SERPINC1 iRNA组合物及其使用方法
【专利摘要】本发明涉及靶向Serpinc1基因的iRNA例如双链核糖核酸(dsRNA)组合物，和使用这类iRNA例如dsRNA组合物来抑制Serpinc1表达的方法以及治疗患有出血性障碍例如血友病的受试者的方法。
【专利说明】SERPINC1iRNA组合物及其使用方法
[0001] 相关申请
[0002] 本专利申请要求于2012年4月26日提交的美国临时申请号61/638, 952、于2012 年7月9日提交的美国临时申请号61/669, 249、于2012年12月7日提交的美国临时申请 号61/734, 573以及于2013年3月15日所提交的美国申请号13/837, 129的优先权。通过 引用将前述申请的每个的全部内容结合在此。
[0003] 发明背景
[0004] Serpincl是丝氨酸蛋白酶抑制剂（serpin)超家族的一个成员。Serpincl是一种 血浆蛋白酶抑制剂，其抑制凝血酶以及凝固系统的其他激活的丝氨酸蛋白酶，例如因子X、 IX、XI、XII和VII，并且从而调节凝血级联（参见例如图1)。通过肝素和催化凝血酶：抗 凝血酶（TAT)复合体形成的其他相关糖胺聚糖的存在增强Serpincl的抗凝活性。
[0005] 出血性障碍（无论遗传性的或获得性的）是存在不完全血液凝结的病况。例如， 血友病是一组世代相传的遗传性出血性障碍，其损害身体控制血液凝结或凝固的能力。血 友病A是一种隐性伴X的遗传性障碍，涉及缺失机能性凝血因子VIII，并代表80%的血友 病案例。血友病B是一种隐性伴X的遗传性障碍，涉及缺失机能性凝血因子IX。它包括大 约20%血友病案例。血友病C是一种常染色体遗传性障碍，涉及缺失机能性凝血因子XI。 血友病C是不完全隐性的，因为杂合的个体也显示增加的出血。
[0006] 尽管目前不存在对血友病的治愈，但它可以用定期输注缺失的凝结因子例如血友 病A中的因子VIII得以控制。然而，一些血友病患者发展了针对给予他们的替代因子的抗 体（抑制剂），并从而对替代凝结因子变得不应。因此，在这类受试者中的出血不能被恰当 地的控制。
[0007] 高效价抑制剂（例如，对于因子VIII和其他凝结因子）的发展是血友病疗法 最严重的并发症，并且使得治疗出血非常具有挑战性。当前，在这类受试者中停止出血 的唯一策略是使用"旁路剂"，例如因子八抑制剂旁路活性（FEIBA)以及激活的重组因子 VII(rFVIIa)、血浆去除术、连续因子替代、以及免疫耐受疗法，这些中没有一个是完全有效 的。因此，本领域需要用于患有出血性障碍例如血友病的受试者的替换治疗。
[0008] 发明概述
[0009] 本发明提供了iRNA组合物，该iRNA组合物影响Serpinc基因的RNA转录本的RNA 诱导沉默复合体（RISC)介导的切割。该Serpincl基因可以在细胞例如受试者（例如人）体 内的细胞的内部。本发明还提供了一种使用和运用本发明的iRNA组合物来抑制Serpincl 基因表达和/或治疗患有将从抑制或减少Serpincl表达受益的障碍例如出血性障碍（例 如血友病）的受试者的方法。
[0010] 因此，在一个方面，本发明提供了用于抑制Serpincl表达的双链核糖核酸 (dsRNA)。该dsRNA包括有义链和反义链，其中该有义链包括与SEQIDN0:1的核苷酸序列 差异不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且该反义链包括与SEQIDN0:5的核苷 酸序列差异不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。
[0011] 在另一个方面，本发明提供了用于抑制Serpincl表达的双链核糖核酸（dsRNA)。 该dsRNA包括有义链和反义链，该反义链包括一个互补区域,该互补区域包括与表3、4、8、 11、 12、14、15、20、和21中任一个列出的反义序列中的任意一个差异不超过3个核苷酸的至 少15个连续核苷酸。
[0012] 在一个实施例中，该有义和反义链包括选自下组的序列，该组由以下各项组成： AD-50487.UAD-50477.UAD-50483.UAD-50475.UAD-50495.UAD-50476.UAD-50499. 1、AD-50478.UAD-50489. 1、AD-50501.UAD-50507.UAD-50484.UAD-50515.UAD-50540. 1、 AD-50528.UAD-50549.UAD-50539.UAD-50534.UAD-50527.UAD-50514.UAD-50509. 1、 AD-50529. 1、AD-54944、AD-56813、AD-57205、AD-57214、和AD-57213,以及表 3、4、8、11、 12、 14、15、20、以及21中任一个列出的序列，或与那些序列至少95%、96%、97%、98%、或 99%相同的序列中的任一个。在本发明的某些实施例中，该dsRNA包括至少一个经修饰的 核苷酸。在一个实施例中，该修饰的核苷酸中的至少一个选自下组，该组由以下各项组成： 2' -0-甲基修饰的核苷酸、包括5' -硫代磷酸基团的核苷酸和与胆留烯基衍生物或十二烷 酸双癸酰胺基团连接的末端核苷酸。在另一个实施例中，该修饰的核苷酸选自下组，该组由 以下各项组成：2' -脱氧-2' -氟修饰的核苷酸、2' -脱氧修饰的核苷酸、锁定的核苷酸、脱碱 基核苷酸、2' -氨基修饰的核苷酸、2' -烷基修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸、以及 包括非天然碱基的核苷酸。
[0013] 该dsRNA的互补区域可以是至少17个核苷酸长度、在19个和21个核苷酸长度之 间、或19个核苷酸长度。
[0014] 在一个实施例中，dsRNA的每条链不多于30个核苷酸长度。
[0015] dsRNA的至少一条链可包括至少1个核苷酸或至少2个核苷酸的3'突出。
[0016] 在某些实施例中，dsRNA进一步包括一个配体。在一个实施例中，该配体共轭至该 dsRNA的有义链的3'末端。
[0017] 在一些实施例中，该配体是通过二价或三价分支连接物而附接的一个或多个 N-乙酰半乳糖胺（GalNAc)衍生物。在具体实施例中，该配体是：
[0018]
【权利要求】
1. 一种用于抑制Serpincl表达的双链核糖核酸（dsRNA)，其中所述dsRNA包括有义链 和反义链，其中所述有义链包括与SEQ ID NO: 1的核苷酸序列差异不超过3个核苷酸的至 少15个连续核苷酸，并且所述反义链包括与SEQ ID NO: 5的核苷酸序列差异不超过3个核 苷酸的至少15个连续核苷酸。
2. -种用于抑制Serpincl表达的双链核糖核酸（dsRNA)，其中所述dsRNA包括有义 链和反义链，该反义链包括一个互补区域，该互补区域包括与表3、4、8、11、12、14、15、20、和 21中任一个列出的反义序列中的任意一个差异不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。
3. 如权利要求2所述的dsRNA，其中该有义和反义链包括选自下组的序列，该组由以下 各项组成：AD-50487. 1、AD-50477. 1、AD-50483. 1、AD-50475. 1、AD-50495. 1、AD-50476. 1、 AD-50499. UAD-50478. UAD-50489. 1、AD-50501. UAD-50507. UAD-50484. UAD-50515. 1、 AD-50540. UAD-50528. UAD-50549. UAD-50539. UAD-50534. UAD-50527. UAD-50514. 1、 AD-50509. UAD-50529. 1、以及 AD-54944,以及表 3、4、8、11、12、14、15、20、以及21中任一个 列出的序列中的任一个。
4. 如权利要求1或2所述的dsRNA，其中所述dsRNA包括至少一个经修饰的核苷酸。
5. 如权利要求4所述的dsRNA，其中所述经修饰的核苷酸中的至少一个选自下组，该组 由以下各项组成：2'-0-甲基修饰的核苷酸、包括5'-硫代磷酸基团的核苷酸、和与胆甾烯 基衍生物或十二烷酸双癸酰胺基团连接的末端核苷酸。
6. 如权利要求4所述的dsRNA，其中所述经修饰的核苷酸选自下组，该组由以下各项组 成：2' -脱氧-2' -氟修饰的核苷酸、2' -脱氧修饰的核苷酸、锁定的核苷酸、脱碱基核苷酸、 2' -氨基修饰的核苷酸、2' -烷基修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸、以及包括非天然 碱基的核苷酸。
7. 如权利要求2所述的dsRNA，其中该互补区域是至少17个核苷酸长度。
8. 如权利要求2所述的dsRNA，其中该互补区域是在19个和21个核苷酸长度之间。
9. 如权利要求8所述的dsRNA，其中该互补区域是19个核苷酸长度。
10. 如权利要求1或2所述的dsRNA，其中每条链不多于30个核苷酸长度。
11. 如权利要求1或2所述的dsRNA，其中至少一条链包括至少1个核苷酸的3'突出 端。
12. 如权利要求1或2所述的dsRNA，其中至少一条链包括至少2个核苷酸的3'突出 端。
13. 如权利要求1或2所述的dsRNA,进一步包括配体。
14. 如权利要求13所述的dsRNA，其中该配体共轭至该dsRNA的有义链的3'末端。
15. 如权利要求13所述的dsRNA，其中该配体是一种N-乙酰半乳糖胺（GalNAc)衍生 物。
16. 如权利要求15所述的dsRNA，其中该配体是
17. 如权利要求15所述的dsRNA，其中该dsRNA共轭至以下示意图中所示的配体
并且其中X是O或S。
18. 如权利要求17所述的dsRNA，其中X是0。
19. 如权利要求2所述的dsRNA，其中该互补区域由表3、4、8、11、12、14、15、20、以及21 中任一个的反义序列中的一个组成。
20. 如权利要求1或2所述的dsRNA，其中该dsRNA包括由选自表3、4、8、11、12、14、15、 20、和21中任一个的序列的有义链序列组成的有义链以及由选自表3、4、8、11、12、14、15、 20、和21的任一个的序列的反义序列组成的反义链。
21. -种细胞，含有如权利要求1或2所述的dsRNA。
22. -种编码dsRNA的至少一条链的载体，其中所述dsRNA包括与编码Serpincl的 mRNA的至少一部分互补的一个区域，其中所述dsRNA是30个或更少碱基对长度，并且其中 所述dsRNA靶向所述mRNA以便切割。
23. 如权利要求22所述的载体，其中该互补区域是至少15个核苷酸长度。
24. 如权利要求22所述的载体，其中该互补区域是19个至21个核苷酸长度。
25. -种细胞，包括如权利要求22所述的载体。
26. -种药物组合物，用于抑制Serpincl基因表达，该药物组合物包括权利要求1或2 所述的dsRNA或权利要求22所述的载体。
27. -种抑制细胞中Serpincl表达的方法，该方法包括： (a)使该细胞与权利要求1或2所述的dsRNA或权利要求22所述的载体进行接触；并 且 (b)维持步骤（a)中产生的细胞一段时间，该时间足以获得Serpincl基因的mRNA转录 本的降解，由此抑制该细胞中的Serpincl基因的表达。
28. 如权利要求27所述的方法，其中所述细胞在受试者体内。
29. 如权利要求28所述的方法，其中该受试者为人类。
30. 如权利要求29所述的方法，其中该人类受试者患有出血性障碍。
31. 如权利要求30所述的方法，其中该出血性障碍是血友病。
32. 如权利要求27-31中任一项所述的方法，其中该Serpincl表达被抑制至少约 30%。
33. -种用于治疗患有将从减少Serpincl表达受益的障碍的受试者的方法，该方法包 括向该受试者给予治疗有效量的如权利要求1或2所述的dsRNA或如权利要求22所述的 载体，由此治疗所述受试者。
34. -种用于预防患有将从减少Serpincl表达受益的障碍的受试者的至少一种症状 的方法，该方法包括向该受试者给予治疗有效量的如权利要求1或2所述的dsRNA或如权 利要求22所述的载体，由此预防患有将从减少Serpincl表达受益的障碍的受试者的至少 一种症状。
35. 如权利要求33或34所述的方法，其中该障碍是一种出血性障碍。
36. 如权利要求35所述的方法，其中该出血性障碍是血友病。
37. 如权利要求33或34所述的方法，其中向该受试者给予该dsRNA造成血液凝结的增 加和/或Serpincl蛋白质积累的减少。
38. 如权利要求33或34所述的方法，其中该dsRNA共轭至一个配体。
39. 如权利要求38所述的方法，其中该配体共轭至该dsRNA的有义链的3'末端。
40. 如权利要求39所述的方法，其中该配体是一种N-乙酰半乳糖胺（GalNAc)衍生物。
41. 如权利要求34所述的方法，其中将该dsRNA以大约0. 01mg/kg至大约10mg/kg或 大约0· 5mg/kg至大约50mg/kg的剂量给予。
42. 如权利要求41所述的方法，其中将该dsRNA以大约10mg/kg至大约30mg/kg的剂 量给予。
43. 如权利要求41所述的方法，其中将该dsRNA以选自下组的剂量给予，该组由以下各 项组成：〇.311^/1^、0.511^/1^、111^/1^、1.511^/1^、311^/1^、1〇11^/1^、以及3〇11^/1^。
44. 如权利要求42或43所述的方法，其中将该dsRNA每周给予该受试者一次。
45. 如权利要求42或43所述的方法，其中将该dsRNA每月给予该受试者两次。
46. 如权利要求33或34所述的方法，进一步包括测量所述受试者体内的凝血酶水平。
47. 如权利要求34或35所述的方法，其中将该dsRNA以大约0. 5mg/kg至大约5mg/kg 的周累积剂量皮下给予该受试者，并且其中该dsRNA是AD-57213。
48. -种抑制受试者体内Serpincl的表达的方法，该方法包括 向所述受试者给予治疗有效量的如权利要求1或2所述的dsRNA或如权利要求22所 述的载体，由此抑制所述受试者体内Serpincl的表达。
49. 如权利要求48所述的方法，其中该dsRNA共轭至一个配体。
50. 如权利要求49所述的方法，其中该配体共轭至该dsRNA的有义链的3'末端。
51. 如权利要求50所述的方法，其中该配体是一种N-乙酰半乳糖胺（GalNAc)衍生物。
52. 如权利要求48所述的方法，其中将该dsRNA以大约0. Olmg/kg至大约lOmg/kg或 大约0· 5mg/kg至大约50mg/kg的剂量给予。
53. 如权利要求52所述的方法，其中将该dsRNA以大约10mg/kg至大约30mg/kg的剂 量给予。
54. 如权利要求52所述的方法，其中将该dsRNA以选自下组的剂量给予，该组由以下各 项组成：lmg/kg、3mg/kg、10mg/kg、以及 30mg/kg。
55. 如权利要求54所述的方法，其中将该dsRNA每周给予该受试者一次。
56. 如权利要求54所述的方法，其中将该dsRNA每月给予该受试者两次。
57. 如权利要求48所述的方法，其中将该dsRNA以大约0. 5mg/kg至大约5mg/kg的周 累积剂量皮下给予该受试者，并且其中该dsRNA是AD-57213。
58. 如权利要求48所述的方法，进一步包括测量所述受试者体内的凝血酶水平。
【文档编号】C07H21/04GK104520310SQ201380034051
【公开日】2015年4月15日 申请日期:2013年4月25日 优先权日:2012年4月26日
【发明者】A·埃金克, A·塞加尔, I·图德加斯卡, D·福斯特, S·米尔斯坦, B·贝滕考特, M·梅尔, K·查理斯, S·库奇曼奇, K·G·拉杰夫, M·玛诺哈兰 申请人:阿尔尼拉姆医药品有限公司