专利名称：一种10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的高效提取纯化工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种化学药物中间体的制备，一种以红豆杉枝叶为原料简单高效提取纯化得到10-去乙酰基巴卡亭III (以下简称10-DAB)的工艺方法。
背景技术：
癌症，已成为严重威胁人类健康的主要病症之一，每年约有600万新的病例被报道，由于癌症早期诊断的困难，相当数量的癌症患者将依赖药物治疗。紫杉醇，具有非常独特的抗癌机理，对卵巢癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、白血病、黑色素瘤和结肠癌等都具有很好的疗效。主要是通过抑制微管解聚而使肿瘤细胞的有丝分裂终止致使肿瘤细胞死亡，还具有通过影响参与细胞凋亡的酶并激活与细胞凋亡有关的蛋白质而促进肿瘤细胞凋亡的能力，是目前唯一能促使微管形成而抑制微管蛋白解聚的植物次生代谢产物。紫杉醇因其独特的作用机理，已成为新一代抗癌药物的代表。迄今为止，紫杉醇已在全球40多个国家上市。因其对多种癌症疗效确切、药理作用独特，紫杉醇自1992年上市以来，销售额以年均5亿美元的净值迅速增长。目前紫杉醇主要有以下几个来源，一是通过从多年生红豆杉树皮中直接提取。1966年采取400根试管的逆流分配色谱法，从12kg太平洋红豆杉树皮中提取0.5g紫杉醇，历时两年，其工艺十分繁琐，且存在生产技术水平落后，工艺可靠性、重复性和稳定性极差，收率极低，波动范围大，生产中原料和辅料浪费大、生产成本高等缺陷，因树皮中紫杉醇含量在0.06%左右，且树皮为非再生性资源，用此种方法，收率极低，只能满足短期需要，且大量牺牲有限的红豆杉资源，因此为解决资源问题，全球的科学家们除了优化改进提取纯化工艺，提高产率之外，在全合成、半合成等方向也做了大量研究。二是全合成法，1994年，Nincolaou等运用逆合成分析法的战略全合成了紫杉醇，但是反应需要22-25步，过程复杂，总收率太低，成本较高，难以形成产业化生产。三是细胞培养法，但其最高产率仅为22mg/L，成本高，且还面临一系列难题，其市场竞争力低，难以实现工业化。四是从红豆杉属植物的枝叶中提取前体半 合成紫杉醇，1988年，法国Denis等首次报道以10-DAB为原料半合成了紫杉醇，10-DAB主要分布在一年生红豆杉的枝叶中，其含量在0.1%以上，因枝叶为再生性资源，且10-DAB在红豆杉中含量比紫杉醇丰富的多，分离提取的收率也高于紫杉醇，使得半合成方法越来越受到重视。IO-DAB,白色粉末结晶，分子式为C29H36Oltl，从红豆杉属植物的枝叶的提取，用于合成抗癌药紫杉醇。已有的提取工艺有丙酮/乙酸乙酯混合溶液回流提取粉碎红豆杉枝叶，回收溶剂得浸膏，水悬浮浸膏二氯甲烷萃取，柱层析分离纯化。有机酸浸泡粉碎的红豆杉枝叶，得到的浸取液用有机溶剂提取，蒸去溶剂，得到黏状物中加入乙腈溶解，所得混合物放置冷却析晶，得到粗品(专利公开号CN1903849)。肖虎申请专利(公开号CN101230053A)采用柠檬酸超声提取粉碎的红豆杉枝叶，得到的提取液用大孔吸附树脂吸附，再用乙醇洗脱，蒸干溶解得到黄褐色提取物浓缩膏，有机溶剂溶解，除掉不溶物，蒸干溶剂，重结晶得到目标产物10-DAB，纯度达到98%，但是产率很低。
总结起来，以上10-DAB提取制备方法存在以下缺陷:(I)反应不完全，无法将10-DAB从红豆杉中完全提取出来；(2)溶剂使用量大，杂质多，质量难以控制，产率低，导致生产成本高；(3)工艺程序繁杂，能耗大，不适合工业化生产；本发明为克服上述不足之处进一步研究，对其工艺进行改进，发明一个高产优质低成本适合大工业生产的10-DAB提取纯化工艺。
发明内容
本发明的目的:发明一种以红豆杉枝叶为原料反应流程简单易操作、节能低碳环保的10-DAB高产优质的提取纯化工艺。(I)将红豆杉枝叶烘干干燥后，粉碎过60目-80目筛得粉末，丙酮/乙酸乙酯(I: I) 5倍体积冷浸提取24h，重复3次，回收溶剂得浸膏，溶剂回收可循环利用；(2)将上步得到的浸膏以3倍量乙醇溶液溶解，(TC静置，离心除去叶绿素，减压浓缩回收溶剂得膏状物，除去叶绿素可大大减少下步反应溶剂的浪费，更利于后续粗品的纯化步骤；(3)用二氯甲烷提取除去叶绿素的醇膏，提取3次过滤除去不溶物，再加入20%乙醇和2%氢氧化钠的混合溶液萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥，回收溶剂可循环利用。较传统工艺直接用悬浮浸膏二氯甲烷萃取，降低乳化，节约溶剂使用量，提高10-DAB的收率和
含量;(4)不采用柱层 析分离纯化，直接以甲醇-水结晶和石油醚-丙酮重结晶得到目标产物，含量在96.5%以上，收率达到67.2%。本发明原料干燥粉碎再有机溶剂冷浸提取，减少反应溶剂使用量同时提高收率，溶剂可回收再利用，绿色环保，该工艺操作简单、高效、节能低碳环保，适合工业化大生产。
图1为10-DAB的结构式图2为10-DAB提取工艺流程图
具体实施例方式在下面的实施例中进一步说明了本发明，这并不限制本发明的范围。实施例1称取红豆杉枝叶10kg，干燥粉碎过80目筛，加入乙酸乙酯/丙酮(I: 1)50.0L冷浸提取24h，重复3次，回收溶剂循环利用，得浸膏，30L乙醇加热回流溶解浸膏，加入9L水，(TC静置，离心，真空减压浓缩回收溶剂得膏状物，乙醇回收循环利用；加入二氯甲烷溶解醇膏，提取3次除去不溶物，加入20%乙醇和2%氢氧化钠混合溶液萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥得浸膏；以甲醇-水结晶和石油醚-丙酮重结晶，得到10-DAB精品，HPLC检测含量96.6%，收率 67.2%o实施例2称取红豆杉枝叶10kg，干燥粉碎过50目筛，加入乙酸乙酯/丙酮(I: 1)50.0L冷浸提取24h，重复3次，回收溶剂循环利用，得浸膏，30L乙醇加热回流溶解浸膏，加入9L水，(TC静置，离心，真空减压浓缩回收溶剂得膏状物，乙醇回收循环利用；加入二氯甲烷溶解醇膏，提取3次除去不溶物，加入20%乙醇和2%氢氧化钠混合溶液萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥得浸膏；加入甲醇-水结晶和石油醚-丙酮重结晶，得到10-DAB精品，HPLC检测含量 95.3%，收率 63.5%。实施例3称取红豆杉枝叶10kg，干燥粉碎过100目筛，加入乙酸乙酯/丙酮(I: 1)50.0L冷浸提取24h，重复3次，回收溶剂循环利用，得浸膏，30L乙醇加热回流溶解浸膏，加入9L水，(TC静置，离心，真空减压浓缩回收溶剂得膏状物，乙醇回收循环利用；加入二氯甲烷溶解醇膏，提取3次除去不溶物，加入20%乙醇和2%氢氧化钠混合溶液萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥得浸膏；加入甲 醇-水结晶和石油醚-丙酮重结晶，得到10-DAB精品，HPLC检测含量95.1%，收率67.3%0实施例4称取红豆杉枝叶10kg，干燥粉碎过80目筛，加入乙酸乙酯/丙酮(I: 1)50.0L冷浸提取24h，重复3次，回收溶剂循环利用，得浸膏，30L乙醇加热回流溶解浸膏，加入9L水，(TC静置，离心，真空减压浓缩回收溶剂得膏状物，乙醇回收循环利用；水悬浮浸膏加入二氯甲烷萃取，萃取液用无水硫酸钠干燥得浸膏；加入甲醇-水结晶和石油醚-丙酮重结晶，得到10-DAB精品，HPLC检测含量61.4%,收率62.6%0
权利要求
1.一种以红豆杉枝叶为原料提取制备IO-DAB的工艺，其特征在于以红豆杉为原料，应用先进高效的提取分离纯化技术，将红豆杉枝叶干燥，粉碎过筛，有机溶剂浸泡提取，将浸膏用有机溶剂溶解，纯化处理得到10-DAB。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于将红豆杉枝叶干燥，粉碎过60-80目筛，有机溶剂冷浸提取24h，重复3次，回收溶剂得浸膏。
3.根据权利要求2所述方法，所使用有机溶剂为丙酮/乙酸乙酯(V: V)1: I混合液。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于有机溶剂溶解浸膏，(TC静置，离心除去叶绿素，得醇膏。
5.根据权利要求4所述方法，所使用有机溶剂为乙醇。
6.根据权利要求1所述方法，采用二氯甲烷提取除去叶绿素的醇膏，过滤除去不溶物，再加入20%乙醇和2%氢氧化钠的混合溶液萃取。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于用甲醇-水结晶和石油醚-丙酮重结晶萃取液得到10-DAB，含量在96. 5%以上，收率达到67.2%。
全文摘要
一种以红豆杉枝叶为原料提取制备10-DAB的工艺，它是合成疗效确切、药理作用独特抗癌药紫杉醇、多烯紫杉醇的重要原料。本发明以有机溶剂浸泡、提取，有机溶剂溶解除杂、萃取和特殊溶剂中纯化处理得到10-DAB。该工艺得到10-DAB的含量在96.5％以上，收率达到67.2％。
文档编号C07D305/14GK103145653SQ201310125299
公开日2013年6月12日 申请日期2013年4月12日 优先权日2013年4月12日
发明者张梅, 彭学东, 赵金召, 邱洁 申请人:江苏斯威森生物医药工程研究中心有限公司