一种从金银花粗取物中精制绿原酸的方法
【专利摘要】本发明涉及提取绿原酸的方法，具体的说是一种从金银花粗取物中精制绿原酸的方法。具体采用大孔树脂A柱除杂过程，大孔树脂B柱富集纯化过程和中压液相色谱（MPLC）精制过程。本发明以金银花粗提物为原料，用去离子水充分溶解后，配制成金银花粗提物的水溶液，将上述水溶液经大孔树脂柱A吸附除去杂质，流出液直接过大孔树脂柱B，动态吸附饱和后，流加洗杂液洗杂至流出液无色，用洗脱液洗脱大孔树脂B至高效液相色谱（HPLC）检测无绿原酸流出，并收集洗脱液，洗脱液减压浓缩，经装有C18反相硅胶柱的MPLC梯度洗脱得纯度大于98%的绿原酸产品。该方法首次提出用MPLC制备高纯度绿原酸，样品处理量大，操作简单，适用于大规模制备。
【专利说明】一种从金银花粗取物中精制绿原酸的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及提取绿原酸的方法，具体的说是一种从金银花粗取物中精制绿原酸的 方法。
【背景技术】
[0002] 金银花，别名忍冬，是忍冬科多年生半常绿缠绕木质藤本植物。金银花为干燥花蕾 或初开的花，在我国东三省、广东、海南、山东、喜马拉雅山均有广泛分布。金银花甘寒清热 而不伤胃，芳香透达可以祛邪，还可散风热，对发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等症均有明 显疗效，是清热解毒的良药。
[0003] 绿原酸为金银花的特征活性成分，具有抗菌、抗病毒及抗真菌、增强机体防御机能 的作用。中药制剂中绿原酸的精制方法主要有有机溶剂萃取法、重结晶法和聚酰胺法等。中 国专利200310111180. 2公开了"一种绿原酸提取分离的方法"，以杜仲树叶和元宝枫叶为 原料，经溶剂浸出、树脂吸附、萃取、干燥、结晶，得纯度为98%以上的绿原酸产品。中国专利 200910264401. 7公开了"一种菊芋制备绿原酸的方法"，以菊芋叶为原料，经超声提取，固液 分离，聚酰胺精制后得精制绿原酸产品。但采用中压液相色谱法制备高纯度绿原酸的方法 尚属首次报导。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种从金银花粗提物中精制绿原酸的新方法。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
[0006] -种从金银花粗取物中精制绿原酸的方法：
[0007] 1)大孔树脂柱A除杂过程，将金银花提取物的水溶液以l-5BV/h的流速通过大孔 树脂柱A，吸附除杂质，收集流出液；
[0008] 2)大孔树脂柱B富集纯化过程，将步骤1)收集的流出液以l_5BV/h的流速过大孔 树脂柱B，动态吸附饱和后，用去离子水以l-10BV/h的流速淋洗大孔树脂柱B至流出液无 色，再用体积分数为10%_80%的乙醇水溶液以5-10BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液 直至无绿原酸流出，最后将收集所得洗脱液减压浓缩至膏状；
[0009] 3)MPLC精制过程，将步骤2)所得的浸膏用30%的甲醇溶解，将溶液注入20-45 μ m 的C18反相硅胶柱，以甲醇和水为流动相，洗脱流速为50-250mL/min进行梯度洗脱，收集出 峰时间为l〇_15min的流出液，流出液经减压浓缩、冷冻干燥后，得绿原酸纯度大于98%的绿 原酸产品。
[0010] 所述步骤1)金银花提取物的水溶液为以金银花为原料经水提醇沉法提取所得的 提取物中加入去离子水，室温下充分搅拌后，配制成，其中金银花提取物与去离子水的比例 为 1:10 (W/V)。
[0011] 所述步骤1)的大孔树脂A为符合药用要求的非极性大孔树脂。
[0012] 所述步骤1)的大孔树脂A为D3520型、D4006型、HPD-100型、HPD-200A型或H103 型大孔树脂中的一种。
[0013] 所述步骤2)的大孔吸附树脂为符合药用要求的极性或中极性大孔树脂。
[0014] 所述步骤2)的大孔吸附树脂为ADS-F8型、NKA型、NKA-2型、ADS-7型或S-8型大 孔树脂中的一种。
[0015] 所述步骤1)和步骤2 )的大孔树脂A和大孔树脂B均可经再生液再生后重复使用， 进而达到连续操作的目的。
[0016] 所述再生液为无水乙醇。
[0017] 所述步骤3) MPLC精制时流动相甲醇的体积分数在0-20min内从10%到50%梯度 变化。
[0018] 本发明有益效果在于：
[0019] 1.本发明采用中压液相色谱的方法制备高纯度绿原酸，为绿原酸的精制提供一种 新方法。
[0020] 2.本发明采用大孔树脂除杂与大孔树脂吸附洗脱联用技术，处理量大，操作连续 简便，大大提高了洗脱过程中绿原酸的纯度。
[0021] 3.本发明采用的洗脱剂和再生剂均可重复利用，且整个过程操作方法简单，控制 参数少，时间短，效率高，适用于工业化生产。
[0022] 4.本发明的方法相对于传统绿原酸精制方法而言，采用中压液相色谱法精制高纯 度绿原酸不但可以大大缩短制备时间（〇. 5h内即可完成)，明显提高工作效率。
【专利附图】
【附图说明】
[0023] 图1为金银花粗提物水溶液中绿原酸的HPLC图；
[0024] 图2为经大孔树脂柱A除杂后的绿原酸的HPLC图；
[0025] 图3为经大孔树脂柱B富集纯化后的绿原酸的HPLC图；
[0026] 图4为经MPLC精制后的绿原酸的HPLC图；
【具体实施方式】
[0027] 以下实施例是对本发明的进一步说明，但本发明不限于此。
[0028] 本发明所述实施例中，金银花提取物是以金银花为原料，经干燥、粉碎后，加水浸 提，过滤，滤液加入乙醇，低温冷藏，静置过夜，使杂质沉淀；过滤，滤液浓缩干燥后得到的。
[0029] 本发明所述实施例中，绿原酸的纯度采用高效液相色谱法进行检测，所用色谱柱 为办口618丨1805 018(4.6_\250_，5 4 111)，检测波长为32711111，流动相六为0.1%三氟乙 酸水溶液，B为乙腈，流速为lmL/min，进样量为10 μ L，梯度洗脱程序如表1。
[0030] 表I HPLC梯度洗脱程序
【权利要求】
1. 一种从金银花粗取物中精制绿原酸的方法，其特征在于： 1) 大孔树脂柱A除杂过程，将金银花提取物的水溶液以l-5BV/h的流速通过大孔树脂 柱A，吸附除杂质，收集流出液； 2) 大孔树脂柱B富集纯化过程，将步骤1)收集的流出液以l-5BV/h的流速过大孔树脂 柱B，动态吸附饱和后，用去离子水以l-10BV/h的流速淋洗大孔树脂柱B至流出液无色，再 用体积分数为10%_80%的乙醇水溶液以5-10BV/h的流速进行洗脱，收集乙醇洗脱液直至无 绿原酸流出，最后将收集所得洗脱液减压浓缩至膏状； 3. MPLC精制过程，将步骤2)所得的浸膏用30%的甲醇溶解，将溶液注入20-45 y m的 C18反相硅胶柱，以甲醇和水为流动相，洗脱流速为50-250mL/min进行梯度洗脱，收集出峰 时间为l〇_15min的流出液，流出液经减压浓缩、冷冻干燥后，得绿原酸纯度大于98%的绿原 酸产品。
2. 按权利要求1所述的从金银花粗取物中精制绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤 1)金银花提取物的水溶液为以金银花为原料经水提醇沉法提取所得的提取物中加入去离 子水，室温下充分搅拌后，配制成，其中金银花提取物与去离子水的比例为1:10 (W/V)。
3. 按权利要求1所述的从金银花粗取物中精制绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤 1)的大孔树脂A为符合药用要求的非极性大孔树脂。
4. 按权利要求3所述的从金银花粗取物中精制绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤 1) 的大孔树脂A为D3520型、D4006型、HPD-100型、HPD-200A型或H103型大孔树脂中的 一种。
5. 按权利要求1所述的从金银花粗取物中精制绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤 2) 的大孔吸附树脂为符合药用要求的极性或中极性大孔树脂。
6. 按权利要求5所述的从金银花粗取物中精制绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤 2 )的大孔吸附树脂为ADS-F8型、NKA型、NKA-2型、ADS-7型或S-8型大孔树脂中的一种。
7. 按权利要求1所述的从金银花粗取物中精制绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤 1)和步骤2 )的大孔树脂A和大孔树脂B均可经再生液再生后重复使用，进而达到连续操作 的目的。
8. 按权利要求7所述的从金银花粗取物中精制绿原酸的方法，其特征在于：所述再生 液为无水乙醇。
9. 按权利要求1所述的从金银花粗取物中精制绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤 3. MPLC精制时流动相甲醇的体积分数在0-20min内从10%到50%梯度变化。
【文档编号】C07C67/56GK104418743SQ201310390214
【公开日】2015年3月18日 申请日期:2013年8月30日 优先权日:2013年8月30日
【发明者】夏传海, 孙鹏程, 王建华, 孔娜娜 申请人:中国科学院烟台海岸带研究所