专利名称：复合晶胶连续床介质、制备与分离IgG和白蛋白的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种复合晶胶连续床介质及其制备方法，以及该复合晶胶连续床介质从人血清中快速分离免疫球蛋白IgG和血清白蛋白的应用。
背景技术：
人血清抗体和白蛋白在生物技术、临床医学和诊断等诸多领域具有重要应用，血清是目前获得IgG和白蛋白的主要来源。现有的分离方法如盐析、乙醇沉淀、金属离子亲和层析、染料亲和层析 、Protein A亲和层析、氨基酸配基亲和层析等方法在分离IgG和白蛋白方面已进行了研究，部分技术已得到了应用。但是，这些方法常常遇到诸如亲和配基容易泄漏、配基与目标蛋白质结合后进入洗脱液而不易去除、分离纯化步骤多、过程时间长、IgG和白蛋白在分离过程中容易失去生物活性等问题。近几年，混合模式扩张床介质也开始用于IgG和白蛋白的吸附分离，但由于床层分散的影响及高效分离介质研究相对滞后，直接用于从人血清中IgG和白蛋白的大量分离时，尚需要开展深入系统的工作。因此，研究从人血清中快速分离IgG和白蛋白的新方法，具有重要意义。最近出现的晶胶层析生物分离方法，以具有超大孔隙的晶胶为分离介质，可以快速从发酵液中分离生物大分子物质。文献(Bereli N., et al., Materials Science andEngineering2010，30:323 - 329)曾以三嗪染料 Cibacron Blue F3GA 及 Cu2+亲和晶胶层析方法分离IgG和白蛋白，但这些亲和介质对这两种目标蛋白的选择性小，得到的是这两种蛋白的混合物，难以将二者分开成为独立的产物，床柱的吸附容量较低。文献(Alkan etal., Biochemical Engineering Journal2009, 45:201 - 208)曾用 Protein A亲和晶胶介质层析分离IgG，但由于Protein A十分昂贵，而且存在配基泄漏而污染目标蛋白的问题，规模化分离难以实现。
发明内容
本发明目的是提供一种复合晶胶连续床介质及其制备与应用，所述复合晶胶连续床介质适于快速分离人血清中免疫球蛋白抗体(IgG)和白蛋白。本发明采用的技术方案是:本发明提供一种复合晶胶连续床介质，所述复合晶胶连续床介质孔径0.1 300 μ m,孔隙率80 95%，所述复合晶胶连续床介质带有式(I )所示疏水苄基_阴离子交
换叔氣基的功能基团:
权利要求
1.一种复合晶胶连续床介质，其特征在于所述复合晶胶连续床介质孔径0.1 300 μ m,孔隙率80 95%，所述复合晶胶连续床介质带有式(I )所示疏水苄基_阴离子交换叔氣基的功能基团:
2.如权利要求1所述复合晶胶连续床介质，其特征在于所述结晶致孔和聚合反应的温度为-15°C，反应时间为20h。
3.如权利要求1所述的复合晶胶连续床介质，其特征在于所述的复合晶胶连续床介质按如下方法制得:将可与复合晶胶连续床介质基质发生接枝反应的单体为原料，以Cu3+离子水溶液为催化剂，通过与所述的复合晶胶连续床介质基质进行接枝反应，固载在复合晶胶连续床介质基质内，即获得所述复合晶胶连续床介质；所述接枝反应的单体为N，N, N-三甲基乙烯基苯甲氯化铵；所述接枝反应的单体以0.5mol/L单体水溶液的形式加入，所述单体水溶液的体积用量为复合晶胶连续床介质基质体积的5倍，所述Cu3+离子水溶液的浓度为0.037M，Cu3+离子水溶液体积用量为复合晶胶连续床介质基质体积的3倍；所述接枝反应的温度为40 55°C，反应时间为0.5 4h。
4.一种权利要求1所述复合晶胶连续床介质在快速分离人血清IgG和白蛋白中的应用，其特征在于所述的应用为:将人血清用PH7.2 7.8的缓冲液稀释制成人血清稀释液，然后以复合晶胶连续床介质为层析柱进行分离，分别以50 100mM、150 200mM、lM的NaCl洗脱液洗脱，收集50 IOOmM的NaCl洗脱液洗脱时出现洗脱峰的流出液，经透析和冷冻干燥即得人血清白蛋白；收集150 200mM的NaCl洗脱液洗脱时出现洗脱峰的流出液，经透析和冷冻干燥即得IgG。
5.如权利要求4所述应用，其特征在于所述人血清用pH7.2 7.8,20 50mM的磷酸盐缓冲液稀释6 15倍。
6.如权利要求4所述应用，其特征在于所述应用为:将人血清用20mM、pH7.8的磷酸盐缓冲液稀释15倍，以复合晶胶连续床介质为层析柱进行分离，以lcm/min的速度上样，然后用20mM、pH7.8的磷酸盐缓冲液冲洗，再用20mM、pH7.8的磷酸盐缓冲液配制的NaCl终浓度分别为100mM、150mM、lM的洗脱液依次洗脱，洗脱流速均为lcm/min，收集NaCl终浓度IOOmM洗脱液洗脱时出现洗脱峰的流出液，经透析和冷冻干燥即得人血清白蛋白；收集NaCl终浓度150mM洗脱液洗脱时出现洗脱峰的流出液，经透析和冷冻干燥即得免疫球蛋白抗体I gGo
全文摘要
本发明公开了一种复合晶胶连续床介质及其制备方法与在快速分离人血清IgG和白蛋白中的应用，所述复合晶胶连续床介质孔径0.1～300μm，孔隙率80～95%，所述复合晶胶连续床介质带有式(Ⅰ)所示疏水苄基-阴离子交换叔氨基的功能基团；本发明所述复合晶胶连续床介质聚合物链中同时含有氨基型离子交换基团及一定疏水功能的苄基，有助于晶胶介质与IgG大分子及白蛋白形成不同的竞争性多点吸附，使得其经不同浓度的含盐洗脱液分步洗脱，依次被解析，分离纯度高，分离性能优良，所述层析方法步骤少，操作简单，所用洗脱液及缓冲液都很容易配制，分离过程迅速，可以实现快速分离，在血清蛋白的分离方面具有广阔的应用前景；式(Ⅰ)中n为正整数。
文档编号C07K1/16GK103230784SQ20131015172
公开日2013年8月7日 申请日期2013年4月26日 优先权日2013年4月26日
发明者贠军贤, 姚善泾, 张颂红, 姚克俭, 叶佳蕾, 徐林红 申请人:浙江工业大学