一种磷酸化多肽的纯化装置制造方法
【专利摘要】本实用新型涉及一种磷酸化多肽的纯化装置。该装置包括纯化玻璃管、混悬仪、接收瓶、真空泵、铁架台五部分。主要是利用减压吸入、减压过滤、砂板截留的原理而设计的。装置中清洗液和洗脱液入口的设计，能够快捷吸入溶液，减少了样品污染的几率，降低了装置的磨损和腐蚀，节省了时间；混悬过程采用混悬仪，使该装置混悬更充分，更有利于磷酸化多肽的纯化，提高磷酸化多肽的纯化质量和产率；通过减压过滤实现了对大量样本的纯化，从而解决了化学合成的磷酸化多肽的大量纯化的难题。本装置具有操作方便、快捷、高效、干净、耐用、适合大量磷酸化多肽纯化的特点。
【专利说明】一种磷酸化多肽的纯化装置
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种磷酸化多肽的纯化装置，属于化学纯化【技术领域】，具体地说是一种填装二氧化钛纳米粒子的磷酸化多肽的减压纯化装置。
【背景技术】
[0002]蛋白质的磷酸化修饰几乎调节着生命活动的所有过程，包括细胞的增值、发育和分化、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢、肿瘤发生等。对磷酸化的认识有助于我们了解疾病的发生过程。而磷酸化多肽则是体现其母体蛋白磷酸化过程结构变化的最好模型，从而在寻找预防和治疗各种疾病的有效药物方面，具有重大的现实意义，因此磷酸化多肽具有重要研究价值。然而，磷酸化多肽在天然样本中含量极低，介于其重要的研究价值，从七十年代末期开始，磷酸化多肽的人工合成得到许多化学家的重视。然而，要得到纯的单一肽，尤其是制备大量的色谱行为相近的多肽纯品，是人工合成并纯化多肽的一项重要而又艰巨的环节。近期，二氧化钛(TiO2)金属氧化物富集技术得到了人们极大的关注，但目前已报道的用于二氧化钛分离的装置都是做成微柱(spin column)、二氧化钛板(“A novel titaniumdioxide-polydimethylsiloxane plate for phosphopeptide enrichment and massspectrometry analysis”，《Analytica ChimicaActa》，P105-113, 2014 年)、色谱柱(申请号201310253448、200810211727.9)等，这些技术主要在蛋白质组学领域中对生物样本中的天然磷酸化多肽进行微量相对富集，以便提高磷酸化多肽在质谱中的检出率，尚停留在微量磷酸化多肽分析水平的纯化，操作原理主要基于离心机的离心力或加压而进行的，目前的装置尚不能满足化学合成的磷酸化多肽的大量纯化。
实用新型内容
[0003]本实用新型专利是针对化学法合成磷酸化多肽的大量纯化的实际需要提供的一种磷酸化多肽的纯化装置。在利用二氧化钛能特异性吸附磷酸化多肽的基础上，设计了一种磷酸化多肽的纯化装置，该装置主要是用减压吸入和减压过滤的原理结合20 μ m的砂板使溶液能滤过，但能截留大于20 μ m的物质而设计的。
[0004]其方案为:一种磷酸化多肽的纯化装置，该装置包括纯化玻璃管1、混悬仪2、接收瓶3、真空泵4、铁架台5五部分。
[0005]其中纯化玻璃管包括进样口 6、清洗液和洗脱液入口 7、储液室8、清洗液和洗脱液出口 9、进样口盖10、孔隙20 μ m的砂板11、三通阀门12 ;储液室8被孔隙20 μ m的砂板11分割成两个空间上储液室和下储液室；三通阀门12有三个孔隙，孔隙的设置确保当一个孔隙与下储液室底部的孔隙相通时，另两个孔隙与清洗液和洗脱液入口 7、清洗液和洗脱液出口 9也同时接通，当无任何孔隙与下储液室底部的孔隙相通时，其它两个孔隙也不与清洗液和洗脱液入口 7、清洗液和洗脱液出口 9相通；进样口盖10通过内螺纹与储液室8相连；
[0006]其中混悬仪2包括转盘13、电机14、转速旋钮15、底座16，纯化玻璃管I通过插入转盘13的圆孔中固定到混悬仪2上，利用混悬仪的旋转，使纯化玻璃管I上下颠倒，达到样品与二氧化钛充分接触吸附、清洗液与样品充分接触洗涤、洗脱液与样品充分接触洗脱的目的；
[0007]其中真空泵4与清洗液和洗脱液入口 7相连，清洗液和洗脱液通过减压便可吸入纯化玻璃管的储液室8 ；
[0008]其中接收瓶3为设有主口和侧口的两口瓶，主口 17与清洗液和洗脱液出口 9相连，侧口 18为带有阀门的抽气口。清洗液和洗脱液通过减压过滤，进入接收瓶3，侧口 18阀门主要是调节压力的。
[0009]纯化操作过程主要包括:上样操作、洗涤操作、洗脱操作。上样后磷酸化多肽被吸附到二氧化钛表面，并随二氧化钛一起被孔隙20 μ m的砂板11截留在上储液室，未被吸附的物质随溶液滤过20 μ m的砂板11到接收瓶3中；通过洗涤操作，未被吸附的物质，进一步被清洗液洗涤滤过20 μ m的砂板11到接收瓶3中，而磷酸化多肽仍被吸附在二氧化钛表面，并被孔隙20 μ m的砂板11截留在上储液室；最后通过洗脱操作，磷酸化多肽溶解到洗脱液中，滤过孔隙20 μ m的砂板11流入接收瓶3中，完成磷酸化多肽的纯化。
[0010]本实用新型的有益效果是:
[0011 ] 1、接收瓶3与清洗液和洗脱液出口 9相连，清洗液和洗脱液通过减压过滤，进入接收瓶，使清洗和洗脱过程更彻底，而且相比离心力原理，减压过滤的原理可以去除大容量的清洗液和洗脱液，从而实现化学合成的磷酸化多肽的大量纯化。
[0012]2、采用混悬仪2的旋转，使纯化玻璃管I自动上下颠倒，从而达到样品与二氧化钛充分接触吸附、清洗液与样品充分接触洗涤、洗脱液与样品充分接触洗脱的目的，相比常用的摇床式平面混摇，该装置更立体、混悬的更充分、更有利于磷酸化多肽的纯化，提高磷酸化多肽的纯化质量和产率。
[0013]3、由于磷酸化多肽的纯化过程，需多次洗涤杂质和洗脱样品，通过真空泵与清洗液和洗脱液入口 7相连，清洗液和洗脱液通过减压便可吸入纯化玻璃管的储液室8，而不必打开进样口盖10，减少了样品污染的几率，降低了由于多次旋转而造成对进样口盖10的磨损和腐蚀，操作时间大大节省，从而使磷酸化多肽的纯化过程方便快捷、简单耐用。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1为一种磷酸化多肽的纯化装置图。
[0015]I为纯化玻璃管,其中:6为进样口、7为清洗液和洗脱液入口、8为储液室、9为清洗液和洗脱液出口、10为进样口盖、11为孔隙20 μ m的砂板、12为三通阀门；
[0016]3为接收瓶，其中17为主口，18为侧口；
[0017]4为真空泵；
[0018]5为铁架台。
[0019]图2为一种磷酸化多肽的纯化混悬装置图。
[0020]2为混悬仪，其中13为转盘、14为电机、15为转速旋钮、16为底座。
【具体实施方式】
[0021]下面结合说明书附图详细说明本实用新型【具体实施方式】，一种磷酸化多肽的纯化装置，纯化玻璃管1、混悬仪2、接收瓶3、真空泵4、铁架台5五部分；[0022]其中纯化玻璃管包括进样口 6、清洗液和洗脱液入口 7、储液室8、清洗液和洗脱液出口 9、进样口盖10、孔隙20 μ m的砂板11、三通阀门12 ;储液室8被孔隙20 μ m的砂板11分割成两个空间上储液室和下储液室，大于20 μ m的物质将被截留在上储液室，小于20 μ m的物质将滤过20 μ m的砂板11流入下储液室；三通阀门12有三个孔隙，孔隙的设置确保当，另两个孔隙与清洗液和洗脱液入口 7、清洗液和洗脱液出口 9同时接通，当无任何孔隙与下储液室底部的孔隙相通时，其它两个孔隙也不与清洗液和洗脱液入口 7、清洗液和洗脱液出口 9相通；进样口盖10通过内螺纹与储液室8相连；
[0023]其中混悬仪2包括转盘13、电机14、转速旋钮15、底座16，纯化玻璃管I通过插入转盘13的圆孔中固定到混悬仪2上；
[0024]其中真空泵4与清洗液和洗脱液入口 7相连；
[0025]其中接收瓶3为两口瓶，主口 17与清洗液和洗脱液出口 9相连，侧口 18带有阀门的抽气口，通过阀门调节压力。一种磷酸化多肽的纯化装置使用方法:
[0026]上样操作:首先移去进样口盖10，并将三通阀门12的三个孔隙旋转到不与清洗液和洗脱液入口 7、清洗液和洗脱液出口 9相通，将二氧化钛和磷酸化多肽粗品溶液移取到纯化玻璃管储液室8中，盖上进样口盖10，确保纯化玻璃管储液室8是密封的；之后将纯化玻璃管I沿转盘13的直径方向固定到混悬仪2上，接通混悬仪2的电源，旋转转速旋钮15，带动纯化玻璃管I上下颠倒混悬；接着将纯化玻璃管I固定到铁架台5上，旋转三通阀门12使其中两个孔隙分别与清洗液和洗脱液入口 7、清洗液和洗脱液出口 9相通，将真空泵4与清洗液和洗脱液入口 7通过橡皮管相连，接收瓶3与清洗液和洗脱液出口 9相连，开始减压过滤；然后旋转三通阀门12使纯化玻璃管储液室8密闭，通过侧口 18的阀门使接收瓶3与大气相通，移去接收瓶3，磷酸化多肽被吸附到二氧化钛表面，并随二氧化钛一起被孔隙20 μ m的砂板11截留在上储液室，未被吸附的物质随溶液滤过20 μ m的砂板11到接收瓶3中；
[0027]洗涤操作:接着将清洗液和洗脱液入口 7放入清洗液中，旋转三通阀门12使清洗液和洗脱液入口 7与大气相通，清洗液被吸入纯化玻璃管储液室8中，旋转三通阀门12使纯化玻璃管储液室8密闭；之后将纯化玻璃管I沿转盘13的直径方向固定到混悬仪2上，接通混悬仪2的电源，旋转转速旋钮15，带动纯化玻璃管I上下颠倒混悬；接着将纯化玻璃管I固定到铁架台5上，旋转三通阀门12使其中两个孔隙分别与清洗液和洗脱液入口 7、清洗液和洗脱液出口 9相通，将真空泵4与清洗液和洗脱液入口 7通过橡皮管相连，接收瓶3与清洗液和洗脱液出口 9相连，开始减压过滤；然后旋转三通阀门12使纯化玻璃管储液室8封闭，通过侧口 18的阀门使接收瓶3与大气相通，移去接收瓶3，未被吸附的物质，进一步被清洗液洗涤滤过20 μ m的砂板11到接收瓶3中，而磷酸化多肽仍被吸附在二氧化钛表面，并被孔隙20 μ m的砂板11截留在上储液室；
[0028]洗脱操作:同洗涤操作。磷酸化多肽溶解到洗脱液中，滤过孔隙20 μ m的砂板11流入接收瓶3中，完成磷酸化多肽的纯化。
【权利要求】
1.一种磷酸化多肽的纯化装置，其特征在于:该装置包括纯化玻璃管(I)、混悬仪(2)、接收瓶(3)、真空泵(4)、铁架台(5)五部分； 其中纯化玻璃管包括进样口出)、清洗液和洗脱液入口(7)、储液室(8)、清洗液和洗脱液出口(9)、进样口盖(10)、孔隙20μπι的砂板(11)、三通阀门(12);储液室(8)被孔隙20μπι的砂板(11)分割成两个空间上储液室和下储液室；三通阀门(12)有三个孔隙，孔隙的设置确保当一个孔隙与下储液室底部的孔隙相通时，另两个孔隙与清洗液和洗脱液入口(7)、清洗液和洗脱液出口(9)也同时接通，而当无任何孔隙与下储液室底部的孔隙相通时，其它两个孔隙也不与清洗液和洗脱液入口(7)、清洗液和洗脱液出口(9)相通；进样口盖(10)通过内螺纹与储液室(8)相连； 其中混悬仪⑵包括转盘(13)、电机(14)、转速旋钮(15)、底座(16)，纯化玻璃管(I)通过插入转盘(13)的圆孔中固定到混悬仪(2)上； 其中真空泵(4)与清洗液和洗脱液入口(7)相连； 其中接收瓶⑶为设有主口和侧口的两口瓶，主口(17)与清洗液和洗脱液出口(9)相连，侧口(18)为带有阀门的抽气口。
【文档编号】C07K1/22GK203782068SQ201420158316
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2014年4月3日 优先权日:2014年4月3日
【发明者】隋少卉, 蒋志刚, 董俊军, 李善茂, 项丰顺, 张鸣, 刘基伟, 周蕾 申请人:中国人民解放军防化学院