专利名称：透骨草中芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分离工艺的制作方法
技术领域：
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及透骨草中芹菜素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分离工艺。
背景技术：
透骨草(Phrymaleptostachya L. var. asiatica Hara)又称老婆子针线、接生草等，属于透骨草科(Phrymaceae)透骨草属(Phryma)多年生草本植物,生长于山坡、林下、 路旁、沟岸及草地的阴湿处。透骨草味苦、归心经。我国很多地区都有分布。透骨草全草均可药用，具有清热利湿、活血消肿、催产等功效，能治跌打损伤、湿疹、骨折、黄水疮等疾病。目前，药典并没有收录有关透骨草科透骨草属透骨草的相关记载，但是民间常用它来治疗“风湿痹痛”等疾病。透骨草富含丰富的木脂素类化合物。日本学者Eiji Tan-iguchi 和Yasuyoshi Oshima先后从北美透骨草根中分离得到了透骨草灵-I (phrymalin-I)、透骨草灵 _Π (phrymalin-II)和乙酸透骨草脂素(leptostachyol acetate)。随后，Eiji Taniguchi和Fumito Ishibashi合成了透骨草灵-I和透骨草灵-II及其立体异构体。Eiji Taniquchi和Fumito Ishibashi等人还从北美透骨草根中分离得到倍半木脂素haedoxao
A,并对haedoxan A进行了合成,但该合成的方法包括20个反应步骤,且反应条件苛刻,合成效率低。韩国学者SangMyung Zee等从北美透骨草干燥地上部分的乙酸乙酯提取物中分离出了透骨草灵-II和熊果酸；此外，韩国学者IL-kwon park等从亚洲透骨草干燥根的氯仿提取液中分离得到乙酰透骨草脂素和去甲氧基乙酰透骨草脂素。从透骨草中分离得到的化合物，除熊果酸为三萜类化合物外，其余均为木脂素类化合物。
发明内容
I、透骨草中芹菜素-7-0-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分离工艺，其特征在于该工艺包括以下过程步骤(I):称取透骨草干燥粗粉4. 1kg，加入以粗粉10倍量的60%乙醇浸泡过夜后，超声提取30min-35min，超声温度为30°C -32°C，超声功率为80W，超声提取三次，合并提取液并减压浓缩，浓缩液置于4°C冰箱中48h-60h，抽滤，得到除去部分色素沉淀的浓缩液；步骤(2):将步骤(I)中的浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇等溶剂各萃取三次，每个萃取部分浓缩至稠膏状浸膏，回收溶剂，由此得到正丁醇提取物45g ；步骤(3):将步骤⑵中正丁醇提取物45g溶于200ml氯仿中，拌以IOOg 100 200目硅胶，挥干溶剂，选用450gl00 200目硅胶用氯仿拌匀，湿法装柱，干法上样；步骤⑷采用不同梯度氯仿-甲醇=45 I 氯仿-甲醇=I I对步骤(3) 中的正丁醇提取物进行洗脱层析，以每50ml洗脱液收集一瓶，用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，浓缩至小体积，再经反复纯化得到化合物42mg ；步骤(5):结合光谱分析鉴定(4)中化合物结构为芹菜素-7-0- β -D-吡喃葡萄糖
3醛酸苷。根据本发明，本发明中的“ ％ ”是重量百分比。
具体实施例方式本发明所述的透骨草中芹菜素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分离工艺包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例I :I、透骨草中芹菜素-7-0-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分离工艺，其特征在于该工艺包括以下过程步骤⑴称取透骨草干燥粗粉4. 1kg，加入以粗粉10倍量的60%乙醇浸泡过夜后，超声提取30min，超声温度为30°C，超声功率为80W，超声提取三次，合并提取液并减压浓缩，浓缩液置于4°C冰箱中48h，抽滤，得到除去部分色素沉淀的浓缩液；步骤(2):将步骤(I)中的浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇等溶剂各萃取三次，每个萃取部分浓缩至稠膏状浸膏，回收溶剂，由此得到正丁醇提取物45g ；步骤⑶将步骤⑵中正丁醇提取物45g溶于200ml氯仿中，拌以IOOg 100 200目硅胶，挥干溶剂，选用450gl00 200目硅胶用氯仿拌匀，湿法装柱，干法上样；步骤(4):采用不同梯度氯仿-甲醇=45 I 氯仿-甲醇=I I对步骤(3) 中的正丁醇提取物进行洗脱层析，以每50ml洗脱液收集一瓶，用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，浓缩至小体积，再经反复纯化得到化合物42mg ；步骤(5):结合光谱分析鉴定(4)中化合物结构为芹菜素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖
醛酸苷。实施例2:I、透骨草中芹菜素-7-0-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分离工艺，其特征在于该工艺包括以下过程步骤(I):称取透骨草干燥粗粉4. 1kg，加入以粗粉10倍量的60%乙醇浸泡过夜后，超声提取35min，超声温度为32°C，超声功率为80W，超声提取三次，合并提取液并减压浓缩，浓缩液置于4°C冰箱中60h，抽滤，得到除去部分色素沉淀的浓缩液；步骤(2):将步骤(I)中的浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇等溶剂各萃取三次，每个萃取部分浓缩至稠膏状浸膏，回收溶剂，由此得到正丁醇提取物45g ；步骤⑶将步骤⑵中正丁醇提取物45g溶于200ml氯仿中，拌以IOOg 100 200目硅胶，挥干溶剂，选用450gl00 200目硅胶用氯仿拌匀，湿法装柱，干法上样；步骤(4):采用不同梯度氯仿-甲醇=45 I 氯仿-甲醇=I I对步骤(3) 中的正丁醇提取物进行洗脱层析，以每50ml洗脱液收集一瓶，用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，浓缩至小体积，再经反复纯化得到化合物42mg ；步骤(5):结合光谱分析鉴定⑷中化合物结构为芹菜素-7-0- β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷。化合物的结构鉴定黄色无定形粉末，溶于热甲醇、热水、热乙醇。盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阳性，三氯化铁-铁氰化钾反应显蓝色，提示该化合物为黄酮苷化合物。茴香醛-硫酸喷雾显黄色(105°C )。用2%的硫酸水解，薄层检识到葡萄糖醛酸的存在。
1H-NMR 在芳香区有 7 个氢质子信号δ7. 95(2H，d，J = 8. 3Hz，H-2S6,)和 δ6.94(2Η，d，J = 8. 3Hz，H-3' ,51 )分别是二氢双峰，偶合常数J = 8. 3Hz，说明黄酮苷元 B 环为 AA' BB'系统；δ 6. 83(1H，br. s，H-8)和 δ 6. 44(1H，br. s，H-6)分别有一个单氢宽单峰，为A环间位偶合的两氢质子；δ 6. 85 (1Η，s，Η-3)处有一尖锐单氢单峰，为黄酮苷元3位氢质子信号峰；低场区的δ 12. 97(lH,br. s)是黄酮5_0H的特征信号峰，说明7位有含氧取代基；δ 10 12 (1Η，br. s)是黄酮4-0H的特征信号峰。δ 5. 16 (1Η，d，J = 7. IHz, H-I ")处为葡萄糖醛酸端基氢信号峰，由其偶合常数J = 7. IHz得知其苷键为β构型。另外在δ3. 2 δ 3. 8处有4个糖上质子信号。13C-NMR 给出了 21 个碳信号，其中 δ 170.9(06 " )、δ 99. 4(C~1 ")、 5 76. 0(C-5/7 )、S74.5(C-3" )、S72.8(C_2" )、δ71·6(04")为一组葡萄糖醛酸基信号峰。另外还有15个黄酮苷兀的碳信号,其中δ99.5和δ 94. 6分别是5, 7-二氧代黄酮A 环上6、8位碳的特征信号峰；δ 181. 9为黄酮类化合物4位C = O的特征信号峰；δ 164. 2 和δ 102. 9分别为黄酮类化合物C-2和C-3的特征信号峰；δ 128. 5和δ 115. 9分别为黄酮类化合物B环上AA' BB'系统中的C-2' ,6'、C_3'，5'的特征信号峰；δ 162. 7说明黄酮类化合物C-7与葡萄糖醛酸相连形成氧苷。由NMR谱对数据进行了归属。经查阅文献与其波谱数据基本一致。与对照品对照展距、显色均一致且混合熔点不下降。根据以上解析推定此化合物结构为芹菜素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷。
权利要求
1.透骨草中芹菜素-7-0-β -D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分离工艺，其特征在于该工艺包括以下过程步骤(I):称取透骨草干燥粗粉4. 1kg，加入以粗粉10倍量的60%乙醇浸泡过夜后，超声提取30min-35min，超声温度为30°C _32°C，超声功率为80W，超声提取三次，合并提取液并减压浓缩，浓缩液置于4°C冰箱中48h-60h，抽滤，得到除去部分色素沉淀的浓缩液；步骤(2):将步骤(I)中的浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇等溶剂各萃取三次，每个萃取部分浓缩至稠膏状浸膏，回收溶剂，由此得到正丁醇提取物45g ；步骤⑶将步骤⑵中正丁醇提取物45g溶于200ml氯仿中，拌以IOOg 100 200目硅胶，挥干溶剂，选用450gl00 200目硅胶用氯仿拌匀，湿法装柱，干法上样；步骤(4):采用不同梯度氯仿-甲醇=45 I 氯仿-甲醇=I I对步骤(3)中的正丁醇提取物进行洗脱层析，以每50ml洗脱液收集一瓶，用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，浓缩至小体积，再经反复纯化得到化合物42mg ；步骤(5):结合光谱分析鉴定(4)中化合物结构为芹菜素-7-0-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷。
全文摘要
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及透骨草中芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷的提取分离工艺。称取透骨草干燥粗粉，加入以粗粉10倍量的60％乙醇浸泡过夜后，超声提取三次，合并提取液并减压浓缩，将浓缩液分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇等溶剂各萃取三次，由此得到正丁醇提取物并进行硅胶柱层析，采用不同梯度氯仿-甲醇＝45∶1～氯仿-甲醇＝1∶1对正丁醇提取物进行洗脱；用薄层色谱TLC检测，合并相同组分，浓缩至小体积，再经反复纯化得到化合物；结合光谱分析鉴定其结构为芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷。本发明的目的是为满足生产和科研上的需求量，提高收率，降低成本。
文档编号C07H17/07GK102603833SQ20121000987
公开日2012年7月25日 申请日期2012年1月1日 优先权日2012年1月1日
发明者侯欣池, 关键, 张崇禧, 张成城, 郑友兰 申请人:山东大学威海分校