专利名称：一种制备高纯度多足蕨苷a的方法
技术领域：
本发明属于天然物质的提取技术领域，涉及ー种制备高纯度多足蕨苷A的方法。
背景技术：
多足蕨苷A (Polypodoside A)分子式为C45H72O17,分子量为885. 05，CAS登录号为119784-25-7,是从水龙骨科(Polypodiaceae)植物甜根多足蕨a glycyrrhizaDC. Eaton根莖及多足蕨/ か/vulgare L.根莖中分离得到的ー种甾体阜苷,可作为甜味剂，其甜度为6% (w/v)鹿糖溶液的600倍。具有安全无毒、低热、性能稳定等特点，作为食品可避免人体摄取过多高热量的蔗糖等糖类甜味剂产生 肥胖症、糖尿病等不良后果。经检索，尚未发现有关多足蕨苷A的提取エ艺报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备高纯度多足蕨苷A的方法。为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案
一种制备高纯度多足蕨苷A的方法，其特征在于包括以下步骤
(O提取取原料加水提取2-3次，每次加水量为原料质量的5-8倍，提取时间为1-2小时；将提取液浓缩至原体积的1/3-1/8，将浓缩液用酸调pH至3-4，加入果胶酶或纤维素酶，加入量为原料质量的2-5%。，灭酶，过滤得上柱液；
(2)大孔树脂富集将上柱液进大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至流出液无色透明，再依次用20%、50%和75%こ醇洗脱，将75%こ醇洗脱液浓缩至浸膏，干燥得总皂苷提取物；
(3)混和柱层析将总皂苷提取物用无水こ醇溶解，与适量硅胶混合，再取新硅胶和酸性氧化铝混合装柱，拌样硅胶置于其上，先用氯仿-甲醇-水(9:1:0. 05)混合溶剂除杂，再用氯仿-甲醇-水(7:3:0. 15)的混合溶剂洗脱，收集洗脱液；
(4)结晶将上述洗脱液浓缩至干，50-80%甲醇重结晶即得纯品。步骤(2)中大孔树脂柱层析为DlOl型或D4020型。步骤(3)中硅胶和酸性氧化铝混合柱层析中，硅胶与酸性氧化铝的用量比为8:2，柱径高比为1:5-20。本发明的优点在于采用酶解法除去影响过滤的杂质，解决了难过滤、易堵塞的问题，纯化了进大孔吸附树脂的料液；用硅胶和酸性氧化铝混合柱层析，分离效率高，可提高
产品纯度。下面将结合具体实施方式
进ー步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例I :
将多足蕨原料粉碎称取2kg投入提取罐中，用水于微沸状态提取2次，毎次加水10L，提取时间分别为2h、lh，过滤，浓缩至3. 5L，将浓缩液冷却至40-45で，开通蒸汽保持温度在此范围内，加入酒石酸调节PH3. I，再加入原料质量3%。的纤维素酶，酶解lh，升温至95°C灭酶，再降温至40-45°C，抽滤，得滤液即上柱液。将上柱液通过D4020大孔吸附树脂柱，吸附结束后，先用去离子水洗脱至流出液无色透明，再依次用20%、50%和75%こ醇洗脱，将75%こ醇洗脱液浓缩至浸膏，干燥得总皂苷提取物。提取物用无水こ醇溶解，与其2倍质量的硅胶混合拌匀，再将新硅胶和酸性氧化铝按重量比8:2混合装柱，拌样硅胶装于其上，先用氯仿-甲醇-水(9:1:0. 05)混合溶剂除杂，再用氯仿-甲醇-水(7:3:0. 15)的混合溶剂洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，80%甲醇重结晶，真空干燥得多足蕨苷A，收率为57. 6%，纯度达
98.2%。实施例2:
将甜根多足蕨原料粉碎称取2kg投入提取罐中，用水于微沸状态提取3次，毎次加水14L，提取时间分别为2し1.511、111，过滤，浓缩至7し将浓缩液冷却至40-45で，开通蒸汽保持温度在此范围内，加入酒石酸调节PH3. 7，再加入原料质量5%。的果胶酶，酶解lh，升温至95°C灭酶，再降温至40-45°C，抽滤，得滤液即上柱液。将上柱液通过DlOl大孔吸附树脂柱，吸附结束后，先用去离子水洗脱至流出液无色透明，再依次用20%、50%和75%こ醇洗脱，将75%こ醇洗脱液浓缩至浸膏，干燥得总皂苷提取物。提取物用无水こ醇溶解，与其2倍质量的硅胶混合拌匀，再将新硅胶和酸性氧化铝按重量比8:2混合装柱，拌样硅胶装于其上，先用氯仿-甲醇-水(9:1:0. 05 )混合溶剂除杂，再用氯仿-甲醇-水(7:3:0. 15 )的混合溶剂洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，70%甲醇重结晶，真空干燥得多足蕨苷A，收率为54. 7%，纯度达 98. 6%ο实施例3:
将多足蕨原料粉碎称取2kg投入提取罐中，用水于微沸状态提取3次，毎次加水16L，提取时间分别为I. 5h、lh、lh，过滤，浓缩至6L，将浓缩液冷却至40-45°C，开通蒸汽保持温度在此范围内，加入酒石酸调节PH4. O,再加入原料质量2%。的纤维素酶，酶解lh，升温至95°C灭酶，再降温至40-45°C，抽滤，得滤液即上柱液。将上柱液通过D4020大孔吸附树脂柱，吸附结束后，先用去离子水洗脱至流出液无色透明，再依次用20%、50%和75%こ醇洗脱，将75%こ醇洗脱液浓缩至浸膏，干燥得总皂苷提取物。提取物用无水こ醇溶解，与其2倍质量的硅胶混合拌匀，再将新硅胶和酸性氧化铝按重量比8:2混合装柱，拌样硅胶装于其上，先用氯仿-甲醇-水(9:1:0. 05 )混合溶剂除杂，再用氯仿-甲醇-水(7:3:0. 15 )的混合溶剂洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，50%甲醇重结晶，真空干燥得多足蕨苷A，收率为51.8%，纯度达
99.2%。实施例4:
将甜根多足蕨原料粉碎称取2kg投入提取罐中，用水于微沸状态提取2次，毎次加水12L，提取时间分别为I. 5h、lh,过滤，浓缩至8L，将浓缩液冷却至40-45°C，开通蒸汽保持温度在此范围内，加入酒石酸调节pH3. 8，再加入原料质量4%。的果胶酶，酶解lh，升温至95°C 灭酶，再降温至40-45°C，抽滤，得滤液即上柱液。将上柱液通过DlOl大孔吸附树脂柱，吸附结束后，先用去离子水洗脱至流出液无色透明，再依次用20%、50%和75%こ醇洗脱，将75%こ醇洗脱液浓缩至浸膏，干燥得总皂苷提取物。提取物用无水こ醇溶解，与其2倍质量的硅胶混合拌匀，再将新硅胶和酸性氧化铝按重量比8:2混合装柱，拌样硅胶装于其上，先用氯仿-甲醇-水(9:1:0. 05)混合溶剂除杂，再用氯仿-甲醇-水(7:3:0. 15)的混合溶剂洗脱，收集洗脱液，浓缩 干燥，60%甲醇重结晶，真空干燥得多足蕨苷A，收率为52. 6%，纯度达98. 4%。
权利要求
1.一种制备高纯度多足蕨苷A的方法，其特征在于包括以下步骤 (1)提取取原料加水提取2-3次，每次加水量为原料质量的5-8倍，提取时间为1-2小时；将提取液浓缩至原体积的1/3-1/8，将浓缩液用酸调pH至3-4，加入果胶酶或纤维素酶，加入量为原料质量的2-5%。，灭酶，过滤得上柱液； (2)大孔树脂富集将上柱液进大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至流出液无色透明，再依次用20%、50%和75%乙醇洗脱，将75%乙醇洗脱液浓缩至浸膏，干燥得总皂苷提取物； (3)混和柱层析将总皂苷提取物用无水乙醇溶解，与适量硅胶混合，再取新硅胶和酸性氧化铝混合装柱，拌样硅胶置于其上，先用氯仿-甲醇-水(9:1:0. 05)混合溶剂除杂，再用氯仿-甲醇-水(7:3:0. 15)的混合溶剂洗脱，收集洗脱液； (4)结晶将上述洗脱液浓缩至干，50-80%甲醇重结晶即得纯品。
2.如权利要求I所述的一种制备高纯度多足蕨苷A的方法，其特征在于，步骤(2)中大孔树脂柱层析为DlOl型或D4020型。
3.如权利要求I所述的一种制备高纯度多足蕨苷A的方法，其特征在于，步骤(3)中硅胶和酸性氧化铝混合柱层析中，硅胶与酸性氧化铝的用量比为8:2，柱径高比为1:5-20。
全文摘要
本发明公开了一种制备高纯度多足蕨苷A的方法，以多足蕨和甜根多足蕨的根茎为原料，经水提取→酶解→大孔吸附树脂富集→浓缩干燥→硅胶-氧化铝混合柱层析→结晶→干燥获得多足蕨苷A。本发明方法适合工业化生产、产品纯度高。
文档编号C07J17/00GK102659893SQ20121011893
公开日2012年9月12日 申请日期2012年4月23日 优先权日2012年4月23日
发明者刘东锋, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司