抗egfr抗体及其使用的制作方法

抗egfr抗体及其使用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了与EGFR结合的抗体及其使用方法。根据本发明的某些实施例，所述抗体是与人EGFR具有高亲和力结合的完全人源抗体。在某些实施例中，本发明的抗体能够抑制表达高水平EGFR的肿瘤细胞的生长和/或诱导此类细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。本发明的抗体可用于治疗各种癌症以及其他EGFR相关病症。
【专利说明】抗EGFR抗体及其使用 发明领域
[0001] 本发明涉及对人EGFR具有特异性的抗体及其抗原结合片段，以及其使用方法。

【背景技术】
[0002] 表皮生长因子受体（EGFR，也称为HERl或ErbBl)是1型受体酪氨酸激酶（RTK) ErbB/HER家族的成员之一。该家族的其他成员包括ErbB2 (HER2或Neu)、ErbB3 (HER3)和 ErbB4(HER4)。已知EGFR配体包括表皮生长因子（EGF)和转化生长因子α (TGF-α)。配体 与EGFR结合后诱导酪氨酸磷酸化以及与ErbB家族其他成员的受体二聚化。
[0003] EGFR等RTK的作用方式是使细胞对各种外部刺激作出反应。但EGFR异常激活和 /或过度表达与数种人类癌症的发展和进展有关。因此，EGFR是抗癌疗法的靶点。已批准 的靶向EGFR药物包括小分子抑制剂，如吉非替尼（Iressa?)和埃罗替尼(Tarceva?)，以及抗 EGFR抗体,如西妥昔单抗(Erbitux*)和帕尼单抗(Vectibix?)。抗EGFR抗体在以下美国专利 中提到，如 US 4, 943, 533、US 5, 844, 093、US 7, 060, 808、US 7, 247, 301、US 7, 595, 378、US 7, 723, 484和US 7, 939, 072。尽管如此，本领域中有对新型EGFR拮抗剂（如抗EGFR抗体） 的需求，以用于治疗癌症和其它相关病症。 发明概述
[0004] 本发明提供了与人EGFR结合的抗体。本发明的抗体可用于，尤其是抑制EGFR介 导的信号传导，以及治疗由EGFR活性和/或信号传导引起或与EGFR活性和/或信号传导 有关的疾病和病症。本发明的抗体也可用于诱导细胞表面表达高水平EGFR的细胞的死亡。
[0005] 本发明的抗体可以是全长的（例如IgGl或IgG4抗体），也可以仅包含抗原结合部 分（例如Fab、F(ab'） 2或scFv片段），并可加以修饰以影响其功能，例如消除残留效应子 功能（Reddy et al.，2000, J. Immunol. 164:1925-1933)。
[0006] 本发明提供抗体或其抗原结合片段，其包含一个重链可变区（HCVR)，后者含有一 个选自包括下列一组序列的氨基酸序列：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、 194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354和 370，或包含一个基本上相同的序列， 具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同一性。
[0007] 本发明还提供了一种抗体或抗体的抗原结合片段，其包含一个轻链可变区 (LCVR)，后者含有一个选自包括下列一组序列的氨基酸序列：10、26、42、58、74、90、106、 122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362 和 378,或包含 一个基本上相同的序列，具有至少90 %、至少95 %、至少98 %或至少99 %的序列同一性。
[0008] 本发明还提供了一种抗体或其抗原结合片段，其包含一个选自包括下列一组序列 对的 HCVR 和 LCVR(HCVR/LCVR)序列对：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、 114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、 258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362 和 370/378。
[0009] 本发明还提供了一种抗体或抗体的抗原结合片段，其包含一个重链⑶R3(HCDR3) 结构域，后者含有选自包括下列一组序列的氨基酸序列：8、24、40、56、72、88、104、120、136、 152、168、184、200、216、232、248、264、280、296、312、328、344、360 和 376,或包含一个基本 上相同的序列，具有至少90 %、至少95 %、至少98 %或至少99 %的序列同一性；以及一个轻 链⑶R3 0XDR3)结构域，后者含有选自包括下列一组序列的氨基酸序列：16、32、48、64、80、 96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256、272、288、304、320、336、352、368 和 384， 或包含一个基本上相同的序列，具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同 一性。
[0010] 在某些实施例中，所述抗体或抗体的抗原结合部分包含一个选自包括下列一组 序列对的 HCDR3/LCDR3 氨基酸序列对：8/16、24/32、40/48、56/64、72/80、88/96、104/112、 120/128、136/144、152/160、168/176、184/192、200/208、216/224、232/240、248/256、 264/272、280/288、296/304、312/320、328/336、344/352、360/368 和 376/384。
[0011] 本发明还提供了一种抗体或其片段，其还包括一个重链⑶Rl (HCDRl)结构域，后 者含有一个选自包括下列一组序列的氨基酸序列：4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、 164、180、196、212、228、244、260、276、292、308、324、340、356 和 372,或包含一个基本上 相同的序列，具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同一'注；一个重链 ⑶R2(HCDR2)结构域，含有一个选自包括下列一组序列的氨基酸序列：6、22、38、54、70、86、 102、118、134、150、166、182、198、214、230、246、262、278、294、310、326、342、358 和 374，或 包含一个基本上相同的序列，具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列同 一性；一个轻链⑶Rl (IXDRl)结构域，含有一个选自包括下列一组序列的氨基酸序列：12、 28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252、268、284、300、316、332、 348、364和380,或包含一个基本上相同的序列，具有至少90%、至少95%、至少98%或至 少99 %的序列同一性；以及一个轻链⑶R2 (IXDR2)结构域，含有一个选自包括下列一组序 列的氨基酸序列：14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254、270、 286、302、318、334、350、366和382,或包含一个基本上相同的序列，具有至少90 %、至少 95%、至少98%或至少99%的序列同一性。
[0012] 本发明的某些非限制性、示例性抗体和抗原结合片段包含HCDR1-HCDR2-HCD R3-IXDR1-IXDR2-IXDR3结构域，后者分别含有选自包括下列一组序列的氨基酸序列： 4-6-8-12-14-16 (如 H1M085N) ;20-22-24-28-30-32 (如 H1M086N) ;36-38-40-44-46-48 (如 H1M089N) ;52-54-56-60-62-64(如 H1M102N) ;68-70-72-76-78-80(如 H1M103N); 84-86-88-92-94-96(如 H1M116N) ;100-102-104-108-110-112(如 H1H134P); 116-118-12〇-124-1 26_128(如 HlHl36P) ;132-134-136-140-14 2_144(如 H1H141P); 148-150-152-156-158-160(如 H1H142P) ;164-166-168-172-174-176(如 H1H143P); 18〇-182-184-188_1 9〇-192(如 H1H144P) ;196-198-2〇〇-2〇4- 2〇6_2〇8(如 Η1Η14δΡ); 212-214-216-220-222-224(如 Η1Η147Ρ) ;228-230-232-236-238-240(如 Η1Η151Ρ); 244-246-248-252-254-256(如 H1H153P) ;260-262-264-268-270-272(如 H1H155P); 276-278-28〇-284- 286_288(如 HlHl57P) ;292-294-296-3〇〇- 3〇2_3〇4(如 HlHl58P); 308-310-312-316-318-320(如 H1H159P) ;324-326-328-332-334-336(如 H1H161P); 34〇-342-344-34 8_35〇-352(如 HlHl63P) ;356-358-36〇-364- 366_368(如 HlHl69P);及 372-374-376-380-382-384(如 H1H171P)。
[0013] 在一个相关实施例中，本发明包括一种与EGFR特异性结合的抗体或抗体的抗原结 合片段，其中所述抗体或片段包含重链和轻链CDR结构域，后者位于选自下列一组序列的 重链和轻链可变区（HCVR/LCVR)序列内：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、 114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、 258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362 和 370/378。用于鉴定 HCVR和LCVR氨基酸序列中的CDR的方法和技术是本领域众所周知的，可用于鉴定在此公开 的特定HCVR和/或LCVR氨基酸序列中的CDR。可用于鉴定CDR边界的示例性约定包括，例 如Kabat定义、Chothia定义和AbM定义。一般而言，Kabat定义基于序列变异性，Chothia 定义基于结构环区域的位置，AbM定义是Kabat和Chothia方法之间的折衷。请参阅例如 Kabat, ''Sequences of Proteins of Immunological Interest, ''National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991) ;A1-Lazikani et al.，J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997);以 及 Martin et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9272(1989)。公共数据库也可用于 鉴定抗体中的⑶R序列。
[0014] 在另一个方面，本发明提供了编码抗EGFR抗体或其抗原结合片段的核酸分子。本 发明也包括携带本发明中核酸的重组表达载体、引入所述载体的宿主细胞，以及在允许产 生抗体的条件下培养宿主细胞以产生抗体并回收所产生抗体的方法。
[0015] 在一个实施例中，本发明提供了一种抗体或其片段，其包含一个由选自包括下 列一组序列的核酸序列编码的 HCVR :1、17、33、49、65、81、97、113、129、145、161、177、193、 209、225、241、257、273、289、305、321、337、353和369,或包含一个基本上相同的序列，具有 至少98%、至少99%、至少98%或至少99%的同源性。
[0016] 本发明还提供了一种抗体或其片段，其包含一个由选自包括下列一组序列的核酸 序列编码的 LCVR :9、25、41、57、73、89、105、121、137、153、169、185、201、217、233、249、265、 281、297、313、329、345、361和377,或包含一个基本上相同的序列，具有至少90%、至少 95 %、至少98 %或至少99 %的同源性。
[0017] 本发明还提供了一种抗体或抗体的抗原结合片段，其包含一个由选自包括下列 一组序列的核苷酸序列编码的HCDR3结构域：7、23、39、55、71、87、103、119、135、151、167、 183、199、215、231、247、263、279、295、311、327、343、359 和 375,或包含一个基本上相同的 序列，具有至少90 %、至少95 %、至少98 %或至少99 %的同源性；以及一个由选自包括下列 一组序列的核苷酸序列编码的LCDR3结构域：15、31、47、63、79、95、111、127、143、159、175、 191、207、223、239、255、271、287、303、319、335、351、367 和 383,或包含一个基本上相同的 序列，具有至少90 %、至少95 %、至少98 %或至少99 %的同源性。
[0018] 本发明还提供了一种抗体或其片段，其还包含一个由选自包括下列一组序列的核 苷酸序列编码的 HCDRl 结构域：3、19、35、51、67、83、99、115、131、147、163、179、195、211、 227、243、259、275、291、307、323、339、355和371，或包含一个基本上相同的序列，具有至 少90%、至少95%、至少98%或至少99%的同源性；一个由选自包括下列一组序列的核 苷酸序列编码的 HCDR2 结构域：5、21、37、53、69、85、101、117、133、149、165、181、197、213、 229、245、261、277、293、309、325、341、357和373,或包含一个基本上相同的序列，具有至 少90%、至少95%、至少98%或至少99%的同源性；一个由选自包括下列一组序列的核苷 酸序列编码的 LCDRl 结构域：11、27、43、59、75、91、107、123、139、155、171、187、203、219、 235、251、267、283、299、315、331、347、363和379,或包含一个基本上相同的序列，具有至少 90%、至少95%、至少98%或至少99%的同源性；以及一个由选自包括下列一组序列的核 苷酸序列编码的 LCDR2 结构域：13、29、45、61、77、93、109、125、141、157、173、189、205、221、 237、253、269、285、301、317、333、349、365和381，或包含一个基本上相同的序列，具有至少 90%、至少95%、至少98%或至少99%的同源性。
[0019] 根据某些实施例，所述抗体或其片段包含由下列序列的核酸序列编码的重链和 轻链 CDR 序列：1 和 9(如 H1M085N)、17 和 25(如 H1M086N)、33 和 41(如 H1M089N)、49 和 57 (如 H1M102N)、65 和 73 (如 H1M103N)、81 和 89 (如 H1M116N)、97 和 105 (如 H1H134P)、 113 和 121(如 H1H136P)、129 和 137(如 H1H141P)、145 和 153(如 H1H142P)、161 和 169(如 H1H143P)、177 和 185 (如 H1H144P)、193 和 201 (如 H1H145P)、209 和 217 (如 H1H147P)、225 和 233 (如 H1H151P)、241 和 249 (如，H1H153P)、257 和 265 (如 H1H155P)、273 和 281 (如 H1H157P)、289 和 297 (如 H1H158P)、305 和 313 (如 H1H159P)、321 和 329 (如 H1H161P)、337 和 345 (如 H1H163P)、353 和 361 (如 H1H169P)，或 369 和 377 (如 H1H171P)。
[0020] 本发明包括具有经修饰的糖基化模式的抗EGFR抗体。在某些应用中，为除去 不合乎需要的糖基化位点所进行的修饰，或寡糖链上缺乏岩藻糖基的抗体（例如为了增 加抗体依赖性细胞毒性[ADCC]功能），可能很有用。（请参阅Shield et al. (2002) JBC 277:26733)。在其它应用中，可以进行半乳糖基化修饰，以修饰补体依赖性细胞毒性（CDC)。
[0021] 在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含一种与EGFR特异性结合的 重组人源抗体或其片段以及一种药学上可接受的载体。在一个相关方面，本发明的特色是 一种抗EGFR抗体和另一种治疗剂结合的药物组合物。在一个实施例中，所述另一种治疗剂 是任何与抗EGFR抗体有利地结合的药剂。可有利地结合抗EGFR抗体的示例性药剂包括但 不限于其它抑制EGFR活性的药剂（包括其他抗体或其抗原结合片段、肽抑制剂、小分子拮 抗剂等）和/或不直接与EGFR结合但会干扰、阻断或减弱EGFR介导的信号传导的药剂。
[0022] 在另一个方面，本发明提供了使用本发明的抗EGFR抗体或抗体的抗原结合部分 抑制EGFR活性的方法，其中所述治疗方法包括施用治疗有效量的包含本发明的抗体或抗 体的抗原结合片段的药物组合物。治疗的病症是任何通过去除、抑制或降低EGFR活性而得 到改善、减轻、抑制或预防的任何疾病或病症。本发明的抗EGFR抗体或抗体片段可以阻断 EGFR和EGFR结合配偶体（例如表皮生长因子[EGF]、转化生长因子α [TGF-α]等）之间 的相互作用，或以其他方式抑制EGFR的信号传导活性。
[0023] 本发明也包括将本发明的抗EGFR抗体或抗体的抗原结合部分用于药物制备，以 治疗患有与EGFR活性相关或由EGFR活性引起的疾病或病症的患者。
[0024] 在审阅随后的详细说明过程中，其它实施例将变得明显。 详细说明
[0025] 在描述本发明之前，应该理解，本发明并不局限于所说明的特定方法和实验条件， 因为这些方法和条件可以变化。还应理解，本文所使用的术语仅出于说明特定实施例的目 的，并非意在限制本发明，因为本发明的范围仅受所附权利要求书的限制。
[0026] 除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语均将具有与本发明所属【技术领域】 中普通技术人员通常理解的相同含义。本文所用的术语"大约"，当用于指列出的某一特定 数值时，表示该数值可能在与所列数值相差不大于1 %的范围内变化。例如本文所用的表达 "大约100"，包括99和101以及这两者之间的所有数值（例如99. 1、99. 2、99. 3、99. 4等）。
[0027] 尽管与本文说明的方法和材料类似或等同的任何方法和材料都可用于本发明的 实施或测试，但现在说明的是优选方法和材料。 定义
[0028] 本文所用的表达"EGFR"和"EGFR片段"是指人类EGFR蛋白或其片段，除非特别 说明是来自某一非人类物种（例如"小鼠 EGFR"、"小鼠 EGFR片段"、"猴EGFR"、"猴EGFR片 段"等）。人EGFR受体的胞外结构域含有，例如氨基酸序列号385的第25位至第645位氨 基酸所示的氨基酸序列。
[0029] 本文所用的"与EGFR结合的抗体"或"抗EGFR抗体"包括与EGFR蛋白的可溶性 片段（例如EGFR的胞外结构域部分）和/或细胞表面表达的EGFR结合的抗体和其抗原结 合片段。"细胞表面表达的EGFR"这一表达是指细胞表面上表达的（体外或体内）的EGFR 蛋白或其部分，使得所述EGFR蛋白的至少一个部分（例如氨基酸序列号385的第25位至 第645位氨基酸）暴露于细胞膜的胞外侧并可以接触到抗体的抗原结合部分。可溶性EGFR 分子包括，例如本文实施例3所描述的单体和二聚体EGFR构建（即分别为"EGFR. mmh"[氨 基酸序列号386]和"EGFR. mFc" [氨基酸序列号387])，或基本与其相似的构建。
[0030] 本文所用的术语"抗体"是指任何抗原结合分子或分子复合物，其包括至少一个特 异性结合到或与特定抗原（例如EGFR)相互作用的互补决定区（CDR)。术语"抗体"包括免 疫球蛋白分子，其包含4条多肽链（通过二硫键连接的两条重链[H]和两条轻链[L])及其 多聚体（例如IgM抗体）。每条重链均包含一个重链可变区（本文缩写为HCVR或V h)和一 个重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域：CH1、CH2和C H3。每条轻链包含一个轻链可变 区（本文缩写为LCVR或VJ和一个轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域（Ql)。 '区可以进一步细分为称为互补决定区（CDR)的高变区，散布有较保守的称为框架区（FR) 的区域。各'均由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、 CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本发明的不同实施例中，抗EGFR抗体的FR (或其抗原 结合部分）可与人类种系序列相同，或可能经过天然或人工修饰。氨基酸共有序列可以基 于两个或多个CDR的并排分析来确定。
[0031] 本文所用的术语"抗体"也包括完整抗体分子的抗原结合片段。本文所用的抗体的 "抗原结合部分"、抗体的"抗原结合片段"等术语包括与一种抗原特异性结合而形成复合物 的任何天然存在的、可以酶促方式获得的、合成的或遗传工程改造的多肽或糖蛋白。抗体的 抗原结合片段可以使用任何合适的标准技术，例如蛋白水解消化或涉及操纵和表达编码抗 体可变和任选的恒定结构域的DNA的重组基因工程技术，从例如完整的抗体分子衍生。这 样的DNA是已知的及/或很容易从例如市售来源、DNA文库（包括例如噬菌体抗体文库）获 得，或可以合成。该DNA可以测序且以化学方法或分子生物学技术加以操纵，例如将一个或 多个可变和/或恒定结构域排列成一种合适的构型，或引入密码子、产生半胱氨酸残基，以 及修饰、添加或删除氨基酸等。
[0032] 抗原结合片段的非限制性实例包括：（i)Fab片段；（ii)F(ab'）2片段；（iii)Fd片 段；（iv) Fv片段；(V)单链Fv(scFv)分子；(vi) dAb片段；以及（vii)由模拟该抗体高变区 (例如一个孤立的互补决定区[⑶R]，如⑶R3肽）或一个FR3-⑶R3-FR4构型约束肽的氨基 酸残基组成的最小识别单位。本文所用的"抗原结合片段"这一表达还包括其它工程分子， 如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失的抗体、嵌合抗体、CDR嫁接抗体、双链抗 体、三链抗体、四链抗体、微型抗体、纳米抗体（例如一价纳米抗体、二价纳米抗体等）、小模 块化免疫药物（SMIP)及鲨鱼可变IgNAR结构域。
[0033] 抗体的抗原结合片段通常会包含至少一个可变结构域。可变结构域可以是任何大 小或具有任何氨基酸组成，且通常会包含至少一个邻近一个或多个框架序列或位于其中的 CDR。在含有与\结构域相关联的Vh结构域的抗原结合片段中，Vh结构域和 '结构域的相 对位置可为任何合适的排列。例如可变区可以是二聚化的且含有VH-VH、V H-'或 二聚 体。或者，抗体的抗原结合片段可含有一个单体Vh结构域或 '结构域。
[0034] 在某些实施例中，抗体的抗原结合片段可含有与至少一个恒定区共价连接的至 少一个可变区。在本发明的抗体的抗原结合片段内可发现的可变区和恒定区的非限制性 示例性构型包括：（i) Vh-ChI ; (ii)VH-CH2 ; (iii)VH-CH3 ; (iv)VH-CHl-CH2 ; (v)VH-CHl-CH2-CH3 ; (vi)VH-CH2-CH3 ； (vii) Vh-Cl ； (viii) Vl-ChI ； (ix)VL-CH2 ； (x)VL-CH3 ； (xi) VL-CH1-CH2 ； (xii) VfCHl-CH2-CH3 ; (xiii) Vf CH2-CH3 ;以及（Xiv)Vfk在可变区和恒定区的任何构型中，包 括上述任何示例性构型，可变区和恒定区可直接相互连接或可通过一个完整或部分的铰链 区或连接区连接。铰链区可含有至少2个（例如5、10、15、20、40、60个或更多）氨基酸，其 在单一肽分子中相邻的可变区和/或恒定区之间形成一种柔性或半柔性连接。此外，本发 明的抗体的抗原结合片段可包含上述任何以非共价键相互连接和/或与一个或多个单体V h 结构域或'结构域（例如通过二硫键）连接的可变区和恒定区构型的同型二聚体或异源 二聚体（或其它多聚体）。
[0035] 如同完整的抗体分子，抗原结合片段可以是单特异性或多特异性（例如双特异 性）。抗体的多特异性抗原结合片段通常包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结 构域都能够特异性地与不同的抗原或同一抗原的不同表位结合。对于任何多特异性抗体形 式，包括本文所公开的示例性双特异性抗体形式，均可使用本领域内可用的常规技术，使其 适合于涉及本发明的抗体的抗原结合片段的用途。
[0036] 本发明的抗体可通过补体依赖性细胞毒性（CDC)或抗体依赖性细胞介导的细胞 毒性（ADCC)发挥作用。"补体依赖性细胞毒性"（CDC)是指本发明的抗体在存在补体时裂 解表达抗原的细胞。"抗体依赖性细胞介导的细胞毒性" (ADCC)是指一种细胞介导的反应， 其中表达Fc受体（FcR)的非特异性细胞毒性细胞（例如天然杀伤[NK]细胞、嗜中性粒细 胞和巨噬细胞）识别靶细胞上结合的抗体，从而导致靶细胞的裂解。CDC和ADCC可使用本 领域中众所周知且可用的分析方法测定。（请参阅例如美国专利5, 500, 362和5, 821，337， 以及 Clynes et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656)。抗体的恒定区对抗体 固定补体和介导细胞依赖性细胞毒性的能力很重要。因此，可根据抗体介导的细胞毒性是 否合乎需要来选择其同型抗体。
[0037] 本文所用的术语"人源抗体"意在包括含有衍生自人类种系免疫球蛋白序列的可 变区和恒定区的抗体。本发明的人源抗体可包括非由人类种系免疫球蛋白序列编码的氨基 酸残基（例如通过随机或位点特异性体外诱变，或通过体内体细胞突变所引入的突变），例 如可在CDR中尤其是在CDR3中包括上述氨基酸残基。但是，本文所用的术语"人源抗体"并 不意图包括这样的抗体，其中衍生自另一哺乳动物物种如小鼠的种系CDR序列被嫁接到人 类框架序列上。
[0038] 本文所用的术语"重组人源抗体"意在包括所有以重组方法制备、表达、产生或分 离的人源抗体，例如用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体（将在下文中进一步 说明），从重组的、组合人源抗体文库分离的抗体（将在下文中进一步说明），从人类免疫球 蛋白基因转基因动物（例如小鼠）分离的抗体（请参阅例如Taylor et al. (1992)Nucl. Acids Res. 20:6287-6295)，或者以任何其他涉及将人类免疫球蛋白基因序列剪接到其他 DNA序列的方法所制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人源抗体含有衍生自人类种系 免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。但是，在某些实施例中，此类重组人源抗体经受体外诱 变（或者，当使用人类Ig序列转基因动物时，经受体内体细胞诱变），从而使得重组抗体的 Vh区和 '区的氨基酸序列成为这样的序列：它们虽然衍生自人类种系Vh序列和 '序列并 与它们相关，但可能并非天然存在于人类体内抗体种系谱中。
[0039] 人源抗体可以两种与铰链异质性相关的形式存在。在第一种形式中，免疫球蛋白 分子包含一个分子量约为150_160kDa的稳定的四链构建物，其中二聚体由一根链间重链 二硫键连接在一起。在第二种形式中，二聚体不是由链间二硫键连接在一起，而是一个由共 价偶联的轻链和重链（半抗体）组成的分子量约为75-80kDa的分子。这些形式一直非常 难以分离，甚至在亲和纯化之后也是如此。
[0040] 第二种形式在各种完整IgG同型中的出现频率是由于但不限于与抗体铰链区 同型相关的结构上的差异。人类IgG4铰链的铰链区内单个氨基酸取代可将第二种形式 (Angal et al. (1993)Molecular Immunology 30:105)的出现频率显著地降低到使用人类 IgGl铰链时通常观察到的水平。本发明包括在铰链区、CH2区或CH3区中含有一个或多个突 变的抗体；所述突变可能是合乎需要的，例如在产生抗体时用于提高所期望的抗体形式的 产率。
[0041] 本文所用的"分离的抗体"是指从其天然环境的至少一个组分中识别、分离和/或 回收的抗体。例如从生物体中的至少一个组成部分或从抗体天然存在或天然产生的组织或 细胞中分离或移除的抗体，就是一种符合本发明目的的"分离的抗体"。"分离的抗体"也包 括重组细胞内的原位抗体。分离的抗体是经过至少一个纯化或分离步骤的抗体。依照某些 实施例，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学物质。
[0042] 本文所用的"中和"或"阻断"抗体意指与EGFR的结合会产生以下效应的抗体：⑴ 干扰EGFR或EGFR片段与EGFR配体（例如EGF、TGF- α等）之间的相互作用；及/或（ii) 导致抑制至少一种EGFR的生物功能。只要使用合适的分析方法可以检测到，EGFR中和或 阻断抗体后并非一定要导致完全抑制。本文中说明了检测EGFR抑制作用的示例性分析方 法。
[0043] 本文所公开的抗EGFR抗体与衍生该抗体的相应种系序列相比，在重链和轻链可 变区的框架区和/或CDR区可包含一个或多个氨基酸的取代、插入和/或缺失。通过将本文 所公开的氨基酸序列与从例如公共抗体序列数据库可获得的种系序列相比，可以很容易确 定此类突变。本发明包括衍生自本文所公开的任何氨基酸序列的抗体及其抗原结合片段， 其中一个或多个框架区和/或CDR区内的一个或多个氨基酸突变为衍生该抗体的种系序列 的相应残基，或突变为另一个人类种系序列的相应残基，或突变为相应种系序列残基的保 守氨基酸取代（此类序列变化在本文中统称为"种系突变"）。本领域中普通技术人员从本 文公开的重链和轻链可变区序列开始，可以很容易产生许多包含一个或多个单个种系突变 或其组合的抗体及其抗原结合片段。在某些实施例中，上述V h和/或 '结构域内的所有框 架和/或CDR残基均回复突变为在衍生该抗体的原始种系序列中发现的残基。在其它一些 实施例中，只有某些残基被回复突变为原始种系序列，例如仅在FRl的前8个氨基酸或FR4 的后8个氨基酸中发现的突变残基，或仅在CDR1、CDR2或CDR3中发现的突变残基，被回复 突变为原始种系序列。在其他一些实施例中，一个或多个框架和/或CDR残基突变为不同 种系序列（即不同于最初衍生该抗体的种系序列的种系序列）的相应残基。此外，本发明 的抗体可在框架区和/或CDR区内含有两个或多个种系突变的任何组合，例如其中某些个 别残基突变为特定种系序列的相应残基，而其他某些不同于原始种系序列的残基则保持不 变或突变为不同的种系序列中的相应残基。一旦获得含有一个或多个种系突变的抗体和抗 原结合片段之后，就很容易测试其一种或多种所需的特性，例如结合特异性改善、结合亲和 力提高、拮抗性或激动性生物学特性改善或增强（视情况而定）、免疫原性下降等。以此一 般方式获得的抗体和抗原结合片段均包含在本发明之内。
[0044] 本发明还包括含有本文所公开的任何HCVR、LCVR和/或⑶R氨基酸序列之变体的 抗EGFR抗体，这些变体含有一个或多个保守氨基酸取代。例如本发明包括含有HCVR、LCVR 和/或⑶R氨基酸序列的抗EGFR抗体，相对于本文所公开的任何HCVR、LCVR和/或⑶R氨 基酸序列，这些氨基酸序列含有例如10个或以下、8个或以下、6个或以下、4个或以下等保 守氨基酸取代。
[0045] 术语"表位"是指抗原决定簇，其与抗体分子可变区中称为互补位的一个特异性抗 原结合位点相互作用。单个抗原可以有一个以上的表位。因此，不同的抗体可与一个抗原 的不同区域结合并可以具有不同的生物学效应。表位可以是构象性或线性的。构象性表位 是由线性多肽链的不同链段在空间上并列的氨基酸产生的。线性表位是由多肽链上相邻的 氨基酸残基产生的。在某些情况下，表位可以包括抗原上的糖基、磷酰基，或磺酰基。
[0046] 术语"实质的同一性"或"基本相同"，当指核酸或其片段时，表示当以适当的核苷 酸插入或缺失与另一个核酸（或其互补链）进行最佳比对时，以下面讨论的任何众所周知 的序列同一性算法如FASTA、BLAST或Gap测量，至少有95%的核苷酸序列同一性，更优的 是至少有96^^97^^98%或99%的核苷酸碱基相同性。在某些情况下，与参照核酸分子有 实质的同一性的核酸分子可编码含有与该参照核酸分子编码的多肽相同或基本上类似的 氨基酸系列的多肽。
[0047] 当应用于多肽时，术语"实质的相似性"或"基本上相似"意为两个肽序列用诸如 GAP或BESTFIT等程序的默认间隙权重排列达到最佳比对时，两者至少有95%的序列同一 性，更优的是至少有98%或99%的序列同一性。较优的是，不相同的残基位置其差别仅在 于保守氨基酸取代。"保守氨基酸取代"是指这样一种取代，即一个氨基酸残基被另一个含 有相似化学性质（例如电荷或疏水性）的侧链（R基团）的氨基酸残基所取代。一般而言， 保守氨基酸取代不会显著改变蛋白质的功能性质。在两个或更多的氨基酸序列相互之间的 差别仅在于某些保守取代的情况下，可将序列同一性百分比或相似性程度向上调整，以校 正所述取代的保守性质。进行这种调整的方法是本领域中技术人员所熟知的。请参阅例如 Pearson(1994)Methods Mol. Biol. 24:307-331。含有化学性质相似侧链的氨基酸组的实 例包括：1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、白氨酸和异白氨酸；(2)脂肪族-羟基侧 链：丝氨酸和苏氨酸；（3)含酰胺侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；(4)芳香族侧链：苯丙氨酸、 酪氨酸和色氨酸；（5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；(6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨 酸；以及（7)含硫侧链：半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代组是：缬氨酸-白氨 酸-异白氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸，以 及天冬酰胺-谷氨酰胺。或者，保守取代是Gonnet et al. (1992) Science 256:1443-1445 中所公开的PAM250对数似然矩阵（PAM2501og-likelihood matrix)中的任何正值变化。 "中度保守"取代是PAM250对数似然矩阵中的任何非负值变化。
[0048] 多肽的序列相似性，也称为序列同一性，通常是用序列分析软件测量的。蛋白质分 析软件用分配给各种取代（包括保守氨基酸取代）、缺失和其它修饰的相似性程度对相似 的序列进行比对。例如GCG软件含有诸如Gap和Bestfit程序，可在默认参数情况下使用 这些程序，以确定密切相关的多肽（例如来自不同物种的生物体的同源多肽）之间或野生 型蛋白质与其突变蛋白之间的序列同源性或序列同一性。请参阅例如GCG 6.1版。也可 以用FASTA(GCG 6. 1版的一个程序）默认参数或推荐参数来比较多肽序列。FASTA(例如 FASTA2和FASTA3)提供查询和检索序列之间的最佳重叠区域的比对和序列同一性百分比 (Pearson (2000)，出处同上）。比较本发明的序列和包含大量来自不同生物体的序列的数据 库时，另一种优选的算法是BLAST计算机程序，特别是BLASTP或TBLASTN (使用默认参数）。 请参阅例如 Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410 及 Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-402。 抗体的生物学特性
[0049] 本发明包括与单体或二聚体EGFR分子以高亲和力结合的抗EGFR抗体及其抗原结 合片段。例如本发明包括抗体和抗体的抗原结合片段，其与二聚体EGFR结合时，经表面等 离振子共振测定（例如使用本文实施例3中所确定的分析形式），K d小于约20pM。在某些 实施例中，本发明的抗体或抗原结合片段与二聚体EGFR结合时，经表面等离振子共振测定 (例如使用本文实施例3中所确定的分析形式），K D小于约15pM、小于约ΙΟρΜ、小于约8pM、 小于约6pM、小于约4pM、小于约2pM或小于约ΙρΜ。本发明还包括抗EGFR抗体及其抗原结 合片段，其与二聚体EGFR结合时，经表面等离振子共振测定（例如使用本文实施例3中所 确定的分析形式），tl/2大于约200分钟。在某些实施例中，本发明的抗体或抗原结合片段 与二聚体EGFR结合时，经表面等离振子共振测定（例如使用本文实施例3中所确定的分析 形式），tl/2大于约210分钟、大于约220分钟、大于约250分钟、大于约260分钟、大于约 280分钟、大于约300分钟、大于约320分钟、大于约340分钟、大于约360分钟、大于约380 分钟、大于约400分钟、大于约450分钟、大于约500分钟、大于约550分钟、大于约600分 钟、大于约650分钟、大于约800分钟、大于约1000分钟或以上。
[0050] 本发明还包括抑制表达EGFR的肿瘤细胞的生长的抗EGFR抗体及其抗原结合片 段。例如本发明包括抗EGFR抗体及其抗原结合片段，其抑制细胞表面表达高水平EGFR的 肿瘤细胞（例如A431表皮样癌细胞）的生长，IC 5tl(即产生50%最大生长抑制的浓度）小 于约200pM。IC5tl值可以使用本文实施例4中列举的细胞生长抑制分析方法或基本相似的 分析方法来测定。根据本发明的某些实施例，抗EGFR抗体或其抗原结合片段能够抑制A431 细胞的体外生长，经本文实施例4中列举的细胞生长抑制分析方法或基本相似的分析方法 测定，IC 5tl小于约180pM、小于约160pM、小于约140pM、小于约120pM、小于约ΙΟΟρΜ、小于约 80pM、小于约60pM、小于约40pM、小于约20pM、小于约10pM、小于约5pM或小于约2pM。
[0051] 本发明还包括诱导表达EGFR的细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC)的 抗EGFR抗体及其抗原结合片段。测定ADCC的分析方法是本领域中众所周知的。本文实施 例5中给出了一种示例性的分析形式，其中将抗EGFR抗体加入外周血单核细胞（PBMC)和 A431表皮样癌细胞（即表达高水平EGFR的细胞）的细胞混合物中。相对于将毛地黄皂苷 加入未处理细胞中的裂解条件下观察到的最大细胞裂解信号来评估细胞杀伤的程度，因此 ADCC的程度可以表示为最大细胞杀伤百分比。当以实施例5中的ADCC分析形式或基本上类 似的分析方法测试时，本发明包括产生最大细胞杀伤百分比大于约25%的抗EGFR抗体。在 某些实施例中，如实施例5中的ADCC分析形式或基本上类似的分析方法所测定，本发明的 抗体或抗原结合片段诱导的ADCC其最大细胞杀伤百分比约为30%、约为35%、约为40%、 约为45%、约为50%、约为55%、约为60%、约为65%、约为70%、约为75%或以上。
[0052] 本发明还包括抑制肿瘤细胞的体外或体内生长的抗EGFR抗体及其抗原结合片 段。在某些情况下，本发明的抗体或抗原结合片段引起肿瘤消退或缩小。本发明包括抑制 人类肿瘤异种移植物在免疫功能低下的小鼠体内生长的抗EGFR抗体及其抗原结合片段。 例如,如本文实施例6中所示，示例性抗EGFR抗体H1H141P在异种移植物小鼠模型中显著 抑制头颈部鳞状细胞癌细胞（例如FaDu肿瘤细胞）、胰腺肿瘤细胞（BxPC3)和肺肿瘤细胞 (Calu3和NCI-H358)的生长。相比于hFC对照处理的肿瘤负荷小鼠，本发明包括的抗体及其 抗原结合片段在肿瘤负荷小鼠中抑制肿瘤细胞生长的效果达到大于约50% (例如约55%、 约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%或以上）。
[0053] 本发明还包括诱导细胞表面表达的EGFR内化的抗EGFR抗体及其抗原结合片段。 抗原表位作图和相关技术
[0054] 本发明包括与人EGFR胞外域内（例如在细胞外域I、II、III和/或IV内）发现 的一个或多个氨基酸相互作用的抗EGFR抗体。抗体所结合的表位可由一个位于EGFR胞外 域内 3 个或 3 个以上（例如 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20 个或以 上）氨基酸组成的单一毗连序列组成。或者，该表位可由位于EGFR胞外域内多个非毗连氨 基酸（或氨基酸序列）组成。
[0055] 本领域中普通技术人员熟知的各种技术可用于确定抗体是否与多肽或蛋白质 内"一个或多个氨基酸相互作用"。示例件的技术包括，例如Antibodies, Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb·，NY)中所描述的常规交叉阻断分 析、丙氨酸扫描突变分析、肤印迹分析（Reineke，2004, Methods Mol Biol 248:443-463)， 以及肽裂解分析。另外，还可采用诸如抗原表位切除、表位提取和化学修饰的方法 (Tomer, 2000, Protein Science9:487-496)。可用于鉴定与抗体相互作用的多肽内氨基酸 的另一方法是用质谱法检测的氢/氘交换。总的说来，氢/氘交换法涉及氘标记的感兴趣蛋 白质，随后将抗体与氘标记的蛋白质结合。然后，将蛋白/抗体复合物转移至水中，让所有 残基均发生氢-氘交换，受抗体保护的残基（其维持氘标记状态）除外。抗体解离后进行 标靶蛋白的蛋白酶裂解和质谱分析，从而揭示对应于与抗体相互作用的特定氨基酸的氘标 记残基。请参阅例如 Ehring(1999)Analytical Biochemistry267(2) :252-259 ;Engen and Smith(2001)Anal. Chem. 73:256A-265A。
[0056] 本发明还包括与本文所述的任何特定示例性抗体在同一表位上结合的抗EGFR 抗体（例如 H1M085N、H1M086N、H1M089N、H1M102N、H1M103N、H1M116N、H1H134P、H1H136P、 H1H141P、H1H142P、H1H143P、H1H144P、H1H145P、H1H147P、H1H151P、H1H153P、H1H155P、 H1H157P、H1H158P、H1H159P、H1H161P、H1H163P、H1H169P、H1H171P 等）。同样地，本发明还 包括与本文所述的任何特定示例性抗体竞争性结合EGFR的抗EGFR抗体（例如H1M085N、 H1M086N、H1M089N、H1M102N、H1M103N、H1M116N、H1H134P、H1H136P、H1H141P、H1H142P、 H1H143P、H1H144P、H1H145P、H1H147P、H1H151P、H1H153P、H1H155P、H1H157P、H1H158P、 H1H159P、H1H161P、H1H163P、H1H169P、H1H171P 等）。
[0057] 使用本领域内众所周知的常规方法，可以很容易确定抗体是否与参照抗EGFR抗 体一样都在同一表位结合，或在结合过程中相互竞争。例如为了确定测试抗体是否与本发 明的参照抗EGFR抗体一样都在同一表位结合，让参照抗体与EGFR蛋白（例如EGFR胞外域 的一个可溶部分或细胞表面表达的EGFR)结合。然后，评估测试抗体与EGFR分子结合的能 力。如果测试抗体在与参照抗EGFR抗体饱和结合之后能够与EGFR结合，就可得出结论，测 试抗体结合的表位不同于参照抗EGFR抗体。反之，如果测试抗体在与参照抗EGFR抗体饱 和结合之后不能与EGFR分子结合，那么测试抗体就可能与本发明的参照抗EGFR抗体所结 合的同一表位结合。然后可进行其它常规实验（例如肽突变和结合分析），以证实所观察到 的测试抗体无法结合的现象是否实际上是由于与参照抗体所结合的同一表位结合，或空间 阻断（或另一种现象）是否是所观察到的无法结合的原因。这类实验可采用ELISA、RIA、 Biacore、流式细胞术或本领域内可用的任何其他定量或定性抗体结合测定法来进行。按照 本发明的某些实施例，如果例如1倍、5倍、10倍、20倍或100倍过量的一种抗体对另一抗 体的结合的抑制达至少50%，但优选的是75%、90%或甚至99% (如竞争性结合测定法所 测量），则两种抗体与同一个（或重叠）表位结合（请参阅例如Junghans et al.，Cancer Res. 1990:50:1495-1502)。或者，如果抗原中减弱或消除一种抗体结合的几乎所有氨基酸 突变都能减弱或消除另一种抗体的结合，则两种抗体就被认为与同一表位结合。如果只有 减弱或消除一种抗体结合的一个氨基酸突变亚组能减弱或消除另一种抗体的结合，则两个 抗体就被认为具有"重叠的表位"。
[0058] 要确定抗体是否与参照抗EGFR抗体竞争性结合，在两个方向上实施上述结合方 法：在第一个方向，让参照抗体在饱和条件下与EGFR蛋白（例如EGFR胞外域的一个可溶部 分或细胞表面表达的EGFR)结合，然后评估测试抗体与EGFR分子的结合。在第二个方向， 让测试抗体在饱和条件下与EGFR分子结合，然后评估参照抗体与EGFR分子的结合。如果 在这两个方向上都只有第一种（饱和）抗体能够与EGFR分子结合，就可以得出结论，测试 抗体与参照抗体与EGFR竞争性结合。如本领域中普通技术人员所熟知的，与参照抗体竞争 性结合的抗体不一定与参照抗体所结合的同一表位结合，其可与重叠或相邻的表位结合而 在空间上阻断参照抗体的结合。 人源抗体的制备
[0059] 产生单克隆抗体包括完全人源单克隆抗体的方法是本领域已知的。任何此类已知 的方法均可在本发明的背景下用于产生与人EGFR特异性结合的人源抗体。
[0060] 使用VEL0CIMMUNE?技术或任何其它产生单克隆抗体的已知技术，最初分离出对 EGFR具有高亲和力的含有一个人类可变区和一个小鼠恒定区的嵌合抗体。如以下实验部分 所述，根据所需特性，包括亲和力、选择性、表位等鉴定和选择抗体。用合乎需要的人类恒定 区替换小鼠恒定区，以产生本发明的完全人源抗体，例如野生型或经修饰的IgGl或IgG4。 所选择的恒定区可根据具体用途而变化，而高亲和力抗原结合特性和靶标特异性特征则存 在于可变区中。 生物等效物
[0061] 本发明的抗EGFR抗体和抗体片段包括某些蛋白，其含有的氨基酸序列不同于所 述抗体，但保留了与人EGFR结合的能力。与亲本序列相比，此类抗体变体和抗体片段包含 一个或多个氨基酸的添加、缺失或取代，但表现出与所述抗体的生物活性基本上等同的生 物活性。同样地，与所公开的序列相比，本发明的编码抗EGFR抗体的DNA序列含有的序列 包含一个或多个核苷酸的添加、缺失或取代，但编码的抗EGFR抗体或抗体片段与本发明的 抗EGFR抗体或抗体片段基本上是生物等效的。此类氨基酸变体和DNA序列的实例如上所 讨论。
[0062] 如果例如两种抗原结合蛋白或抗体是医药等效物或医药替代物，在相似实验条件 下无论以单剂或多剂方式以相同摩尔剂量给药时，其吸收速率和程度均未显示显著差异， 则认为这两种抗原结合蛋白或抗体具有生物等效性。如果某些抗体的吸收程度相当但吸收 速率不相当，它们将被视为等效物或医药替代物，并仍可视为具有生物等效性，因为吸收速 率的这种差异是有意设置的并反映在标记上，而且对于达到有效的体内药物浓度不具关键 性（例如对于慢性用途），因此认为对于所研究的特定医药产品没有医学上的意义。
[0063] 在一个实施例中，如果两种抗原结合蛋白在安全性、纯度和药效方面没有临床意 义上的差异，则它们具有生物等效性。
[0064] 在一个实施例中，如果患者可以在参照产品和生物产品之间转换一次或多次而不 良反应（包括与无此类转换而继续治疗相比，出现有临床意义的免疫原性变化或有效性降 低）的预期风险不会增加，则这两种抗原结合蛋白具有生物等效性。
[0065] 在一个实施例中，如果两种抗原结合蛋白在所使用条件下都通过一种或多种共同 的作用机制起作用，且这类机制是已知的，则它们具有生物等效性。
[0066] 生物等效性可通过体内和体外方法来证明。生物等效性的测定方法包括，例如（a) 人或其他哺乳类动物的体内试验，其中血液、血浆、血清或其他生物体液中抗体或其代谢物 的浓度作为时间函数来测定；(b)与人的体内生物利用度数据相关并可合理预测人的体内 生物利用度数据的体外试验；（c)人或其他哺乳类动物的体内试验，其中抗体（或其靶标） 的相应急性药理作用作为时间的函数来测定；以及（d)建立抗体安全性、有效性或生物利 用度或生物等效性的对照良好的临床试验。
[0067] 本发明的抗EGFR抗体的生物等效变体可通过例如取代对生物活性不是必需的各 种残基或序列或去掉对生物活性不是必需的末端或内部残基或序列而构建。例如可去掉或 以其它氨基酸取代对生物活性不是必需的半胱氨酸残基，以防止在复性时形成不必要或不 正确的分子内二硫键。在其他情况下，生物等效的抗体可包括包含修饰抗体糖基化特征的 氨基酸变化（例如消除或去除糖基化的突变）的抗EGFR抗体变体。 物种选择性和物种交叉反应性
[0068] 根据本发明的某些实施例，抗EGFR抗体与人EGFR结合但不与其他物种的EGFR结 合。本发明还包括与人EGFR结合并与一种或多种非人类物种的EGFR结合的抗EGFR抗体。 例如本发明的抗EGFR抗体可与人EGFR结合，但未必与一个或多个下列物种的EGFR结合 (视情况而定）：小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、沙鼠、猪、猫、狗、兔、山羊、绵羊、牛、马、胳骑、食蟹 猴、狨猴、恒河猴或黑猩猩。 免疫偶联物
[0069] 本发明包括与诸如细胞毒素、化疗药物、免疫抑制剂或放射性同位素等治疗基团 ("免疫偶联物"）偶联的抗EGFR单克隆抗体。细胞毒性药物包括对细胞有害的任何药物。 形成免疫偶联物的合适的细胞毒性药物和化疗药物的实例是本领域已知的（请参阅例如 WO 05/103081专利）。多特异性抗体
[0070] 本发明的抗体可以是单特异性、双特异性或多特异性。多特异性抗体可以对一个 靶多肽的不同表位具有特异性，或可含有对一个以上靶多肽具有特异性的抗原结合结构 域。请参阅例如 Tutt et al.，1991，J. Immunol. 147:60-69 ；Kufer et al. , 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244。本发明的抗EGFR抗体可与另一个功能性分子例如另一个肽或蛋 白连接或共表达。例如抗体或其片段可与一个或多个其他分子实体，如另一个抗体或抗体 片段功能性地连接（例如通过化学偶联、基因融合、非共价键结合或其他方式），以产生具 有第二结合特异性的双特异性或多特异性抗体。例如本发明包括双特异性抗体，其中免疫 球蛋白的一臂对人EGFR或其片段具有特异性，而免疫球蛋白的另一臂则对第二治疗靶标 具有特异性或与一个治疗基团偶联。
[0071] 可在本发明的背景下使用的示例性双特异性抗体形式涉及使用一种免疫球蛋白 (Ig)的C H3结构域和另一种Ig的CH3结构域，其中两种Ig的CH3结构域彼此在至少一个氨 基酸上有差异，且与没有该氨基酸差异的双特异性抗体相比，其中至少一个氨基酸差异减 弱了双特异性抗体与蛋白A的结合。在一个实施例中，第一种Ig的G3结构域与蛋白A结 合，而第二种Ig的C H3结构域含有一个减弱或消除与蛋白A结合的突变，例如H95R修饰（系 按照頂GT外显子编号法；按照欧盟编号法则为H435R)。第二个G3结构域还可包含Y96F 修饰（系按照頂GT编号法；按照欧盟编号法则为Y436F)。可在第二个CH3结构域内发现的 其它修饰包括：针对IgGl抗体为D16E、L18M、N44S、K52N、V57M和V82I (系按照MGT编号 法；按照欧盟编号法则为D356E、L358M、N384S、K392N、V397M和V422I);针对IgG2抗体为 N44S、K52N和V82I (系按照MGT编号法；按照欧盟编号法则为N384S、K392N和V422I);针 对IgG4抗体为Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q和V82I (系按照MGT编号法；按照欧盟 编号法则为Q355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q和V422I)。上述双特异性抗体形式 的各种变体均被认为属于本发明之范围。 治疗配方和给药
[0072] 本发明提供了含有本发明的抗EGFR抗体或其抗原结合片段的药物组合物。本 发明的药物组合物是与合适的载体、辅料以及改善转移、递送、耐受性等性质的其他试 剂一起配制的。在以下这本所有药剂化学师都知道的处方集里可以找到大量合适的 配方：雷明顿药物科学（Remington，s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA)。这些配方包括例如粉剂、糊剂、软膏、凝胶、錯剂、油剂、脂质、阳离子 或阴离子脂质囊泡（如 LIPOFECTIN?, Life Technologies, Carlsbad, CA)、DNA 偶联物、无水 吸收性糊剂、油包水和水包油乳剂、乳剂碳蜡（各种分子量的聚乙二醇）、半固体状凝胶以 及含有碳錯的半固体混合物。还请参阅Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations"PDA(1998)J Pharm Sci Technol 52:238-311。
[0073] 给患者施用的抗体剂量可根据患者的年龄和体形大小、靶标疾病、病症、给药途径 等而变化。优选的剂量通常是根据体重或体表面积计算的。当本发明的抗体用于治疗成人 患者中与EGFR活性相关的病症和疾病时，将本发明的抗体经由静脉内给药可能是有利的， 通常是单剂量以约〇. Ol至约20毫克/千克体重的剂量给药，更优选的剂量为约0. 02至约 7、约0. 03至约5,或约0. 05至约3毫克/千克体重。取决于病症的严重程度，治疗频率和 持续时间可以调整。抗EGFR抗体给药的有效剂量和时间安排可根据经验确定；例如可通过 定期评估来监控患者的进展并相应地调整剂量。此外，可以使用本领域内众所周知的方法 进行物种间剂量缩放（例如 Mordenti et al.，1991，Pharmaceut. Res. 8:1351)。
[0074] 已知有各种药物递送系统可用于本发明的药物组合物的给药，例如脂质体封装、 微颗粒、微胶囊、能表达突变病毒的重组细胞、受体介导的胞吞作用（请参阅例如mi et al.，1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432)。给药方法包括但不限于皮内、肌内、腹腔内、静脉 内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。该组合物可通过任何方便的途径给药，例如输注或快速 浓注、通过上皮或皮肤粘膜内层（例如口腔粘膜、直肠和肠道粘膜等）吸收，并可与其他生 物活性药剂一起给药。给药方式可为全身性或局部性。
[0075] 本发明的药物组合物可用标准针头和注射器经皮下或静脉给药。此外，对于皮下 给药，笔型给药装置可方便地用于本发明的药物组合物的给药。此类笔型给药装置可以是 可重复使用型或一次性使用型。可重复使用的笔型给药装置一般采用一种可更换的含药物 组合物的药筒。药筒内所有药物组合物均已给出、药筒变空后，则可方便地丢弃空药筒，并 用含有药物组合物的新药筒替换。然后，该笔型给药装置即可重复使用。在一次性使用的 笔型给药装置中，没有可更换的药筒。而是，该一次性使用的笔型给药装置自带一个预充了 药物组合物的贮液器。贮液器内的药物组合物排空后，整个装置则被丢弃。
[0076] 大量可重复使用的笔型和自动注射给药装置可用于本发明的药物组合物皮下给 药。其实例包括但不限于 AUT0PEN?(0wen Mumford, Inc.，Woodstock, UK)、DISETR0NIC? 笔（Disetronic Medical Systems, Bergdorf，Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25? 笔、 HUMAL0G? 笔、HUMALIN 70/30? 笔（Eli Lilly and Co. ,Indianapolis, IN)、N0V0PEN?I、 II 和 III 型（Novo Nordisk，Copenhagen, Denmark)、N0V0PEN JUNI0R?(Novo Nordisk， Copenhagen, Denmark)、BD? 笔(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ)、0ΡΤΙΡΕΝ?、 0PTIPEN PRO?、0PTIPEN STARLET? 和 0PTICLIK?(sanofi-aventis，Frankfurt, Germany)， 此处仅举几例。用于本发明的药物组合物皮下给药的一次性使用的笔型给药装置 的实例包括但不限于 S0L0STAR? 笔（sanofi-aventis)、FLEXPEN?(Novo Nordisk)、 KWIKPEN?(Eli Lilly)、SURECLICKTM 自动注射器（Amgen，Thousand 0aks，CA)、 PENLETTM(Haselmeier, Stuttgart, Germany)、EPIPEN(Dey，L.P.)和 HUMIRA? 笔（Abbott Labs, Abbott Park IL)，此处仅举几例。
[0077] 在某些情况下，药物组合物可用控释系统给药。在一个实施例中，可使用一种 泵（请参阅 Langer，出处同上；Sefton，1987，CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201)。在 另一个实施例中，可使用聚合材料；请参阅Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds. )，1974，CRC Pres.，Boca Raton, Florida。在另外一个实 施例中，可将控释系统放在所述组合物的靶标附近，从而只需要使用全身剂量的一小部分 (请参阅例如 Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release,出处同 上，vol. 2, pp. 115-138)。在 Langer，1990, Science 249:1527-1533 的综述中讨论了其他 控释系统。
[0078] 注射用制剂可包括静脉内、皮下、皮内和肌内注射、点滴输注等剂型。这些注射用 制剂可用已知的方法制备。例如可以将上述抗体或其盐溶解、悬浮或乳化在常规用于注射 的无菌水性介质或油性介质中，以制备注射用制剂。注射用水性介质包括例如生理盐水、含 葡萄糖和其他辅助剂的等渗溶液等，可结合使用适当的助溶剂，例如醇（如乙醇）、多元醇 (如丙二醇、聚乙二醇）、非离子型表面活性剂[例如聚山梨酯80、HC0-50 (氢化蓖麻油的聚 氧乙烯（50摩尔）加合物）]等。采用的油性介质包括例如芝麻油、豆油等，可结合使用助 溶剂，例如苯甲酸苄酯、苄醇等。如此制备的注射液最好是充入适当的安瓿瓶中。
[0079] 有利的是，上述口服或胃肠外使用的药物组合物是制备成单位剂量的剂型，适合 于容纳一个剂量的活性成分。此类单位剂量的剂型包括例如片剂、丸剂、胶囊、注射剂（安 瓿）、栓剂等。单位剂量中上述抗体的含量一般为每个剂型约5至约500mg ;尤其是注射 剂型，优选的是上述抗体的含量为约5至约lOOmg，其他剂型中抗体的含量为约10至约 250mg〇 抗体的治疗用途
[0080] 本发明的抗体很有用，尤其是对治疗、预防和/或改善任何与EGFR表达或活性有 关，或由EGFR表达或活性介导的疾病或病症，或通过阻断EGFR和EGFR配体（例如EGF或 TGF-α )之间的相互作用或以其它方式抑制EGFR活性和/或信号传导，及/或促进受体内 化和/或降低细胞表面受体的数目可以治疗的疾病或病症。例如本发明的抗体和抗原结合 片段可用于治疗表达高水平EGFR的肿瘤。本发明的抗体和抗原结合片段可以用于治疗例 如脑和脑膜、口咽、肺和支气管树、胃肠道、男性和女性生殖道、肌肉、骨骼、皮肤和附属物、 结缔组织、脾脏、免疫系统、成血细胞和骨髓、肝脏和泌尿道，以及特殊感觉器官如眼内出现 的原发和/或转移性肿瘤。在某些实施例中，本发明的抗体和抗原结合片段用于治疗下列 一种或多种癌症：肾细胞癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈部癌、前列腺癌、恶性胶质瘤、骨肉瘤、结 直肠癌、胃癌（例如伴MET扩增的胃癌）、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、小细胞肺癌、 非小细胞肺癌（例如EGFR依赖型非小细胞肺癌）、滑膜肉瘤、甲状腺癌或黑色素瘤。 联合治疗和配方
[0081] 本发明包括治疗给药方案，其包括联合给予本发明的抗EGFR抗体和至少一种其 他治疗活性组分。此类其他治疗活性组分的非限制性实例包括其它EGFR拮抗剂（例如另 一种抗EGFR抗体[例如西妥昔单抗或帕尼单抗]或EGFR的小分子抑制剂[例如吉非替尼 或厄洛替尼])、EGFR家族另一成员，例如Her2/ErbB2、ErbB3或ErbB4的拮抗剂（例如抗 ErbB2、抗ErbB3或抗ErbB4抗体，或ErbB2、ErbB3或ErbB4活性的小分子抑制剂）、EGFRvIII 拮抗剂（例如与EGFRvIII特异性结合的抗体）、cMET拮抗剂（例如抗cMET抗体）、IGFlR拮 抗剂（例如抗IGFlR抗体）、B-raf抑制剂（例如威罗非尼、索拉非尼、⑶C-0879、PLX-4720)、 TOGFR- α抑制剂（例如抗TOGFR- α抗体）、TOGFR- β抑制剂（例如抗TOGFR- β抗体）、 VEGF拮抗剂（例如VEGF陷阱，请参阅例如美国7, 087, 411专利，在此也称为"VEGF抑制融合 蛋白")、抗VEGF抗体（例如贝伐单抗）、VEGF受体的小分子激酶抑制剂（例如舒尼替尼、索 拉非尼或帕唑帕尼）、DLL4拮抗剂（例如美国专利2009/0142354中公开的抗DLL4抗体，如 REGN421)、Ang2拮抗剂（例如美国专利2011/0027286中公开的抗Ang2抗体，如H1H685P) 等。可有利地与本发明的抗EGFR抗体联合施用的其它药剂包括细胞因子抑制剂，包括小 分子细胞因子抑制剂，以及与诸如 IL-I、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-9、IL-Il、 IL-12、IL-13、IL-17、IL-18等细胞因子或其各自受体结合的抗体。
[0082] 本发明还包括包含本文所提及的任何抗EGFR抗体，以及抑制VEGF、Ang2、DLL4、 ErbB2、ErbB3、ErbB4、EGFRvIII、cMet、IGF1R、B-rAF、PDGFR-a、PDGFR-β 或上述任何细 胞因子中一种或多种因子的抑制剂的治疗组合物，其中所述抑制剂是一种适体、反义分子、 核酶、SiRNA、肽体、纳米抗体或抗体片段（例如Fab片段；F(ab'） 2片段；Fd片段；Fv片段； scFv ;dAb片段；或其它工程分子，例如双链抗体、三链抗体、四链抗体、微型抗体和最小识 另Ij单位）。本发明的抗EGFR抗体也可以与抗病毒剂、抗生素、镇痛药、皮质类固醇和/或 NSAID联合施用和/或共用配制。本发明的抗EGFR抗体也可以作为还包括放射治疗和/或 常规化疗的治疗方案的一部分施用。
[0083] 所述其他治疗活性组分可以在即将施用本发明的抗EGFR抗体之前、同时或施用 后不久给药；（出于本公开书的目的，此类给药方案被视为是抗EGFR抗体与其他治疗活性 组分的"联合"给药）。本发明包括一些药物组合物，其中如本文别处所述，本发明的抗EGFR 抗体是与一种或多种其他治疗活性组分共同配制的。
[0084] 本发明还包括组合物和方法，其包含"降解抗体"和"配体封闭抗体"的组合。"降 解抗体"是指引起细胞内EGFR降解但不一定阻断配体-受体相互作用的抗EGFR抗体。本 发明的降解抗体的非限制性实例是命名为H1H134P的抗体。"配体封闭抗体"是指阻断EGFR 和其一个或多个配体（例如EGF或TGF- α )之间相互作用的抗EGFR抗体。本发明的配体 封闭抗体的非限制性实例是命名为Η1Η141Ρ的抗体。配体封闭抗体的另一个实例是西妥昔 单抗。本发明的发明人设想将降解抗体和配体封闭抗体结合，以便以协同方式或以其它方 式提高抗肿瘤疗效。因此，本发明包括包含至少一种降解抗体和至少一种配体封闭抗体的 药物组合物。本发明还包括一些治疗方法，其包括向受试者联合施用降解抗体和配体封闭 抗体（无论是单独施用还是作为联合制剂施用）。 抗体的诊断用途
[0085] 本发明的抗EGFR抗体还可用于检测和/或测定样本中的EGFR或表达EGFR的细 胞，例如用于诊断目的。例如抗EGFR抗体或其片段可用于诊断特征为EGFR异常表达（例 如过度表达、表达不足、缺乏表达等）的病症或疾病。示例性EGFR诊断测定法可包括例如 用本发明的抗EGFR抗体与获自患者的样本接触，其中该抗EGFR抗体以可检测的标记或报 告分子标记。或者，在诊断应用中也可以将未标记的抗EGFR抗体与本身具有可检测标记 的另一种抗体结合使用。可检测标记或报告分子可以是放射性同位素，如 3H、14C、32P、35S或 125I ;荧光或化学发光基团，如异硫氰酸荧光素或罗丹明；或诸如碱性磷酸酶、β_半乳糖苷 酶、辣根过氧化物酶或荧光素酶等酶。可用于检测或测定样本中EGFR的特定示例性测定法 包括酶联免疫吸附测定（ELISA)、放射免疫测定（RIA)和荧光激活细胞分选（FACS)。
[0086] 可根据本发明用于EGFR诊断测定的样本，包括获自患者的在正常或病理条件下 含有可检测EGFR蛋白或其片段量的任何组织或体液样本。一般而言，先从一位健康患者 (例如未患与EGFR异常水平或活性相关的疾病或病症的患者）获得特定的样本并测定其 EGFR表达水平，以初步建立EGFR的基线或标准水平。然后，可将EGFR基线水平与从获自可 疑患有EGFR相关性疾病或病症的人员的样本测得的EGFR表达水平进行比较。 实施例
[0087] 举出以下实例是为了向本领域中普通技术人员就如何产生和利用本发明的方法 和组合物提供一个完整的公开和说明，并非意在限制本发明人视为其发明的范围。业已作 出努力以确保所用数字（例如量、温度等）的准确性，但也应考虑到某些实验误差和偏差。 除非另有说明，份数是指重量份数，分子量是指平均分子量，温度是指摄氏度，压强是指大 气压或接近大气压。 实施例1.人源抗EGFR抗体的产生
[0088] 将一种表达EGFR的细胞系直接与刺激免疫应答的佐剂一起，施用到包含编码人 类免疫球蛋白重链和κ轻链可变区的DNA的VEL0CIMMUNE?小鼠体内。通过EGFR特异性 免疫测定监测抗体的免疫应答。当达到所需的免疫应答时，收集脾细胞并与小鼠骨髓瘤细 胞融合，以维持其生存能力并形成杂交瘤细胞系。筛选和选择杂交瘤细胞系，以确定产生 EGFR特异性抗体的细胞系。使用这种技术得到了几种抗EGFR嵌合抗体（即抗体具有人类 可变区和小鼠恒定区）；以这种方式生成的示例性抗体分别命名如下：H1M085N、H1M086N、 H1M089N、H1M102N、H1M103N 和 H1M116N。
[0089] 还如美国专利2007/0280945A1中所述，从抗原阳性的B细胞中直接分离了抗EGFR 抗体，但不与骨髓瘤细胞融合。使用这种方法得到了几种完全人源抗EGFR抗体（即抗体 具有人类可变区与人类恒定区）；以这种方式生成的示例性抗体分别命名如下：H1H134P、 H1H136P、H1H141P、H1H142P、H1H143P、H1H144P、H1H145P、H1H147P、H1H151P、H1H153P、 H1H155P、H1H157P、H1H158P、H1H159P、H1H161P、H1H163P、H1H169P 和 H1H171P。
[0090] 按照本实施例的方法产生的示例性抗EGFR抗体的某些生物学特性在下述诸实施 例中详细说明。 实施例2.重链和轻链可变区的氨基酸序列
[0091] 表1列出了选定的抗EGFR抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列对，及其相应的抗 体识别号。 表1

【权利要求】
1. 一种与二聚体人表皮生长因子受体（hEGFR)特异性结合的分离的抗体或其抗原结 合片段，根据表面等离子共振在37°C下测定，其结合解离平衡常数（KD)小于约20pM。
2. 权利要求1中的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与二聚体 hEGFR特异性结合，根据表面等离子共振在37°C下测定，其解离半衰期（t72)大于400分 钟。
3. 权利要求1或2中的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段抑制表 达EGFR的细胞的体外增殖。
4. 权利要求3中的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段抑制表达 EGFR的细胞的体外增殖，且IC5(I小于200pM。
5. 权利要求1至4任一项中的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段 在存在外周血单核细胞（PBMC)的条件下诱导表达EGFR的细胞的抗体依赖性细胞介导的细 胞毒性（ADCC)，且EC5Q小于3. OpM。
6. 权利要求1至5任一项中的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片 段与参照抗体竞争性结合hEGFR，而参照抗体包含具有以下序列号的HCVR/LCVR序列对：130/138。
7. 权利要求1至5任一项中的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段 与hEGFR结合的表位与参照抗体相同，而参照抗体包含具有以下序列号的HCVR/LCVR序列 对：130/138。
8. 权利要求1至3任一项中的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片 段与参照抗体竞争性结合hEGFR，而参照抗体包含具有以下序列号的HCVR/LCVR序列对：98/106。
9. 权利要求1至3任一项中的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段 与hEGFR结合的表位与参照抗体相同，而参照抗体包含具有以下序列号的HCVR/LCVR序列 对：98/106。
10. -种与人表皮生长因子受体（hEGFR)特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片 段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：(a)重链可变区（HCVR)的互补决定区（CDR)，其 含有选自包括下列一组序列的氨基酸序列：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、 194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354 和 370;以及〇3)轻链可变区（10^)的 CDR，其含有选自包括下列一组序列的氨基酸序列：1〇、26、42、58、74、90、106、122、138、154、 170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362 和 378。
11. 权利要求10中的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包 含的重链和轻链⑶R位于选自包括下列一组序列对的HCVR/LCVR氨基酸序列对内：2/10、 18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、 194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、 338/346、354/362 和 370/378。
12. 权利要求11中的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片 段分别包含选自包括下列一组序列的HCDR1-HCDR2-HCDR3-IXDR1-IXDR2-IXDR3结构 域：4-6-8-12-14-16 ;20-22-24-28-30-32 ;36-38-40-44-46-48 ;52-54-56-60-62-64 ; 68-70-72-76-78-80 ； 84-86-88-92-94-96 ； 1 00- 1 02-104-108-1 10-1 12 ； 116-118-120-124-126-128 ； 132-134-136-140-142-144 ； 148-150-152-156-158-160 ； 164-166-168-172-174-176 ； 180-182-184-188-190-192 ； 196-198-200-204-206-208 ； 212-214-216-220-222-224 ;228-230-232-236-238-240 ;244-246-248-252-254-256 ; 260-262-264-268-270-272 ;276-278-280-284-286-288 ;292-294-296-300-302-304 ; 308-310-312-316-318-320 ;324-326-328-332-334-336 ;340-342-344-348-350-352 ; 356-358-360-364-366-368 ;及 372-374-376-380-382-384。
13. -种与人表皮生长因子受体（hEGFR)特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片 段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区（HCVR)，其含有选自包括下列 一组序列的氨基酸序列：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、 258、274、290、306、322、338、354和370;以及〇3)轻链可变区仏0^)，其含有选自包括下 列一组序列的氨基酸序列：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、 250、266、282、298、314、330、346、362 和 378。
14. 权利要求13中的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段 包含选自包括下列一组序列对的HCVR/LCVR氨基酸序列对：2/10、18/26、34/42、50/58、 66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、 226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362 和 370/378。
15. -种药物组合物，其包含权利要求1至14任一项中的抗体或抗原结合片段以及一 种药学上可接受的载体或稀释剂。
16. -种抑制肿瘤生长的方法，该方法包括向患有肿瘤的受试者施用权利要求15中的 药物组合物。
17. 权利要求16中的方法，其中所述肿瘤选自下列一组肿瘤：肾肿瘤、胰腺肿瘤、头颈 部肿瘤、乳腺肿瘤、前列腺肿瘤、结肠肿瘤、胃肿瘤和卵巢肿瘤、肺肿瘤和皮肤肿瘤。
18. -种抑制或减弱受试者肿瘤生长的方法，所述方法包括向受试者施用权利要求1 至14任一项中的抗体或抗原结合片段或权利要求15中的药物组合物，以及另一种治疗剂， 其中所述另一种治疗剂是与 HER2、ErbB3、ErbB4、cMet、IGF1R、Ang2、PDGFR- a 或 PDGFR- 3 特异性结合的一种抗体或其抗原结合片段。
19. 一种抑制或减弱受试者肿瘤生长的方法，所述方法包括向受试者施用权利要求1 至14任一项中的抗体或抗原结合片段或权利要求15中的药物组合物，以及另一种治疗剂， 其中所述另一种治疗剂是VEGF拮抗剂。
【文档编号】C07K16/28GK104411722SQ201380033859
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2013年6月25日 优先权日:2012年6月25日
【发明者】C·戴利, G·瑟斯顿, N·J·帕帕多普洛斯 申请人:瑞泽恩制药公司