Fviii肽和它们用于耐受化血友病患者的用途
【专利摘要】本发明涉及FVIII肽和它们用于耐受化血友病患者的用途。本发明提供一种肽，其包含可衍生自人FVIII的核心残基序列，所述肽能够结合II类MHC分子而没有进一步的抗原加工。本发明还涉及这样的肽用于防止或阻遏A型血友病和/或获得性血友病中抑制剂抗体形成的用途。
【专利说明】FVI I I肽和它们用于耐受化血友病患者的用途
[0001]本申请是申请日为2008年12月03日、中国申请号为200880119313.1、发明名称为“FVIII肽和它们用于耐受化血友病患者的用途”的发明申请的分案申请。
【技术领域】
[0002]本发明涉及一种肽。具体地说，本发明涉及可衍生自因子VIII (FVIII)的肽。这些肽可以用来减少或阻止因子VIII抑制物抗体(factor VIII inhibitor antibody)的形成，例如在A型血友病治疗和获得性血友病中。
发明背景
[0003]血友病
[0004]血友病(haemophilia)属于一类遗传性血液病症，包括A型血友病、B型血友病(克里斯马斯病(Christmas disease))和血管性血友病(Von Willebrand' s disease)。
[0005]在血友病中，血液凝集能力由于某种关键的凝血因子的部分或全部缺失而严重降低，导致出血时间增加。A型血友病是一种因子VIII缺陷,而B型血友病是一种凝血因子DC缺陷。在这两种疾病中，出问题的基因存在于X染色体上，所以这些症候是X连锁的。A型血友病的常见程度是B型血友病的五倍。
[0006]血友病是一种终身性、遗传性的基因疾病，影响女性(作为携带者)和遗传了这种症候的男性。大约三分之一的新确诊病例没有过往家族史。这种疾病在全世界都有出现，在所有种族中均有发生。在英国大约有6000人患有血友病。
[0007]血友病人(haemophiliacs)在受伤后发生长时间的出血。外伤，如切割伤或擦伤，通常不会造成严重问题:往往可以通过施加一定程度的压力和包覆伤处(例如用石膏)。
[0008]主要的问题是向关节、肌肉和软组织中的内出血，这些可能自发发生。内出血，例如向脑中的出血，非常难以处理，且可能致命。关节中的重复出血会导致剧烈疼痛，并可导致关节炎和/或致残的长期性关节损伤。
[0009]血友病的治疗通常是通过补充(!^placement)缺失的凝血因子。在轻度或中度的血友病中，可以在发生出血时进行注射(应求式(on-demand)疗法)。但是，在严重血友病中，则有规律地进行预防性注射，以帮助血液凝集并最大程度地减小长期性关节损伤的可能性。
[0010]A型血友病凝血因子补充疗法的一个潜在的严重麻烦是会产生可中和因子III的促凝血功能的抗体。因子III抑制物在大约25%的严重A型血友病人中出现。由于先天性A型血友病人可能具有FVIII基因缺陷，抑制物的合成是一种针对为了预防或治疗出血事件而施用的外来蛋白的同种异体免疫应答。
[0011]⑶4+T细胞在针对FVIII的免疫应答中扮演着中枢角色。FVIII被抗原呈递细胞(APC)摄取后，经过蛋白酶降解成为肽片段(Reding et al (2006)HaemophiIial2 (supp6) 30-36) 0然后这些肽以与II类MHC分子结合的形式被提呈在APC的表面。然后，这样的复合物被对FVIII特异性的CD4+细胞的T细胞受体所识别。在合适的共刺激信号的存在下，这种识别作用最终导致CD4+细胞去指导B细胞合成抗体。
[0012]抑制物形成的频度最开始随着因子VIII治疗的次数增加而增加，但是在暴露50-100天后似乎达到平台。抑制物形成在严重血友病中比在轻度或中度血友病中常见得多，而且某些分子缺陷，最明显的是因子VIII轻链中的大段缺失和无义突变，似乎引起抑制物形成的倾向。补充因子的浓度、类型(纯化的或重组的)、以及治疗历史等参数也会影响抗体生成的可能性。
[0013]如何管理携带抑制物的血友病患者是人们正面临的挑战。使用脱敏(desensization)技术的免疫耐受诱导(ITI)在一些携带抗因子VIII同种抗体的患者身上获得了成功。这种治疗手段要求患者正在接受因子补充疗法，因此是一种长期性的策略。
[0014]虽然ITI可能取得成功，但有相当一部分(大约30%)的患者对ITI无应答。抑制物效价高的患者对治疗应答的可能性低得多。另一个明显起作用的因素是开始ITI时的年龄，当患者大于20岁时成功率大大降低(Hay et at (2005) Seminars in Thrombosis andHemostasis32:15-21)。
[0015]当ITI疗法不成功时，抑制物一般会终身存在，而由于这样的患者通常是高应答者，需要使用FVIII旁路产品，如活化的凝血酶原复合物浓缩剂(FEIBA?)和重组-活化的FVII，来治疗出血事件。然而，使用此类药剂会带来弥散性血管内凝血、急性心肌梗塞、肺栓塞和血栓等不良事件(Acharya and DiMichele (2006) Best Practice&Research ClinicalHaematologyl9:51-66)。
[0016]对于不应答ITI的患者有时使用免疫抑制疗法。治疗包括使用非特异性地靶向免疫系统的免疫抑制药如环磷酰胺(cyclophosphamide)、泼尼松(prednisone)、硫唑嘌呤(azathioprine)、和环孢菌素(cyclosporine)等。这些治疗可能造成与普遍性免疫抑制相关的副作用。`
[0017]人们对利用利妥昔单抗(Rituximab?)——一种针对B细胞⑶20抗原的人源化单克隆抗体一进行的选择性B细胞耗竭又产生了兴趣。但是，用这种药物治疗一些儿童时，发生了输注反应、血清病和机会性感染(DiMichele (2007) J Thromb Haemost5:143-50)。
[0018]获得性血友病(acquiredhaemophilia)
[0019]获得性血友病是一种罕见的自身免疫病症，在每100万人中有I至4人罹患此病。在此病中，生来不具有血友病的受试者产生对抗一种凝血因子如因子VIII的抗体。人们认为妊娠和自身免疫疾病如类风湿性关节炎及癌症可能增加发生获得性血友病的风险。虽然在导致其产生的免疫机制有所不同，但应答于凝血因子补充疗法而产生的FVIII抑制物与获得性血友病中产生的FVIII抑制物的临床表现是相似的。
[0020]获得性血友病患者的死亡率接近25%，部分地是由于获得的抑制物与严重的出血并发症有关联。针对获得性自身抗体抑制物的治疗，主要是根据控制或阻止急性出血性并发症的需要(这些并发症常常危及生命和四肢健全)，其次是去除自身抗体以恢复正常凝血的需要。
[0021]对于某些伴随有低效价自身抗体抑制物(〈5个Bethesda单位)的出血,可以通过高剂量施用FVI11浓缩剂来有效治疗。先前，猪FVIII浓缩剂被看作针对获得性血友病相关出血的关键的一线药物，因为只有它是唯一一种使人们有机会在实验室中对输注后FVIII凝血活性水平进行实际测量的补充疗法。由于猪血浆池被猪细小病毒污染，该产品于2004年下市。目前，最常用的是“旁路”(bypassing)药物，但存在产生血栓的潜在风险，而且每种产品的效力仅有约80%。对于旁路药物或FVIII补充法而言，为了提供充分的止血，可能需要通过血浆去除术和体外免疫吸附进行血浆交换，以暂时性地充分降低抑制物效价。
[0022]自身抗体抑制物的根除取决于免疫抑制措施，如:(I)施用皮质类固醇，在3-6周内的效力为30%-50% ;(2)使用细胞毒性和骨髓抑制性化疗剂，例如环磷酰胺、环孢菌素、2-氯脱氧腺苷；(3)用静脉注射免疫球蛋白进行免疫调节；和(4)借助利妥昔单抗进行选择性B细胞耗竭。利妥昔单抗(Rituximab?)应答者可能需要同时使用类固醇，复发(relapse)可对再次治疗(retreatment)有应答。
[0023]因此，目前所有可用来减少伴随着A型血友病治疗的同种异体抗体产生、以及获得性血友病中自身抗体产生的方法，都存在着缺点。因此需要更好的方法来解决A型血友病和获得性血友病中抗-VIII抗体的问题。
[0024]本发明人们发现，通过用FVIII衍生肽预耐受化(pre-tolerize)患者，来阻止FVIII抑制物抗体生成是可能的。
[0025]本发明的优选方面
[0026]因此，本发明涉及可从FVIII衍生的、能够诱导或恢复针对FVIII的耐受性的肽。
[0027]本发明人已经鉴定了 FVIII中的数个免疫显性区域，预测它们会产生HLA-DR2结合肽(表1)。在这些 肽中，因子VIII的545-559和1788-1803区域被认为是针对人因子VIII的HLA-DR2限制性T细胞应答的免疫显性T细胞表位区域。已经证明，用这些肽处理小鼠可实质性地抑制针对因子VIII的免疫应答。
[0028]在第一个方面，本发明提供一种肽，其包含下列核心残基序列之一:
[0029]LYISQFIIM
[0030]FIIMYSLDG
[0031]IARYIRLHP
[0032]LI IFKNQAS
[0033]LTRYYSSFV
[0034]MVTFRNQAS
[0035]LRIHPQSffV
[0036]所述肽能够在没有进一步抗原加工的条件下结合II类MHC分子，并被因子III特异性T细胞所识别。
[0037]所述肽可以，例如，具有序列PRCLTRYYSSFVNME 或 DNMVTFRNQASRPY。
[0038]在第二个方面，本发明提供一种组合物，例如药物组合物，其包含本发明第一个方面的肽。所述组合物可包含多个这样的肽。具体地，所述组合物可包含下述肽:PRCLTRYYSSFVNME 和 DNMVTFRNQASRPY。
[0039]组合物可以是试剂盒的形式，其中分别地提供所述多个肽，以便进行分立(separate)、继起(subsequent)、顺序(sequential)或同时(simultaneous)施用。
[0040]本发明的肽或组合物可用于阻遏、减少、或阻止因子VIII抑制物抗体的产生(development)。
[0041]本发明还提供这样的肽或组合物在制备用于阻遏、减少或防止因子VIII抑制物抗体产生的药物中的用途。[0042]本发明还提供一种用于阻遏、防止或减少受试者中因子VIII抑制物抗体产生的方法，包括对所述受试者施用这样的肽或组合物的步骤。
[0043]受试者可以是FVIII缺陷的。特别地，受试者可患有A型血友病，并且可能接受，或者即将接受因子VIII补充疗法。
[0044]或者，受试者可能患有获得性血友病,或者具有患上获得性血友病的风险。
[0045]因子VIII抗体在表达HLA-DR2的个体中更常见。用本发明的方法治疗的受试者因此可以是HLA-DR2阳性的。
[0046]本发明涉及下述各项。
[0047]1.一种肽，其包含下列核心残基序列之一:
[0048]
【权利要求】
1.一种肽，其由下列序列之一组成:
PRCLTRYYSSFVNME
TKSDPRCLTRYYSSF
KSDPRCLTRYYSSFV
SDPRCLTRYYSSFVN
DPRCLTRYYSSFVNM
RCLTRYYSSFVNMER
CLTRYYSSFVNMERD
PPIIARYIRLHPTHY
PI1ARYIRLHPTHYS
ARYIRLHPTHYSIRS。
2.一种组合物，其包含多种如权利要求1所述的肽。
3.权利要求1的肽或权利要求2的组合物在制备用于在阻遏或防止体内因子VIII抑制物抗体的产生的方法中使用的药物中的用途。
4.权利要求1的肽或权利要求2的组合物在制备用于在治疗受试者中血友病的方法中使用的药物中的用 途。
5.权利要求4所述的用途，其中所述受试者患有A型血友病，并且正在接受或即将接受因子VIII补充治疗。
6.权利要求4所述的用途，其中所述受试者患有获得性血友病，或者有患上获得性血友病的风险。
7.权利要求4所述的用途，其中所述受试者为HLA-DR2。
【文档编号】C07K7/08GK103709234SQ201310392152
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2008年12月3日 优先权日:2007年12月4日
【发明者】戴维.赖思 申请人:艾匹托普国际股份有限公司