治疗多发性骨髓瘤相关障碍的抗icam-1抗体的制作方法
【专利摘要】本发明涉及对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，或对ICAM-1具有结合特异性的所述抗体或抗原结合片段的变体、融合体或衍生物用于治疗多发性骨髓瘤相关障碍的用途。本发明还涉及给予这些抗体、其片段、变体、融合体和衍生物的方法。
【专利说明】治疗多发性骨髓瘤相关障碍的抗ICAM-1抗体
【技术领域】
[0001] 本发明涉及对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，或对ICAM-1具有结合特异性的所述抗体或抗原结合片段的变体、融合体或衍生物用于治疗多发性骨髓瘤相关障碍的用途。本发明还涉及给予这些抗体、其片段、变体、融合体和衍生物的方法。
[0002]多发性骨髓瘤(也称为骨髓瘤或MM)是B细胞的恶性肿瘤并占总的血液恶性肿瘤的10%至20%。目前，其是一种不能治愈的疾病，诊断时的中位数年龄为65-70岁，诊断的极少数患者在40岁以下。在美国，预期在2008年有19，920例多发性骨髓瘤的新病例和超过10，000例死亡是骨髓瘤相关的(American Cancer Society, 2008)。该疾病具有轻微的男性优势，并且发现在非裔美国人中更频繁，而在亚洲人群体中不那么普遍(Kyle&Rajkumar, Blood.2008Marl5 ；111 (6):2962-72.综述)。
[0003]已知许多障碍与多发性骨髓瘤相关(在其临床表现及其分子和生理基础方面)，但是其是可以与多发性骨髓瘤区分的不同障碍。例如，像由克隆浆细胞障碍引起或其特征为克隆浆细胞障碍的许多这样的相关障碍的多发性骨髓瘤，和患有这样的障碍的患者可以显示已知在多发性骨髓瘤中出现的一种或多种症状。因此这样的相关障碍可以独立地由多发性骨髓瘤引起，或可以与多发性骨髓瘤同时存在(并在多发性骨髓瘤形成之前或之后形成)。因此，患者可以与多发性骨髓瘤同时或与多发性骨髓瘤无关地患有这样的多发性骨髓瘤相关障碍。
[0004]三种这样的多发性骨髓瘤相关障碍为浆细胞瘤(PC);浆细胞白血病(PCL);和轻链淀粉样变性(AL)。目前对多发性骨髓瘤没有真正有效的治疗，因此，任何目前的多发性骨髓瘤治疗也不提供对多发性骨髓瘤相关障碍如PC、PCL和AL的有效治疗。实际上，目前的对多发性骨髓瘤相关障碍的治疗依赖于仅治疗障碍的症状(例如，使用止痛剂)，而不治疗多发性骨髓瘤相关障碍本身。
[0005]本发明提供了用于治疗多发性骨髓瘤相关障碍的方法。
[0006]在第一个方面中，本发明提供了:
[0007]一种对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，或对ICAM-1具有结合特异性的所述抗体或抗原结合片段的变体、融合体或衍生物，或其所述变体或衍生物的融合体，其用于治疗多发性骨髓瘤相关障碍，所述治疗包括给予需要其的患者有效量的抗体、其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物以治疗多发性骨髓瘤相关障碍的步骤。
[0008]在第二个方面中，本发明提供了:
[0009]一种对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，或对ICAM-1具有结合特异性的所述抗体或抗原结合片段的变体、融合体或衍生物，或其所述变体或衍生物的融合体在制备用于治疗多发性骨髓瘤相关障碍的药物中的用途，所述治疗包括给予需要其的患者有效量的抗体、其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物以治疗多发性骨髓瘤相关障碍的步骤。
[0010]在第三个方面中，本发明提供了:
[0011]一种用于治疗患者中的多发性骨髓瘤相关障碍的方法，所述方法包括给予需要其的患者有效量的以下物质的步骤:
[0012]对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，
[0013]或对ICAM-1具有结合特异性的所述抗体或抗原结合片段的变体、融合体或衍生物，或其所述变体或衍生物的融合体，
[0014]其中所述抗体、其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物的量对治疗多发性骨髓瘤相关障碍是有效的。
[0015]ICAM-1在恶性和非恶性细胞上高度表达并且通常作为二聚体存在于细胞表面上。认为ICAM-1涉及细胞粘附到骨髓间质，并且认为在恶性细胞中与耐药性的形成、血管生成和逃逸免疫监视相关。[0016]W02007/068485涉及能够结合在细胞表面上的ICAM-1并且诱导细胞死亡的抗体(例如，通过诱导ADCC或细胞凋亡)。
[0017]如在所附实施例中所讨论的，本发明人现在惊讶地发现存在于患有多发性骨髓瘤相关疾病的患者中的浆细胞表达ICAM-1。该意外的发现导致本发明的发展，其涉及使用对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段治疗患者中的多发性骨髓瘤相关障碍。
[0018]如本领域技术人员将理解的，使用抗体治疗可以提供在其靶向癌细胞并且避开周围组织的能力内具有低毒性的治疗优势。利用生理机制如自然杀伤(NK)细胞介导的细胞死亡或直接诱导细胞凋亡而不是肿瘤细胞坏死，耐受性可以反映免疫球蛋白的动力作用。
[0019]由于非癌性(即健康的)浆细胞还表达ICAM-1，靶向该分子也将降低非癌性浆细胞在个体中的数量。这样的细胞可以再次由天然B细胞产生，所述天然B细胞成熟和分化以代替已经被破坏的任何健康浆细胞。相反地，用于治疗多发性骨髓瘤的许多其他方法(如利妥昔单抗)杀死所有的CD20+细胞，导致个体中使健康浆细胞再生所需的天然B细胞的杀死。
[0020]因此，本发明提供了具有最小副反应的治疗，因此提供了治疗患有多发性骨髓瘤相关障碍的个体的实用方式。
[0021]对于“多发性骨髓瘤相关障碍”，我们包括在其临床表现及其分子和生理基础方面与多发性骨髓瘤相关的障碍，但是其是可以与多发性骨髓瘤不同并且可以与其区分的障碍。例如，多发性骨髓瘤相关障碍可以由克隆浆细胞障碍引起，或其特征为克隆浆细胞障碍，并且患有这样的障碍的患者可以显示已知在多发性骨髓瘤中出现的一种或多种症状。多发性骨髓瘤相关障碍可以独立地由多发性骨髓瘤引起，或可以与多发性骨髓瘤同时存在(并在多发性骨髓瘤形成之前或之后形成)。因此，患者可以与多发性骨髓瘤同时或与多发性骨髓瘤无关地患有这样的多发性骨髓瘤相关障碍。
[0022]如医药和肿瘤学领域的技术人员所熟知的，多发性骨髓瘤是源自转化的浆细胞的恶性克隆疾病。疾病的明显特征是恶性细胞分泌IgG-或IgA-型(少见IgD或IgE)，或仅有轻链(K或λ )，或两者形式的单克隆免疫球蛋白(Ig)。然而，单克隆免疫球蛋白(血液或尿液中)的发现不是强制性的，并在小百分比的病例中，骨髓瘤被分类为“非分泌的”。
[0023]近年来，在理解多发性骨髓瘤的发病机理和分子机制方面已经取得了实质性的进步。基因研究已显示通常带有预后相关性的大量不同的染色体变化的出现与该疾病相关。简言之，这些染色体易位通常涉及免疫球蛋白(Ig)H基因座(14q32.3)，并且使多种转化基因与Ig增强子促进的片段并列，导致异常调节表达和潜在的恶性转化(Hideshima等人.Nat Rev Cancer.2007.7 (8):585-598)。
[0024]对MM的诊断标准包括满足三个以下标准(Rajkumar (2011) American Journal ofHematology86:57-65):
[0025]-至少10%的克隆骨髓浆细胞
[0026]-血清和/或尿液单克隆蛋白的存在(除了在患有真非分泌性多发性骨髓瘤的患者中)
[0027]-可以归因于潜在的浆细胞障碍的终末器官损伤的迹象(高钙血症、肾功能不全、贫血、骨损伤)
[0028]在一个实施方案中，患有多发性骨髓瘤相关障碍的患者不另外地患有多发性骨髓瘤。
[0029]优选地，本发明提供了用途和方法，其中多发性骨髓瘤相关障碍选自包括以下或由以下组成的群组:浆细胞瘤(PC);浆细胞白血病(PCL);轻链淀粉样变性(AL)。
[0030]在一个实施方案中，患者患有一种或多种选自包括以下或由以下组成的群组的多发性骨髓瘤相关障碍:浆细胞瘤(PC);浆细胞白血病(PCL);轻链淀粉样变性(AL)，并且患有该障碍的患者不另外地患有多发性骨髓瘤。
[0031]因此，在一个优选的实施方案中，患有浆细胞瘤的患者不另外地患有多发性骨髓瘤。在另一个优选的实施方案中，患有浆细胞白血病的患者不另外地患有多发性骨髓瘤。在另一个优选的实施方案中 ，患有轻链淀粉样变性的患者不另外地患有多发性骨髓瘤。
[0032]如本领域技术人员所熟知的，浆细胞瘤(例如，孤立性浆细胞瘤(SP))是有症状的障碍，其特征为单克隆浆细胞在骨或髓外软组织中增殖，但没有明显的骨髓浆细胞浸润的迹象。骨孤立性浆细胞瘤的特征为涉及任何部分的骨骼的独特的损伤，最常见的是脊柱，并且最通常发展成多发性骨髓瘤或另外的孤立性或多发性浆细胞瘤(WH0，2008)。SP通常通过放疗(优选地)或手术切除(少见)来治疗。
[0033]衆细胞瘤的诊断标准包括满足四个以下标准(Rajkumar(2011)American Journalof Hematology86:57-65):
[0034]-活检证明的骨或软组织的孤立性损伤，并具有克隆浆细胞的迹象
[0035]-正常骨髓，没有克隆浆细胞的迹象
[0036]-脊柱和骨盆的正常骨骼检查和MRI(除了原发性孤立性损伤以外)
[0037]-不存在可以归因于淋巴瘤-浆细胞增生性障碍的终末器官损伤，如高钙血症、肾功能不全、贫血或骨损伤(CRAB)
[0038]浆细胞瘤患者还通常地显示在血清和/或尿液中无M组分。然而，可以有时出现小量的 M 组分(小于 30g/l) ( “Myelom utredning och behandling, nationellariktlinjer, diagnosgruppen for plasmacellssjukdomar” ( “Myeloma Diagnosis andTreatment, National Guidelines and Diagnosis Group for Plasma Cell Disorders”)，
于2010年2月28日出版于瑞典，于2011年2月28日修订，可得自Svensk Forening for
Hematologi (Swedish Society of Hematology, www.sfhem.se),例如，可得自 www.sfhem.se/content/download/3182/52091/file/Myelom % 20riktlinjer % 20versi on %2020100228.pdf,自 2011 年 9 月起)。
[0039]M组分是包含一个或多个抗体链(如重链或轻链，或两者)的蛋白，并且由浆细胞产生并分泌。用于检测M组分在个体中存在的方法为本领域技术人员熟知，并且包括血清和/或尿液电泳法或免疫固定法(或相关的免疫化学方法)。用于检测M组分的示例性的方法描述于:National Comprehensive Cancer Network(NCCN)Clinical PracticeGuidelines in Oncology:Multiple Myeloma.V.1.2008, National Comprehensive CancerNetwork, Inc.2005/2006。
[0040]如本领域技术人员所熟知的，浆细胞白血病(PCL)是一种罕见的然而侵略性的浆细胞肿瘤，其特征为高水平的浆细胞在外周血中循环。PCL可以从头(de novo)起源(称为“原发性PCL”)或作为多发性骨髓瘤的继发性白血病转化(称为“继发性PCL”)。呈现的体征和症状与在多发性骨髓瘤中所见的那些相似，如肾功能不全、高钙血症、溶解性骨损伤、贫血和血小板减少，但是还可以包括肝肿大(肝增大)和脾肿大(脾增大)。
[0041]疑似患有PCL的患者的诊断评价应包括外周血涂片的检查、骨髓抽吸和活检、具有免疫固定的血清蛋白电泳(SPEP)和来自24h尿液收集的等分蛋白电泳(UPEP)。当PC的单克隆群体以超过2000/ μ L的绝对PC计数存在于外周血中，并且PC包含20 %或更多的外周血白细胞时，可以作出诊断。PCL的预后较差，中位生存期为7到11个月。
[0042]通常，使用诱导疗法，接着在对该方法适合的候选者中进行造血细胞移植(HCT)治疗患者。对PCL的最佳诱导方案不是已知的，并且在临床实践中具有较大的可变性。加入针对多发性骨髓瘤的前线和挽救疗法中的更新的药剂已显示在PCL中的活性，如免疫调节剂和不同组合的硼替佐米的使用。
[0043]如本领域技术人员所熟知的，轻链淀粉样变性(AL)是克隆性但非增生性浆细胞障碍，其中Ig轻链的片段沉积在组织中。临床特征取决于所涉及的器官但是可以包括限制性心肌病、肾病综合症、肝衰竭和外周/自主神经病变。AL是由免疫球蛋白轻链的纤维状聚集物的病理性沉积引起的重度的并通常致命的病症。淀粉样变性通常显示在器官如肾脏、心脏、皮肤、神经系统中和软组织(如舌)中(Merlini和Belotti, 2003，NEJM，349:583-596)，并且可以导致器官衰竭。器官衰竭通常涉及心脏和肾脏，分别导致重度的心律失常或心力衰竭和肾病综合症。
[0044]使用刚果红染色显示具有苹果绿双折射的淀粉样蛋白沉积物的组织活检是诊断所需的。不需要侵入性器官活检，因为在85%的患者中，可以在骨髓活检或皮下脂肪抽吸物中发现淀粉样蛋白沉积物。N-末端脑钠肽前体和血清肌钙蛋白T值用于将患者分成大小大致相等的三组；中位生存期分别为26.4、10.5和3.5个月。
[0045]AL的诊断标准包括满足四个以下标准(Rajkumar (2011)American Journal ofHematology86:57-65):
[0046]-淀粉样蛋白相关的全身性症状的存在(如涉及肾脏、肝脏、心脏、胃肠道或外周神经)
[0047]-在任何组织中通过刚果红的阳性淀粉样蛋白染色(例如，脂肪抽吸、骨髓或器官活检)
[0048]-通过直接检查淀粉样蛋白建立的淀粉样蛋白为轻链相关的证据(可能使用基于质谱的蛋白质组学分析，或免疫电子显微镜)
[0049]-单克隆浆细胞增生性障碍的证据(在骨髓中的血清或M蛋白、异常游离轻链比或克隆浆细胞)，(2-3%的患有AL的患者将无法满足该要求，因此必须谨慎诊断)。[0050]对于淀粉样变性，已使用标准骨髓瘤疗法(如在Comenzo, Blood.2009.114,3147-3157中讨论的)，但结果不如在骨髓瘤患者中的结果，这被认为是由于淀粉样变性的器官功能受损。心脏的淀粉样变性是该病症的最可怕的现象，除了选择心脏移植的极少病例外，其一直被认为是无法挽回的致命疾病(〈I年)。
[0051]如以上所讨论的，目前还没有针对多发性骨髓瘤相关障碍真正有效的治疗，并且目前的治疗依赖于仅治疗障碍的症状(例如，使用止痛药)，而不治疗多发性骨髓瘤相关障碍本身。因此，存在对涉及患有多发性骨髓瘤相关障碍如PC、PCL和AL的个体的新治疗的明确需要。该需要是通过本发明解决的，其提供了对多发性骨髓瘤相关障碍本身的治疗，而没有与目前的治疗相关的副作用。
[0052]PC、PCL和AL的临床和生化特征的细节，和用于确定PC、PCL和AL以及用于确定那些障碍的特征标准的适合的测试和分析是医学领域中的技术人员已知的，并如上所述和在例如 Rajkumar (20 11)American Journal of Hematology86:57-65 和 Albarracin andFonseca(2011)Blood Reviews25:107-112 中描述。
[0053]在一个实施方案中，本发明提供了抗体、用途或方法，其中患有多发性骨髓瘤相关障碍的患者另外地患有多发性骨髓瘤。
[0054]在一个实施方案中，患有多发性骨髓瘤相关障碍的患者选自包括以下或由以下组成的群组:浆细胞瘤；浆细胞白血病；轻链淀粉样变性,并且该患者另外地患有多发性骨髓瘤。
[0055]对于“另外地患有多发性骨髓瘤”，我们包括患有多发性骨髓瘤相关障碍的患者另外地患有(即，遭受)多发性骨髓瘤的情况。由于除了多发性骨髓瘤外，他们另外地患有(即，遭受)多发性骨髓瘤相关障碍，因此这样的患者代表多发性骨髓瘤患者的亚组。
[0056]在一个优选的实施方案中，患者患有浆细胞瘤和多发性骨髓瘤。
[0057]在一个进一步优选的实施方案中，患者患有浆细胞白血病和多发性骨髓瘤。
[0058]在一个进一步优选的实施方案中，患者患有轻链淀粉样变性和多发性骨髓瘤。
[0059]如以上所讨论的，由于多发性骨髓瘤相关障碍的症状和临床表现可以区分于多发性骨髓瘤，因此本领域技术人员将能够鉴定患有多发性骨髓瘤相关障碍(如一种或多种浆细胞瘤、浆细胞白血病和轻链淀粉样变性)和多发性骨髓瘤本身两者的患者。
[0060]但应当理解，患有多发性骨髓瘤和多发性骨髓瘤相关障碍两者的患者的亚组具有特别严重和晚期的医学病症和不良预后。
[0061]例如，虽然单独的浆细胞白血病的预后较差(具有7至11个月的中位存活时间，如以上所讨论的)，但是当浆细胞白血病发生在多发性骨髓瘤的情况下时，患者的存活期更短(2至7个月)。因此，患有浆细胞白血病和多发性骨髓瘤两者的患者代表患有特别侵略性的浆细胞障碍的患者亚组，其与比仅存在多发性骨髓瘤的患者更差的预后和更短的存活时间相关(参见，例如，Albarracin 和 Fonseca(2011)Blood Reviews25:107-112)。
[0062]同样地，轻链淀粉样变性见于10-15%的患有多发性骨髓瘤的患者，并且该亚组的患者(即患有轻链淀粉样变性和多发性骨髓瘤两者的患者)被认为与多发性骨髓瘤的晚期形式一致(“Myelom utredning och behandling, nationella riktlinjer, diagnosgruppenfor plasmacellss jukdomar” 2010，2011 年修订，如以上所讨论的)。
[0063]浆细胞瘤是一种由非典型浆细胞组成的肿瘤块。与多发性骨髓瘤相关的浆细胞瘤的发病在诊断时为7 %到17 %，并且在疾病的过程中为6 %至20 %。在这两种情况下，髓外疾病的发生与较差的预后始终相关。髓外复发或进展发生在各种临床情况和环境中，因此需要治疗的个体化(“Multiple myeloma with extramedullary disease”，Oriol A.(2011)Adv.Ther.,增刊 7:1-6)。
[0064]本发明是特别有利的，因为其提供了适用于以上所讨论的患有特别严重的和侵略性的疾病形式的患者亚组的治疗。如所附实施例所讨论的，发明人惊讶地发现存在于患有多发性骨髓瘤相关疾病(如浆细胞瘤、浆细胞白血病和轻链淀粉样变性)的患者中的浆细胞表达ICAM-1，这提供了用于治疗这些障碍的方法。
[0065]先前的方法已经治疗了这样的患者亚组所产生的症状，但未治疗潜在的障碍本身，导致了非常差的预后和短的生存期。事实上，在一些情况下，这样的患者亚组已经可以被视作患有已经被认为不值得使用常规疗法治疗的这样的重度疾病。
[0066]对于“治疗”，我们包括受试者/患者的治疗性和预防性治疗。术语“预防性”用于包括本文所述的抗体、药物或组合物的用途，其防止或降低个体中的病症或障碍(如多发性骨髓瘤相关障碍)的发生或发展的可能性。
[0067]对于“抗体”，我们包括基本上完整的抗体分子，以及嵌合抗体、人源化抗体、人抗体(其中至少一个氨基酸 相对于天然存在的人抗体发生突变)、单链抗体、双特异性抗体、抗体重链、抗体轻链、抗体重链和/或轻链的同源二聚体和异源二聚体和抗原结合片段及其衍生物。
[0068]术语“抗体”还包括所有类型的抗体,包括IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。因此,该抗体可以是IgG分子，如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4分子。优选地，本发明的抗体是IgG分子或抗原结合片段或其变体、融合体或衍生物。
[0069]本发明的方法和用途包括所限定抗体及其抗原结合片段的变体、融合体和衍生物，以及所述变体或衍生物的融合体，只要这样的变体、融合体和衍生物对ICAM-1具有结合特异性。
[0070]由于抗体及其抗原结合片段包括一种或多种多肽组分、如本文所定义的抗体及其抗原结合片段的变体、融合体和衍生物可以使用重组多核苷酸，使用本领域熟知的蛋白质工程和位点定向诱变的方法来制备(参见例如，Molecular Cloning:a LaboratoryManual, 3rd edition，Sambrook&Russell，2001，Cold Spring Harbor Laboratory Press,将其引入本文作为参考)。
[0071]因此，如本文所定义的抗体或其抗原结合片段的变体、融合体和衍生物，可以基于抗体或其抗原结合片段的多肽组分来制备。
[0072]对于“融合体”，我们包括融合到任何其它多肽的所述多肽。例如，所述多肽可以被融合到多肽，如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)或蛋白A，以便促进纯化所述多肽。这样的融合体的实例是本领域技术人员熟知的。类似地，所述多肽可以被融合到一个寡组氨酸标签如His6或融合到由抗体识别的表位，如熟知的Myc-标签的表位。融合到所述多肽的任何变体或衍生物也包括在本发明的范围内。将理解的是，优选保留了希望的性质的融合体(或变体或其衍生物)，如对ICAM-1具有结合特异性的融合体。
[0073]融合体可以包括另外的部分或由另外的部分组成，所述另外的部分赋予所述多肽希望的特征，例如，该部分可以在检测或分离多肽，或促进多肽的细胞吸收中是有用的。所述部分可以为例如生物素部分、放射性部分、荧光部分，例如，如本领域技术人员熟知的小的荧光团或绿色荧光蛋白(GFP)荧光团，。该部分可以是免疫原性标签，例如Myc-标签，如本领域技术人员已知的，或可以是亲脂性分子或多肽结构域，其能够促进多肽的细胞吸收，如本领域技术人员已知的。
[0074]对于所述多肽的“变体”，我们包括保守的或非保守的插入、缺失和替换。特别地，我们包括多肽的变体，其中这样的变化基本上不改变所述多肽的活性。特别地，我们包括多肽的变体，其中这样的变化基本上不改变对ICAM-1的结合特异性。
[0075]多肽变体的氨基酸序列可以与以上给出的一个或多个氨基酸序列具有至少75%的同一性，例如与以上指定的一个或多个氨基酸序列具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的同一性。
[0076]两个多肽之间的百分比序列同一性可以使用适合的计算机程序，例如威斯康辛大学遗传计算组(University of Wisconsin Genetic Computing Group)的GAP程序来确定，并且可以理解，百分比同一性的计算与其序列已被最佳地比对的多肽相关。
[0077]比对可以供选择地使用Clustal W程序进行(如在Thompson等人的1994，Nucl.Acid Res.22:4673-4680种所述，将其引入本文作为参考)。
[0078]使用的参数可以如下所示:
[0079]-快速成对比对参数:K-元组(字)大小；1，窗口大小；5，空位罚分；3，顶级对角线数量；5，评分方法:百分之X。
[0080]-多重比对参数:空位 开放罚分；10，空位延伸罚分；0.05。
[0081]-评分矩阵:BL0SUM。
[0082]供选择地，BESTFIT程序可用于确定局部序列比对。
[0083]用于本发明的方法或用途的抗体、抗原结合片段、变体、融合体或衍生物可以包括经修饰或衍生化的一个或多个氨基酸或由经修饰或衍生化的一个或多个氨基酸组成。
[0084]一个或多个氨基酸的化学衍生物可通过与官能侧基反应来实现。这样衍生化的分子包括，例如其中游离氨基已被衍生化以形成胺盐酸盐，对甲苯磺酰基、羧基苄氧基(carboxybenzoxy group)、叔丁氧羰基、氯乙酰基或甲酰基的那些分子。游离羧基可以被衍生化以形成盐、甲酯和乙酯或其它类型的酯和酰肼。游离羟基可以被衍生化以形成O-酰基或O-烷基衍生物。还作为化学衍生物包括的是那些肽，其含有20种标准氨基酸的天然存在的氨基酸的衍生物。例如:4_羟基脯氨酸可以取代脯氨酸；5_羟赖氨酸可以取代赖氨酸；3-甲基组氨酸可以取代组氨酸；高丝氨酸可以取代丝氨酸和鸟氨酸可以取代赖氨酸。衍生物还包括含有一种或多种添加或缺失的肽，只要所需的活性被维持即可。其它包括的修饰是酰胺化、氨基末端酰化(例如，乙酰化或巯基乙酸酰胺化)、末端羧基酰胺化(例如与氨或甲胺)等末端修饰。
[0085]本领域技术人员将进一步理解的是，模拟肽化合物(peptidomimetic compound)也可以是有用的。因此，对于“多肽”，我们包括能够结合ICAM-1的拟肽化合物。术语“模拟肽”是指模拟作为治疗剂的特定的肽的构象和希望的特征的化合物。
[0086]例如，所述多肽不仅包括其中氨基酸残基被肽(-C0-NH-)键连接的分子，还包括其中肽键反转的分子。这样的逆反模拟肽可以使用本领域中已知的方法制备，例如在Meziere等人的(1997) J.1mmunol.159，3230-3237中描述的那些，将其引入本文作为参考。该方法涉及使伪肽含有涉及主链的变化，而不是侧链的定向。含有NH-CO键代替CO-NH肽键的逆反肽对蛋白水解抗性更强。供选择地，所述多肽可以是模拟肽化合物，其中一个或多个氨基酸残基是由_y (CH2NH)-键代替常规的酰胺键连接的。
[0087] 在另一个供选择的方案中，肽键可以完全免去，只要使用在氨基酸残基的碳原子之间保留间隔的合适的接头部分；其可能对接头部分是有利的，以具有与肽键基本相同的电荷分布和基本相同的平面性。
[0088]将理解的是，所述多肽可以方便地在其N-或C-末端封闭，从而有助于降低对外切蛋白水解消化的敏感性。
[0089]各种未编码的或修饰的氨基酸，如D-氨基酸和N-甲基氨基酸也已被用来修饰哺乳动物的肽。另外，推定的生物活性构象可通过共价修饰例如环化来稳定，或通过加入内酰胺或其它类型的桥来稳定，例如参见Veber等人，1978，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA75:2636和 Thursell 等人，1983, Biochem.Biophys.Res.Comm.111:166,将其引入本文作为参考。
[0090]在众多的合成策略中的一个共同主题已经是将一些环部分引入基于肽的框架中。环部分限制肽结构的构象空间，这经常导致肽对特定生物受体的特异性增加。该策略的一个附加的优点在于，将环部分引入肽还可以导致产生对细胞肽酶具有减弱的敏感性的肽。
[0091]因此，在本发明的方法和用途中有用的示例性的多肽包括末端半胱氨酸氨基酸或由末端半胱氨酸氨基酸组成。这样的多肽可以通过在末端半胱氨酸氨基酸中的硫醇基的二硫键形成以杂环形式存在，或通过在末端氨基酸之间的酰胺肽键形成以均环形式存在。如上所示，通过N-和C-末端半胱氨酸之间的二硫键或酰胺键来环化小肽可以通过减少蛋白水解并且还增加结构的刚性来规避有时在线性肽中观察到的特异性和半衰期问题，这可以产生更高特异性的化合物。通过二硫键环化的多肽具有游离氨基和羧基末端，其仍然容易发生蛋白水解降解，而通过在N-末端氨基和C-末端羧基之间形成酰胺键而环化的肽因此不再含有游离的氨基或羧基末端。因此，该肽可以通过C-N键合或二硫化物键合。
[0092]本发明不以任何方式受限于肽的环化方法，而是包括其环状结构可以通过任何合适的合成方法来实现的肽。因此，杂键可包括但不限于通过二硫化物、亚烷基或硫化物桥形成。均环肽和杂环肽，包括二硫化物、硫化物和亚烷基桥的合成方法公开于US5，643，872，将其引入本文作为参考。环化方法的其他实例讨论并公开于US6，008，058，将其引入本文作为参考。
[0093]合成环稳定化模拟肽化合物的另外的方法是闭环复分解(RCM)。该方法涉及合成肽前体并使其与RCM催化剂接触以产生构象限制的肽的步骤。适合的肽前体可以包含两个或多个不饱和的C-C键。该方法可以采用固相肽合成技术来进行。在该实施方案中，被固定到固体支持物的前体与RCM催化剂接触，然后将产物从固体支持物上裂解以产生构象限制的肽。
[0094]由 D.H.Rich 在 Protease Inhibitors, Barrett andSelveson, eds., Elsevier (1986)中公开的另一种方法已经通过在酶抑制剂设计中的过渡态类似物概念的应用来设计肽模拟物(peptide mimic)，将其引入本文作为参考。例如，已知辛伐他汀(staline)的仲醇模拟胃蛋白酶底物的易断裂的酰胺键的四面体过渡态。
[0095]总之，如所熟知的，末端修饰在降低对蛋白酶消化的易感性方面是有用的，因此在延长肽在溶液中特别是在蛋白酶可能存在的生物流体中的半衰期方面是有用的。多肽环化也是有用的修饰，这是因为通过环化所形成的稳定结构并鉴于观察到的环肽的生物活性。
[0096]因此，在一个实施方案中，所述多肽是环状的。然而，在供选择的实施方案中，所述多肽是线性的。
[0097]对于“对ICAM-1的结合特异性”，我们是指能够选择性地结合到ICAM-1的抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物。对于“能够选择性地结合”，我们包括这样的抗体衍生的结合部分，其对ICAM-1的结合比对另外的蛋白的结合强至少10倍；例如强至少50倍，或强至少100倍。结合部分可以能够在生理条件下如在体内选择性地结合到ICAM-1。
[0098]这样的结合特异性可以通过本领域熟知的方法，如酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化、免疫沉淀、蛋白质印迹和流式细胞术，使用表达ICAM-1的转染的细胞来确定。用于测量相对结合强度的适合的方法包括免疫分析，例如其中所述结合部分是抗体(参见Harlow 和 Lane, “Antibodies: A Laboratory Manual，，，Cold Spring Habor LaboratoryPress, New York，将其引入本文作为参考)。供选择地，结合可以使用竞争性分析或使用
Biaeore?分析(Biacore International AB, Sweden)进行评估。
[0099]在另一个实施方案中，抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物仅结合到 ICAM-1。
[0100]本领域技术人员将理解，抗体或其抗原结合片段的结合特异性是由构成重链和轻链的可变区中的互补决定区(CDR)的存在赋予的。如以下讨论的，在一个特别优选的本文所定义的抗体和其抗原结合片段、变体、融合体和衍生物的实施方案中，对ICAM-1的结合特异性是由本文被鉴定为SEQ ID N0S:1至6的6个⑶R中的一个或多个的存在赋予的。
[0101]在一个优选的实施方案中，本文定义的抗体或其抗原结合片段、或抗体的变体、融合体或衍生物保留了原始抗体对ICAM-1的结合特异性。对于“保留了结合特异性”，我们是指如本文定义的抗体或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物能够与本发明的示例性抗体(称为B1-AB，参见所附的实施例)竞争结合于ICAM-1。例如，抗体或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物可以与包括CDR或由CDR组成的抗体结合于ICAM-1上的相同表位，所述CDR鉴定为SEQ ID N0S:1至6。
[0102]对于“表位”，在本文中意图是指抗体结合的分子位点，即抗原的分子区域。表位可以是由例如抗原的氨基酸序列(即一级结构)确定的线性表位，或由抗原的二级结构(例如肽链折叠成β折叠或α螺旋)或由抗原的三级结构(例如螺旋或折叠被折叠或排列以得到三维结构的方式)限定的三维表位。
[0103]用于确定测试抗体是否能够与第二抗体竞争结合的方法在本领域是熟知的(例如，夹心ELISA或反向夹心ELISA技术)并且描述于，例如，Antibodies:A Laboratory Manual, Harlow&Lane(1988, CSHL, NY, ISBN0-87969-314-2)，将其引入本文作为参考。
[0104]对ICAM-1具有结合特异性的抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物也可以保留与原始抗体(如示例性抗体，B1-AB)相同的一种或多种生物学性质。
[0105]细胞间粘附分子-1 ( “ICAM-1”，也称为⑶54)是一种80_114kDa的糖基化的细胞表面的跨膜蛋白，其由五个免疫球蛋白结构域、一个跨膜结构域和一个短的胞质结构域组成。
[0106]ICAM-1充当白细胞功能相关抗原-1(⑶lla/C418)的配体，并且还另外地结合Mac-1 (railb/tD18)、⑶43、MUC-1、鼻病毒和纤维蛋白原。ICAM-1的主要功能是将白细胞向炎症部位募集，而ICAM-1还参与了其它的细胞-细胞粘附和细胞活化、细胞信号传导、细胞迁移和细胞侵袭(Rosette 等人，Carcinogenesis26, 943-950 (2005) ;Gho 等人，CancerRes59, 5128-5132(1999) ;Gho 等人，Cancer Res61, 4253-4257 (2001) ;Chirathaworn 等人，JImmunol 168，5530-5537(2002) ;Berg 等人，J Immunol 155，1694-1702 (1995) ；Martz, HumImmunol 18，3-37 (1987) ;Poudrier 和 Owens, J.Exp.Med.179, 1417-1427 (1994) ;Sun 等人，JCancer Res Clin 0ncoll25, 28-34(1999) ；Springer, Cell76, 301-314(1994) ;Siu 等人，JImmunol 143，3813-3820(1989) ;Dang 等人，J Immunol 144, 4082-4091 (1990) ;Damle 等人，JTmmunol 151, 2368-2379(1993) ;Lane 等人，J Immunoll47, 4103-4108 (1991) ;Ybarrondo 等人，J Exp Medl79, 359-363(1994))。
[0107]ICAM-1在这些过程中的重要性是复杂的，并已成为大量研究的主题。最常见的ICAM-1缺陷，无论是遗传消融、SiRNA给予还是功能阻断抗体赋予的，已显示通过以不同的程度降低或延缓细胞迁移和活化来干扰白细胞外渗和募集到炎症位点(Reilly 等人.J Immunol155，529-532(1995) ；Kim 等人.J Immunother(1997)30,727-739(2007) ；SmalIshaw 等人，J Immunother27, 419-424(2004) ； CoIeman 等人，JImmunother29, 489-498 (2006) ;Kawano 等人.Br J Haematol79, 583-588 (1991))。[0108]ICAM-1在细胞表面上作为二聚体存在，而且还可以以W-形、环形或长链的形式多聚(Springer, Cell76, 301-314(1994) ;Siu 等人，J Immunol 143, 3813-3820 (1989))。因此，对于“ICAM-1”，我们包括分子的单体形式，和ICAM-1单体的二聚体和多聚体，包括以W-形、环形或长链的形式的多聚体。
[0109]本领域技术人员将理解，ICAM-1可衍生自人类或非人类动物。在一个实施方案中，ICAM-1是人类的。
[0110]如本文使用的“治疗有效量”或“有效量”或“治疗有效的”是指对给定的病症和给药方案提供治疗效果的量。这是经计算的活性物质用于产生与所需的添加剂和稀释剂，即载体或给药溶媒相关的希望的治疗效果的预定量。另外，它意图是指足以减少或防止宿主的活动、功能和反应的临床上的显著缺陷的量。供选择地，治疗有效量足以引起在宿主中的临床显著病症的改善。
[0111]本发明的药剂(即抗体、其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物)、药物和药物组合物可以使用可注射的缓释药物递送系统递送。这些是专门设计的以降低注射频率。这样的系统的一个实例是Nutropin D印ot，其将重组人生长激素(rhGH)封装在生物可降解的微球中，所述微球一注射，其便在持续的时期缓慢释放rhGH。优选地，递送在肌内(1.m.)和/或皮下(s.c.)和/或静脉内α.V.)进行。
[0112]本发明的药剂、药物和药物组合物可通过外科手术植入的装置给予，所述装置直接将药物释放到所需部位。例如，Vitrasert将更昔洛韦直接释放到眼部以治疗CMV视网膜炎。直接将这种毒剂应用到疾病的部位可实现有效的治疗，而没有药物的显著的全身副作用。
[0113]优选地，本发明的药物和/或药物组合物是含有活性成分的每日剂量或单位、每日亚剂量或其适当部分的单位剂量。
[0114]本发明的药剂、药物和药物组合物将通常以包含活性成分的药物组合物的形式，任选地以无毒的有机或无机酸或碱、加成盐的形式，以药学上可接受的剂型，通过非肠道途径给药。根据待治疗的障碍和患者以及给药途径，组合物可以以不同的剂量给药。
[0115]在人类治疗中，本发明的药剂、药物和药物组合物可以单独给药，但通常将与关于预期的给药途径和标准药物规范选择的合适的药物赋形剂、稀释剂或载体混合给药。
[0116]本发明的药剂、药物和药物组合物可以肠胃外给药，例如，静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、肌内或皮下给药，或它们可以通过输注技术给药。它们最好以无菌水溶液的形式使用，在其中可以含有其他物质，例如足够的盐或葡萄糖以使溶液与血液等渗。如果需要，水溶液应该进行适当的缓冲(优选PH为3至9)。在无菌条件下制备合适的肠胃外制剂通过本领域技术人员熟知的标准制药技术容易地实现。 [0117]适用于肠胃外给药的药物和药物组合物包括水性和非水性无菌注射溶液，所述注射液可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，其使制剂与预期接受者的血液等渗；以及水性和非水性无菌混悬剂，所述混悬剂可以包括助悬剂和增稠剂。药物和药物组合物可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶，并且可以存储在冷冻干燥的(冻干)条件下，其仅需要在使用前加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和混悬剂可以由先前描述的无菌粉末、颗粒和片剂制备。
[0118]对于向人类患者肠胃外给药，本发明的药剂、药物和药物组合物的每日剂量水平将通常是单次或分次剂量给予I μ g至IOmg每成人每天。在任何情况下，医生将决定实际剂量，该剂量将是最适合任何个体患者的，并且会随着具体患者的年龄、体重和反应变化。上述剂量是一般情况的范例。当然，可以有其中应更高或更低的剂量范围的个别情况，这些都在本发明范围内。
[0119]通常地，本发明的药物和药物组合物将包含本发明的药剂，其浓度为约2mg/ml至150mg/ml或约2mg/ml至200mg/ml。在一个优选的实施方案中，本发明的药物和药物组合物将包含本发明的药剂，其浓度为10mg/ml。
[0120]通常，在人类中，本发明的药剂、药物和药物组合物的口服或胃肠外给药是优选的途径，是最方便的。
[0121]对于兽药用途，本发明的药剂、药物和药物组合物是按照正常兽医规范作为适合的可接受的制剂给药的，并且兽医将确定最适合于特定动物的给药方案和给药途径。
[0122]因此，本发明提供了药物制剂，其包含有效治疗各种病症的一定量的本发明的抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物(如以上和以下进一步描述)。
[0123]优选地，药物组合物适合于通过选自以下的途径递送:静脉内；肌内；皮下。
[0124]本发明还包括含有本发明的多肽结合部分的药学上可接受的酸或碱加成盐的药物组合物。用于制备在本发明中有用的上述碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是那些形成无毒的酸加成盐，即含有药理学上可接受的阴离子的那些，其中所述盐如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、酒石酸氢盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、糖酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐[即1，1'-亚甲基-双-(2-羟基-3萘甲酸盐)]。
[0125]药学上可接受的碱加成盐也可以用于制备根据本发明的药剂的药学上可接受的盐的形式。[0126]可以用作试剂以制备性质为酸性的本发明药剂的药学上可接受的碱盐的化学碱是与这样的化合物形成无毒的碱盐的那些。其中，这样的无毒碱盐包括但不限于衍生自这样的药理学上可接受的阳离子的那些，其中所述阳离子如碱金属阳离子(例如钾和钠)和碱土金属阳离子(例如钙和镁)；铵或水溶性胺加成盐，如N-甲葡糖胺(葡甲胺)；以及低级链烷醇铵和药学上可接受的有机胺的其他碱盐。
[0127]本发明的药剂和/或多肽结合部分可以冻干用于储存并且在使用前复溶(reconstituted)于合适的载体。可以采用任何合适的冻干方法(例如，喷雾干燥法，粉块干燥(cake drying))和/或复溶技术(reconstitution technique)。本领域技术人员将认识到冻干和复溶可以导致不同程度的抗体活性损失(例如对于常规免疫球蛋白，IgM抗体倾向于具有比IgG抗体更大的活性损失)，并且使用水平可能必须上调以补偿。在一个实施方案中，当重新水合时，(在冷冻干燥前)冻干的(冷冻干燥的)多肽结合部分损失不超过其活性的约20 %，或不超过约25 %，或不超过约30 %，或不超过约35 %，或不超过约40 %,或不超过约45 %,或不超过约50 %。
[0128]优选地，本发明提供了抗体、用途或方法，其中有效量的抗体、其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物为约0，0001mg/kg至50mg/kg的抗体、其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物。
[0129]如由本领域技术人员所理解的，化合物的精确量可根据其比活度(specificactivity)而变化。合适的剂量可以含有经计算用于产生与需要的稀释剂相关的希望的治疗效果的预定量的活性组合物。在用于制备本发明的组合物的方法和用途中，提供了治疗有效量的活性成分。治疗有效量可以由普通熟练的医学或兽医工作者根据患者特征，如年龄、体重、性别、病症、并发症、其它疾病等来确定,如本领域中已知的。
[0130]在一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物结合的ICAM-1位于浆细胞的表面上。
[0131]对于“浆细胞”，我们包括衍生自分化的B细胞的克隆扩增并能够合成抗体分子的细胞。
[0132]ICAM-1以较低水平组成性表达在血管内皮、上皮细胞、成纤维细胞、角质细胞、白细胞以及常规的抗原呈递细胞(APC)上(综述于Roebuck和Finnegan, J LeukocBiol, 66，876-888 (1999))。细胞表面ICAM-1表达可以通过几种细胞因子和促炎剂，如IFN- Y、TNF- α、脂多糖(LPS)、氧自由基或缺氧诱导(Roebuck 和 Finnegan, J LeukocBiol66，876-888 (1999))。ICAM-1可以另外地根据细胞类型通过蛋白水解或通过供选择的剪接从细胞中流出(Dang等人，J Immunol 144, 4082-4091 (1990) ；Damle等人.JImmunol 151，2368-2379 (1993) ;Lane 等人，J Immunol 147，4103-4108 (1991) ;Ybarrondo 等人，J Exp Medl79, 359-363(1994))。
[0133]优选的是，抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物能够特异性结合位于细胞表面上的ICAM-1，并抑制和/或防止该细胞的增殖。
[0134]对于“增殖”，我们包括单个细胞的生长和其分化为子细胞。用于测试细胞增殖的合适分析(在体外和体内两者)是本领域已知的。
[0135]在一个实施方案中，所述抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物能够特异性结合位于细胞表面上的ICAM-1，并诱导该细胞的凋亡。认为细胞凋亡是由抗体结合于并交联位于细胞表面上的ICAM-1而引发的。
[0136]如所熟知的，细胞凋亡是细胞死亡的一种形式，其中事件的程序化顺序导致细胞的消除而不将有害物质释放到周围环境中。在个体的正常运转过程中，细胞凋亡在通过消除旧的、不必要的和/或不健康的细胞来发展并维持健康中起着至关重要的作用。因此，对于细胞的“诱导凋亡”，我们是指该细胞是通过细胞凋亡的诱导消除的。用于测量细胞凋亡的合适分析(在体外或体内两者)是本领域已知的。
[0137] 在本发明中，与多发性骨髓瘤相关障碍相关的或是多发性骨髓瘤相关障碍的原因的浆细胞的凋亡将防止该障碍的持续。
[0138]在另一个实施方案中，抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物能够特异性结合于位于细胞表面上的ICAM-1,并诱导针对该细胞的抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)。
[0139]如所熟知的，ADCC是一种免疫应答，其中抗体结合到靶细胞，导致该靶细胞被免疫系统消除。用于测量ADCC的合适分析(在体外和体内两者)是本领域已知的。在本发明中，与多发性骨髓瘤相关障碍相关的或是多发性骨髓瘤相关障碍的原因的ADCC介导的浆细胞的消除将防止该障碍的持续。
[0140]优选地，抗体或其抗原结合片段在多发性骨髓瘤相关障碍的治疗中具有功效。
[0141]优选地，抗体或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物包含完整抗体或由完整抗体组成。供选择地，抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物可以基本上由完整抗体组成。对于“基本上由……组成”，我们是指抗体或其抗原结合片段、变体、融合或衍生物由足以显示对ICAM-1的结合特异性的一部分完整抗体组成。
[0142]在本发明的用途和方法的一个实施方案中，抗体是非天然存在的抗体。当然，当抗体是天然存在的抗体时，它是以分离的形式(即，与其在自然界中发现的不同)提供的。
[0143]在一个供选择的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物包含选自以下的抗原结合片段或由选自以下的抗原结合片段组成:Fv片段；Fab片段；Fab样片段。
[0144]抗体的重链可变(Vh)和轻链可变区参与抗原识别，这一事实首先由早期的蛋白酶消化实验确认。进一步的确认由啮齿动物抗体的“人源化”发现。啮齿动物来源的可变区可以融合到人来源的恒定区，使得产生的抗体保留啮齿动物亲本抗体的抗原特异性(Morrison 等人(1984) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA81, 6851-6855)。
[0145]抗原特异性由可变区赋予并且独立于恒定区，如由涉及抗体片段的细菌表达的实验已知的，所述抗体片段均含有一个或多个可变区。这些分子包括Fab样分子(Better等人(1988)Science240, 1041) ;Fv 分子(Skerra 等人(1988) Science240, 1038);单链 Fv (ScFv)分子，其中伴侣区通过柔性寡肽连接(Bird等人(1988) Science242, 423 ;Huston等人(1988) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85, 5879)和包含分离的V区或由分离的V区组成的单域抗体(dAb) (Ward等人(1989)Nature341, 544)。在保留其特异结合位点的抗体片段的合成中涉及的技术的一般性综述见于Winter&Milstein (1991)Nature349, 293-299。
[0146]因此，对于“抗原结合片段”，我们包括能够结合于ICAM-1的抗体的功能性片段。
[0147]示例性的抗原结合片段可以选自Fv片段(例如单链Fv和二硫化物键合的Fv),和Fab样片段(例如Fab片段、Fab’片段和F(ab)2片段)。[0148]在本发明的用途和方法的一个实施方案中，抗原结合片段是scFv。
[0149]使用抗体片段而非完整抗体的优点是多方面的。片段的较小尺寸可以导致改善的药理学性质,如更好的固体组织的渗透。此外,抗原结合片段,如Fab、Fv、ScFv和dAb抗体片段可以在大肠杆菌(E.coli)中表达并由大肠杆菌分泌，因此允许容易地产生大量的所述片段。
[0150]本发明的范围还包括经修饰形式的抗体及其抗原结合片段版本，例如由聚乙二醇或其它合适的聚合物的共价连接修饰的。
[0151]特别优选的是，抗体或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物是重组分子。
[0152]生成抗体和抗体片段的方法是本领域熟知的。例如，抗体可通过数种方法中的任一种生成，所述方法采用诱导体内抗体分子的产生、筛选免疫球蛋白库(Orlandi 等人，1989.Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.86: 3833-3837 ;Winter 等人，1991，Nature349:293-299)或通过在培养物中的细胞系生成单克隆抗体分子。这些包括但不限于，杂交瘤技术、人B-细胞杂交瘤技术和EB病毒(EBV)杂交瘤技术(Kohler等人，1975.Nature256:4950497 ;Kozbor 等人，1985.J.1mmunol.Methods81:31-42 ;Cote 等人,1983.Proc.Natl.Acad.Sc1.USA80:2026-2030 ；Cole 等人,1984.Mol.Cell.Biol.62:109-120)。[0153]便利地，本发明提供了抗体或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物，其中所述抗体是重组抗体(即，其中它是通过重组方法制备的)。
[0154]在一个特别优选的实施方案中，本发明提供了一种抗体、用途或方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
[0155]选择的抗原的合适的单克隆抗体可以通过已知技术制备，例如在“MonoclonalAntibodies:A manual of techniques”，H Zola(CRC Press, 1988)和在“MonoclonalHybridoma Antibodies: Techniques and Applications”，J G R HurrelI(CRCPress, 1982)中公开的那些，将其引入本文作为参考。
[0156]抗体片段也可以使用本领域熟知的方法获得(参见，例如，Harlow和Lane, 1988, “Antibodies:A Laboratory Manual，，，Cold Spring Harbor Laboratory,将其引入本文作为参考)。例如，用于本发明的方法和用途中的抗体片段可以通过抗体的蛋白水解或通过编码该片段的DNA在E.coli或哺乳动物细胞(例如中国仓鼠卵巢细胞培养物或其它蛋白表达系统)中的表达来制备。供选择地，抗体片段可以通过常规方法通过完整抗体的胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化而获得。
[0157]优选地，抗体或其抗原结合片段是人抗体或人源化抗体。
[0158]优选地，本发明提供了抗体、用途或方法，其中所述抗体或其抗原结合片段是人抗体或人源化抗体。
[0159]本领域的技术人员将理解的是，对于人的治疗或诊断，可以使用人源化抗体。非人(例如鼠类)抗体的人源化形式是具有衍生自非人抗体的最小部分的遗传工程改造的嵌合抗体或抗体片段。人源化抗体包括其中人抗体(受体抗体)的互补决定区被来自具有希望的功能的非人类物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠或兔的互补决定区的残基替代的抗体。在一些情况下，人抗体的Fv框架残基被相应的非人残基替代。人源化抗体还可以包含那些发现既不在受体抗体中也不在输入的互补决定区或框架序列中的残基。一般地，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个，通常两个可变区，其中所有或基本上所有的互补决定区对应于非人抗体的互补决定区，并且所有或基本上所有框架区对应于相关的人共有序列的框架区。人源化抗体任选地还包括至少一部分抗体恒定区，例如Fe区，通常衍生自人抗体(参见，例如，Jones等人，1986.Nature321:522-525 ；Riechmann等人,1988, Nature332:323-329 ；Presta, 1992, Curr.0p.Struct.Biol.2:593-596,将其引用本文作为参考)。
[0160]用于人源化非人抗体的方法是本领域熟知的。一般地，人源化抗体具有从非人来源引入到其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基，通常被称为输入的残基，它们通常取自输入的可变区。人源化基本上可以如所述地(参见例如，Jones等人,1986, Nature321:522-525 ；Reichmann 等人,1988.Nature332:323-327 ；Verhoeyen 等人，1988，Science239:1534-15361 ；US4, 816，567，将引入本文作为参考)，通过将人的互补决定区用相应的啮齿动物互补决定区取代来进行。因此，这样的人源化抗体是嵌合抗体，其中基本上小于完整的人可变区已经被来自非人物种的相应序列取代。在实践中，人源化抗体通常可以是其中一些互补决定区残基和可能的一些框架残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代的人抗体。
[0161]人抗体还可以使用本领域中已知的多种技术，包括噬菌体展示文库来鉴别(参见，例如，Hoogenboom 和 Winter, 1991, J.Mol.Biol.227:381 ；Marks 等人,1991, J.Mol.Biol.222:581 ;Cole 等人，1985，在:Monoclonal antibodiesand Cancer Therapy, AlanR.Liss, pp.77 ；Boerner 等人，1991.J.Tmmunol.147:86-95，Soderlind 等人，2000，NatBiotechnol 18:852-6和W098/32845，将其引入本文作为参考)。
[0162]在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含以下的氨基酸序列中的一个或多个或由以下的氨基酸序列中的一个或多个组成:
[0163]
【权利要求】
1.一种对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段， 或对ICAM-1具有结合特异性的所述抗体或抗原结合片段的变体、融合体或衍生物，或其所述变体或衍生物的融合体， 其用于治疗多发性骨髓瘤相关障碍，所述治疗包括给予需要其的患者有效量的抗体、其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物以治疗多发性骨髓瘤相关障碍的步骤。
2.—种对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段， 或对ICAM-1具有结合特异性的所述抗体或抗原结合片段的变体、融合体或衍生物，或其所述变体或衍生物的融合体， 在制备用于治疗多发性骨髓瘤相关障碍的药物中的用途，所述治疗包括给予需要其的患者有效量的抗体、其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物以治疗多发性骨髓瘤相关障碍的步骤。
3.一种用于治疗患者中的多发性骨髓瘤相关障碍的方法，所述方法包括给予需要其的患者有效量的以下物质的步骤: 对ICAM-1具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段， 或对ICAM-1具有结合特异性的所述抗体或抗原结合片段的变体、融合体或衍生物，或其所述变体或衍生物的融合体， 其中所述抗体、 其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物的量对治疗多发性骨髓瘤相关障碍是有效的。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体、用途或方法，其中患有多发性骨髓瘤相关障碍的患者未另外患有多发性骨髓瘤。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体、用途或方法，其中所述多发性骨髓瘤相关障碍选自:浆细胞瘤(PC);浆细胞白血病(PCL);和轻链淀粉样变性(AL)。
6.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中有效量的抗体、其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物为约0.1 μ g至Ig的抗体(例如约0.02mg/ml至5mg/ml)、其抗原结合片段、变体、融合体或衍生物。
7.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中ICAM-1位于浆细胞的表面。
8.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物能够特异性地结合位于细胞表面的ICAM-1并抑制和/或防止该细胞的增殖。
9.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物能够特异性地结合位于细胞表面的ICAM-1并诱导该细胞的凋亡。
10.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物能够特异性地结合位于细胞表面的ICAM-1并诱导针对该细胞的抗体依赖性细胞的细胞毒性。
11.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体或抗原结合片段在治疗多发性骨髓瘤相关障碍中具有功效。
12.根据权利要求11所述的抗体、用途或方法，其中所述多发性骨髓瘤相关障碍为浆细胞瘤(PC)。
13.根据权利要求11所述的抗体、用途或方法，其中所述多发性骨髓瘤相关障碍为浆细胞白血病(PCL)。
14.根据权利要求11所述的抗体、用途或方法，其中所述多发性骨髓瘤相关障碍为轻链淀粉样变性(AL)。
15.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物包括完整抗体或由完整抗体组成。
16.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体、或其抗原结合片段、或变体、融合体或衍生物包括抗原结合片段或由抗原结合片段组成，所述抗原结合片段选自=Fv片段；Fab片段；Fab样片段。
17.根据权利要求16所述的抗体、用途或方法，其中所述Fv片段是单链Fv片段或二硫化物键合的Fv片段。
18.根据权利要求17所述的抗体、用途或方法，其中所述Fab样片段是Fab’片段或F(ab)2 片段。
19.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体为重组抗体。
20.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体为单克隆抗体。
21.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体或其抗原结合片段为人抗体或人源化抗体。
22.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包括一个或多个以下的氨基酸序列:
FSNAWMSWVRQAPG[SEQ ID NO:1];和/或
/\FIWYDGSNΚΛ?ΑDS\;KGR [SEQ ID \0:2j:和或
ARYSGWYFDY[SEQ ID NO:3];和成
CTGSSSNIGAGYDVH[SEQ ID NO:4];和/或
DNNNRPS[SEQ IDNO:5];和/或
CQSYDSSLSAWL[SEQ ID NO:6J?
23.根据权利要求22所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体、片段、变体、融合体或衍生物的重链可变区包括以下的⑶R: FSNAWMSWVRQAPG[SEQ ID NO:1];和 AFIffYDGSNKYYADSVKGR [SEQ ID NO:2];和 ARYSGWYFDY[SEQ ID NO:3]。
24.根据权利要求23所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体、片段、变体、融合体或衍生物的重链可变区包括SEQ ID NO:7的氨基酸序列:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVAFIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYSGWYFDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO:7]。
25.根据权利要求22所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体、片段、变体、融合体或衍生物的轻链可变区包括以下的⑶R: CTGSSSNIGAGYDVH[SEQ ID NO:4]；和DNNNRPS[SEQ ID NO:5]；和 CQSYDSSLSAffL[SEQ ID NO:6]。
26.根据权利要求25所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体、片段、变体、融合体或衍生物的轻链可变区包括SEQ ID NO:8的氨基酸序列:
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYDNNNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCQSYDSSLSAWLFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO:8]。
27.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中抗体或抗原结合片段、变体、融合体或衍生物包括如权利要求23或24所限定的重链可变区和如权利要求25或26所限定的轻链可变区。
28.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体或抗原结合片段、变体、融合体或衍生物包括如权利要求24所限定的重链可变区和如权利要求26所限定的轻链可变区。
29.根据前述任一项权利要求所述的抗体、用途或方法，其中所述抗体或抗原结合片段、变体、融合体或衍生物能够与如权利要求27或权利要求28所限定的抗体竞争结合到ICAM-1。
30.一种抗体或其抗原结合片段，参照说明书，其用于治疗基本上如本文所述的多发性骨髓瘤相关障碍。
31.一种抗体或 其抗原结合片段的用途，参照说明书，其基本上如本文所述。
32.—种治疗个体中的多发性骨髓瘤相关障碍的方法，其基本上如本文所述。
【文档编号】C07K16/28GK103957938SQ201280054652
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2012年9月27日 优先权日:2011年9月29日
【发明者】M·汉松 申请人:生物发明国际公司