一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法
【专利摘要】本发明名称为一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法，涉及生物医药领域。本发明申请所要解决的技术问题为克服现有工艺生产鱼精蛋白周期长、酒精用量大等不足，提供一种利用硫酸提取、有机溶剂纯化与硅藻土吸附相结合对鳕鱼鱼精蛋白进行分离纯化的方法。本方法避免了传统工艺中采用多次乙醇溶解再沉淀的过程，大大减少了有机溶剂的用量，降低生产成本的同时缩短了生产周期，且产品纯度好，活性收率高。
【专利说明】一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的提取方法。
【背景技术】
[0002]鱼精蛋白是一类从鱼类的鱼白组织中提取的碱性蛋白质，临床上可以作为胰岛素的载体，延长胰岛素的半衰期，从而使药物注射间隔时间延长；同时，鱼精蛋白可用于因肝素注射过量引起的出血，且目前无其他药物可以代替；另外，鱼精蛋白在中性和碱性介质中显示出很强的抑菌能力，并有较高的热稳定性，在210°C条件下加热仍具有活性，同时其抑菌范围和食品仿佛范围均较广，对枯草杆菌、芽孢杆菌、干酪乳杆菌、胚芽乳杆菌、乳酸菌、霉菌、芽孢耐热菌和革兰氏阳性菌等均有较强的抑制作用，经毒理实验证明，鱼精蛋白作为防腐剂无味无臭，对人体无害，因而使用量不受任何限制，可根据需要添加到满意的抑菌效果，综上，鱼精蛋白具有广阔的市场。目前已有很多鲤鱼、鲢鱼、马哈鱼等鱼精蛋白制备方法的文献报道，但还没有鳕鱼鱼精蛋白制备方法的报道。[0003]由于鱼精蛋白通常是以核酸-蛋白质的形式存在于鱼的精子中，核蛋白结合键不牢固，所以现有的提取技术通常采用硫酸使其与核酸分离，制得鱼精蛋白的硫酸盐，即硫酸鱼精蛋白，后采用有机溶剂进行纯化，申请号为20121028815991的专利采用硫酸提取、升温提取、低温析出、干燥工序的工艺进行硫酸鱼精蛋白的制备，而在硫酸提取、升温提取和干燥工序的过程中采用了多次乙醇沉淀再溶解的方法，致使酒精用量大，使生产成本增高，生产周期较长，且通过硫酸提取、有机溶剂纯化的方法得到的鱼精蛋白通常仍还有核酸等杂质，产品活性收率低。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是提供一种利用硫酸提取、有机溶剂纯化与硅藻土吸附相结合对鳕鱼鱼精蛋白进行分离纯化的方法，该方法克服了鱼精蛋白生产周期长、酒精用量大、活性收率低等不足。
[0005]本发明采用的技术方案如下:
一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法，包括以下步骤:
(1)预处理:取解冻的鳕鱼鱼白置于组织捣碎机中，加入NaCl溶液，用三层纱布 过滤得浆液；
(2)离心:3500r/min15分钟，去上清，收集沉淀;
(3)提取:向沉淀中加入硫酸进行提取；
(4)过滤:收集滤液；
(5)吸附:在滤液中加入娃藻土,搅拌1-2小时；
(6)过滤:收集滤液；
(7)用乙醇进行沉淀、脱水、干燥。
[0006]优化地，所述步骤(1)中NaCl溶液的浓度为0.5%_3%。[0007]优化地，所述步骤(3)中硫酸溶液浓度为3%_10%，提取时间为1-4小时。
[0008]优化地，所述步骤(5)中所加硅藻土的质量分数为1%_10%。
[0009]优化地，所述步骤(7)中，所用乙醇的量为使得沉淀后的酒精度为60%_85%，沉淀10小时以上。
[0010]本发明的有益效果为通过采用硫酸提取、有机溶剂纯化与吸附纯化相结合的方式对鱼精蛋白进行提取纯化，避免了传统工艺中采用多次乙醇溶解再沉淀的过程，大大减少了有机溶剂的用量，降低生产成本的同时缩短了生产周期，且产品纯度高，活性收率高。
【具体实施方式】
[0011]下面对本发明作进一步的详细说明。
[0012]实施例1
(1)预处理:取100g解冻的鳕鱼鱼白置于组织捣碎机中，加入100mL0.5%NaCl溶 液，用三层纱布过滤得浆液；
(2)离心:3500r/min15分钟，去上清，收集沉淀；
(3)提取:向沉淀中加入50ml3%的硫酸提取I小时；
(4)过滤:收集滤液；
(5)吸附:在滤液中加入1%的硅藻土，搅拌I小时；
(6)过滤:收集滤液；
(7)用乙醇进行沉淀、脱水、干燥。滤液中加入95%的乙醇，使得酒精度为60%，静置10小时，离心，收集沉淀，用无水乙醇脱水，真空干燥。
[0013]对产品各项指标进行检测，将结果记录于表1。
[0014]实施例2
(1)预处理:取100g解冻的鳕鱼鱼白置于组织捣碎机中，加入300ml2%NaCl溶液，
用三层纱布过滤得浆液；
(2)离心:3500r/min15分钟，去上清，收集沉淀；
(3)提取:向沉淀中加入150ml5%的硫酸提取2.5小时；
(4)过滤:收集滤液；
(5)吸附:在滤液中加入5%的娃藻土,搅拌1.5小时
(6)过滤:收集滤液；
(7)用乙醇进行沉淀、脱水、干燥。滤液中加入95%的乙醇，使得酒精度为75%，静置14小时，离心，收集沉淀，用无水乙醇脱水，真空干燥。
[0015]对产品各项指标进行检测，将结果记录于表1。
[0016]实施例3
(1)预处理:取100g解冻的鳕鱼鱼白置于组织捣碎机中，加入500ml3%NaCl溶液，
用三层纱布过滤得浆液；
(2)离心:3500r/min15分钟，去上清，收集沉淀；
(3)提取:向沉淀中加入300ml10%的硫酸提取4小时；
(4)过滤:收集滤液；
(5)吸附:在滤液中加入10%的硅藻土，搅拌2小时；(6)过滤:收集滤液；
(7)用乙醇进行沉淀、脱水、干燥。滤液中加入95%的乙醇,使得酒精度为85%,静置16小时，离心，收集沉淀，用无水乙醇脱水，真空干燥。
[0017]对产品各项指标进行检测，将结果记录于表1。
[0018]对比例
(1)预处理:取100g解冻的鳕鱼鱼白置于组织捣碎机中，加入500ml3%NaCl溶液，
用三层纱布过滤得浆液；
(2)离心:3500r/min15分钟，去上清，收集沉淀；
(3)提取:向沉淀中加入300ml10%的硫酸提取4小时；
(4)过滤:收集滤液；
(5)用乙醇进行沉淀、脱水、干燥。滤液中加入95%的乙醇，使得酒精度为80%，静置12小时，离心，收集沉淀，用无水乙醇脱水，真空干燥。
[0019]对产品各项指标进行检测，将结果记录于表1。
[0020]表1
【权利要求】
1.一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法，其特征包括如下步骤: (1)预处理:取解冻的鳕鱼鱼白置于组织捣碎机中，加入NaCl溶液，用三层纱布 过滤得浆液； (2)(离心:3500r/min15分钟，去上清，收集沉淀； (3)提取:向沉淀中加入硫酸进行提取； (4)过滤:收集滤液； (5)吸附:在滤液中加入娃藻土,搅拌1-2小时； (6)过滤:收集滤液； (7 )用乙醇进行沉淀、脱水、干燥。
2.根据权利要求1所述的一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法，其特征是所述步骤(1)中NaCl溶液的浓度为0.5%-3%。
3.根据权利要求1所述的一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法，其特征是所述步骤(3)中硫酸溶液浓度为3%-10%，提取时间为1-4小时。
4.根据权利要求1所述的一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法，其特征是所述步骤(5)中所加硅藻土的质量分数为1%_10%。
5.根据权利要求1所述的 一种鳕鱼硫酸鱼精蛋白的制备方法，其特征是所述步骤(7)中，所用乙醇的量为使得沉淀后的酒精度为60%-85%，沉淀10小时以上。
【文档编号】C07K14/435GK103923199SQ201310009731
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2013年1月11日 优先权日:2013年1月11日
【发明者】李萍, 张永勤, 曲辉, 张春革 申请人:青岛亚博生物科技有限公司