨在提供一种多肽固相合成艾塞那肽的制备方法。本发明提供了一种如式I所示的艾塞那肽的固相合成制备方法，所述的方法包括步骤(1)将Fmoc-Rink amide AM树脂和脱保护剂混合，得到Rink amide AM树脂；(2)将 Fmoc-Ser (tBu) -OH 和 Rink amide AM 树脂缩合，得到 Fmoc-Ser (tBu) -Rink amide AM 树脂；(3)按照固相合成的方法重复步骤(1)中脱Fmoc保护和步骤(2)的将氨基酸同树脂上的多肽缩合的步骤，将氨基酸自C端向N端按照Ser至His的顺序依次同树脂上的多肽缩合，形成如式II所示的多肽树脂；和(4)使式II所示多肽树脂上的多肽和树脂分离，得到如式I所示的艾塞那肽；
权利要求
1. 一种如式I所示的艾塞那肽的固相合成制备方法，其特征在于，所述的方法包括步骤(1)将Fmoc-Rinkamide AM树脂和脱保护剂混合，得到Rink amide AM树脂；(2)将Fmoc-Ser (tBu) -OH 和 Rink amide AM 树脂缩合，得到 Fmoc-Ser (tBu) -Rink amide AM 树脂；(3)按照固相合成的方法重复步骤(1)中脱Fmoc保护和步骤( 的将氨基酸同树脂上的多肽缩合的步骤，将氨基酸自C端向N端按照Ser至His的顺序依次同树脂上的多肽缩合，形成如式II所示的多肽树脂；和(4)使式II所示多肽树脂上的多肽和树脂分离，得到如式I所示的艾塞那肽；
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在脱保护基团Fmoc的步骤之后，以及在将氨基酸和Rink amide AM树脂或多肽Rink amide AM树脂缩合的步骤之后，都用含有 50-100v/v% N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的溶液洗涤Rink amideAM树脂或多肽Rink amide AM树脂。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的脱保护剂以其总体积计，其中含有3-20%哌啶，0. 5-10%二环脒(DBU)，和0. 5-10% 1-羟基苯并三唑(HOBt)。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述缩合在缩合剂存在下进行，所述的缩合剂是N，N’ - 二异丙基碳二亚胺(DIC)和选自下述的一种或一种以上的混合物0-(苯并三唑-1-基)-N，N，N，N-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)、二异丙基乙胺(DIPEA)、1-羟基苯并三唑(HOBt)。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述缩合剂DIC分两次加入，第一次加入反应20-60分钟后第二次加入，反应60-180分钟。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的缩合在Ninhydrin测试法监控下进行。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，缩合反应中未反应完的氨基用乙酸酐进行乙酰化。
8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)在由三氟乙酸(TFA)、三异丙基硅烷(TIS)、茴香硫醚(thioanisole)和水组成的切割剂存在下进行。
全文摘要
本发明公开了一种多肽固相合成艾塞那肽的制备方法，所述的方法包括步骤(1)将Fmoc-Rink amide AM树脂和脱保护剂混合，得到Rink amide AM树脂；(2)将Fmoc-Ser(tBu)-OH和Rink amide AM树脂缩合，得到Fmoc-Ser(tBu)-Rink amideAM树脂；(3)按照固相合成的方法重复步骤(1)中脱Fmoc保护和步骤(2)的将氨基酸同树脂上的多肽缩合的步骤，将氨基酸自C端向N端按照Ser至His的顺序依次同树脂上的多肽缩合，形成如式II所示的多肽树脂；和(4)使式II所示多肽树脂上的多肽和树脂分离，得到如式I所示的艾塞那肽。
文档编号C07K1/04GK102174082SQ201110043778
公开日2011年9月7日 申请日期2011年2月23日 优先权日2011年2月23日
发明者张国庆, 张若平, 白俊才 申请人:上海昂博生物技术有限公司