抗il-36r抗体的制作方法

抗il-36r抗体的制作方法
【专利摘要】本发明是关于抗IL-36R结合化合物，特别是新的抗IL-36R抗体，及使用其之治疗及诊断方法及组合物。
【专利说明】抗IL-36R抗体
[0001]序列表
[0002]本申请案含有已以ASCII格式经由EFS-Web递交的序列表且其以引用的方式整体并入本文中。该ASCII拷贝在2012年11月12日创建，命名为09-0583W0.txt且大小为147，390个字节。
[0003]【发明所属的【技术领域】】
[0004]一般而言，本发明是关于用于诊断及治疗用途的抗IL-36R抗体。该等抗体可用于包含该等化合物的医药组合物及套组中。该等抗体可用于治疗人类中的各种疾病或病症(例如免疫学疾病、发炎性疾病、自体免疫疾病、纤维变性疾病及呼吸疾病)的方法。
【【背景技术】】
[0005]细胞因子的IL-1家族是由11个不同配体组成，即IL-1a (亦称为IL-1F1)、IL-1 β (IL-1F2)、IL-1 受体拮抗剂(IL-1Ra 或 IL-1F3)、IL-18 (IL-1F4)、IL-1F5 至 IL-1F10及IL-1FlK或IL-33)。已知IL-1 α及IL-1 β诱导与I型IL-1受体(IL-1RI)结合的促发炎活性及常见共受体IL-1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)的募集，而IL-1Ra作为与IL-1RI结合的IL-1的竞争性抑制剂起作用，从而发挥抗发炎活性。大量研究报导IL-18是为IFN-Y的诱导物的促发炎细胞因子，而IL-33是阐述为参与(具体而言)Th2反应的控制的免疫调节细胞因子。藉助在DNA数据库中搜索IL-1的同系物来识别-1家族的新成员(包括IL-1F5、IL-1F6、IL-1F8及IL-1F9)。在人类及小鼠中，所有编码该等细胞因子的基因映像至小于300kb的染色体2q，其中其由IL1A、IL1B及ILlRN基因侧接。IL-1F6、IL-1F8及IL-1F9与IL-1及IL-1Ra共享21%至37 %氨基酸序列同源性，而IL-1F5与IL-1Ra展示52%氨基酸序列同源性，此表明IL-1F5可代表内源性受体拮抗剂。
[0006]IL-1F6、IL-1F8 及 IL-1F9 与 IL-lRrp2(IL-lR家族的受体)结合，且使用 IL-1RAcP作为共受体来刺激与那些由IL-1诱导的信号类似的细胞内信号，而显示IL-1F5抑制过表达IL-lRrp2的Jurkat T细胞中IL-1F9诱导的NF- κ B活化。如IL-1 β 一般，所有该等IL-1同系物缺少前导肽且不能藉助常规分泌途径来释放，但研究表明IL-lRrp2激动剂的释放可藉由与那些调节IL-1 β分泌的机制不同的机制来控制。为认可该等细胞因子的具体生物学效应并确认其全部与同一受体结合，最近已提出修正IL-1同系物的命名法。因此，IL-lRrp2 现称为 IL-36R，且其配体命名为 IL-36 a (IL-1F6)、IL-36 β (IL-1F8)及IL-36 Y (IL-1F9)。另外，已显示发挥受体拮抗剂活性的IL-1F5已重命名为IL_36Ra。
[0007]IL-36 α、IL-36 β及IL-36 Y的信使RNA在若干组织中、具体而言在暴露于病原体及皮肤中的内部上皮组织中大量表达。令人感兴趣的，IL_36Ra及IL-36a的表达在IL-1 β /TNF- α刺激的人类角化细胞中显著上调，且IL_36Ra及IL-36 Y mRNA在牛皮癣损伤皮肤中极大增加。此外，在TNF-α及IFN-Y刺激后，人类角化细胞中的IL-36 Y蛋白质产生提高。在慢性肾病中亦报导升高的IL-36 a mRNA及蛋白质表达。
[0008]在角化细胞中过表达IL_36a的转基因小鼠呈现与牛皮癣共有一些特征的发炎性皮肤损伤。当转基因小鼠与缺乏IL-36Ra的小鼠杂交时，此表现型更严重，此支持IL-36Ra在活体内的调节功能。若利用12_0_十四酰基佛波醇13-乙酸酯治疗角化细胞特异性IL-36CI转基因小鼠，则该等小鼠中的发炎皮肤病状与人类牛皮癣甚至更类似，其在组织学上、分子上及在其对治疗法的反应上与人类疾病类似。此外，当利用抗IL-36R抗体治疗免疫缺陷型小鼠时，移植至该小鼠的人类牛皮癣损伤皮肤正常化，此证明需要IL-36轴来维持人类牛皮癣皮肤中的损伤表现型。该等数据合起来指示IL-36R配体(包括IL-36a、IL-36 β及IL-36 Y)在活体外及活体内发挥促发炎效应且IL_36Ra作为天然拮抗剂起作用，由此模拟IL-1/IL-lRa系统。
[0009]因此，有证据证明许多疾病病状中涉及IL-36R配体，且业内需要靶向此途径、具体而言用于治疗发炎性疾病的新治疗剂。
【
【发明内容】
】
[0010]本发明藉由提供与IL-36R结合的生物治疗药物、具体而言抗体来解决上文需要。在一方面中，本发明抗体阻断IL36配体介导的信号传导(α、β及/或Y)。在一方面中，本发明抗体可用于(例如)治疗诸如牛皮癣、发炎性肠疾病、硬皮病、coro及慢性肾病等疾病中上皮介导的发炎/纤维变性。
[0011]在一方面中，本发明提供抗具有一或多种以下性质的IL-36R抗体。
[0012]在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体具有较高分子/细胞结合效能。在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体以KD〈0.1nM与人类IL-36R结合。在又一方面中，本发明的抗IL-36R抗体、具体而言人类化抗IL-36R抗体以KD〈50pM与人类IL-36R结合。在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体以EC9Q〈5nM与IL-36R表达细胞结合。
[0013]在另一方面中，本发明的抗IL-36R抗体具有较高的基于细胞的功能阻断效能。在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体在疾病相关细胞以及原代细胞中以IC9(l〈5nM阻断所有三种IL-36R激动配体(α、β、Y )。
[0014]在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体具有上文所述的分子/细胞结合效能及基于细胞的功能阻断效能。
[0015]在又一方面中，本发明的抗IL-36R抗体对人类IL-1R1或IL-36R阴性细胞是具有高选择性、例如大于1000倍的选择性。在又一方面中，本发明的抗IL-36R抗体不与人类IL-1Rl或IL-36R阴性细胞是结合。
[0016]在实施方案一中，本发明提供抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其以等于或〈0.1nM的Kd与人类IL-36R结合。
[0017]在实施方案二中，本发明提供根据实施方案一的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或其抗原结合片段。
[0018]在实施方案三中，本发明提供根据实施方案一或二的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段是人类化的抗体或其抗原结合片段。
[0019]在实施方案四中，本发明提供根据实施方案三的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其以等于或<50ρΜ的Kd与人类IL-36R结合。
[0020]在实施方案五中,本发明提供根据实施方案一至实施方案四中任一者的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其不与人类IL-1Rl结合。
[0021]在实施方案六中，本发明提供根据实施方案一的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0022]a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO: 35、102、103、104、105、106 或 140 (L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0023]b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0024]在实施方案七中，本发明提供根据实施方案六的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0025]a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:102(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0026]b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0027]在实施方案八中，本发明提供根据实施方案六的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0028]a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:103(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0029]b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0030]在实施方案九中，本发明提供根据实施方案六的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0031]a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:104(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0032]b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0033]在实施方案十中，本发明提供根据实施方案六的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0034]a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:105(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0035]b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0036]在实施方案^ 中，本发明提供根据实施方案六的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0037]a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:106(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0038]b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0039]在实施方案十二中，本发明提供根据实施方案六的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0040]a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:140(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0041]b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0042]在实施方案十三中，本发明提供根据实施方案一的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含SEQ ID N0:76、77、78、79、80、81、82或83中的任一者的氨基酸序列的轻链可变区；及包含SEQ ID N0:87、88、89、90、91、92、93、94或95中的任一者的氨基酸序列的重链可变区。
[0043]在实施方案十四中，本发明提供根据实施方案十三的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID N0:77的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:87的重链可变区；或
[0044]包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:88的重链可变区；或
[0045]包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:89的重链可变区。
[0046]在实施方案十五中，本发明提供抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID N0:80的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ IDNO:87的重链可变区；或
[0047]包含氨基酸序列SEQ ID NO:80的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:88的重链可变区；或
[0048]包含氨基酸序列 SEQ ID NO:80的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:89的重链可变区。
[0049]在实施方案十六中，本发明提供根据实施方案一的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0050]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO:63 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:73(H-CDR3);或
[0051]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO:64 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:73(H-CDR3);或
[0052]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:54(H-CDR1);氨基酸序列 SEQ ID NO:63 或 64(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:73(H-CDR3)。
[0053]在实施方案十七中，本发明提供根据实施方案一的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含SEQ ID N0:84、85或86中的任一者的氨基酸序列的轻链可变区；及包含SEQ ID N0:96、97、98、99、100或101中的任一者的氨基酸序列的重链可变区。
[0054]在实施方案十八中，本发明提供根据实施方案十七的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID N0:85的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 100的重链可变区；或
[0055]包含氨基酸序列SEQ ID NO:85的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 101的重链可变区。
[0056]在实施方案十九中，本发明提供根据实施方案十七的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID N0:86的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 100的重链可变区；或
[0057]包含氨基酸序列SEQ ID NO:86的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 101的重链可变区。
[0058]在实施方案二十中，本发明提供抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含SEQ IDN0:114、115、116、117、118、119、120或121中任一者的氨基酸序列的轻链；及包含SEQ IDN0:125、126、127、128、129、130、131、132或133中的任一者的氨基酸序列的重链。
[0059]在实施方案二十一中，本发明提供根据实施方案二十的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 115的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 125的重链。
[0060]在实施方案二十二中，本发明提供根据实施方案二十的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 115的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 126的重链。
[0061]在实施方案二十三中，本发明提供根据实施方案二十的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 115的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 127的重链。
[0062]在实施方案二十四中，本发明提供根据实施方案二十的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 118的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 125的重链。
[0063]在实施方案二十五中，本发明提供根据实施方案二十的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 118的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 126的重链。
[0064]在实施方案二十六中，本发明提供根据实施方案二十的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 118的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 127的重链。
[0065]在实施方案二十七中，本发明提供抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含SEQ IDN0:122、123或124中的任一者的氨基酸序列的轻链;及包含SEQID NO: 134、135、136、137、138或139中的任一者的氨基酸序列的重链。
[0066]在实施方案二十八中，本发明提供根据实施方案二十七的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 123的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 138的重链。
[0067]在实施方案二十九中，本发明提供根据实施方案二十七的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 123的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 139的重链。
[0068]在实施方案三十中，本发明提供根据二十七的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 124的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 138的重链。
[0069]在实施方案三^ 中，本发明提供根据实施方案一的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0070]a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:103(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0071]b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0072]在实施方案三十二中，本发明提供根据实施方案一的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0073]a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:104(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0074]b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0075]在实施方案三十三中，本发明提供根据实施方案一的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0076]a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及
[0077]b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:63(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 73 (H-CDR3)。
[0078]在实施方案三十四中，本发明提供根据实施方案一的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0079]a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及
[0080]b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:64(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO:73 (H-CDR3)。
[0081]在一实施方案中,根据实施方案一至三十四中的任一者的抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体。在一实施方案中，根据实施方案一至三十四中的任一者的抗体或其抗原结合片段是人类化的抗体。在一实施方案中，根据实施方案一至三十四中的任一者的抗体或其抗原结合片段是单克隆人源化抗体。
[0082]在实施方案三十五中，本发明提供抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:
[0083]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:21 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:30(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 39 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 48 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 57 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:67(H-CDR3);或
[0084]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 22 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:31(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:40 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 49 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 58 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:68(H-CDR3);或
[0085]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 23 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:32(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:41 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 50 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 59 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:69(H-CDR3);或
[0086]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24(L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:33(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 42 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:51(H-CDR1);氨基酸序列 SEQ ID NO: 60 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:70(H-CDR3);或
[0087]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 25 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:34(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:43 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:52(H-CDR1);氨基酸序列 SEQ ID NO:61 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:71(H-CDR3);或
[0088]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:35(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:44(L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 62 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:72(H-CDR3);或
[0089]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 54 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 63 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:73(H-CDR3);或
[0090]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:54(H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO:64(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:73(H-CDR3);或
[0091]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 28 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:37(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 46 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 55 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 65 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:74(H-CDR3);或
[0092]轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 29 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:38(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 47 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 56 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 66 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:75(H-CDR3)。
[0093]在实施方案三十六中，本发明提供抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的重链可变区；或
[0094]包含氨基酸序列SEQ ID N0:2的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的重链可变区；或
[0095]包含氨基酸序列SEQ ID N0:3的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13的重链可变区；或
[0096]包含氨基酸序列SEQ ID N0:4的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 14的重链可变区；或
[0097]包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 15 ；的重链可变区或
[0098]包含氨基酸序列SEQ ID N0:6的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 16的重链可变区；或
[0099]包含氨基酸序列SEQ ID N0:7的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 17的重链可变区；或
[0100]包含氨基酸序列SEQ ID N0 :8的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 18的重链可变区；或
[0101]包含氨基酸序列SEQ ID N0:9的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 19的重链可变区；或
[0102]包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的重链可变区。
[0103]在又一实施方案三十七中，本发明提供医药组合物，其包含根据先前实施方案中的任一者的抗体或抗原结合片段及医药上可接受的载剂。
[0104]在又一实施方案三十八中，本发明提供根据先前实施方案中的任一者的抗体或抗原结合片段或医药组合物，其用于医学中。
[0105]在又一实施方案三十九中，本发明提供根据实施方案I至37中任一者的抗体或抗原结合片段或医药组合物，其中该用途是治疗发炎性疾病、自体免疫疾病、呼吸疾病、代谢病症、上皮介导的发炎病症、纤维变性或癌症。
[0106]在又一实施方案四十中，本发明提供根据实施方案I至37中任一者的抗体或抗原结合片段或医药组合物，其中该用途是用于治疗牛皮癣、发炎性肠疾病、牛皮癣性关节炎、多发性硬化症、类风湿性关节炎、C0PD、慢性气喘或关节粘连性脊椎炎。
[0107]在又一实施方案四十一中，本发明提供根据实施方案I至37中任一者的抗体或抗原结合片段或医药组合物，其中该用途是用于治疗发炎性肠疾病。
[0108]在再一实施方案四十二中，本发明提供根据实施方案41的抗体或抗原结合片段或医药组合物，其中该疾病是克隆氏病(Crohns disease)。
[0109]在另一实施方案四十三中，本发明提供治疗疾病的方法，该方法包含向有需要的患者投与根据实施方案I至37中任一者的抗体或抗原结合片段或医药组合物，其中该疾病是选自发炎性疾病、自体免疫疾病、呼吸疾病、代谢病症、上皮介导的发炎病症、纤维变性及癌症。
[0110]在另一实施方案四十四中，本发明提供根据实施方案43的方法，其中该疾病是选自牛皮癣、发炎性肠疾病、牛皮癣性关节炎、多发性硬化症、类风湿性关节炎、C0PD、慢性气喘及关节粘连性脊椎炎。
[0111]在再一实施方案四十五中，本发明提供治疗克隆氏病的方法。
[0112]本发明的其它实施方案涵盖:
[0113]-分离多核苷酸，其包含编码本发明的抗IL-36R抗体或抗原结合片段的序列，较佳DNA或RNA序列；
[0114]-本发明的分离多核苷酸，其编码藉由SEQID N0.1至140中的一或多者定义的序列；
[0115]-载体,其包含本发明的多核苷酸，较佳为表达载体，更佳为包含本发明多核苷酸与表达控制序列功能联结的载体；
[0116]-宿主细胞，其包含本发明多核苷酸及/或本发明载体；
[0117]-产生本发明的抗IL-36R抗体或抗原结合片段的方法，较佳重组产生方法，其包含使用本发明多核苷酸及/或本发明载体及/或本发明宿主细胞；
[0118]-此一方法较佳包含以下步骤:(a)在允许抗IL-36R抗体或抗原结合片段表达的条件下培养宿主细胞及(b)回收抗IL-36R抗体或抗原结合片段；
[0119]-诊断套组或诊断方法，其包含本发明的抗IL-36R抗体或抗原结合片段或其使用；
[0120]-本发明的诊断套组或诊断方法，其用于诊断发炎性疾病、自体免疫疾病、呼吸疾病、代谢病症、上皮介导的发炎病症、纤维变性、癌症、牛皮癣、发炎性肠疾病、牛皮癣性关节炎、多发性硬化症、类风湿性关节炎、C0PD、慢性气喘、关节粘连性脊椎炎或克隆氏病。
[0121]【附图简述】
[0122]图1:1L-36 拮抗配体(IL-36RA/IL1F5、IL-38/ILF10)抑制信号传导级联。
[0123]图2:基因芯片分析表明IL-36R配体在牛皮癣皮肤中上调(IL-36RA、IL-36 α及IL-36Y)。
[0124]图3:使用人类皮肤切片的表现剖面。
[0125]经福尔马林(Formalin)固定，石蜡包埋且使用抗体33D10进行抗体滴定。
[0126]图4:评估人类皮肤切片的表皮厚度的方法。
[0127]【实施方式】
[0128]本发明是关于抗IL-36R抗体。在一方面中，本发明抗体在(例如)人类中是用于诊断及治疗用途。
[0129]本发明提供与IL-36R、具体而言人类IL-36R结合的抗体。本发明亦是关于结合IL-36R的人源化抗体。在具体实施方案中，已基于某些主要小鼠抗体的序列确定该等人源化抗体的序列。
[0130]不希望受此理论限制，认为抗IL-36R抗体或其抗原结合片段与人类IL-36R结合且从而干扰IL-36激动剂的结合，且这样做时至少部分地阻断自IL-36R至发炎媒介物的信号传导级联。此藉由图1来图解说明。
[0131]在一方面中，本发明抗体是用于人类疾病模型。IL-36R亦称为IL-1RL2及IL-lRrp2。已报导，IL-36激动配体(α、β或Y )藉由接合IL-36受体、然后与IL-1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)形成异源二聚体来起始信号传导级联。IL-36拮抗配体(IL-36RA/IL1F5、IL-38/ILF10)抑制信号传导级联(参见图1)。
[0132]在一方面中，本发明提供抗具有一或多种以下性质的IL-36R抗体。
[0133] 在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体具有较高分子/细胞结合效能。在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体以KD〈0.1nM与人类IL-36R结合。在又一方面中，本发明的抗IL-36R抗体、具体而言人类化抗IL-36R抗体以KD〈50pM与人类IL-36R结合。在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体以EC9Q〈5nM与IL-36R表达细胞结合。
[0134]在另一方面中，本发明的抗IL-36R抗体具有较高的基于细胞的功能阻断效能。在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体在疾病相关细胞以及原代细胞中以IC9tl≤5nM阻断所有三种IL-36R激动配体(α、β、Y )。
[0135]在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体具有上文所述的分子/细胞结合效能及基于细胞的功能阻断效能。
[0136]在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体是人源化抗体。在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体是单克隆抗体。在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体是全长抗体。在一方面中，本发明的抗IL-36R抗体是人类化单克隆抗体，例如全长人类化单克隆抗体。
[0137]本发明的抗体或其抗原结合片段识别特异性「IL-36R抗原表位」或「IL-36R表位」。如本文所用，该等术语是指能够与抗IL-36R抗体产生免疫反应性的分子(例如，肽)或分子片段。
[0138]最常见表位是蛋白质、短寡肽、寡肽模拟物(即，模拟IL-36R抗原的抗体结合性质的有机化合物)或其组合。认为抗体的肽或多肽表位的最小尺寸是约4个至5个氨基酸。肽或多肽表位含有(例如)至少7个氨基酸或(例如)至少9个氨基酸或(例如)介于约15个至约20个之间的氨基酸。由于抗体可识别呈三级形式的抗原肽或多肽，故包含表位的氨基酸不需为邻接的，且在一些情形下，可甚至不在同一肽链上。表位可藉由业内已知的各种技术来测定，例如X 射线结晶学、氢/氘交换质谱法(HXMS)、定点诱变、丙胺酸扫描诱变及妝筛选法。
[0139]抗体或免疫球蛋白的一般化结构为本领域技术人员所熟知。该等分子是通常为约150，000道耳顿(dalton)的异源四聚体糖蛋白，其由两个相同轻(L)链及两个相同重(H)链组成且通常称为全长抗体。每一轻链是藉由一个二硫键与重链共价连接而形成异源二聚体，且异源四聚体分子是藉助异源二聚体中两个相同重链之间的共价二硫键来形成。尽管轻链及重链是藉由一个二硫键连接在一起，但两个重链间的二硫键数可随免疫球蛋白同型而变。每一重链及轻链亦具有规则间隔的链内二硫键。每一重链在胺基末端具有可变结构域(Vh)，的后是三个或四个恒定结构域(CH1、CH2, Ch3及Ch4)，以及Chi与Ch2之间的铰链区。每一轻链具有两个结构域，即胺基末端可变结构域(')及羧基末端恒定结构域(CJ。'结构域与Vh结构域非共价结合，而Q结构域通常经由二硫键与Chi结构域共价连接。据信，特定氨基酸残基在轻链可变结构域与重链可变结构域的间形成接口(Chothia等人，1985，J.Mol.B1l.186:651-663)。可变结构域在本文中亦称为可变区。
[0140]在不同抗体间，可变结构域内的某些结构域广泛不同，即具有「超变性」。该等超变结构域含有直接参与每一特定抗体与其特异性抗原决定簇的结合及特异性的残基。轻链可变结构域与重链可变结构域二者中的超变性均集中于三个称为互补决定区(CDR)或超变环(HVL)的区段中。⑶R是藉由以下文献中的序列比较来定义:Kabat等人，1991, Sequencesof Proteins of Immunological Interest,第 5 版，Public Health Service, Nat1nalInstitutes of Health, Bethesda, MD.,而HVL (在本文中亦称为⑶R)是根据可变结构域的三维结构在结构上定义,如Chothia及Lesk, 1987, J.Mol.B1l.196:901-917中所述。其中该两种方法识别的CDR略有不同。如由Kabat所定义，在轻链可变结构域中，CDR-Ll大致位于残基24-34处，⑶R-L2大致位于残基50-56处，且⑶R-L3大致位于残基89-97处；在重链可变结构域中，CDR-Hl大致位于残基31-35处，CDR-H2大致位于残基50-65处，且CDR-H3大致位于残基95-102处。涵盖特定CDR的确切残基数将视CDR的序列及尺寸而变。给定抗体的可变区氨基酸序列，本领域技术人员可以常规方式确定哪些残基包含特定⑶R。重链及轻链的CDR1、CDR2、CDR3由此界定对于给定抗体具有特异性的独特功能性质。
[0141]每一重链及轻链内的三个CDR是由框架区(FR)来间隔，框架区含有可变性往往较低的序列。自重链及轻链可变结构域的胺基末端至羧基末端，FR及CDR是以以下顺序排列:FRl、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。FR的较大β -折迭构型使每一链内的CDR彼此紧邻且与另一链中的⑶R紧邻。所得构象有助于抗原结合位点(参见Kabat等人，1991，NIHPubl.第91-3242号，第I卷，第647页-第669页)，但并非所有⑶R残基均必须直接参与抗原结合。
[0142]FR残基及Ig恒定结构域并不直接参与抗原结合，但有助于抗原结合及/或介导抗体效应子功能。人们认为，一些FR残基以至少三种方式对抗原结合产生显著效应:直接与表位非共价结合，与一或多个CDR残基相互作用，及影响重链与轻链之间的接口。恒定结构域并不直接参与抗原结合，但介导各种Ig效应子功能，例如介导抗体参与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)及抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。
[0143]可基于恒定结构域的氨基酸序列将脊椎动物免疫球蛋白的轻链分配至两个显著不同的类别(卡帕(O及兰布达U))中的一类中。藉由比较，根据恒定结构域的序列将哺乳动物免疫球蛋白的重链分配至五个主要类别中的一类中:IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。将IgG及IgA进一步分为亚类(同型)，例如IgGp IgG2、IgG3、IgG4 JgA1 &IgA2。与免疫球蛋白的不同类别相对应的重链恒定结构域分别称为α、β、ε、Y及μ。各天然免疫球蛋白类别的亚单元结构及三维构型为人所熟知。
[0144]术语「抗体」、 「抗IL-36R抗体」、「人类化抗IL-36R抗体」、「人类化抗IL-36R表位抗体」及「变体人类化抗IL-36R表位抗体」具体涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)及抗体片段，例如抗体中呈现期望生物学活性(例如，IL-36R结合)的可变结构域及其它部分。术语「单克隆抗体」(mAb)是指具有高度特异性且针对单一抗原决定簇(「表位」)的抗体。因此，修饰词「单克隆」指示针对相同表位的抗体，且不应理解为需要藉由任何特定方法来产生该抗体。应理解，单克隆抗体可藉由业内已知的任何技术或方法来制备；包括(例如)融合瘤方法(Kohler等人，1975，Nature256:495)，或业内已知的重组DNA方法(例如，参见美国专利第4，816，567号)，或使用噬菌体抗体文库并使用以下文献中所述技术分离以重组方式产生的单克隆抗体的方法:Clackson 等人，1991, Nature352:624-628 ；及 Marks 等人，1991, J.Mol.B1l.222:581-597。
[0145]术语「单体」是指抗体的均质形式。例如，对于全长抗体而言，单体意指具有两个相同重链及两个相同轻链的单体抗体。
[0146]嵌合抗体是由来自一物种(例如，非人类哺乳动物，例如小鼠)的抗体的重链及轻链可变区及另一物种(例如，人类)抗体的重链及轻链恒定区组成，且可藉由以下方式来获得:连接来自第一物种(例如，小鼠)的编码抗体可变区的DNA序列与来自第二物种(例如人类)的编码抗体恒定区的DNA序列，并用含有该等经连接序列的表达载体转化宿主，从而使其产生嵌合抗体。或者，嵌合抗体亦可是其中重链及/或轻链中的一或多个区域或结构域与来自另一免疫球蛋白类别或同型的单克隆抗体中的对应序列相同、同源或是其变体，或来自共有序列或种是序列者。嵌合抗体可包括该等抗体的片段，限制条件是抗体片段呈现其亲代抗体的期望生物学活性，例如与相同表位结合(例如，参见美国专利第4，816，567号；及 Morrison 等人，1984，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA81:6851-6855)。
[0147]术语「抗体片段」、「抗IL-36R抗体片段」、「抗IL-36R表位抗体片段」、「人类化抗IL-36R抗体片段」、「人类化抗IL-36R表位抗体片段」、「变体人类化抗IL-36R表位抗体片段」是指全长抗IL-36R抗体的一部分，其中保留可变区或功能能力，例如，特异性IL-36R表位结合。抗体片段的实例包括(但不限于)Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、scFv及scFv-Fc片段、双链抗体、线性抗体、单链抗体、微小抗体、自抗体片段形成的双链抗体及自抗体片段形成的多特异性抗体。
[0148]可用诸如木瓜酶或胃蛋白酶等酶处理全长抗体以生成可用抗体片段。使用木瓜酶消化来产生两个相同的称作「Fab」片段的抗原结合抗体片段(各自具有单一抗原结合位点)及残留「Fe」片段。Fab片段亦含有轻链的恒定结构域及重链的C01结构域。胃蛋白酶处理产生F (ab’)2片段，其具有两个抗原结合位点且仍能交联抗原。
[0149]Fab’片段与Fab片段的不同的处在于在Cm结构域的C末端存在额外残基，包括一或多个来自抗体铰链区的半胱胺酸。F(ab’)2抗体片段是藉由铰链区中的半胱胺酸残基连接的Fab’片段对。亦已知抗体片段的其它化学偶合。
[0150]「Fv」片段含有完整抗原识别及结合位点，该位点是由一个重链可变结构域与一个轻链可变结构域呈紧密非共价连接的二聚体组成。在此构型中，每一可变结构域的三个CDR相互作用，从而在该Vh-' 二聚体的表面上界定抗原结合位点。该六个CDR共同赋予该抗体抗原结合特异性。
[0151]「单链Fv」或「scFv」抗体片段是包含抗体的Vh及Vlj结构域的单链Fv变体,其中该等结构域存于单一多肽链中。单链Fv能识别并结合抗原。scFv多肽视情况亦可含有位于Vh结构域与\结构域之间的多肽连接体，以促进scFv形成用于抗原结合的期望三维结构(例如，参见Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of monoclonal Antibodies,第 113卷，Rosenburg 及 Moore 编辑，Springer-Verlag, New York,第 269 页-第 315 页)。
[0152]「双链抗体」是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，该等片段包含在同一多肽链(Vh-'或'-Vh)中连接至轻链可变结构域的重链可变结构域(Vh)。双链抗体是更充分地阐述于(例如)HolIiger 等人(1993) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:6444-6448 中。
[0153]其它已识别抗体片段包括那些包含串联Fd区段(Vh-Ch1-Vh-Chi)对以形成抗原结合区对者。该等「线性抗体」可具有双特异性或单特异性，如于(例如)Zapata等人，1995，Protein Eng.8 (10): 1057-1062 中所阐述。
[0154]「人源化抗体」或「人源化抗体片段」是特定类型的嵌合抗体，其包括免疫球蛋白氨基酸序列变体或其片段，其能与预定抗原结合，且其包含一或多个实质上具有人类免疫球蛋白氨基酸序列的FR及一或多个实质上具有非人类免疫球蛋白氨基酸序列的CDR。此常称作「导入」序列的非人类氨基酸序列通常取自「导入」抗体结构域，具体而言可变结构域。通常，人源化抗体至少包括非人类抗体的CDR或HVL，其插入人类重链或轻链可变结构域的FR的间。本发明阐述具体人类化抗IL-36R抗体，其含有源自小鼠单克隆抗体的CDR或人类化CDR，该等CDR插入人类种是序列重链及轻链可变结构域的FR的间。应理解，某些小鼠FR残基可对人源化抗体的功能具有重要意义，且因此修饰某些人类种是序列重链及轻链可变结构域残基以使其与对应小鼠序列中的那些相同。
[0155]在另一方面中，人类化抗IL-36R抗体包含实质上所有的至少一个(且通常两个)可变结构域(例如含于(例如)Fab、Fab’、F (ab’)2、Fabc及Fv片段中者)，其中所有或实质上所有CDR均与非人类免疫球蛋白中的那些相对应，且在本文中具体而言，所有CDR均是下文中所详述的小鼠或人类化序列，且所有或实质上所有FR均是人类免疫球蛋白共有序列或种是序列中的那些。在另一方面中，人类化抗IL-36R抗体亦包括免疫球蛋白Fe区的至少一部分，通常是人类免疫球蛋白中者。通常，抗体可含有轻链以及至少重链的可变结构域二者。若适宜,抗体亦可包括重链的Ch1、铰链、CH2> Ch3及/或Ch4区中的一或多者。
[0156]人类化抗IL_36r抗体可选自任一免疫球蛋白类别(包括IgM、IgG、IgD、IgA及IgE)及任一同型(包括IgG1^IgG2>IgG3>IgG4>IgA1及IgA2)。例如,恒定结构域可是补体固定的恒定结构域，其中期望人源化抗体呈现细胞毒性活性，且同型通常是IgG115若不期望该细胞毒性活性，则恒定结构域可为另一同型，例如IgG2。替代性人类化抗IL-36R抗体可包含来自不止一个免疫球蛋白类别或同型的序列，且本领域技术人员可选择特定恒定结构域来优化期望效应子功能。在具体实施方案中，本发明所提供抗体是IgGl抗体，且更具体而言是剔除效应子功能的IgGl抗体。
[0157]人类化抗IL-36R抗体的FR及⑶R或HVL不需要与亲代序列精确对应。例如，可藉由取代、插入或缺失来改变(例如，诱变处理)导入CDR或HVL或共有或种是FR序列中的一或多个残基，从而使得所得氨基酸残基不再与任一亲代序列中对应位置的原始残基相同，但抗体仍保留与IL-3 6R结合的功能。该改变通常可并非广泛改变且可是保守改变。通常，至少75%的人源化抗体残基可与亲代共有或种是FR及导入CDR序列中的那些残基相对应，更通常有至少90 %、且最通常有超过95 %或超过98 %或超过99 %的残基相对应。
[0158]影响重链与轻链可变区之间的接口(「'_VH接口」)的免疫球蛋白残基是那些影响两条链相对于彼此的接近或定向者。某些可能参与链间相互作用的残基包括'残基34、
36、38、44、46、87、89、91、96 及 98 以及 Vh 残基 35、37、39、45、47、91、93、95、100 及 103 (采用Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest (Nat1nal Institutesof Health, Bethesda, Md., 1987)中所述的编号系统)。美国专利第6，407，213号亦论述，诸如\残基43及85以及Vh残基43及60等残基亦可能参与此相互作用。尽管仅针对人类IgG阐述该等残基，但其亦适用于其它物种。选择合理地预期参与链间相互作用的重要抗体残基用于共有序列中的取代。
[0159]术语「共有序列」及「共有抗体」是指在任一特定类别、同型或亚单元结构的所有免疫球蛋白(例如人类免疫球蛋白可变结构域)中的每一位置处包含最常出现的氨基酸残基的氨基酸序列。共有序列可是基于特定物种或多个物种的免疫球蛋白。「共有」序列、结构或抗体可理解为涵盖某些实施方案中所述的共有人类序列，且是指在任一特定类别、同型或亚单元结构的所有人类免疫球蛋白中的每一位置处包含最常出现的氨基酸残基的氨基酸序列。因此，共有序列含有在每一位置处具有存于一或多种已知免疫球蛋白中的氨基酸的氨基酸序列，但其可能并不完全复制任一单一免疫球蛋白的整个氨基酸序列。可变区共有序列并非自任一天然产生的抗体或免疫球蛋白获得。Kabat等人，1991，Sequencesof Proteins of Immunological Interest,第 5 版，Public Health Service, Nat1nalInstitutes of Health, Bethesda, Md.及其变化形式。
[0160]人类种是序列天然存于人类种群中。该等种是基因的组合产生抗体多样性。抗体轻链的种是抗体序列来自保守人类种是κ或λ V-基因及j-基因。类似地，重链序列来自种是 V-、d-及 j-基因(LeFranc, M-P 及 LeFranc, G,「The Immunoglobulin Facts BookJAcademic Press, 2001)。
[0161]如本文所用，「变体」、「抗IL-36R变体」、「人类化抗IL-36R变体」或「变体人类化抗IL-36R」各自是指至少具有轻链可变鼠类⑶R的人类化抗IL-36R抗体。变体包括那些在轻链或重链可变结构域的一或两者中具有一或多处氨基酸变化者，限制条件是该等氨基酸变化不会实质上损害抗体与IL-36R的结合。
[0162]「经分离」抗体是已经识别且已自其天然环境的组份中分离及/或回收的抗体。抗体天然环境中的污染物组份是那些可干扰抗体的诊断或治疗用途的材料，且可是酶、激素或其它蛋白质性或非蛋白质性溶质。在一方面中，可将抗体纯化至以抗体重量计至少大于95%的分离度。
[0163]由于抗体天然环境中的至少一种组份不会存在，故分离抗体包括产生其的重组细胞内的原位抗体。然而，分离抗体通常可藉由至少一个纯化步骤来制备，其中移除重组细胞材料。
[0164]术语「抗体性能」是指有助于抗体识别抗原或抗体的活体内效力的因素。抗体的氨基酸序列的变化可影响诸如折迭等抗体性质，且可影响诸如以下等物理因素:抗体与抗原结合的初始速率CO、抗体与抗原的解离常数(kd)、抗体对抗原的亲和常数(Kd)、抗体构象、蛋白质稳定性及抗体半衰期。
[0165]本文所用术语「经表位标记」是指抗IL-36R抗体与「表位标签」融合。「表位标签」是具有足量氨基酸以为抗体产生提供表位的多肽，且其经设计以使得其不干扰人类化抗IL-36R抗体的期望活性。表位标签通常具有充分独特性以使得针对该表位标签产生的抗体实质上不会与其它表位发生交叉反应。适宜标签多肽通常含有至少6个氨基酸残基且通常含有约8个至50个氨基酸残基或约9个至30个残基。表位卷标及结合表位的抗体的实例包括流感HA卷标多肽及其抗体12CA5 (Field等人，1988Mol.Cell.B1l.8:2159-2165) ；c-myc 标签及其 8F9、3C7、6E10、G4、B7 及 9E10 抗体(Evan 等人，1985, Mol.Cell.B1l.5(12):3610-3616);及疱疹单纯型病毒糖蛋白D (gD)标签及其抗体(Paborsky 等人，1990, Protein Engineerings (6): 547-553)。在某些实施方案中，表位标签是「补救受体结合表位」。本文所用术语「补救受体结合表位」是指IgG分子(例如IgGpIgG2, IgG3或IgG4)的Fe区中的表位，其负责延长IgG分子的活体内血清半衰期。
[0166]在一些实施方案中，本发明抗体可与细胞毒性剂偶联。此是抑制或防止细胞功能及/或引起细胞破坏的任何物质。该术语意欲包括放射性同位素(例如I131、I125、Y9tl及Re186)、化学治疗剂及毒素(例如细菌、真菌、植物或动物源的酶促活性毒素)及其片段。该等细胞毒性剂可使用标准程序与本发明的人源化抗体偶合，且可用于(例如)治疗适用抗体疗法的患者。
[0167]「化学治疗剂」是可用于治疗癌症的化学化合物。化学治疗剂有多种实例可与本发明的治疗性抗体偶联。该等化学治疗剂的实例包括烷基化剂，例如噻替哌(th1tepa)及环磷酰胺；磺酸烷基酯，例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan);氮杂环丙焼，例如苯并多巴(benzodopa)、卡波酉昆(carboquone)、美妥替哌(meturedepa)及乌瑞替哌(uredepa);伸乙亚胺及甲基密胺，包括六甲密胺(altretamine)、三伸乙基密胺、三伸乙基磷酰胺、三伸乙基硫代磷酰胺及三羟甲基密胺；番蒸枝内酯(acetogenin)(尤其是布拉它辛(bulIatacin)及布拉它辛酮(bullatacinone));喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康(topotecan))；苔藓虫素(bryostatin);卡利抑制素(callystatin) ;CC_1065 (包括其合成类似物阿多来新(adozelesin)、卡泽来新(carzelesin)及比泽来新(bizelesin));克利特非辛(cryptophycin)(尤其是克利特非辛I及克利特非辛8);尾海兔素(dolastatin);奥里斯他汀(auristatin)(包括类似物单甲基-奥里斯他汀E及单甲基-奥里斯他汀F);多卡米星(duocarmycin)(包括合成类似物 KW-2189 及 CB1-TMI);艾植塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin);匍枝珊瑚醇(sarcodictyin);海绵抑制素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustard)，例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlomaphazine)、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、二氯甲二乙胺(mechlorethamine)、盐酸甲氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、霉法兰(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯乙酸氮芥胆留醇酯(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine);曲磷胺(trofosfamide)、尿啼唳氮芥；硝基脲，例如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(1mustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine);抗生素，例如烯二炔抗生素(例如，卡奇霉素(calicheamicin)，尤其是卡奇霉素Y II及卡奇霉素—I (例如，参见 Agnewj Chem.1ntl.Ed.Engl.，33:183-186)；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素A ;双膦酸盐，例如氯屈膦酸盐(clodronate);埃斯培拉霉素(esperamicin);以及新制癌菌素发色团(neoca rzinostatin chromophore)及相关色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、偶氮丝胺酸、博莱霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、卡拉霉素(carabicin)、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素 D (dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6_ 重氮基-5-侧氧基-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin) (Adriamycin?)(包括吗啉基-多柔比星、氰基吗啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星及脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcel1mycin)、丝裂霉素(mitomycin)(例如丝裂霉素 C)、霉酌.酸(mycophenolicacid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、票呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链脲霉素(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代谢物，例如甲胺蝶呤及5-氟尿嘧啶(5-FU);叶酸类似物，例如二甲叶酸(denopterin)、甲胺蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate) ； P?呤类似物，例如氟达拉滨(fludarabine)、6_巯基票呤、硫咪票呤(thiamiprine)、硫鸟票呤；啼卩定类似物，例如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6_氮杂尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷、脱氧氟尿苷（doxifIuridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(fIoxuridine);雄激素，例如卡普睪酮（calusterone)、丙酸屈他雄酮（dromostanolone propionate)、环硫雄醇 (epitiostanol)、美雄焼(mepitiostane)、睪内酉旨(testolactone);抗肾上腺素，例如胺鲁米特（aminoglutethimide)、米托坦（mitotane)、曲洛司坦(trilostane);叶酸补充剂，例如亚叶酸；乙酰葡醒酸内酯(aceglatone);醒磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside);胺基乙酉先丙酸（aminolevulinic acid);恩尿啼唳（eniIuraciI);安 R丫唳 (amsacrine);百思布什(bestrabucil);比生群(bisantrene);依达曲沙(edatrexate)； 地磷酰胺(defosfamine);秋水仙胺(demecolcine);地口丫酉昆(diaziquone);依氟鸟胺酸(ef Iomithine);依利醋铵(elliptinium acetate);埃博霉素(epothilone);依托格鲁（etoglucid);硝酸镓；轻基脲；香燕多糖（Ientinan);氯尼达明（Ionidamine)； 类美坦辛（maytansinoid)，例如美坦辛（maytansine)及安丝菌素（ansamitocin)； 米托胍腙（mitoguazone);米托蒽醌（mitoxantrone);莫哌达醇（mopidamol) ； 二胺硝卩丫卩定(nitracrine);喷托他汀（pentostatin);蛋胺氮芥（phenamet)；卩比柔比星（pirarubicin);洛索蒽醌（Iosoxantrone);鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼 (procarbazine) ； FSK(S)；雷佐生(razoxane);根霉素(rhizoxin);西佐喃(sizofiran)； 锗螺胺(spirogermanium);细格孢氮杂酸(tenuazonic acid);三亚胺酉昆(triaziquone)； 2，2’，2’’-三氯三乙胺；新月毒素（尤其是T-2毒素、疣疱菌素AGeiracurin A)、杆孢菌素(roridin A)及蛇形菌素(anguidine));乌拉坦(urethan);长春地辛(vindesine)； 达卡巴曝(dacarbazine);甘露莫司汀(mannomustine) ; 二漠甘露酉享(mitabronitol)； 二溴卫矛醇(mitolactol);哌泊溴焼(pipobroman);噶萨托辛(gacytosine);阿拉伯糖苷(arabinoside) (「Ara-Cj );环磷酰胺；噻替哌；紫杉焼(taxoid)，例如紫杉醇 (paclitaxel) ( TAXOL⑩，Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N. J.)及多西紫杉醇（doxetaxel) ( TAXOTERE, Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨（gemcitabine) (Gemzar?) ;6_硫鸟_呤；巯基_呤；甲胺蝶呤；钼类似物，例如顺钼（cisplatin)及卡钼（carboplatin);长春花碱（vinblastine);钼；依托泊苷（etoposide) (VP-16);异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱（vincristine);长春瑞滨 (vinorelbine) (Navelbine?);诺安托(novantrone);替尼泊苷(teniposide);依达曲沙 (edatrexate);道诺霉素(daunomycin);胺基蝶呤(aminopterin);希罗达(xeloda);伊班膦酸盐（ibanctonate) ;CPT_11 ;拓扑异构酶抑制剂RFS2000 ;二氟甲基鸟胺酸（DMFO)； 类视色素，例如视黄酸；卡培他滨（capecitabine);及上述药剂中任一者的医药上可接受的盐、酸或衍生物。此定义中亦包括用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂，例如抗雌激素及选择性雌激素受体调节剂（SERM)，包括（例如)他莫昔芬（tamoxifen)(包括 Nolvadex?)、雷洛昔芬（raloxifene)、屈洛昔芬（droloxifene)、4_轻基他莫昔芬、曲沃昔芬（trioxifene)、盐酸雷洛昔芬（keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)及托瑞米芬（toremifene) (Fareston?);抑制酶芳香酶的芳香酶抑制剂，其调节肾上腺中的雌激素产生，例如4(5)-咪唑、胺鲁米特、乙酸甲地孕酮（megestrol acetate) (Megace?)、依西美坦（exemestane)、福美司坦（formestane)、法屈唑（fadrozole)、伏罗唑(vorozole) (Rivisor?)、来曲唑(Ietrozole) (Femara?)及阿那曲唑(anastrozole) (Arimidex?);及抗雄激素，例如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(Ieuprolide)及戈舍瑞林(goserelin);及上述药剂中任一者的医药上可接受的盐、酸或衍生物。该等药剂中的任何一或多者可与本发明人源化抗体偶联以提供用于治疗各种病症的有用治疗剂。
[0168]亦可使抗体与前药偶联。「前药」是医药活性物质的前体或衍生物形式，其对肿瘤细胞的细胞毒性与母体药物相比较小，且能酶促活化或转化为活性更强的形式。例如，参 JAL Wilman, 1986, 「Prodrugs in Cancer Chemotherapy」，B1chemical SocietyTransact1ns, 14,第 375 页-第 382 页，615th Meeting Belfast ；及 Stella 等人，1985,「Prodrugs:A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery」，Directed DrugDelivery, Borchardt等人(编辑),第247页-第267页,Humana Press。有用前药包括(但不限于)含有磷酸根的前药、含有硫代磷酸根的前药、含有硫酸根的前药、含有肽的前药、经D-氨基酸修饰的前药、糖基化前药、含有β -内酰胺的前药、含有视情况经取代的苯氧基乙酰胺的前药及含有视情况经取代的苯基乙酰胺的前药、5-氟胞嘧啶前药及其它5-氟尿苷前药，其可转化成具有更高活性的无细胞毒性药物。可衍生为前药形式的细胞毒性药物的实例包括(但不限于)那些上文所述的化学治疗剂。
[0169]出于诊断性以及治疗性监测目的，亦可使本发明抗体与标记(单独的标记或标记及额外第二药剂(前药、化学治疗剂及诸如此类))偶联。标记与其它第二药剂不同，其是指可检测化合物或组合物药剂，且其可与本发明人源化抗体直接或间接偶联。标记可是自身可检测(例如，放射性同位素标记或荧光标记)，或在酶标记情形下，标记可催化受质化合物或组合物发生可检测的化学变化。可制备经标记人类化抗IL-36R抗体并用于各种应用中，包括活体外及活体内诊断学。
[0170]可将本发明抗体调配为脂质体制剂的一部分以影响其活体内递送。「脂质体」是由各种类别的脂质、磷脂及 /或表面活性剂组成的小囊泡。脂质体可用于向哺乳动物递送化合物或调配物，例如本文所揭示的人类化抗IL-36R抗体，该抗体视情况与一或多种医药活性剂及/或标记偶合或组合。脂质体的组份通常以双层结构排列，此与生物膜的脂质排列类似。
[0171]本发明某些方面是关于分离核酸，其编码本发明人源化抗体的一或多个结构域。「经分离」核酸分子是自至少一种污染物核酸分子识别并分离的核酸分子，其在抗体核酸的天然来源中通常与该污染物核酸分子相结合。分离核酸分子与存于天然细胞中的核酸分子不同。
[0172]在本发明的各种方面中，可重组表达人源化抗体的一或多个结构域。该重组表达可采用一或多种控制序列，即在特定宿主生物体中表达可操作连接的编码序列所需的多核苷酸序列。适用于原核细胞中的控制序列包括(例如)启动子、操纵子及核糖体结合位点序列。真核控制序列包括(但不限于)启动子、聚腺苷酸化信号及增强子。该等控制序列可用于在原核及真核宿主细胞中表达及产生人类化抗IL-36R抗体。
[0173]在使核酸序列与另一核酸序列具有功能性联是时，该核酸序列经「可操作地连接」。例如，若核酸前序列或分泌前导序列表达为参与多肽分泌的前蛋白，则该核酸前序列或分泌前导序列与编码该多肽的核酸可操作地连接；若启动子或增强子影响编码序列的转录，则该启动子或增强子与该序列可操作地连接；或若核糖体结合位点经定位以促进转译，则该核糖体结合位点与编码序列可操作地连接。通常，「可操作连接」意指所连接的DNA序列是邻接序列，且在分泌前导序列情形下是邻接序列且位于读码框内。然而，增强子视情况邻接。可藉由在便捷的限制位点处接合来完成连接。若不存在该等位点，则可使用合成寡核苷酸衔接子或连接体。
[0174]本文所用表达「细胞」、「细胞是」及「细胞培养物」可互换使用，且所有该等名称均包括其子代。因此，「转化体」及「转化细胞」包括原代个体细胞及源自其的培养物而不考虑转移次数。
[0175]用于治疗目的的术语「哺乳动物」是指任何归类为哺乳动物的动物，包括人类、家畜及农场动物，以及动物园动物、运动用动物或宠物，例如狗、马、猫、牛及诸如此类。较佳地，哺乳动物是人类。
[0176]本文所用「 病症」是可受益于利用本文所述人类化抗IL-36R抗体治疗的任何病状。该术语包括慢性及急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物易患所述病症的病理学病状。本文欲治疗的非限制性实例或病症包括发炎性病症、血管生成病症、自体免疫病症及免疫性病症、呼吸病症、癌症、血液恶性肿瘤、良性肿瘤及恶性肿瘤、白血病及淋巴恶性肿瘤。
[0177]术语「癌症」及「癌性」是指或描述哺乳动物中特征通常在于细胞生长失调的生理学病状。癌症的实例包括(但不限于)癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤及白血病。
[0178]IL-36R相关病症亦包括免疫系统疾病及病症，例如自体免疫病症及发炎性病症。该等病状包括(但不限于)类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、硬皮症、休格伦氏症候群(Sjogren’s syndrome)、多发性硬化症、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、发炎性肠疾病(例如，溃瘍性结肠炎及克隆氏病(Crohn’s disease))、肺炎、气喘及特发性血小板减少性紫癜(ITP)、上皮性发炎病症、纤维变性及关节粘连性脊椎炎。
[0179]术语「静脉内输注」是指药剂引入动物或人类患者的静脉中经大于约15分钟、通常介于约30分钟至90分钟之间的时间。
[0180]术语「静脉内快速浓注(bolus)」或「静脉内推注」是指药物投与动物或人类的静脉中以使身体在约15分钟或更短、通常5分钟或更短时间内接受药物。
[0181 ] 术语「皮下投与」是指药物引入动物或人类患者的皮肤下、较佳在皮肤与基底组织之间的囊内，由药物贮器相当缓慢持续递送。将皮肤向上捏离或拉离基底组织可产生囊。
[0182]术语「皮下输注」是指药物引入动物或人类患者的皮肤下、较佳在皮肤与基底组织之间的囊内，由药物贮器相当缓慢持续递送一段时间，包括(但不限于)30分钟或更短、或90分钟或更短。视情况，可由皮下植入药物递送帮浦植入动物或人类患者的皮肤下来实施输注，其中该帮浦递送预定量的药物经预定时间，例如30分钟、90分钟或跨越整个治疗方案的时间。
[0183]术语「皮下快速浓注」是指药物投与动物或人类患者的皮肤下，其中快速浓注药物递送短于约15分钟；在另一方面中，短于5分钟；且在又一方面中，短于60秒。在再一方面中，投与皮肤与基底组织之间的囊内，其中该囊可由将皮肤向上捏离或拉离基底组织来产生。
[0184]所用术语「治疗有效量」是指活性剂缓解或改善所治疗病症的一或多种症状的量。在另一方面中，治疗有效量是指已显示可有效例如减慢疾病进展的目标血清浓度。可以常规方式测量功效，视欲治疗病状而定。
[0185]本文所用「治疗」及「疗法」及诸如此类意欲包括针对疾病或病症的治疗性以及预防性或抑制性措施，其产生任何临床上期望或有益的效应，包括(但不限于)减轻或缓解疾病或病症的一或多个症状、使疾病或病症消退、减慢或停止疾病或病症的进展。因此，例如，术语治疗包括在疾病或病症的症状发作的前或的后投与药剂，由此预防或消除疾病或病症的一或多个体征。作为另一实例，该术语包括在疾病的临床表现后投与药剂，从而抵抗该疾病的症状。此外，在发作后及在已出现临床症状后投与药剂包含本文所用「治疗」或「疗法」，其中不论该治疗是否引起疾病改善，投与均影响疾病或病症的临床参数，例如组织损伤度或转移的量或程度。此外，只要单独或与另一治疗剂组合的本发明组合物与未使用人类化IL-36R抗体组合物时相比减轻或改善所治疗病症的至少一个症状，不论是否减轻该病症的所有症状，该结果即应视为可有效治疗潜在病症。
[0186]所用术语「包装插页」是指通常包括于治疗产品的商业包装内的说明书，其含有关于适应症、用法、投与、禁忌及/或关于使用该等治疗产品的警告的信息。
[0187]抗体
[0188]在一方面中，本文阐述并揭示抗IL-36R抗体、具体而言人类化抗IL-36R抗体，及包含本发明的一或多种抗IL-36R抗体、具体而言一或多种人类化抗IL-36R抗体的组合物及制品。亦阐述包括抗IL-36抗体、具体而言人类化抗IL-36R抗体的抗原结合片段的结合剂。
[0189]本发明的代表性抗体的可变区及CDR是揭示于下文中:
[0190]抗IL-36R小鼠抗体序列
[0191]本发明的代表性小鼠前导抗体的可变区及CDR(小鼠前导序列)是显示于下文中:
[0192]轻链可变区(VK)氨基酸序列
[0193]
【权利要求】
1.一种抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其以等于或〈0.1nMiKrj与人类IL-36R结合。
2.如权利要求1的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或其抗原结合片段。
3.如权利要求1和 /或2的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段是人源化抗体或其抗原结合片段。
4.如权利要求1至3任一项的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其以等于或<50pM的Kd与人类IL-36R结合。
5.如权利要求1至4任一项的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其不与人类IL-1Rl结合 ?
6.如权利要求1至5任一项的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ ID NO: 35,102、103、104、105、106 或 140 (L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID NO:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
7.如权利要求6的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:102(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID NO:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
8.如权利要求6的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQID N0:26(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:103(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID NO:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
9.如权利要求6的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:104(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID NO:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
10.如权利要求6的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:105(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID NO:62、.108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
11.如权利要求6的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:106(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID N0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
12.如权利要求6的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:140(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID N0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
13.如权利要求1至5任一项的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含SEQ ID N0:76、77、78、79、80、81、82或83中任一者的氨基酸序列的轻链可变区；及包含SEQ ID N0:87、88、89、90、91、92、93、94或95中任一者的氨基酸序列的重链可变区。
14.如权利要求13的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 77的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 87的重链可变区；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:88的重链可变区；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:89的重链可变区。
15.如权利要求13的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO:80的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:87的重链可变区；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:80的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:88的重链可变区；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:80的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:89的重链可变区。
16.如权利要求1-5任一项的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:27(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO:63 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:73(H-CDR3);或 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO:64 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:73(H-CDR3);或 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:27(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54(H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 63 或 64(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:73(H-CDR3)。
17.如权利要求1-5任一项的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含SEQ ID NO:84、85或86中任一者的氨基酸序列的轻链可变区；及包含SEQ ID N0:96、97、98、99、100或101中任一者的氨基酸序列的重链可变区。
18.如权利要求17的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含该氨基酸序列SEQ ID NO:85的轻链可变区；及包含该氨基酸序列SEQ ID NO: 100的重链可变区；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:85的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 101的重链可变区。
19.如权利要求17的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO:86的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 100的重链可变区；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:86的轻链可变区；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 101的重链可变区。
20.如权利要求1-5任一项的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含SEQID NO: 114、115、116、117、118、119、120或121中任一者的氨基酸序列的轻链；及包含SEQ ID NO: 125、126、127、128、129、130、131、132或133中任一者的氨基酸序列的重链。
21.如权利要求20的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 115的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 125的重链。
22.如权利要求20的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQID NO:115的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 126的重链。
23.如权利要求20的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQID NO:115的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 127的重链。
24.如权利要求20的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 118的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 125的重链。
25.如权利要求20的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 118的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 126的重链。
26.如权利要求20的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 118的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 127的重链。
27.如权利要求1-5任一项的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含SEQID NO: 122、123或124中任一者的氨基酸序列的轻链；及包含SEQ ID NO: 134、135、136、137、138或139中任一者的氨基酸序列的重链。
28.如权利要求27的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 123的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 138的重链。
29.如权利要求27的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 123的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 139的重链。
30.如权利要求27的抗IL-36R抗体，其中该抗体包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 124的轻链；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 138的重链。
31.如权利要求1-5任一项的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:103(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:62(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
32.如权利要求1-5任一项的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:104(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO:44(L-CDR3);及 b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:62(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
33.如权利要求1 -5任一项的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及 b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:63(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 73 (H-CDR3)。
34.如权利要求1-5任一项的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: a)轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及 b)重链可变区，其包含氨基酸序列SEQID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:64(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO:73 (H-CDR3)。
35.如权利要求1-5的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含: 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 21 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:30(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 39 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 48 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 57 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:67(H-CDR3);或 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:22(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:31(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:40 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 49 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 58 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:68(H-CDR3);或 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:23(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:32(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID N0:41 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 50 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 59 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:69(H-CDR3);或 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 24 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:33(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 42 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:51(H-CDR1);氨基酸序列 SEQ ID NO: 60 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:70(H-CDR3);或 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 25 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:34(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 43 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:52(H-CDR1);氨基酸序列 SEQ ID NO:61 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:71(H-CDR3);或 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:26(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:35(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:44(L_CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 62 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:72(H-CDR3);或 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:27(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 54 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 63 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:73(H-CDR3);或 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:27(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸 序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:54(H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO:64(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:73(H-CDR3);或 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:28(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:37(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:46 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 55 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 65 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:74(H-CDR3);或 轻链可变区，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:29(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:38(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 47 (L-CDR3);及重链可变区，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 56 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 66 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:75(H-CDR3)。
36.如权利要求1-5任一项的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的轻链蛋白质；及包含氨基酸序列SEQ IDNO: 11的重链蛋白质；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO: 2的轻链蛋白质；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的重链蛋白质；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO: 3的轻链蛋白质；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13的重链蛋白质；或 包含氨基酸序列SEQ ID N0:4的轻链蛋白质；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 14的重链蛋白质；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO: 5的轻链蛋白质；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 15的重链蛋白质；或 包含氨基酸序列SEQ ID N0:6的轻链蛋白质；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 16的重链蛋白质；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO: 7的轻链蛋白质；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 17的重链蛋白质；或 包含氨基酸序列SEQ ID N0:8的轻链蛋白质；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 18的重链蛋白质；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的轻链蛋白质；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 19的重链蛋白质；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10的轻链蛋白质；及包含氨基酸序列SEQ ID N0:20的重链蛋白质。
37.一种药物组合物，包含权利要求1-36任一项的抗体或其抗原结合片段，以及药学可接受的载体。
38.权利要求1-36任一项的抗体或其抗原可结合片段，或权利要求37的药物组合物，用于医学中。
39.权利要求38的抗体或其抗原可结合片段或药物组合物，其中该于医学中的用途是在治疗炎症疾病、自体免疫疾病、呼吸疾病、代谢病症、上皮介导的发炎病症、纤维变性或癌症的方法中的用途。
40.如权利要求38或39的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，其中该于医学中的用途是在治疗牛皮癣、发炎性肠疾病、牛皮癣性关节炎、多发性硬化症、类风湿性关节炎、COPD、慢性气喘或关节粘连性脊椎炎的方法中的用途。
41.如权利要求38-40任一项的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，其中该于医学中的用途是在治疗发炎性肠疾病的方法中的用途。
42.如权利要求38-41任一项的抗体或其抗原结合片段或药物组合物，其中该于医学中的用途是在治疗克隆氏病(Crohn’s disease)的方法中的用途。
43.一种治疗疾病的方法，包括给药有此需要的患者权利要求1-36任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求38的药物组合物，其中所述疾病选自:炎症疾病、自体免疫疾病、呼吸疾病、代谢病症、上皮介导的发炎病症、纤维变性和癌症。
44.如权利要求43的方法，其中所述疾病选自:牛皮癣、发炎性肠疾病、牛皮癣性关节炎、多发性硬化症、类风湿性关节炎、C0PD、慢性气喘和关节粘连性脊椎炎。
45.如权利要求43和/或44的方法，其中所述疾病是克隆氏病。
46.一种分离的多核苷酸,其包含编码如权利要求1至36中任一权利要求的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段的序列，较佳为DNA或RNA序列。
47.如权利要求46的分离的多核苷酸，其编码如SEQID N0.1至140中的一或多者所定义的序列。
48.—种载体,其包含如权利要求46和/或47的多核苷酸,较佳为表达载体,更佳为包含本发明的多核苷酸与表达控制序列功能联结的载体。
49.一种宿主细胞，其包含如权利要求46和/或47的多核苷酸和/或如权利要求48的载体。
50.—种制造如权利要求1至36中任一权利要求或多权利要求的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段的方法，较佳为重组制造方法，包含使用如权利要求46和/或47的多核苷酸、和/或如权利要求48的载体和/或如权利要求49的宿主细胞。
51.如权利要求50的方法，其包含以下步骤:(a)该宿主细胞在允许表现该抗IL-36R抗体或抗原结合片段的条件下培养，及(b)回收该抗IL-36R抗体或抗原结合片段。
52.一种诊断套组或诊断方法，包含如权利要求1至36中任一权利要求的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，或使用如权利要求1至36中任一权利要求的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段。
53.如权利要求52的诊断套组或诊断方法，其用于诊断炎症疾病、自体免疫疾病、呼吸疾病、代谢病症、上皮介导的发炎病症、纤维变性、癌症、牛皮癣、发炎性肠疾病、牛皮癣性关节炎、多发性硬化症 、类风湿性关节炎、COPD、慢性气喘、关节粘连性脊椎炎或克隆氏病。
【文档编号】C07K16/28GK104080808SQ201280054425
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2012年11月14日 优先权日:2011年11月16日
【发明者】S-E.布朗, K.卡纳达, L.科勒维基, M.豪威尔, D.曼纳里克, 小约瑟夫.R.沃斯卡 申请人:勃林格殷格翰国际有限公司