抗cdh3(p-钙粘着蛋白）抗体的药剂偶联物的制作方法
【专利摘要】本发明的目的在于提供一种有效地杀伤表达CDH3的癌细胞的抗CDH3抗体药剂偶联物。根据本发明，提供一种将针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段与化疗剂连结而成的免疫复合物。
【专利说明】抗CDH3 (P-钙粘着蛋白）抗体的药剂偶联物
【技术领域】
[0001] 本发明涉及抗⑶H3抗体的药剂偶联物。本发明还涉及一种抗⑶H3抗体的药剂偶 联物的使用方法。
【背景技术】
[0002] 癌症为占死亡原因上位的重要的疾病，但其治疗需求尚未得到满足。近年来，为了 解决现有的化疗对于正常细胞也造成损伤这样的问题点，正在积极研究利用以癌细胞特异 性表达的特定分子作为靶向而设计药剂进行治疗的分子靶向药物来治疗癌症。
[0003] 作为其靶向之一，鉴定有作为细胞表面抗原的CDH3。CDH3是作为钙依赖性 地参与同嗜性的细胞粘附的分子而被发现的膜蛋白质（Yoshida and Takeichi, Cell 28:217-224, 1982)。具有由相互同源性高的约110个氨基酸残基构成的钙粘着蛋白重复序 列的蛋白质称为钙粘着蛋白超家族，CDH3属于其主要成员。
[0004] 报告有在某种癌细胞中⑶H3的表达上升例，对于与正常组织相比在癌组 织中⑶H3表达高的癌细胞使用抗体的癌治疗正在研究中（W02002/097395号公报、 W02007/102525 号公报）。
[0005] 作为分子靶向药物，实际上已经上市许多抗体医药，其大多是以抗体依赖性细胞 毒活性（ADCC :Antibody_dependent cellular cytotoxicity)为主要的作用机理。然而， 其药效未必充分，也同时进行着以更强力的抗肿瘤效果为目标的技术开发。
[0006] 作为增强抗体的抗肿瘤能力的有效的方法之一，可以举出抗体与具有强力毒性的 药剂（毒素）的连结。若将毒素单独向患者给药，则对正常组织也造成障碍，而无法成为有 效的治疗方法。然而，通过连结与肿瘤细胞特异性的抗原结合的抗体，就可以具有不对正常 的组织造成不良影响而仅杀伤肿瘤细胞的能力。这样的药剂称为抗体药物偶联物（ADC)。 艮P，毒素在与抗体结合的状态下不显示任何毒性。但是，某种抗体若与作为靶向的抗原结 合，则被摄入细胞内，被溶酶体分解。因此，结合有毒素的该种抗体被摄入细胞内并在细胞 内分解，由此释放毒素，仅在特定的细胞内部表现毒性，利用其效果杀伤细胞。
[0007] ADC中所使用的药剂成分中包含白喉毒素等细菌性蛋白毒素；篦麻毒素等植物蛋 白毒素；奥瑞他汀、美登素类、刺孢霉素等低分子毒素及其衍生物。
[0008] 在ADC中，与抗体结合的药剂在血液中循环，在累积到作为靶向的肿瘤中后显示 药效。在肿瘤部位以外的药剂释放（脱离抗体）由于具有产生副作用的危险性，故未必优 选。简言之，优选与抗体结合的药剂在导入细胞内后从抗体脱离的设计。近年来，Genentech 公司从这样的观点考虑，开发了将毒素经由非裂解型连接物（SMCC)与曲妥单抗结合而成 的药剂（T-DMl)，并进行临床试验，显示非常高的临床效果。另外，也开发了经由裂解性连接 物与药剂成分连结而成的抗体药剂偶联物。例如，ImmunoGen公司进行了以表达NCAM抗原 的癌为对象，经由二硫连接物（SPP)使HuN901抗体与药剂结合而成的抗体药剂偶联物的开 发。
[0009] 如上所述，利用ADC治疗癌这样的观点为公知。在该领域中，需需求用于治疗肺 癌、大肠癌这样的各种癌的进一步的药剂。对该目的特别有用的药剂包括毒性明显低但具 有有益的治疗有效性的抗CDH3抗体药剂偶联物。这些及其它的限制乃至过去的问题点可 通过本发明来解决。
[0010] 现有技术文献
[0011] 专利文献
[0012] 专利文献I :W02002/097395号公报
[0013] 专利文献2 :W02007/102525号公报
[0014] 非专利文献
[0015] 非专利文献 I :Yoshida and Takeichi, Cell 28:217-224, 1982
【发明内容】
[0016] 发明所要解决的课题
[0017] 本发明的课题在于提供一种有效地杀伤表达⑶H3的癌细胞的抗⑶H3抗体药剂偶 联物。
[0018] 用于解决课题的技术方案
[0019] 本发明的发明人为了解决上述课题而进行了潜心研究，结果发现，将针对CDH3的 抗体与化疗剂连结而成的免疫复合物对于表达CDH3的癌细胞株显示强力的细胞毒活性， 从而完成了本发明。
[0020] 即，根据本发明，提供一种将针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段与化 疗剂连结而成的免疫复合物。
[0021] 优选本发明的免疫复合物中，针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段对 于表达⑶H3的细胞显示细胞毒性。
[0022] 优选针对⑶H3的抗体是抗体产生细胞产生的抗体，该抗体产生细胞是由投与了 CDH3或表达CDH3的细胞作为免疫原的免疫细胞获得的。
[0023] 优选所述抗体为单克隆抗体。
[0024] 优选所述抗体被嵌合化。
[0025] 优选所述抗体被人源化。
[0026] 优选所述抗体为人抗体。
[0027] 优选所述抗体在H链包含序列号48、56及65中记载的氨基酸序列，L链包含序列 号75、82及86中记载的氨基酸序列。
[0028] 优选所述抗体在H链包含序列号52、60及70中记载的氨基酸序列，L链包含序列 号75、82及91中记载的氨基酸序列。
[0029] 优选所述抗体在H链包含序列号54、62及72中记载的氨基酸序列，L链包含序列 号74、81及93中记载的氨基酸序列。
[0030] 优选所述抗体在H链包含序列号55、63及73中记载的氨基酸序列，L链包含序列 号80、85及94中记载的氨基酸序列。
[0031] 优选所述抗体在H链包含序列号49、64及66中记载的氨基酸序列，L链包含序列 号76、84及89中记载的氨基酸序列。
[0032] 优选所述抗体在H链包含序列号49、58及68中记载的氨基酸序列，L链包含序列 号79、82及90中记载的氨基酸序列。
[0033] 优选所述抗体在H链包含序列号53、61及71中记载的氨基酸序列，L链包含序列 号75、82及92中记载的氨基酸序列。
[0034] 优选所述抗体在H链包含序列号51、57及67中记载的氨基酸序列，L链包含序列 号78、83及88中记载的氨基酸序列。
[0035] 优选所述抗体在H链包含序列号50、59及69中记载的氨基酸序列，L链包含序列 号77、83及87中记载的氨基酸序列。
[0036] 优选所述抗体具有由与上述的本发明的抗体的H链的氨基酸序列具有至少90% 的序列同一性的氨基酸序列构成的H链。
[0037] 优选CDH3为哺乳类的CDH3。
[0038] 优选CDH3选自灵长类的CDH3。
[0039] 优选CDH3选自人的CDH3。
[0040] 优选⑶H3为细胞表面表达的⑶H3。
[0041] 优选所述具有CDH3结合能力的抗体片段为Fab，F(ab'）2或scFv。
[0042] 优选所述化疗剂为细胞毒性物质。
[0043] 优选所述细胞毒性物质选自美登素类（maytansinoid)及其衍生物。
[0044] 优选所述细胞毒性物质选自奥瑞他汀（auristatin)及其衍生物。
[0045] 优选所述美登素类及其衍生物选自DMl、DM3、DM4。
[0046] 优选所述奥瑞他汀及其衍生物选自MMAE或者MMAF。
[0047] 优选所述细胞毒性剂为DMl。
[0048] 优选针对⑶H3的抗体或具有⑶H3结合能力的其片段的每1分子结合有1?10 个 DM1。
[0049] 优选针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段的每1分子结合有3?8个 DMl。
[0050] 优选针对⑶H3的抗体或具有⑶H3结合能力的其片段与化疗剂经由连接物结合。
[0051] 优选针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段与化疗剂经由抗体的Fc区 域的分子内二硫键结合。
[0052] 优选针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段与化疗剂的结合是以基因工 程的方法改变抗体的Fc区域而进行的结合。
[0053] 优选使针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段与化疗剂结合的连接物为 2价反应性交联试剂。
[0054] 优选所述连接物选自N-琥珀酰亚胺基4 一（马来酰亚胺基甲基）环己烷羧酸酯 (SMCC)、N-琥珀酰亚胺基一 4 一（N-马来酰亚胺基甲基）一环己烷一 1 一羧基一（6-酰胺 己酸酯）（LC-SMCC)、K 一马来酰亚胺基^^一酸N-琥珀酰亚胺酯（KMUA)、Y -马来酰亚胺 基丁酸N-琥珀酰亚胺酯（GMBS)、e -马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯（EMCS)、 间马来酰亚胺基苯甲酰基一 N-羟基琥珀酰亚胺酯（MBS)、N -（a -马来酰亚胺基乙酰 氧基）一琥珀酰亚胺酯（AMAS)、琥珀酰亚胺基一 6 --马来酰亚胺基丙酰胺基）己酸 酯（SMPH)、N -琥珀酰亚胺基4 一（对马来酰亚胺基苯基）一丁酸酯（SMPB)、及N -（对 马来酰亚胺基苯基）异氰酸酯（PMPI)、6 -马来酰亚胺基己酰基（MC)、马来酰亚胺基丙酰 基（MP)、对氨基苄氧基羰基（PAB)、N -琥珀酰亚胺基4(2 -吡啶基硫代）戊酸酯（SPP)及 N -琥珀酰亚胺基（4 一碘一乙酰基）氨基苯甲酸酯（SIAB)、N-琥珀酰亚胺基（4 一（2 - 吡啶基硫代）丁酸酯（STOB)。
[0055] 优选所述连接物被蛋白酶切断。
[0056] 优选所述连接物含有val-cit。
[0057] 优选所述连接物含有PABA。
[0058] 进而，根据本发明，提供一种医药组合物，其包含本发明的免疫复合物，用于治疗 以⑶H3的过量表达为特征的癌。
[0059] 优选本发明的医药组合物具有抗癌作用。
[0060] 优选所述癌选自结肠直肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、头颈癌、卵巢癌、肺癌、浸润 性膀胱癌、胰腺癌、脑转移癌、甲状腺癌、头颈部鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、肺鳞状细胞 癌、皮肤鳞状细胞癌、黑素瘤、乳腺癌、肺腺癌、宫颈鳞状细胞癌、胰腺鳞状细胞癌、结肠鳞状 细胞癌、或胃鳞状细胞癌、前列腺癌、骨肉瘤或软组织肉瘤。
[0061] 发明的效果
[0062] 本发明提供的将抗CDH3抗体与化疗剂连结而成的免疫复合物与未结合化疗剂的 抗体相比，对表达CDH3的癌细胞株显示更强力的细胞毒活性。因此，本发明的免疫复合物 通过对具有表达CDH3的癌细胞的患者给药，可期待发挥高的抗癌作用。即，本发明的免疫 复合物作为抗癌剂有用。
【专利附图】
【附图说明】
[0063] 图1表示使人CDH3强制表达细胞株与市售抗人CDH3抗体反应的流式细胞术的结 果。A :CH0细胞、B :⑶H3强制表达CHO细胞。a :抗⑶H3抗体0. Olmg/mL、b :抗⑶H3抗体 0? lmg/mL、c :抗⑶H3 抗体 lmg/mL
[0064] 图2表示获得抗体3例与各细胞株的典型的流式细胞术结果。A :CDH3强制表达 CHO细胞、B :CH0细胞、C :源自肺癌的细胞株NCI-H358。a :抗CDH3抗体0. Olmg/mL、b :抗 (3DH3 抗体 0. lmg/mL、c :抗⑶H3 抗体 lmg/mL。
[0065] 图3表示各种肿瘤组织的⑶H3的mRNA的表达结果。A :正常组织、B :各种癌组织、 C :胰腺癌分化度
[0066] 图4表示各种人肿瘤组织中的⑶H3的表达结果。
[0067] 图5表示使各⑶H3嵌合抗体反应的流式细胞术的结果。A :CH0细胞、B :⑶H3强 制表达CHO细胞、C :源自肺癌的细胞株NCI-H358
[0068] 图6表示DMlSMe的结构。
[0069] 图7表示⑶H3抗体药剂偶联物的细胞毒性试验结果。ADC :⑶H3抗体药剂偶联物、 Naked :药剂未结合CDH3抗体。
[0070] 图8表示使用了 CDH3抗体药剂偶联物的动物试验结果。ADC :CDH3抗体药剂偶联 物、Naked :药剂未结合CDH3抗体
【具体实施方式】
[0071] 下面，对本发明进一步详细地进行说明。
[0072] 本发明的免疫复合物以有效地杀伤癌细胞的抗CDH3抗体药剂偶联物的形式提 供。
[0073] 作为用于制作本发明的抗体的抗原，可以使用CDH3或其部分肽。作为一个例子， 可以使用可溶型CDH3蛋白质等，但并不限定于此。
[0074] 本发明中所使用的抗体可以为多克隆抗体，也可以为单克隆抗体。本发明的 抗体可以通过多种方法中的任一者制造。抗体的制造方法为该领域众所周知的[例 如 参照 Sambrook, J et al. , Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)]〇
[0075] (a)多克隆抗体的制作
[0076]为了制作多克隆抗体，以CDH3或其部分肽作为抗原，将其投与哺乳动物，例如大 鼠、小鼠、兔子等。对于每1只动物的抗原的给药量而言，在不使用佐剂时为〇. 1?l〇〇mg， 在使用佐剂时为1?IOOu g。作为佐剂，可以举出：弗氏完全佐剂（FCA)、弗氏不完全佐剂 (FIA)、氢氧化铝佐剂等。免疫主要通过注入静脉内、皮下、腹腔内等进行。另外，免疫的间 隔没有特别限定，以数日至数周间隔、优选以2?5周间隔，进行免疫1?10次、优选2? 5次。而且，在距最终的免疫日6?60天后，以酶联免疫测定法（ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)或 EIA(enzyme immunoassay))、放身寸性免疫测定法（RIA ;radio immunoassay)等测定抗体效价，在显示最大的抗体效价的日子采血，得到抗血清。在需要由 抗血清精制抗体的情况下，可以通过适宜选择硫酸铵盐析法、离子交换色谱法、凝胶过滤、 亲和色谱法等公知的方法或组合这些方法来精制。
[0077] (b)单克隆抗体的制作
[0078] 为了制作单克隆抗体，首先，以CDH3或其部分肽作为抗原，将其投与哺乳动物，例 如大鼠、小鼠、兔子等。对于每1只动物的抗原的给药量而言，在不使用佐剂时为0. 1? lOOmg，在使用佐剂时为1?IOOii g。作为佐剂，可以举出：弗氏完全佐剂（FCA)、弗氏不完 全佐剂（FIA)、氢氧化铝佐剂等。免疫主要通过注入静脉内、皮下、腹腔内等进行。另外，免 疫的间隔没有特别限定，以数日至数周间隔、优选以2?5周间隔，进行免疫1?10次、优 选2?5次。而且，在距最终的免疫日1?60天后，优选1?14天后，采集抗体产生细胞。 作为抗体产生细胞，可以举出：脾脏细胞、淋巴结细胞、外周血细胞等，但优选脾脏细胞或局 所淋巴结细胞。
[0079] 为了得到细胞融合杂交瘤，进行抗体产生细胞与骨髓瘤细胞的细胞融合。作为与 抗体产生细胞融合的骨髓瘤细胞，可以使用小鼠等动物的通常可获得的株化细胞。作为使 用的细胞株，优选具有药剂选择性且具有无法在未融合的状态存活于HAT选择培养基（含 有次黄嘌呤、氨喋呤、胸苷）中，仅在与抗体产生细胞融合的状态下能够存活的性质的细 胞。作为骨髓瘤细胞，例如可以举出：？3乂634 §.8』1(?3叫、呢-1等小鼠骨髓瘤细胞株。
[0080] 接着，使上述骨髓瘤细胞与抗体产生细胞细胞融合。对细胞融合而言，在不含血清 的DMEM、RPMI-1640培养基等动物细胞培养用培养基中，混合I X IO6?I X IO7个/ml的抗 体产生细胞和2X IO5?2X IO6个/ml的骨髓瘤细胞（抗体产生细胞和骨髓瘤细胞的细胞 比优选5:1)，在细胞融合促进剂的存在下进行融合反应。作为细胞融合促进剂，可以使用平 均分子量1000?6000道尔顿的聚乙二醇等。另外，也可以使用利用了电刺激（例如电穿 孔）的市售的细胞融合装置使抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合。
[0081] 从细胞融合处理后的细胞中筛选目的杂交瘤。作为其方法,将细胞悬浮液用例如 含胎牛血清的RPMI-1640培养基等适当地稀释后，以3X IO5个/孔左右接种于微量滴定板 上，在各孔中加入选择培养基，以后适当地更换选择培养基进行培养。其结果，以选择培养 基开始培养后，从14天前后能够得到生长的细胞作为杂交瘤。
[0082] 接着，在增殖得到的杂交瘤的培养上清中，筛选目的抗体是否存在。杂交瘤的筛选 只要按照通常的方法即可，没有特别限定。例如，可以采集作为杂交瘤生长的孔中所含的培 养上清的一部分，通过酶联免疫测定法、放射性免疫测定法等，筛选产生与CDH3结合的抗 体的杂交瘤。融合细胞的克隆可以利用有限稀释法等进行，最终建立作为单克隆抗体产生 细胞的杂交瘤。
[0083] 作为从建立的杂交瘤中采集单克隆抗体的方法，可以采用通常的细胞培养法或腹 水采集法等。在细胞培养法中，将杂交瘤在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基、MEM培养 基或无血清培养基等动物细胞培养培养基中，在通常的培养条件（例如37°C、5% CO2浓度） 下培养7?14天，从其培养上清中获得抗体。
[0084] 在腹水采集法的情况下，在与骨髓瘤细胞来源的哺乳动物的同种系动物的腹腔内 投与杂交瘤约IX IO7个，使杂交瘤大量增殖。然后，在1?2周后采集腹水。在上述抗体 的采集方法中，在需要精制抗体的情况下，可以通过适宜选择硫酸铵盐析法、离子交换色谱 法、凝胶过滤、亲和色谱法等公知的方法或组合这些方法来精制。
[0085] 本发明的抗体的种类没有特别限制，可以为小鼠抗体、人抗体、大鼠抗体、兔抗体、 绵羊抗体、骆驼抗体、鸟抗体等、以及出于降低对人的异种抗原性等为目的而人为改变而的 基因重组型抗体、例如嵌合抗体、人源化抗体等的任意种类。基因重组型抗体可以使用已知 的方法制造。嵌合抗体为由人以外的哺乳动物、例如小鼠抗体的重链、轻链的可变区域和人 抗体的重链、轻链的恒定区域构成的抗体，可以通过将编码小鼠抗体的可变区域的DNA与 编码人抗体的恒定区域的DNA连结，将其重组入表达载体并导入宿主中使其产生来得到。 人源化抗体为将人以外的哺乳动物、例如小鼠抗体的互补性决定区域（CDR)移植入人抗体 的互补性决定区域而得到的，其通常的基因重组方法也是已知的。具体而言，由以末端部具 有重叠的部分的方式制作的多个寡核苷酸利用PCR法合成以连结小鼠抗体的CDR和人抗体 的框架区域（Framework Region ;FR)的方式设计的DNA序列。可通过将所得到的DNA与 编码人抗体恒定区域的DNA连结，然后重组入表达载体，将其导入宿主中使其产生来得到 (EP239400号公报、国际公开W096/02576号公报等）。
[0086] 用于蛋白质表达的宿主细胞系多是在抗体生产体系中源自哺乳动物的细胞。该生 产者可优先确定最适合要表达的基因产物的特定的宿主细胞系。作为通常的宿主细胞系， 可以举出：源自CHO的细胞株（中国仓鼠卵巢细胞系）、CVl (猴肾脏系）、COS (表达SV40T 抗原的CVl的衍生物）、SP2/0 (小鼠骨髓瘤）、P3x63-Ag3. 653 (小鼠骨髓瘤）、及293 (人肾 脏）、293T (表达SV40T抗原的293的衍生物），但并不限定于这些。宿主细胞系可以由商业 设施及美国标准生物品收藏中心（ATCC)或所发表的文献的发表机关获得。
[0087] 作为宿主细胞系，优选为dgfr基因表达缺陷的源自CHO的细胞株或SP2/0的任意 细胞系（分别参照Urland, G?等，Effect of gamma rays at the dihydrofolate reductase locus: deletions and inversions, Somat. Cell. Mol. Genet. Vol.12,1986p5555-566> 以 及 Schulman, M.等，A better cell line for making hybridomas secreting specific antibodies, Nature Vol. 276, 1978, p269-270)。最优选宿主细胞系为 DHFR 缺失 CHO。 [0088] 质粒在宿主细胞中的转染可使用任意的技术实现。作为具体的方法，可以举出：利 用转染（包括磷酸钙法、DEAE法、脂质体转染及电穿孔）、利用仙台病毒等的包膜导入DNA 的方法、微注射、以及使用逆转录病毒或腺病毒等病毒载体的感染，但并不限定于这些（参 照 Current Protocols in Molecular Biology, Chapter 9 Introduction of DNA into Mammalian Cells, John Wiley and Sons, Inc.)。最优选利用电穿孔向宿主中导入质粒。 [0089] 另外，人抗体的获得方法也是已知的。例如，在体外用期望的抗原或表达期望的 抗原的细胞将人淋巴细胞致敏，使致敏淋巴细胞与人骨髓瘤细胞、例如U266融合，也可以 得到具有与抗原的结合活性的期望的人抗体（参照日本特公平1-59878)。另外，可以通过 以期望的抗原免疫具有人抗体基因的全部内容的转基因动物而获得期望的人抗体（参照 W093/12227、TO92/03918、TO94/02602、TO94/25585、TO96/34096、TO96/33735)。此外，也已 知使用人抗体文库，通过筛选获得人抗体的技术。例如，可以使人抗体的可变区域以单链抗 体（scFv)的形式利用噬菌体展不法表达在噬菌体的表面，选择与抗原结合的噬菌体。若分 析所选择的噬菌体的基因，则可以确定编码与抗原结合的人抗体的可变区域的DNA序列。 若与抗原结合的scFv的DNA序列明确，则可以由该序列制作适当的表达载体，获得人抗体。 这些方法已经是众所周知的，可以参考W092/01047、W092/20791、W093/06213、W093/11236、 W093/19172、W095/01438、W095/15388。
[0090] 另外，这些抗体只要识别⑶H3,则可以为一价抗体、二价抗体、多价抗体中的任意 种类，也可以为抗体片段（片段）等低分子化抗体及抗体的修饰物等。另外，也可以为使Fc 部分与抗体片段及低分子化抗体、例如Fab、Fab'、F(ab'）2、Fv、ScFv(single chain Fv:单 链Fv抗体）、Diabody (双特异抗体）等融合而成的物质。为了得到这样的抗体，只要构建 编码这些抗体的基因，将其导入表达载体后，使其在适当的宿主细胞中表达即可。
[0091] 这些抗体也可以结合例如聚乙二醇（PEG)等各种分子而使用。这样的抗体修饰物 可以通过对所得到的抗体实施化学修饰来得到。需要说明的是，抗体的修饰方法是本领域 技术人员所公知的。
[0092] 在本发明的免疫复合物中，还可以在上述的抗体上结合化疗剂，用作细胞毒剂。本 发明的免疫复合物例如可以通过使其与表达CDH3的癌细胞接触来杀伤癌细胞。
[0093] 作为本发明的免疫复合物的优选形式，可以举出在抗体上结合药剂等细胞毒性物 质而成的所谓的ADC。
[0094] 作为本发明中所使用的化疗剂的例子，例如可以举出：多卡米星（duocarmycin)、 多卡米星的类似物及衍生物、以CC-1065、CBI为主成分的多卡米星类似物、以MCBI为主 成分的多卡米星类似物、以CCBI为主成分的多卡米星类似物、多柔比星、多柔比星偶联物、 吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、多拉司他汀、多拉司他汀-10、考布他汀、刺孢霉素 (calicheamicin)、美登素、美登素类似物、DM1，DM2, DM3, DM4、DMI、奥瑞他汀E、奥瑞他汀 EB (AEB)、奥瑞他汀EFP (AEFP)、单甲基奥瑞他汀E (MMAE)、单甲基奥瑞他汀F (MMAF)、5-苯甲 酰基戊酸AE酯（AEVB)、tubulysin、双萨拉唑（Disorazole)、埃博霉素、紫杉醇、多西紫杉 醇、SN-38、托泊替康、根霉素、棘霉素、秋水仙碱、长春碱、长春地辛、雌氮芥、西马多丁、艾榴 塞洛素（eleutherobin)、甲氨蝶呤、甲基叶酸、二氯甲氨蝶呤、5-氟尿啼陡、6-巯基噪呤、阿 糖胞苷、美法仑、长春罗新、异长春碱、放线菌素、柔红霉素、柔红霉素偶联物、丝裂霉素 C、丝 裂霉素 A、洋红霉素、氨基喋呤、他利霉索、鬼日毒素、鬼日毒素衍生物、依托泊式、依托泊式 磷酸盐、长春新碱、泰索、泰索帝视黄酸、丁酸、N8-乙酰基亚精胺以及喜树碱等，但并不仅限 于此。
[0095] 本发明中的ADC可以将上述的化疗剂与抗体结合，利用公知的方法制作。抗体和 化疗剂可以经由它们自身具有的连结基团等直接结合，另外，也可以经由连接物或其它的 物质间接地结合。
[0096] 化疗剂直接结合时的连结基团可以举出例如使用了 SH基的二硫键及经由马来酰 亚胺基的结合。例如，还原抗体的Fc区域的分子内的二硫键和药剂的二硫键，将两者以二 硫键结合。另外，还有经由马来酰亚胺基的方法。另外，作为其它的方法，也有以基因工程 的方法在抗体内导入半胱氨酸的方法。
[0097] 也可将抗体和化疗剂经由其它的物质（连接物）间接地结合。优选连接物具有与 抗体或化疗剂或者与两者反应的1种或2种以上的官能团。作为官能团的例子，可以举出： 氨基、羧基、巯基、马来酰亚胺基、吡啶基等。
[0098] 作为连接物的例子，可以举出：N-琥珀酰亚胺基4 一（马来酰亚胺基甲基）环己 烷羧酸酯（SMCC)、N-琥珀酰亚胺基一 4 一（N-马来酰亚胺基甲基）一环己烷一 1 一羧 基一（6-酰胺己酸酯）（LC-SMCC)、K 一马来酰亚胺基^^一酸N-琥珀酰亚胺酯（KMUA)、 Y -马来酰亚胺基丁酸N-琥珀酰亚胺酯（GMBS)、e -马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酰 亚胺酯（EMCS)、间马来酰亚胺基苯甲酰基一 N -羟基琥珀酰亚胺酯（MBS)、N -（a -马来 酰亚胺基乙酰氧基）一琥珀酰亚胺酯（AMAS)、琥珀酰亚胺基一 6 --马来酰亚胺基丙 酰胺基）己酸酯（SMPH)、N -琥珀酰亚胺基4 一（对马来酰亚胺基苯基）一丁酸酯（SMPB)、 和N -（对马来酰亚胺基苯基）异氰酸酯（PMPI)、6 -马来酰亚胺基己酰基（MC)、马来酰 亚胺基丙酰基（MP)、对氨基苄氧基羰基（PAB)、N -琥珀酰亚胺基4(2 -吡啶基硫代）戊酸 酯（SPP)及N -琥珀酰亚胺基（4 -碘一乙酰基）氨基苯甲酸酯（SIAB)、N -琥珀酰亚胺基 (4 一（2-吡啶基硫代）丁酸酯（STOB)等，但并不限定于这些。另外，该连接物例如可以为 缬氨酸一瓜氨酸（Val-Cit)、丙氨酸一苯丙氨酸（ala-phe)这样的肽连接物，也可以分别适 当地组合使用上述举出的连接物。
[0099] 关于化疗剂与抗体的结合方法，例如可以依据Cancer Research ; 68(22)9280(2008)>Nature Biotechnology ；26 (8)925(2008)>Bio Conjugate Chemistry； 19、1673 (2008)、Cancer Research ;68 (15) 6300 (2008)、或日本特表 2008-516896 号公报等 中记载的方法进行。
[0100] 作为本发明的其它的实施方式，可以举出以化学或基因工程的方法在抗体上结合 毒素（toxin)而成的所谓的免疫毒素。
[0101] 作为本发明中所使用的毒素，例如可以举出：白喉毒素 A链、假单胞菌内毒素、篦 麻毒素链；无糖链篦麻毒素 A链、白树毒素（Gelonin)、皂草素（Saporin)等。
[0102] 本发明的免疫复合物由于显示很高的细胞毒活性，因此可以用作细胞毒剂。进而， 本发明的抗体可以用作CDH3高表达疾病的治疗药物。本发明的细胞毒剂及CDH3高表达疾 病的治疗药物例如可以通过使其与表达钙粘着蛋白的癌细胞接触来杀伤癌细胞。作为人 CDH3高表达疾病，可以举出：结肠直肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、头颈癌、卵巢癌、肺癌、浸 润性膀胱癌、胰腺癌、脑转移癌、甲状腺癌、头颈部鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、肺鳞状细 胞癌、皮肤鳞状细胞癌、黑素瘤、乳腺癌、肺腺癌、宫颈部鳞状细胞癌、胰腺鳞状细胞癌、结肠 鳞状细胞癌、或胃鳞状细胞癌、前列腺癌、骨肉瘤或软组织肉瘤等。
[0103] 本发明的免疫复合物可以根据需要通过适宜组合药学上可接受的载体、赋形剂、 稀释剂等而作为医药组合物使用。作为本发明的医药组合物，例如可以制成注射剂。本发 明的医药组合物的给药量依赖于患者的症状的程度、年龄及体重、给药方法等，作为有效成 分的抗体的重量，通常为约IOng?约100mg/kg体重的范围。
[0104] 利用以下的实施例对本发明进一步具体地进行说明，但本发明并不受实施例限 定。
[0105] 实施例
[0106] 实施例1⑶H3表达CHO细胞株的建立
[0107] 为了得到抗⑶H3抗体筛选用细胞株，进行表达全长⑶H3的CHO细胞的建立。
[0108] (1)⑶H3基因表达载体的制作
[0109] 为了将序列号1所示的全长人⑶H3DNA插入哺乳类表达载体pEF4/ myc-HisB (Invitrogen 公司）中，在 37 °C 下用 2 种限制酶 KpnI (Takarabio 公司）及 XbaI (Takarabio公司）处理1小时，然后利用T4 DNA连接酶（Promega公司）按照常规方法 插入同样用KpnI及XbaI处理后的pEF4/myc_HisB中，得到表达载体pEF4-〇)H3-myc-His。
[0110] (2)⑶H3稳定表达株的获得
[0111] 依据FuGENE(注册商标）6转染试剂（Roche Diagnostics公司）的操作说明书， 在转染日前一天向直径IOcm的培养皿中接种8 X IO5细胞的CHO细胞，培养一晚后，将8 ii g 的表达载体pEF4-CDH3-myc-His和16 ii L的FuGENE6试剂混入400 ii L的无血清RPMI1640 培养基（SIGMA-ALDRICH公司），室温放置15分钟后，加入细胞培养液进行转染。在转染次 日使用选择试剂（Zeocin(注册商标））以有限稀释法进行克隆。
[0112] CDH3全长表达CHO的克隆筛选利用使用了抗c-Myc单克隆抗体（SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY公司）的蛋白质印迹法进行，其结果，得到表达量高、且增殖良好的⑶H3全 长表达CHO细胞株（EXZ1501)。将该细胞株与市售抗CDH3抗体（R & D SYSTEMS公司）的 流式细胞仪测定结果示于图1。
[0113] 实施例2可溶型⑶H3抗原的制作
[0114] 为了得到抗CDH3抗体制作的免疫原，制作了使C末端跨膜区域以后缺损的可溶型 CDH3(sCDH3)蛋白质。
[0115] (1)可溶型⑶H3抗原表达载体的制作
[0116] 以⑶H3全长cDNA为模板，使用以扩增相当于⑶H3细胞外区域的部分（相 当于序列号2的1-654，以下为s⑶H3cDNA)的方式所设计的正向引物（序列号3 : CGCGGTACCATGGGGCTCCCTCGT)和反向引物（序列号 4 :CCGTCTAGATAACCTCCCTTCCAGGGTCC) 进行PCR反应。在反应中使用KOD-Plus (东洋纺公司），以94°C -15秒、55°C -30秒、68°C -90 秒、30个循环的反应条件进行。
[0117] 然后，以琼脂糖凝胶电泳切出含有目的尺寸的约2. Okbp的带的凝胶片段，使用 QIA (注册商标）快速凝胶提取试剂盒（Qiagen公司）得到目的s⑶H3cDNA。
[0118] 为了将该sCDH3cDNA插入表达用载体pEF4/myc-HisB，用2种限制酶KpnI及 XbaI处理后，使用T4 DNA连接酶按照常规方法插入同样用KpnI及XbaI处理了的pEF4/ myc-HisB，得到表达载体 pEF4-sCDH3-myc_His。
[0119] (2)可溶型⑶H3蛋白质的表达
[0120] 依据FuGENE6转染试剂的操作说明书，在转染日前一天向直径IOcm的培养皿中接 种8X IO5个CHO细胞，培养一晚后，将8 ii g的表达载体pEF4-sCDH3-myc-His和16 ii L的 FuGENE6试剂混入400 ii L的无血清RPMI1640培养基，室温放置15分钟后，加入细胞培养液 进行转染。在转染次日使用选择试剂（Zeocin)以有限稀释法进行克隆。
[0121] 可溶型⑶H3表达CHO细胞的筛选以使用了抗c-Myc单克隆抗体（SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY公司）的蛋白质印迹法进行。选择在培养上清中的分泌量多且增殖良好 的细胞株，结果得到了可溶型CDH3表达CHO细胞株（EXZ1702)。所选择的可溶型CDH3 表达CHO细胞株（EXZ1702)使用培养面积1，500cm 2的转瓶3个，以每1个转瓶无血清培 养基CHO-S-SFM-II (Invitrogen公司）333mL进行培养72小时，回收培养上清。通过利 用HisTrap (注册商标）HP柱（GE Healthcare Bioscience公司）的亲和色谱法和利用 Superdex (注册商标）200pg柱（GE Healthcare Bioscience公司）的凝胶过滤色谱法，从 所得到的培养上清中得到可溶型CDH3蛋白质。
[0122] 实施例3抗⑶H3单克隆抗体的制作
[0123] (1)以可溶型CDH3蛋白质为免疫原的单克隆抗体的制作
[0124] 等量混合溶解于生理食盐水的50 ii g的可溶型⑶H3蛋白质和Titer-MAX Gold(注 册商标）（TiterMax公司），注射到MRL/lpr小鼠（日本SLC株式会社）的腹腔内及皮下， 由此进行初次免疫。第2次以后的免疫通过混合同样地制备的质量相当于25 y g蛋白质 的可溶型⑶H3蛋白质和Titer-MX Gold并注射到腹腔内及皮下来实施。自最末次免疫3 日后，由小鼠无菌地制备脾脏细胞，按照常规方法，利用聚乙二醇法进行与小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0-Agl4 或者 P3-X63-Ag8. 653 的细胞融合。
[0125] (2)抗⑶H3抗体产生杂交瘤的筛选
[0126] 抗⑶H3抗体的筛选以使用了表达全长⑶H3的CHO细胞株（EXZ1501)的流式细胞 术进行。
[0127] S卩，通过用2mM EDTA-PBS处理表达全长CDH3的CHO细胞株（EXZ1501)而从培养 板剥离，然后，以成为IX IO6个/mL的方式悬浮于FACS溶液。将该细胞悬浮液以50 i! L/ 孔的方式接种于96孔板中，加入杂交瘤培养上清，在4°C下使其反应60分钟，用FACS溶液 (200 y L/ 孔）清洗 2 次后，加入 AlexaFluor488 标记抗小鼠 IgG ?山羊 F(ab'）2 (Invitrogen 公司），在4°C下使其反应30分钟。然后，用FACS溶液清洗2次后，实施流式细胞术，筛选 确认到与CDH3表达CHO细胞的反应的杂交瘤。
[0128] 将由该杂交瘤得到的抗体和⑶H3表达CHO细胞（EXZ1501)、亲株CHO细胞及可确 认到CDH3为高表达的人细支气管肺泡癌细胞株NCI-H358的典型的反应结果示于图2。确 认到筛选的杂交瘤全部与⑶H3表达CHO细胞（EXZ1501)及NCI-H358反应，而未与CHO细 胞反应。
[0129] 实施例4正常组织及癌组织中的⑶H3mRNA的表达
[0130] 从正常人组织及各种癌组织由以激光捕获显微切割法（Laser Capture Microdissection)回收的样品使用ISOGEN(Nippongene公司）按照常规方法制备总 RNA。将 RNA 各 IOng 使用 GeneChipU_133B (Affymetrix 公司）依据 Expression Analysis Technical Manual (Affymetrix公司）分析基因表达。将总基因的表达得分的平均值设为 100,探索癌细胞中表达亢进的基因，结果，⑶H3在正常人组织中表达有限，在肺癌、大肠癌、 胰腺癌中表达高（图3A、B)。另外，研究不同分化度的胰腺癌组织中的⑶H3mRNA的表达， 结果，不论分化度如何，均确认到表达高的组织（图3C)。
[0131] 实施例5利用免疫组织化学染色检测癌组织中的⑶H3蛋白质的表达
[0132] 为了确认癌临床样本中的CDH3蛋白质的表达，以癌样本组织芯片进行免疫染色。
[0133] 癌细胞组织芯片使用上海芯超生物科技有限公司公司（Shanghai Outdo Biotech Co.，Ltd.)制的胰腺癌（腺癌）、肺癌（腺癌）、肺癌（鳞状细胞癌）及大肠癌（腺癌）。
[0134] 对各组织芯片玻片进行脱石蜡处理，在95°C下，以IOmMTris ImM EDTA(pH9. 0)进 行活化40分钟。以ENVISION+Kit(Dako公司）附带的封闭试剂进行内源性过氧化物酶的 灭活，然后，在4°C下，使其与抗⑶H3抗体610227 (BD BI0SCIENCE公司）、及作为阴性对照 的抗HBs抗体Hyb-3423以5 ii g/mL的浓度反应一晚。冲洗抗体溶液后，在室温下，使其与 ENVISION+Kit附带的聚合物二次抗体试剂反应30分钟。以ENVISION+Kit附带的显色试剂 进行显色，以苏木精伊红溶液进行核染色。
[0135] 将结果示于图4。癌细胞被抗CDH3抗体染色，正常细胞未被染色。实施例6由杂 交瘤精制RNA
[0136] 按照 Gough, Rapid and quantitative preparation of cytoplasmic RNA from small numbers of cells, Analytical Biochemisty, 173, p93_95 (1988)中所记载的方法 (其中，代替该论文中所记载的溶解缓冲液而使用其它的TNE缓冲液25mM Tris-HCl，pH 7. 5 ;1%NP_40 ;150mM NaCl ;lmM EDTA，pH 8. 0)从产生CDH3抗体的小鼠杂交瘤细胞中分离 细胞质中存在的RNA。作为具体的操作方法，将5X 10e6个杂交瘤细胞悬浮于0. 2mL的TNE 缓冲液中并溶解细胞膜，然后，利用离心除去细胞核。在所得到的约〇. 2mL细胞质上清中加 入0? 2mL的萃取缓冲液（IOmM Tris-HCl，pH 7. 5 ;0? 35M NaCl ;1% (w/v)SDS ;10mM EDTA，pH 8. 0 ;7M尿素）。将该混合物用苯酚及氯仿抽提，在所得到的RNA溶液中加入作为载体的糖 元（罗氏，Cat No. 901393)，然后，用乙醇使其沉淀。接着，将RNA沉淀物加入10?50微升 的灭菌蒸馏水进行溶解，使细胞质RNA浓度为0. 5?2微克/微升。
[0137] 实施例7从由杂交瘤制备的RNA制作cDNA文库
[0138] 为了合成单链cDNA，将如上所述制备的细胞质RNA的0. 5?3微克制备成含有 50mM Tris-HCl，pH 8.3(室温）；75mM KCl;3mM MgCl2;10mM DIT、100 纳克的随机引物、 0? 5mM dNTP、200单位的Superscript II (逆转录酶，Invitrogen公司）的20微升反应混 合液，在42°C下孵育50分钟。将如上所述合成的cDNA文库直接用作聚合酶链式反应（PCR) 法的模板。
[0139] 实施例8利用PCR法扩增编码抗CDH3抗体可变区域的基因
[0140] 实验中使用的引物全部在北海道System Science株式会社合成。
[0141] A.用于将编码小鼠轻链的可变区域的基因以PCR法扩增的引物
[0142] 使用在5'末端与FRl部分具有同源性的DNA引物和在3'末端与小鼠 L链内的J 链基因具有同源性的4组引物（1)、或者在5'末端与L链信号部分（7组引物）和在3'末 端与KC部分（KVL反义引物）具有同源性的引物组（2)的2种引物组，利用聚合酶链式反 应从该cDNA中分离小鼠免疫球蛋白L链可变区DNA。引物序列如下。
[0143] (1)小鼠 L链可变区克隆4组正义引物
[0144] 参照"Phage Display - A Laboratory Manual-，Barbas Burton Scott Silverman，'PROTOCOL 9. 5 在北海道 SystemScience 合成 Sense Primer 17 种、Reverse Primer 3 种。
[0145] VK正义（FR1部分）：将下述17个引物的混合物用作VK正义引物。
【权利要求】
1. 一种免疫复合物，其特征在于： 其是将针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段与化疗剂连结而成的免疫复合 物。
2. 如权利要求1所述的免疫复合物，其特征在于： 针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段对于表达CDH3的细胞显示细胞毒性。
3. 如权利要求1或2所述的免疫复合物，其特征在于： 针对CDH3的抗体是抗体产生细胞产生的抗体，该抗体产生细胞是由投与了 CDH3或表 达CDH3的细胞作为免疫原的免疫细胞获得的。
4. 如权利要求1?3中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体为单克隆抗体。
5. 如权利要求1?4中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体被嵌合化。
6. 如权利要求1?4中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体被人源化。
7. 如权利要求1?4中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体为人抗体。
8. 如权利要求1或2所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体在H链包含序列号48、56及65中记载的氨基酸序列，L链包含序列号75、82 及86中记载的氨基酸序列。
9. 如权利要求1或2所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体在H链包含序列号52、60及70中记载的氨基酸序列，L链包含序列号75、82 及91中记载的氨基酸序列。
10. 如权利要求1或2所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体在H链包含序列号54、62及72中记载的氨基酸序列，L链包含序列号74、81 及93中记载的氨基酸序列。
11. 如权利要求1或2所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体在H链包含序列号55、63及73中记载的氨基酸序列，L链包含序列号80、85 及94中记载的氨基酸序列。
12. 如权利要求1或2所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体在H链包含序列号49、64及66中记载的氨基酸序列，L链包含序列号76、84 及89中记载的氨基酸序列。
13. 如权利要求1或2所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体在H链包含序列号49、58及68中记载的氨基酸序列，L链包含序列号79、82 及90中记载的氨基酸序列。
14. 如权利要求1或2所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体在H链包含序列号53、61及71中记载的氨基酸序列，L链包含序列号75、82 及92中记载的氨基酸序列。
15. 如权利要求1或2所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体在H链包含序列号51、57及67中记载的氨基酸序列，L链包含序列号78、83 及88中记载的氨基酸序列。
16. 如权利要求1或2所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体在H链包含序列号50、59及69中记载的氨基酸序列，L链包含序列号77、83 及87中记载的氨基酸序列。
17. 如权利要求1或2所述的免疫复合物，其特征在于： 所述抗体具有由与权利要求8?16中任一项所述的抗体的H链的氨基酸序列具有至 少90%的序列同一性的氨基酸序列构成的H链。
18. 如权利要求1?3中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： ⑶H3为哺乳类的⑶H3。
19. 如权利要求1?3中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： ⑶H3选自灵长类的⑶H3。
20. 如权利要求1?3中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： CDH3选自人的CDH3。
21. 如权利要求1?3中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： ⑶H3是细胞表面表达的⑶H3。
22. 如权利要求1?21中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： 所述具有CDH3结合能力的抗体片段是Fab，F(ab'）2或scFv。
23. 如权利要求1?22中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： 所述化疗剂是细胞毒性物质。
24. 如权利要求23所述的免疫复合物，其特征在于： 所述细胞毒性物质选自美登素类及其衍生物。
25. 如权利要求23所述的免疫复合物，其特征在于： 所述细胞毒性物质选自奥瑞他汀及其衍生物。
26. 如权利要求24所述的免疫复合物，其特征在于： 所述美登素类及其衍生物选自DMl、DM3、DM4。
27. 如权利要求25所述的免疫复合物，其特征在于： 所述奥瑞他汀及其衍生物选自MMAE或者MMAF。
28. 如权利要求23所述的免疫复合物，其特征在于： 所述细胞毒性剂为DMl。
29. 如权利要求28所述的免疫复合物，其特征在于： 针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段的每1分子结合有1?10个DMl。
30. 如权利要求28所述的免疫复合物，其特征在于： 针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段的每1分子结合有3?8个DMl。
31. 如权利要求1?30中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： 针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段与化疗剂经由连接物结合。
32. 如权利要求1?30中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： 针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段与化疗剂经由抗体的Fc区域的分子 内二硫键结合。
33. 如权利要求1?30中任一项所述的免疫复合物，其特征在于： 针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段与化疗剂的结合是以基因工程的方法 改变抗体的Fc区域而进行的结合。
34. 如权利要求31所述的免疫复合物，其特征在于： 使针对CDH3的抗体或具有CDH3结合能力的其片段与化疗剂结合的连接物是2价反应 性交联试剂。
35. 如权利要求31所述的免疫复合物，其特征在于： 所述连接物选自N -琥珀酰亚胺基4 一（马来酰亚胺基甲基）环己烷羧酸酯（SMCC)、 N -琥珀酰亚胺基一 4 一（N -马来酰亚胺基甲基）一环己烷一 1 一羧基一（6 -酰胺己酸 酯）（LC-SMCC)、K 一马来酰亚胺基^^一酸N-琥珀酰亚胺酯（KMUA)、Y -马来酰亚胺基 丁酸N-琥珀酰亚胺酯（GMBS)、e -马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯（EMCS)、 间马来酰亚胺基苯甲酰基一 N-羟基琥珀酰亚胺酯（MBS)、N -（a -马来酰亚胺基乙酰 氧基）一琥珀酰亚胺酯（AMAS)、琥珀酰亚胺基一 6 --马来酰亚胺基丙酰胺基）己酸 酯（SMPH)、N -琥珀酰亚胺基4 一（对马来酰亚胺基苯基）一丁酸酯（SMPB)、及N -（对 马来酰亚胺基苯基）异氰酸酯（PMPI)、6 -马来酰亚胺基己酰基（MC)、马来酰亚胺基丙酰 基（MP)、对氨基苄氧基羰基（PAB)、N -琥珀酰亚胺基4(2 -吡啶基硫代）戊酸酯（SPP)及 N -琥珀酰亚胺基（4 一碘一乙酰基）氨基苯甲酸酯（SIAB)、N -琥珀酰亚胺基（4 一（2 - 吡啶基硫代）丁酸酯（STOB)。
36. 如权利要求31所述的免疫复合物，其特征在于： 所述连接物被蛋白酶切断。
37. 如权利要求31所述的免疫复合物，其特征在于： 所述连接物含有val-cit。
38. 如权利要求31所述的免疫复合物，其特征在于： 所述连接物含有PABA。
39. -种医药组合物，其特征在于： 其包含权利要求1至38中任一项所述的免疫复合物，用于治疗以CDH3的过量表达为 特征的癌。
40. 如权利要求39所述的医药组合物，其特征在于： 其具有抗癌作用。
41. 如权利要求39或40所述的医药组合物，其特征在于： 所述癌选自结肠直肠癌、非小细胞肺癌、乳癌、头颈癌、卵巢癌、肺癌、浸润性膀胱癌、胰 腺癌、脑转移癌、甲状腺癌、头颈部鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、肺鳞状细胞癌、皮肤鳞状 细胞癌、黑素瘤、乳腺癌、肺腺癌、宫颈鳞状细胞癌、胰腺鳞状细胞癌、结肠鳞状细胞癌、或胃 鳞状细胞癌、前列腺癌、骨肉瘤或软组织肉瘤。
【文档编号】C07K16/46GK104220595SQ201280072237
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2012年4月4日 优先权日:2012年4月4日
【发明者】石井敬介, 见供克之, 甲田克志, 野村富美子, 粥川容子, 松浦正 申请人:株式会社英仙蛋白质科学