调节复合物SASPase-FLG2的肽的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种从SASPase或FLG2、其片段或其同系物中分离出来的肽，该肽可以改变通过来自丝聚合蛋白-2的第一氨基酸序列和来自SASPase的第二氨基酸序列之间的相互作用而形成的复合物的三维构像。
【专利说明】调节复合物SASPase-FLG2的肽
【技术领域】[0001]本发明涉及一种关于皮肤和/或其附属物的新颖的美容靶点或治疗靶点，还涉及其用于皮肤的生物标记物的用途，或用于筛选新的专用于皮肤和/或其附属物的美容护理、治疗护理或皮肤病学护理的活性剂的用途。
[0002]更具体地说，本发明涉及分别从丝聚合蛋白-2或FLG2和SASPase分离出的肽，所述肽能够一起形成复合物，并且本发明涉及所述肽作为用于筛选关于皮肤和/或其附属物的美容活性剂或治疗活性剂的靶点的用途。
【背景技术】
[0003]词语“皮肤和其附属物”意思是整个身体的皮肤、头皮、黏膜，尤其是嘴唇、体毛、头发和指甲。更具体地说，本发明涉及身体的皮肤、头皮、嘴唇、头发和体毛。特别地，本发明涉及面部的皮肤、颈部皮肤、臂和前臂的皮肤、腿部的皮肤、和头皮。更具体地说，术语“附属物”表示头发、体毛、指甲，尤其是头发和体毛。
[0004]表皮通常分为构成表皮的生发层的胶质细胞基底层，位于生发层上的多面体细胞构成的多层“刺状”层，由含有明显的细胞质内含物透明胶质颗粒的扁平细胞构成的I层至3层“颗粒”层，和最后的被称为角化层(或角质层)的上层组合，该上层组合由在其分化末期被称为角质细胞的角化细胞构成。
[0005]角质细胞为主要由含有细胞质蛋白的纤维材料构成、由角化包膜包围的无核细胞。新的角化细胞经历了永久的生成以补偿通过被称为脱皮的机理而来自于角化层的表皮细胞的连续的损失。导致角质层的形成和其消除的整个过程是在多种激素因子或细胞因子的控制下精细调节的对象。这些因子的失调，如果没有快速调节，到最后导致基底层中细胞增殖和/或分化的功能紊乱，或脱皮的功能紊乱。
[0006]皮肤和其附属物的许多缺陷或紊乱可与此类改变关联。
[0007]因此，相对于脱皮，当表皮的基底层的细胞的增殖和/或分化加速时，那么角质层倾向于变厚。根据其表现的程度，这种功能紊乱可与各种美学缺陷(如皮肤老化的体征、表皮屏障功能紊乱、或皮肤干燥的体征)有关，或者在适当情况下，与各种病理紊乱(例如，角化过度、干燥病、鱼鳞癣、牛皮癣或反应性角化过度)有关。
[0008]相反，相对于脱皮，基底层的细胞的增殖和/或分化减慢可以通过使表皮、尤其角化层变薄而显现出其本身。根据其表现的程度，这种功能紊乱可与各种美学缺陷(如愈合缺陷、或尤其在皮肤用力擦洗或去角质处理后的再上皮化缺陷)有关，或者在适当情况下，与各种病理紊乱(例如，通常由皮肤与一种或多种外源试剂接触而诱导的免疫起源反应)有关。
[0009]为角质层形成的基础的激素的、细胞的或分子的机理的各种失调可与这些紊乱有关。
[0010]例如，FR2842209描述了 SASPase蛋白质在表皮中的表达，和其在治疗皮肤紊乱中作为靶点的用途。然而，SASPase在表皮中的表达的检测只是整套涉及表皮体内平衡的机理的一个因素，这些机理的许多方面仍然有待确定。
[0011]因此，仍然需要更加精确地确定涉及表皮体内平衡、尤其涉及表皮细胞的增殖和/或分化的因子的性质和作用。
[0012]尤其，需要确定能够调节SASPase的蛋白水解活性的试剂的性质。
[0013]仍然需要识别和提供关于皮肤和/或其附属物的新的美容靶点或治疗靶点，尤其是涉及表皮细胞的增殖和/或分化的美容靶点或治疗靶点。
[0014]仍然需要识别和提供用于筛选能够调节表皮细胞的增殖和/或分化的活性化合物的新的工具，该工具同时是快速的、灵敏的、易于使用和便宜的。
【发明内容】
[0015]本发明的目的是满足这些需要。
[0016]因此，根据第一主题，本发明涉及一种分离的肽，该分离的肽由选自SEQ IDN0.:9、SEQ ID N0.: 16、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物的氨基酸序列表示，所述氨基酸序列能够改变由来自丝聚合蛋白-2的第一氨基酸序列和来自SASPase的第二氨基酸序列的相互作用而形成的复合物的三维构象。
[0017]出乎意料的是，发明人已证明以单体或二聚物形式的丝聚合蛋白-2和SASPase通过亲和力彼此结合，以一起形成蛋白质复合物。尤其，发明人已识别了在丝聚合蛋白-2和SASPase中，涉及该结合和蛋白质复合物的形成的明确的氨基酸序列。
[0018]更重要的是，发明人已证明丝聚合蛋白-2与SASPase的结合增强了 SASPase的蛋白水解活性，并且证明该活性也可以通过来自于丝聚合蛋白-2的特定的肽来调节。
[0019]为了本发明的目的，术语“相互作用”意思是在两个氨基酸序列之间通过亲和力形成一个或多个键，以致形成在生理学上可接受的条件下能够保持稳定的蛋白质或肽复合物。在本发明中，无区别地使用术语“相互作用”和“结合”。
[0020]为了本发明的目的，复合物的“三维构象”这一术语意思是当彼此相互作用时组成该复合物的氨基酸序列的空间排列。
[0021] 为了本发明的目的，复合物的三维构象的“改变”这一术语意思是改变复合物中的氨基酸序列的空间排列，或改变这些序列中的两者或一者的三维结构。
[0022]这些改变可以导致复合物的整体形状的改变(也称为变构改变)和/或在自由氨基酸序列和彼此结合的氨基酸序列之间的热力平衡的改变。这些改变导致复合物的生物活性的增强、降低或稳定。
[0023]优选地，这些改变可以导致复合物的解离，即在自由序列和结合序列之间建立的热力平衡朝着自由序列偏移。
[0024]根据另一个方面，本发明涉及一种嵌合肽，该嵌合肽包括与第二氨基酸序列融合的第一氨基酸序列，其中，第一氨基酸序列表示本发明的肽。
[0025]根据另一个方面，本发明涉及一种分离复合物，该分离复合物通过第一氨基酸序列和来自SASPase或其具有至少85%的序列同一性的同系物的第二氨基酸序列的相互作用而形成，其中，所述第一氨基酸序列表示本发明的肽，尤其是正如根据本发明的第一个主题所限定的肽。
[0026]为了本发明的目的，词语“来自于…的氨基酸序列”旨在表示考虑之中的蛋白质或肽的全部或部分，即整体或片段。
[0027]根据另一个方面，本发明涉及至少一种本发明的复合物用于筛选能够调节表皮细胞的增殖和/或分化的化合物的用途。
[0028]根据另一个方面，本发明涉及一种用于筛选能够调节表皮细胞的增殖和/或分化的化合物的方法，所述方法至少包括在下文中描述的步骤。
[0029]本发明的方法或用途可有利地在体内、间接体内或体外进行。
[0030]尤其，本发明的方法或用途可在间接体内或体外进行。
[0031]可有利地实施本发明的筛选方法，以便识别能够预防和/或治疗与表皮细胞的分化和/或增殖的功能紊乱关联的皮肤和/或其附属物的美学缺陷或病理紊乱的新的活性化合物。
[0032]为了本发明的目的，术语“预防”意思是降低出现所给现象(即在本发明中，与表皮细胞的分化和/或增殖的缺陷关联的皮肤和/或其附属物的美学缺陷或病理紊乱)的风险或可能性。
[0033]本发明有利地可提供新靶点，其用在化妆品行业或关于皮肤和/或其附属物的治疗中。
[0034]有利的是，本发明的肽对于进行筛选新的美容活性剂或皮肤病学活性剂的简单的、便宜的和灵敏的方法可以是特别有用的。
[0035]有利的是，本发明可以识别能够作用于调节表皮体内平衡的未知途径的新的活性剂，并且因此可以关于皮肤和/或其附属物的美容缺陷或病理紊乱提供更加精确的效果和更好的效力。
[0036]有利的是，本发明可以提供一种新颖的筛选工具，该工具对于检测在关于皮肤和/或其附属物的化妆品行业或治疗中有用的新的活性化合物是特别有效和灵敏的。
[0037]对于与表皮细胞的增殖和/或分化的缺陷关联的皮肤和/或其附属物的美学缺陷或病理紊乱，这些活性化合物可以是特别有效的。
[0038]有利的是，本发明的肽也可以用作化妆品活性剂。
[0039]肽
[0040]本发明的肽可以来自于或源于SASPase或FLG2的氨基酸序列，并且能够在适当的条件下改变由来自丝聚合蛋白-2的第一氨基酸序列和来自SASPase的第二氨基酸序列的相互作用而形成的复合物的三维构象。
[0041]这样的复合物可以由来自SASPase的第一氨基酸序列的全部或部分和来自FLG2的第二氨基酸序列或该第二序列的二聚物的全部或部分相互作用而形成。
[0042]适合于这样的复合物的SASPase或FLG2的氨基酸序列尤其可以由选自于以下的序列表示:由标号Q53RT3和Q5D862 (Uniprot/Swissprot标号)表示的序列、其片段、或其具有至少85%的序列同一性和相同性质的生物活性的同系物。
[0043]根据一个实施方式，本发明的肽能够通过亲和力与来自SASPase的氨基酸序列结合。尤其根据本发明所考虑的来自SASPase的氨基酸序列可以是由Q53RT3序列(Uniprot/Swissprot标号)所表示的氨基酸序列，优选地从该序列的位置85延伸至位置343的氨基酸序列。从Q53RT3序列的位置85延伸至位置343的氨基酸序列被推定表示包含259个氨基酸的SASPase的活性形式，提供的分子量大约为28kDa。[0044]本发明的肽可以来自于FLG2。尤其，适合于本发明的丝聚合蛋白_2可以是人类丝聚合蛋白-2,尤其是具有标号Q5D862 (Uniprot/Swissprot标号)所表示的氨基酸序列的丝聚合蛋白_2。该序列包括2391个氨基酸，具有大约为948kDa的分子量。
[0045]根据一个优选的实施方式变型，本发明涉及由序列SEQ ID N0.:9、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物所表示的氨基酸序列的分离肽。这样的肽能够通过亲和力与来自SASPase的氨基酸序列结合。
[0046]由SEQ ID N0.:9表不的氨基酸序列表不从丝聚合蛋白_2的标号Q5D862的序列的位置2延伸至位置95的氨基酸序列。
[0047]根据一个实施方式，本发明的肽尤其可以由来自序列SEQ ID N0.:9的3至50个连续的氨基酸、优选6至30个连续的氨基酸、优选8至20个连续的氨基酸、更优选8至16个连续的氨基酸、甚至10至16个连续的氨基酸而构成。
[0048]更优选的是，本发明的肽尤其可以由来自序列SEQ ID N0.:9的3至10个连续的氨基酸组成。更特别地，这样的肽可以适合于美容用途，例如用在局部施用或经皮施用的美容组合物中。
[0049]根据一个优选的实施方式变型，本发明的肽可以由选自以下的氨基酸序列表示:SEQ ID N0.:10、SEQ ID N0.:11、SEQ ID N0.:12、SEQ ID N0.:13、SEQ ID N0.:14、SEQ IDN0.: 15、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物。
[0050]这些肽能够通过亲和力与来自SASPase的氨基酸序列结合。
[0051]根据另一个实施方式，本发明的肽能够通过亲和力与来自FLG2的氨基酸序列结合。尤其根据本发明所考虑的来自FLG2的氨基酸序列可以是由Q5D862序列(UnipiOt/Swissprot标号)所表示的氨基酸序列，优选地从该序列的位置2延伸至位置213的氨基酸序列。
[0052]根据一个实施方式变型，本发明的肽能够与来自FLG2的氨基酸序列的二聚物结
口 ο
[0053]根据另一个实施方式，本发明的能够通过亲和力与来自FLG2的氨基酸序列结合的肽可以来自于SASPase。适合于本发明的SASPase或“皮肤天冬氨酸蛋白酶”可以是人类SASPase,尤其可以是具有由标号Q53RT3 (Uniprot/Swissprot标号)表示的氨基酸序列的SASPase0该序列包括343个氨基酸，具有大约为37kDa的分子量。
[0054]根据一个优选的实施方式变型，本发明涉及由SEQ ID N0.: 16、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物表示的氨基酸序列的分离肽。优选地，这样的肽能够通过亲和力与来自FLG2的氨基酸序列结合。
[0055]由SEQ ID N0.: 16表示的氨基酸序列表示从SASPase的Q53RT3序列(Uniprot/Swissprot标号)的位置97延伸至位置173的氨基酸序列。
[0056]根据一个实施方式,本发明的能够通过亲和力与来自SASPase的氨基酸序列结合的肽可以通过由选自SEQ ID N0.: 1、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物的序列表示的核酸序列编码。
[0057]优选地，本发明 的能够通过亲和力与来自SASPase的氨基酸序列结合的肽可以通过由 SEQ ID N0.:1、SEQ ID N0.:2、SEQ ID N0.:3、SEQ ID N0.:4、SEQ ID N0.:5、SEQ IDN0.:6、SEQ ID N0.:7、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物表示的核酸序列编码。
[0058]根据一个实施方式，本发明的能够通过亲和力与来自FLG2的氨基酸序列结合的肽可以通过由选自SEQ ID N0.:8、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物的序列表示的核酸序列编码。
[0059]根据本发明的一个方面，本发明也涉及编码本发明的肽的分离的核酸序列、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物，尤其如上文所限定。
[0060]本发明的核酸序列可以用于制备本发明的任何氨基酸序列，尤其用于制备如在下文中指出的嵌合肽。
[0061]适合于本发明的核酸序列可以具有任何可能的来源，即:动物、尤其哺乳类、甚至更特别的是人类；或者植物；或者来自于微生物，如病毒、噬菌体、细菌或真菌，而关于这些微生物是否天然地存在于所述的生物体中没有任何先入之见。
[0062]氨基酸序列或核酸序列的“同系物”这一术语意在表示与所述序列具有至少85%、尤其至少90%、尤其至少98%、更特别的至少99%的同一性并且具有相同性质的生物活性的序列。
[0063]可以由本领域的技术人员通过在本领域中任何通常用的技术来确定序列同源性。举例来说，可以通过 使用在NCBI网站(地址http://blast.ncb1.nlm.nih.gov)上可买到的配置有默认参数的BLAST计算机界面来确定序列同源性。
[0064]例如，氨基酸序列的同系物可以通过氨基酸的一个或多个缺失和/或嵌入、和/或一个或多个替换而区别于该序列。同样地，例如，核酸序列的同系物可以通过碱基或密码子的一个或多个缺失和/或嵌入、和/或一个或多个替换而区别于该序列。这些改变可被组
口 ο
[0065]根据一个实施方式变型，氨基酸序列或核酸序列的同系物可以包括一个或多个保守氨基酸替换或密码子替换。
[0066]在序列中，保守替换是:一个氨基酸被另一个氨基酸取代，所述另一个氨基酸具有与原氨基酸的物理化学性质基本上相似或充分接近的物理化学性质，使得蛋白质的或肽的性质和功能不受影响或基本上不受影响。同样地，在核酸序列中，保守替换是一个密码子被另一个密码子取代，所述另一个密码子编码的氨基酸与原氨基酸相同或具有与原氨基酸的物理化学性质基本上相似或充分接近的物理化学性质，核酸序列的性质和功能不受影响或基本上不受影响。
[0067]以上示出的氨基酸序列或核酸序列的改变一般可以称为“突变”。因此，本发明的同系物也涉及本发明的氨基酸序列或核酸序列的突变体和变型。
[0068]根据一个实施方式，来自于SASPase的氨基酸序列可以包括一个或多个突变。
[0069]关于可被考虑在本发明中的SASPase突变的例子，可以提到，一个或多个氨基酸残基由具有相似的亲水指数的氨基酸残基取代，而基本上不影响SASPase的生物性质，尤其不影响其与其配对肽相互作用的性质。亲水指数为根据氨基酸的疏水性和电荷指派给氨基酸的指数(Kyte&Doolittle，J.Mol.Biol.，1982，157:105)。
[0070]适合于本发明的氨基酸序列可以包括一个或多个翻译后修饰。
[0071]词语“翻译后修饰”意在包含氨基酸序列在细胞中合成结束时易于经受的所有的修饰，例如，一个或多个磷酸化、一个或多个糖基化、一个或多个瓜氨酸化、一个或多个脂化(如法尼基化或棕榈酰化)、或结构重排(如二硫键形成和/或在肽序列内的裂解)。
[0072]本发明的氨基酸序列的“相同性质的生物活性”这一词语尤其表示其通过亲和力与配对氨基酸序列结合的能力。核酸序列的“相同性质的生物活性”这一词语尤其表示其被转录和翻译成氨基酸序列的能力。
[0073]根据一个实施方式变型，关于SASPase，相同性质的生物活性也可以被理解为其蛋白水解活性，尤其关于角膜锁链蛋白的蛋白水解活性。
[0074]根据本发明的另一个实施方式变型，当使用SASPase的非活性突变体时，词语“相同性质的生物活性”主要表示突变体的通过亲和力与本发明的来自FLG2的氨基酸序列结合的性质。
[0075]因此，适合于本发明的SASPase氨基酸序列必定至少具有与FLG2氨基酸序列相互作用的性质。
[0076]关于来自FLG2的氨基酸序列，相同性质的生物活性也可以被理解为其促进和/或增强SASPase的蛋白水解活性的性质。
[0077]根据本发明的另一个变型，相同性质的生物活性也可以被理解为本发明的复合物关于表皮细胞的增殖和/或分化的生物活性。
[0078]为了本发明的目的，氨基酸序列的“片段”这一术语表示来自于该序列、由3至50个连续的氨基酸、优选6至30个连续的氨基酸、优选8至20个连续的氨基酸、更优选10至16个连续的氨基酸而构成 的任何部分，并且该部分具有与该氨基酸序列表达的性质相同性质的生物活性。
[0079]关于核酸序列，术语“片段”表示来自于该序列、由9至150个碱基、优选18至90个碱基，优选24至60个碱基、更优选30至48个碱基而构成的任何部分，并且该部分编码由该序列编码的氨基酸序列的片段。
[0080]根据一个实施方式，本发明的氨基酸序列可以是天然的或合成的氨基酸序列，在适当情况下，能够通过化学的或生物的合成、或通过从生物组织(如皮肤)中提取而获得，该生物组织自然地或转导后表达氨基酸序列以及其各种翻译后形式。
[0081 ] 本发明的肽也可以选自于模拟肽。本发明的模拟肽可以通过修饰本发明的氨基酸序列或通过合成模拟此类序列的化合物(如类肽或β_肽)而获得。所考虑的修饰可以基于将“非自然的”改变引入到氨基酸序列中，如主链的修饰或非天然氨基酸的结合。
[0082]本发明的主题还是一种嵌合肽，该嵌合肽包含与第二氨基酸序列、亲水的或疏水的靶向剂、生物能转换前驱体、和亲和标记物(例如，荧光标记物、冷光标记物、放射性标记物或比色标记物)融合或偶联的第一氨基酸序列。
[0083]以非限制的方式，作为可与本发明的氨基酸序列偶联的化合物的例子，可以提到:荧光蛋白(如绿色荧光蛋白)、荧光化合物(如罗丹明、荧光素或德克萨斯红)、磷光化合物、放射性元素(如3H、35S、99Tc、121I或1251)、或比色标记物(如对半乳糖苷酶、过氧化物酶、氯霉素乙酰转移酶、荧光素酶或碱性磷酸酶的作用敏感的显色底物)、或其他的亲和标记物(尤其 His-tag 型、GST 型或 MBP 型)。
[0084]根据可以与本发明的氨基酸序列偶联的化合物的性质，通过本领域的技术人员熟知的任何化学方法或任何分子生物学方法可以进行耦联。在分子生物学方法的情况下，提到融合肽或融合蛋白、或嵌合肽或嵌合蛋白。[0085] 因此，本发明的主题还是一种嵌合肽，该嵌合肽包括与第二氨基酸序列融合的第一氨基酸序列，其中，该第一氨基酸序列表示如先前所限定的本发明的肽。
[0086]根据一个实施方式，根据本发明的嵌合肽可以包括作为第二氨基酸序列的选自于突光蛋白、亲和标记物、信号肽和促渗透肽(propenetrating peptide)的序列,优选亲和标记物。
[0087]根据一个实施方式，本发明的嵌合肽的第一氨基酸序列可以是来自FLG2或来自SASPase、更优选地来自序列SEQ ID N0.:9或SEQ ID N0.: 16的氨基酸序列。
[0088]作为本发明的嵌合肽的优选的第二氨基酸序列，可以提到荧光蛋白，尤其是GFP(绿色荧光蛋白)、ECFP (增强型蓝绿色荧光蛋白)、DsRed2FP (DsRed荧光蛋白)、EGFP (增强型绿色荧光蛋白)、EYFP (增强型黄色荧光蛋白)JPEBFP (增强型蓝色荧光蛋白)。
[0089]作为适合于本发明的亲和标记物，尤其可以提到谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、硫氧还蛋白(THX)、Myc标记物、FLAF标记物、His标记物、或THX-Hi s-tag 或 THX-Hi s-S-tag 标记物。
[0090]通过本领域的技术人员熟知的任何分子生物方法，尤其如由Sambrook等描述的方法(Molecular Cloning:A laboratory Manual,Ed.Cold Spring Harbor,2001),可以获得本发明的嵌合肽。
[0091]根据本发明的另一个方面，本发明涉及一种分离复合物，该分离复合物通过第一氨基酸序列和来自SASPase或其具有至少85%的序列同一性的同系物的第二氨基酸序列的相互作用而形成，其中，所述第一氨基酸序列表示来自于FLG2的肽，优选正如在先前所限定的肽。
[0092]根据一个优选的实施方式变型，本发明的复合物的第二氨基酸序列可以表示来自于如先前所限定的SASPase的肽。
[0093]筛选
[0094]本发明涉及至少一种本发明的复合物用于筛选能够调节表皮细胞的增殖和/或分化的化合物的用途。
[0095]根据一个实施方式，本发明涉及一种用于筛选能够调节表皮细胞的增殖和/或分化的化合物的方法。
[0096]优选地，这样的化合物可以调节通过来自FLG2的第一氨基酸序列或该序列的二聚物与来自SASPase的第二氨基酸序列的相互作用而形成的复合物的三维构象。
[0097]更优选地，这样的化合物可以调节通过来自FLG2的第一氨基酸序列或该序列的二聚物与来自SASPase的第二氨基酸序列的相互作用而形成的复合物的形成。
[0098]有利的是，FLG2和SASPase的氨基酸序列可以是正如先前所限定的序列。
[0099]根据一个实施方式变型，在考虑之中的复合物可以是本发明的正如先前所限定的复合物。
[0100]本发明的方法可以至少包括在于以下的步骤:
[0101]a)在有利于本发明的复合物的形成的条件下，提供所述复合物，
[0102]b)在步骤a)之前或继步骤a)之后，将第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列与实体结合，第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列与所述实体形成能够在接触激发波长后发射信号的组合件，实施步骤a)和步骤b)引起获得所述复合物，[0103]c)使所述复合物经受所述激发波长，以便获得表示该复合物的特征的第一信号SI，
[0104]d)定量地或定性地确定该信号SI，
[0105]e)将该复合物与假定包含待筛选的化合物的介质接触，
[0106]f )使在步骤e)中获得的介质经受该激发波长，以便获得第二信号S2，
[0107]g)定量地或定性地确定该信号S2，和
[0108]h)比较第一信号SI和第二信号S2,以便得出关于在所筛选的化合物存在下,该复合物的三维构象可能改变的结论。
[0109]根据一个实施方式，适合于本发明的实体可以选自于适合于表面等离子体共振的载体、荧光标记物、抗体或一抗和二抗的组合，该抗体或该二抗带有荧光标记物。
[0110]本发明的第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列可以通过本领域的技术人员熟知的任何方法与实体结合，并且适应于必须与第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列组合的载体的性质。将自然地选择偶联方法，以便不影响所用氨基酸序列的结合性能或亲和性倉泛。
[0111]根据一个实施方式，通过化学耦联、分子生物学、或特异性强亲和相互作用可以进行第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列之间的结合。
[0112]尤其，通过化学耦联、尤其通过反应性化学官能团、或通过分子生物学方法可以进行结合。
[0113]当通过化学方法进行结合时，待反应的化学官能团可以天然地存在于第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列上，或者可以在化学反应之前被引入到第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列和实体上。
[0114]作为适合于本发明的反应性化学官能团的例子，例如，可以提到通常被用在“点击化学”反应中的反应性化学官能团。
[0115]作为适合于实体和第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列之间的结合的分子生物学方法的例子，可以提到通常用在克隆方法中的分子生物学方法，该克隆方法尤其包括:制备适当的核酸序列、使核酸序列连接并将其引入到合适的表达载体(如质粒)中、和将质粒转染至能够允许表达和生成本发明的嵌合肽的宿主细胞中。
[0116]根据另一个实施方式，实体和第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列可以通过一种或多种特异性强亲和相互作用而与彼此结合。
[0117]根据一个实施方式,尤其适合于本发明的实体可以是抗体或一组一抗和二抗。
[0118]适合于本发明的抗体可以通过本领域的技术人员熟知的任何方法，尤其是正如在“Antibodies:A Laboratory Manual，，，Cold Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor, N.Y.(1990)中描述的方法而获得。
[0119]关于适合于本发明的抗体的类型，可提到单克隆抗体或多克隆抗体、以及免疫球蛋白片段，该免疫球蛋白片段能够结合抗原，并且可通过本领域的技术人员熟知的任何基因工程技术或通过整个抗体的酶法裂解或化学裂解而生成。
[0120]更特别地，适合于本发明的抗体可以选自于单克隆抗体、多克隆抗体、双价抗体、scFv抗体、F(ab’)2抗体、Fab’抗体、嵌合抗体、人源化抗体、和重组抗体。
[0121]根据一个实施方式，适合于本发明的抗体可以对其所针对的第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列的一部分具有亲和力，或者对由第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列所携带的特定的亲和标记物具有亲和力。
[0122]根据本发明的一个实施方式，第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列可以携带由抗体识别的亲和标记物。
[0123]适合于本发明的亲和标记物可以尤其选自于先前指出的亲和标记物。
[0124]作为适合于本发明的抗体的例子，尤其可以提到用在下文中陈述的实施例中的抗体。[0125]根据另一个实施方式，第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列分别与第一实体和第二实体结合，所述实体分别包括荧光基团A和荧光基团B，该基团A和基团B限定了适合于通过荧光共振实现能量转移的荧光能量受体-供体配对。
[0126]作为可根据本发明使用的受体-供体配对的例子，以非限制的方式，可提到BFP(蓝色荧光蛋白)/GFP (绿色荧光蛋白)配对、CFP (蓝绿色荧光蛋白)/YFP (黄色荧光蛋白)配对、CFP/DsRed (红色荧光蛋白)配对、GFP/DsRed配对、和EuK (铕穴状化合物)/XL665配对所组成。优选地，适合于本发明的受体-供体配对可以是EuK/XL665。
[0127]根据一个实施方式变型，第一实体和第二实体可以是突光标记物。这样的突光标记物可以选自于通常在本领域中使用的荧光分子或荧光蛋白。优选地，所使用的荧光标记物可以选自于尤其是正如先前指出的通过分子生物学与第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列融合的荧光蛋白。
[0128]根据另一个实施方式变型，第一实体和第二实体可以是带有荧光标记物的抗体，并且可以能够与分别由第一氨基酸序列和/或第二氨基酸序列所携带的第一亲和标记物和第二亲和标记物分别结合。
[0129]根据一个实施方式，在根据本发明的方法的步骤d)中定量地或定性地测定的信号SI可以是通过在荧光能量供体的激发波长下进行的照射而获得的荧光信号。
[0130]在本方法的步骤g)中定量地或定性地测定的信号S2可以是通过在激发波长下对荧光能量供体照射而获得的荧光信号。
[0131]可以采用适合于本发明的且为本领域的技术人员所熟知的任何装置测量荧光信号SI和突光信号S2。作为适合于本发明的装置的例子,可提到酶标仪、突光显微镜、突光分光计或荧光扫描仪。
[0132]根据一个优选的实施方式，本发明的方法可以在微孔板中以高通量进行，荧光信号可以通过酶标仪(例如Pherastar酶标仪(BMG))测量。
[0133]在待筛选的化合物的存在下，信号S2明显高于信号SI可以指示提升本发明的复合物的三维构象的平衡性和稳定性的化合物。
[0134]优选地，这样的化合物可以促进第一氨基酸序列和第二氨基酸序列之间的相互作用，或者是第一氨基酸序列和第二氨基酸序列之间的相互作用的激动剂。
[0135]相反地，在待筛选的化合物的存在下，信号S2明显低于信号SI可以表示使本发明的复合物的三维构象不稳定或发生改变的化合物。
[0136]优选地，这样的化合物可以使第一氨基酸序列和第二氨基酸序列之间的相互作用不稳定，或者是第一氨基酸序列和第二氨基酸序列之间的相互作用的拮抗剂。
[0137]根据本发明的方法使得可以筛选调节表皮细胞的增殖和/或分化的试剂。[0138]为了本发明的目的，词语“调节化合物”意思是任何易于或能够直接地或间接地对包括来自FLG2的第一氨基酸序列或该序列的二聚物与来自SASPase的第二氨基酸序列的结合的复合物作用来调节该结合的三维构象的化合物。
[0139]根据本发明的一个实施方式，所筛选的化合物可以是该结合的激动剂或拮抗剂。
[0140]根据一个实施方式变型，调节化合物可以促进该结合或是该结合的激动剂。可替选地，根据另一个实施方式变型，调节化合物可以是使该结合不稳定的化合物，或是该结合的拮抗剂。
[0141]调节化合物关于该结合的激动剂性质或拮抗剂性质将更特定地根据对表皮细胞的增殖和/或分化待施加的调节作用而选择。
[0142]因此，根据待预防或治疗的皮肤和/或其附属物的美学缺陷或病理紊乱的性质，将更加特定地使用作为该结合的激动剂或拮抗剂的调节化合物。
[0143]根据本发明的一个优选的实施方式，所筛选的化合物能够预防和/或治疗与表皮细胞的分化和/或增殖的功能紊乱关联的皮肤和/或其附属物的美学缺陷或病理紊乱。
[0144]根据一个实施方式，本发明的筛选方法还可以包括至少一个额外的步骤，该步骤在于评估调节表皮细胞的分化和/或增殖的所筛选化合物的性能。
[0145]这样的评估可以在体外或间接体内、尤其在培养中的表皮细胞上而进行。该细胞可以是细胞系中的细胞，即，利用病毒转化的细胞，或肿瘤区域的细胞，以便使细胞不死。
[0146]或者，该细胞可以是原代培养细胞，即，取自于活的生物体组织的细胞(例如，来自于人类的表皮)。
[0147]优选地，培养中的细胞可以是成纤维细胞，甚至是角化细胞，尤其该细胞是分层的。可以根据本领域的技术人员熟知的任何方法准备细胞培养。
[0148]同样地，体外评估可以在重建的表皮模型上进行。这样的表皮模型可以是市场上可买到的(例如，Episkin模型)。
[0149]根据本发明的所筛选的化合物的体外或间接体内的评估可以通过本领域的技术人员熟知的任何方案而进行，目的在于将由测试化合物给出的效果与对照值或标准值进行比较。
[0150]在体外或间接体内，根据本发明的所筛选的化合物的效果可以通过测量与表皮细胞的分化和/或增殖有特定关系的已知的生物标记而被确定。
[0151]例如，这样的标记可以选自于测量角质层的厚度，测量角质层的屏障功能，测量谷氨酰胺转胺酶1、丝聚合蛋白、半胱天冬酶14、SASPase、角膜锁链蛋白、桥粒芯糖蛋白或Κ?67蛋白的表达和/或活化。
[0152]例如，这些标记可以根据本领域的技术人员熟知的任何方案，通过免疫印迹或免疫荧光而确定。
[0153]用途和组合物
[0154]本发明的所筛选的化合物、肽或核酸序列可以用于化妆品行业，作为用于预防和/或治疗与表皮细胞的分化和/或增殖的功能紊乱关联的皮肤和/或其附属物的美学缺陷的美容活性剂。
[0155]本发明的所筛选的化合物、肽或核酸序列可以用于制备用来预防和/或治疗与表皮细胞的分化和/或增殖的功能紊乱关联的皮肤和/或其附属物的病理紊乱的治疗组合物。
[0156]同样地，本发明涉及一种治疗组合物，该治疗组合物包括作为活性剂的本发明的用于预防和/或治疗与表皮细胞的分化和/或增殖的功能紊乱关联的皮肤和/或其附属物的病理紊乱的所筛选的化合物、肽或核酸序列。
[0157]本发明的所筛选的化合物、肽或核酸序列的美容的或治疗的应用取决于继表皮细胞的分化和/或增殖的功能紊乱之后由皮肤和/或其附属物表达出的病征的表现性质、甚至表现程度或表现强度。评定该表现性质或该表现强度，以及实施适当的应用，在本领域的技术人员的常识之内。
[0158]本发明的一个特定的实施方式涉及本发明的肽或编码这样的肽的核酸序列的作为用于预防和/或治疗与表皮细胞的分化和/或增殖的功能紊乱关联的皮肤和/或其附属物的美学缺陷的美容活性剂的美容用途。
[0159]本发明考虑的美学缺陷可选自于皮肤老化的体征、表皮屏障功能紊乱、皮肤干燥的体征、皮脂分泌过多的皮肤体征、皮肤肤色的改变、皮肤或头皮脱皮症、和愈合缺陷和/或再上皮化缺陷。
[0160]本发明考虑的美学缺陷也可以是多汗症和/或体臭问题。
[0161]根据另一个实施方式，本发明的肽或核酸序列也可以用于化妆品行业，作为用于在皮肤用力擦洗或去角质处理后促进再上皮化的活性剂。
[0162]根据另一个实施方式，根据本发明的肽或核酸序列也可以用于化妆品行业，作为用于预防和/或治疗脱发和/或促进头发恢复、或预防体毛再生长的活性剂。
[0163]根据一个实施方式，病理紊乱可以选自于癌症、牛皮癣、白癜风、酒糟鼻、特应性皮炎、脂溢性皮炎和痤疮。
[0164]根据一个实施方式，本发明的美容用途可以优选采用本发明的尤其正如先前限定的肽或编码这样的肽的核酸序列作为用于预防和/或治疗表皮老化和/或改善表皮屏障功能的美容活性剂，该肽来自于FLG2，并能够通过亲和力与来自SASPase的氨基酸序列结合。
[0165]根据一个实施方式，本发明的美容用途可以优选采用本发明的尤其正如先前限定的肽作为用于预防和/或治疗表皮老化和/或改善表皮屏障功能的美容活性剂，该肽来自于SASPase，并能够通过亲和力与来自丝聚合蛋白_2的氨基酸序列结合。
[0166]根据本发明的一个方面，本发明涉及美容组合物，该美容组合物在生理上可接受的介质中包括有效量的至少一种本发明的肽或有效量的编码这样的肽的核酸序列。
[0167]根据本发明的一个方面，本发明涉及美容组合物或治疗组合物，该组合物包括有效量的至少一种本发明的肽或编码此类肽的核酸序列作为用于治疗和/或预防与表皮细胞的增殖和/或分化的功能紊乱关联的皮肤和/或其附属物的美学缺陷或病理紊乱的活性剂。
[0168]为了本发明的目的，词语“有效量”意思是对于皮肤和/或其附属物的美学缺陷或病理紊乱施加预防效果和/或治疗效果所充分的且必需的活性剂的量。
[0169]这样的组合物可以口服给药、不经肠道给药、或局部给药。
[0170]这样的实施途径是本领域的技术人员熟知的。
[0171]根据本发明的另一个方面，本发明涉及包括至少一种编码本发明的肽的核酸序列的组合物。[0172]这样的组合物可专用于使得本发明的肽在细胞、生物组织或器官中表达。
[0173]这样的组合物可以用于美容的目的、治疗的目的、或诊断的目的。
[0174]根据另一个方面，本发明涉及用于预防和/或治疗个体中的与表皮细胞的分化和/或增殖的功能紊乱关联的皮肤和/或其附属物的美学缺陷的美容治疗方法，该方法包括至少一个向该个体给药有效量的作为活性剂的至少一种本发明的肽或核酸序列的步骤。
[0175]有利地，可以局部地、口服地、或不经肠道地实施此类方法，尤其是局部地或口服地。
[0176]不经肠道的途径尤其包括皮内途径和皮下途径。
[0177]根据另一个方面，本发明涉及有效量的至少一种本发明的肽、或至少一种本发明的核酸序列、或至少一种本发明的所筛选的化合物的用于制备和/或改进尤其是表皮的或粘膜的类型的多层细胞模型、特别是重建的皮肤模型的用途。
[0178]有利地，将本发明的肽或核酸序列、或本发明的所筛选的化合物加入到培养基中，多层培养模型在该培养基中培养。在本发明的氨基酸或核酸序列、或本发明的所筛选的化合物的存在下所进行的细胞模型培养步骤和培养时间由本领域的技术人员根据待获得的细胞模型和待获得的效果而被自然地调整。
[0179]为了本发明的目的，词语“重建的皮肤模型”表示一种模型，其中，各种细胞类型(如，尤其是自然存在于皮肤中的细胞，像角化细胞、成纤维细胞、朗格尔汉斯细胞和黑色素细胞)组合在该模型中。可以选择地照射成纤维细胞类型的细胞。
[0180]此类模型和其制备是本领域的技术人员所熟知的。
[0181]在以下的描述和实施例中，除非特别说明，百分比为质量百分比，以“在…至…之间”形式书写的值的范围包括规定的下限和上限。
[0182]在下面给出的实施例作为本发明的非限制性说明而被呈现。
【具体实施方式】
[0183]实施例
[0184]实施例1
[0185]SASPase-FLG2相互作用和识别该相互作用所涉及的肽域
[0186]采用野生形式的完整的28kDa的SASPase蛋白(SASPase_28，基因库标号gi 16553767)和在催化天冬氨酸下突变的形式的完整的28kDa的SASPase蛋白(SASPase_28D128A)、以及完整的37kDa的SASPase形式(SASPase_37，基因库标号gil89409121)、和对应于关于SASPase_28序列的蛋白质的84个氨基酸的N-末端的片段(SASPase_27N84)，进行利用“双杂交”技术的首次研究。
[0187]除了根据取向N-SASPase_28N84-LexA_C 与 LexA 域融合的 SASPase_28N84 序列以外，SASPase序列根据取向N_LexA_SASPase_C与DNA结合域LexA融合，以便保持SASPase的C-末端自由。
[0188]猎物(prey)序列与Gal4转录激活域融合。
[0189]野生型或突变的SASPase_28、SASPase_37和SASPase_28N84没有表现出双杂交系统的自激活。因此，利用SASPase_28序列或SASPase_37序列进行的筛选使得可以以非常好的置信分数来识别与丝聚合蛋白-2 (FLG2)的相互作用。[0190]采用识别为与SASPase_28序列和SASPase_37序列相互作用并且对应于基因库序列:g1:62122916的氨基酸2-213的丝聚合蛋白_2片段作为诱饵，发现了与SASPase的相互作用。
[0191]根据取向N-LexA-FLG22_213_C，序列与DNA结合域LexA融合。
[0192]猎物序列与Gal4转录激活域融合。
[0193]丝聚合蛋白-2的N-末端片段表现出双杂交系统的轻微的自激活，因此浓度为5mM的3-氨基三唑用于筛选。
[0194]筛选使得证实与SASPase相互作用。
[0195]进行了补充实验，以便降低和识别负责SASPase_28和丝聚合蛋白_2之间的该相互作用的序列的大小。
[0196]这些实验可以表明SASPase_28的N-末端片段(氨基酸11_86，SEQ ID N0.:16)对于与FLG2相互作用是充分的。
[0197]关于FLG2，这些补充实验表明，丝聚合蛋白_2的N-末端SlOO域(氨基酸2_95，SEQID N0.:9)参与与SASPase的相互作用。
[0198]实施例2
[0199]通过FLG2调节SASPase的蛋白水解活性
[0200]由从与硫氧还蛋白-His-S.Tag (THX-His-S-tag)亲和标记物融合的由标号Q5D862 (标号:Uniprot/Swissprot)表示的序列的位置2延伸至位置213的氨基酸所组成的重组丝聚合蛋白-2 (FLG2)制备在亲本质粒pET32c (Novagen)中(FLG22-213-硫氧还蛋白-His-S.Tag 或 FLG2-HS)。
[0201]按照由Bernard 等描述的方法(J.1nvest.Dermatol., 2005,125:278-287)制备由从标号Q53RT3 (Uniprot/Swissprot标号)所表示的序列的位置85延伸至位置343的氨基酸所组成的重组的28kDa的SASPase (SASPase_28)。
[0202]在0.01mM 的比色底物 Dabcyl-QIDRIMEK-Edans (ProductionJerini Peptide 标号 D17:JPT Peptide Technologies GmbH)存在下，0.025mg/mL 的 SASPase_28 存在于 PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液)中。
[0203]以SASPase 的最终浓度(0.025mg/mL)的 0.01 倍、0.02 倍、0.04 倍、0.08 倍、0.16倍、0.31 倍、0.63 倍、1.25 倍、2.5 倍、5 倍或 10 倍使用 FLG2_Hs。
[0204]通过活化的SASPase水解比色底物导致EDANS荧光染料和其减活化剂(或淬灭剂)Dabcyl的分离，并且导致EDANS荧光的增加。
[0205]在λ ex340nm/ λ em490nm 处测量荧光信号。在 37 °C 下，利用 SPECTRAMAX M5e(Molecular Devices),每10分钟读取突光，持续I小时30分钟。
[0206]所获得的结果表明，在浓度增大的FLG2-HS的存在下，SASPase的酶活性显著地增强。
[0207]利用从FLG2即SEQ ID N0.:9的位置71延伸至位置90的氨基酸序列，合成具有8至20个氨基酸的肽。
[0208]通过用如此制备的每个肽替代FLG2-HS，重复先前的酶学测定。
[0209]在被测试的肽中，由序列SEQ ID N0.: 10,SEQ ID N0.=IUSEQ ID N0.:12、SEQ IDN0.:13, SEQ ID N0.:14和SEQ ID N0.: 15表示的肽显示具有特别显著的增强SASPase的催化活性的能力。
[0210]实施例3
[0211 ] 筛选调节来自于FLG2的肽和SASPase之间的相互作用的试剂
[0212]根据本发明的方法可以采用均相时间分辨荧光(或HTRF)技术。
[0213]来自于SASPase的、在其C-末端处与GST (日本血吸虫的谷胱甘肽-S-转移酶)亲和标记物融合的氨基酸序列(SEQ ID N0.:16)制备在pGEX-4-T3载体中(基因库U13855)(SASPaseSEQ ID N0.:16-GST)。
[0214]如下制备来自于FLG2的、在其N末端处与硫氧还蛋白-His-S.Tag亲和标记物融合的氨基酸序列(SEQ ID N0.:9) (FLG2SEQIDN。.:9-His-Thx)。
[0215]所获得的质粒用于转化胜任的大肠杆菌。然后，在IPTG (异丙基硫代半乳糖苷)存在下，诱导该转化的细菌，然后离心，通过超声溶解。嵌合肽通过对在适当的树脂上的HIS标记物或GST标记物的亲和力而被提纯，然后用缓冲液透析。然后通过Bradford法分析所获得的嵌合肽。
[0216]分别识别GST亲和标记物或His-S.Tag亲和标记物并分别带有EuK荧光供体基团(铕穴状化合物 λ ex337nm/ λ em620nm)或 XL1665 荧光受体基团(λ ex570-630nm/ λ em665nm)的抗体用来监测肽-SASPase相互作用。
[0217]此类肽是市场上可买到的，例如，来自于Cisco公司的标号为61GSTKLB (抗-GSTK抗体)或6IHISKLB (抗-6HIS K抗体)的产品。
[0218]通过在EuK荧光标记物和XL1665荧光标记物之间的荧光能量转移(FRET)观测到SASPaseSEQ ID N0.:16_GST/FLG2seq ID N0.:9-His-THX 相互作用。EuK 荧光供体在 λ ex337nm 处被激发，来自于XL1665突光受体的突光发射在λ em665nm被测量。
[0219]独立于肽之间的相互作用之外发生的λ effl620nm的EuK荧光发射用来使信号标准化。
[0220]通过来自Perkin Elmer的Janus自动化设备，于pH为7.4的PBS磷酸盐缓冲液中，在384-孔板中进行筛选方法。
[0221]无待筛选的化合物的缓冲液或稀释溶液作为对照。
[0222]预培养SASPaseSEQ ID N0.:16_GST 和所测试的化合物，然后将 FLG2SEQ ID N0.:9_His-THX加入到培养介质中。
[0223]然后将对亲和标记物特异的抗体加入到该培养介质中。
[0224]在通过PHERASTAR 酶标仪(BMG)读取荧光(λ ex337nm/ λ em665nm,在 λ em620nm 处标准化)之前，将混合物留下来培养。
[0225]采用下面的公式计算结果:
[0226]Delta_F=100x [比例(100%)-比例(背景)]/ 比例(背景)
[0227]其中，“比例(100%)”表示在 SASPaseSEQ ID N0.:g-GST 和 FLG2SEQ ID N0.:4-His-THX 存在下突光抗体的突光λ em665/ λ em620的比例比例(背景)”表不在肽不存在下突光抗体的突光 λ em665/ λ em620 的比例 ο
[0228]在测试化合物(对照物在二甲亚砜(DMSO)中)存在下(“Delta_F分析”)或不存在下(“Delta_F 对照”)，确定 Delta_F。
[0229]然后采用下面的公式计算反映肽的相互作用的抑制百分比或活化百分比的“最终比例”:
[0230]最终比例=IOOx (061七&_卩分析-061七&_卩对照)/ (Delta_F对照)
[0231]该最终比例的降低表明存在能够预防或动摇SASPaseSEQ ID N0.:16-GST/FLG2seq ID N0.:9-Hi s-THX相互作用的化合物。
[0232]该最终比例的增大表明存在能够稳定或促进该相互作用的化合物。
[0233]对于识别能够正面地或负面地调节在来自于FLG2的肽和SASPase之间或在来自于FLG2的肽和来自于SASPase的肽之间的相互作用的活性化合物，本发明的筛选方案证明是特别有利的。
[0234]关于由表皮细胞的增殖和/或分化的缺陷造成的皮肤和/或其附属物的审美紊乱或病理紊乱，这些所筛选的活性化合物能够被有利地采用。
【权利要求】
1.一种分离的肽，所述分离肽由选自SEQ ID N0.:9、SEQ ID N0.:16、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物的氨基酸序列表示，并且能够改变由来自丝聚合蛋白-2的第一氨基酸序列和来自SASPase的第二氨基酸序列的相互作用而形成的复合物的三维构象。
2.根据权利要求1所述的肽，其中，所述肽由序列SEQID N0.:9、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物表示，并且能够通过亲和力与来自SASPase的所述第一氨基酸序列结合。
3.根据权利要求1或2所述的肽，其中，所述肽由来自序列SEQID N0.:9的3至50个连续的氨基酸、优选6至30个连续的氨基酸、优选8至20个连续的氨基酸、更优选10至16个连续的氨基酸构成。
4.根据前述权利要求中的任意一项所述的肽，其中，所述肽由选自SEQID N0.:10,SEQID N0.: 11、SEQ ID N0.: 12、SEQ ID N0.: 13、SEQ ID N0.: 14、SEQ ID N0.: 15、其片段、或其具有至少85%的序列同一'I"生的同系物的氨基酸序列表不。
5.根据前述权利要求中的任意一项所述的肽，其中，所述肽通过选自SEQID N0.:1、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物的序列所表示的核酸序列编码。
6.根据权利要求1所述的肽，其中，所述肽由序列SEQID N0.: 16、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物表示，并且能够通过亲和力与来自丝聚合蛋白-2的所述第二氨基酸序列结合。
7.根据前一项权利要求所述的肽，其中，所述肽通过由SEQID N0.:8、其片段、或其具有至少85%的序列同一性的同系物表示的核酸序列编码。
8.一种嵌合肽，包括与第二氨基酸序列融合的第一氨基酸序列，其中，所述第一氨基酸序列表示在权利要求1至7的任意一项中所限定的肽。
9.根据前一项权利要求所述的嵌合肽，其中，所述第二氨基酸序列选自于荧光蛋白、亲和标记物、信号肽和促渗透肽，优选为亲和标记物。
10.一种分离的复合物，该分离的复合物通过第一氨基酸序列和第二氨基酸序列相互作用形成，所述第二氨基酸序列来自SASPase或其具有至少85%的序列同一'I"生的同系物，其中，所述第一氨基酸序列表示在权利要求1至5、权利要求8或9中的任意一项中所限定的肽。
11.根据前一项权利要求所述的复合物，其中，所述第二氨基酸序列表示如在权利要求1和权利要求6至9的任意一项中所限定的来自SASPase的肽。
12.至少一种如在权利要求10或11中所限定的复合物用于筛选能够调节表皮细胞的增殖和/或分化的化合物的用途。
13.一种用于体外或间接体内地筛选能够调节表皮细胞的增殖和/或分化的化合物的方法，所述方法至少包括在于以下的步骤: a)在有利于权利要求10或11中所限定的复合物的形成的条件下，提供所述复合物； b)在步骤a)之前或继步骤a)之后，将所述第一氨基酸序列和/或所述第二氨基酸序列与实体结合，所述第一氨基酸序列和/或所述第二氨基酸序列与所述实体形成在接触激发波长后能 够发射信号的组合件，步骤a)和步骤b)的实施导致获得所述复合物， c)使所述复合物经受所述激发波长，以便获得表示所述复合物的特征的第一信号SI，d)定量地或定性地确定该信号S1， e)将所述复合物与假定含有待筛选的化合物的介质接触， f )使在步骤e)中获得的所述介质经受所述激发波长，以便获得第二信号S2， g)定量地或定性地确定所述信号S2，和 h)比较所述第一信号SI和所述第二信号S2，以便得出与在所筛选的化合物存在下所述复合物的三维构象的可能的改变相关的结论。
14.根据前一项权利要求所述的方法，其中，所述实体选自于适合于表面等离子体共振的载体、荧光标记物、抗体、或一抗和二抗的组合，所述抗体或所述二抗带有荧光标记物。
15.根据权利要求13或14所述的方法，其中，所述第一氨基酸序列和/或所述第二氨基酸序列通过化学耦联、分子生物学、或特异性强亲和相互作用与所述实体结合。
16.根据权利要求13至15中的任意一项所述的方法，其中，所述实体是抗体或一组一抗和二抗。
17.根据权利要求13至16中的任意一项所述的筛选方法，其中，所述第一氨基酸序列和所述第二氨基酸序列分别与第一实体和第二实体结合，所述第一实体和第二实体分别包括荧光基团A和荧光基团B，所述基团A和所述基团B限定适合于通过荧光共振实现能量转移的荧光能量受体-供体配对。
18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述信号SI和/或所述信号S2通过在所述荧光能量供体的激发波长下进行的照射而获得的荧光信号。
19.根据权利要求13至18中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述所筛选的化合物是所述第一氨基酸序列和所述第二氨基酸序列之间的相互作用的激动剂或拮抗剂。
20.根据权利要求13至19中的任意一项所述的方法，其特征在于，所述所筛选的化合物能够预防和/或治疗与表皮细胞的分化和/或增殖的功能紊乱关联的皮肤和/或其附属物的美学缺陷或病理紊乱。
21.权利要求1至9中的任意一项所限定的肽或编码这样的肽的核酸序列作为用于预防和/或治疗与表皮细胞的分化和/或增殖的功能紊乱关联的皮肤和/或其附属物的美学缺陷的美容活性剂的美容用途。
22.根据权利要求21所述的用途，其中，所述肽如在权利要求1至5和权利要求8至9中的任意一项所限定，并且能够通过亲和力与来自SASPase的氨基酸序列或编码这样的肽的核酸序列结合，且作为用于预防和/或治疗表皮老化和/或改善表皮屏障功能的美容活性剂。
23.根据权利要求21所述的用途，其中，所述肽如在权利要求6至9中的任意一项所限定，并且能够通过亲和力与来自丝聚合蛋白-2的氨基酸序列结合，作为用于预防和/或治疗表皮老化和/或改善表皮屏障功能的美容活性剂。
24.一种美容组合物，包括在生理上可接受的介质中的有效量的至少一种如在权利要求I至9中的任意一项所限定的肽或有效量的编码这样的肽的核酸序列。
25.一种组合物，包括至少一种编码权利要求1至9中的任意一项所限定的肽的核酸序列。
【文档编号】C07K14/47GK103596969SQ201180067024
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2011年12月5日 优先权日:2010年12月7日
【发明者】D·伯纳德, A·托马斯-克里基努恩 申请人:欧莱雅