专利名称：枸杞多糖提取纯化工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于生物工程药品领域。
现代药理学认为宁夏枸杞的生物活性成分可归纳三个方面1.枸杞色素中丰富的类胡萝卜素；2.甜菜碱；3.枸杞多糖。枸杞多糖是一种非特性免疫增强剂，可提高机体免疫力，增强抗病能力，从而达到抗衰老、抗癌、抗放射线、抗肝炎以及抗艾滋病等作用。现有技术对枸杞多糖粗品提取是选干枸杞子为原料，采用乙醇沉淀法提取。91年至94年间，中国科学院上海有机化学研究所田庚元课题组选干枸杞子用乙醇沉淀法提取枸杞多糖粗品后柱层得两种枸杞多糖。96年华中农业大学张声华剂组选干枸杞子用乙醇沉淀法提取枸杞多糖粗品，再柱层析，冷冻干燥得到四种白色略带棕色纤维状疏松固体枸杞多糖。上述提取的枸杞多糖分子量在1.0×104-8.8×104d之间，枸杞多糖的药理与临床研究有待深入，纯枸杞多糖的还未达到工业化生产的效果。
本发明的目的针对现有技术提取、分离、纯化枸杞多糖速度慢、工艺方法落后，提供一种可尽快实现工业化生产，转化为临床应用的药品的枸杞多糖的提取纯化工艺。
本发明的技术方案是这样的。采用新鲜枸杞浆果分离除去枸杞籽后，制得枸杞原汁作为分离提取枸杞多糖的原料。采用先进的膜分离技术，先用50万分子量膜分离掉枸杞色素及不溶固形微粒。再用1万-10万分子量膜截留溶解枸杞多糖的原汁部分，然后真空冷冻干燥成枸杞多糖粗品。采用制备型高压液相色谱仪紫外检测器控制监测枸杞多糖分离纯化，订制Φ45mm和Φ100mm大柱径制备型分离柱进行柱层析，可以g量级以上制备纯枸杞多糖。枸杞原汁制备枸杞多糖粗品的工艺流程为枸杞原汁经500目涤纶滤布吊包过滤，得枸杞清汁；枸杞清汁经50万分子量膜超滤，通过的枸杞汁再经过10万分子量膜超滤，通过的枸杞汁再经过1万分子量膜超滤，截留1-10万分子量枸杞汁经过真空冷冻干燥得枸杞多糖粗品。采用柱层析分离纯化枸杞多糖工艺为a.使用DEAE纤维素柱层析串联两次脱色；b.使用sephadex交联葡聚糖凝胶G-25柱双蒸馏水水洗脱、脱盐；c.使用sephadex交联葡聚胶G-100柱双蒸馏水洗脱、分离纯化；d.经真空冷冻干燥获白色疏松纤维絮状枸杞多糖结晶纯品。
本发明具有如下效果由于采用了枸杞原汁为原料制备枸杞多糖粗品，通过先进的膜分离技术，使用大柱径分离柱进行柱层析制备纯枸杞多糖，提高了枸杞多糖折制备效率和得率，适宜于工业化生产，使枸杞多糖尽快转化为药品，用于医学临床，造福于人类。
本发明的实施例如下一、提取枸杞多糖粗品，进料量及工艺过程如下640kg枸杞原汁↓500目滤布吊滤→色素(粘稠状液体)66.5kg↓ ↓过573.5kg清汁 冷冻干燥↓ ↓截留134kg汁←50万分子量膜 12.8kg↓过439.5kg汁↓截留120kg汁←10万分子量膜↓过319.5kg汁↓截留239kg汁←1万分子量膜↓↓真空冷冻干燥过80.5kg汁↓枸杞多糖粗品21kg二、枸杞多糖粗品的分离、纯化工艺1.枸杞多糖柱层析设备(1)YZS-3型液相制备色谱仪技术参数流量范围40ml/min，连续可调最高工作压力5MPa检测波长UV-254nm、280nm、360nm、460nm、550nm量程从2°-29呈整数倍衰减，共分10档制备柱内径16mm、22mm、40mm、45mm、100mm、长200mm、250mm、300mm、500mm、1000mm
柱数正反相柱N≥1000片/m性能具有高柱数、多品种、多规格预装制备柱，能以较大规模进行制备和提纯工作，快速经济地制备克量级以上纯品(2)真空冷冻干燥机(3)纤维素(DEAE)(OH-型)层析纯(4)交联葡聚糖凝胶(sephadex)G-25、G-100、层析纯2.柱层析实验设备及工艺流程(1)实验用设备45×500mm DEAE纤维素玻璃柱2套；45×500mm sephadcx G-25交联葡聚糖凝胶柱1套；45×500mm sephadex G-100交联葡聚糖凝胶柱1套。
(2)工艺流程称20g枸杞多糖粗品溶于200ml双蒸馏水中→1号DEAE柱上端进样，水流速3ml/min→800ml双蒸馏水洗脱，流速3ml/min→1号DEAE柱洗脱液上端进样于2号DEAE柱→800ml双蒸馏水洗脱，流速3ml/min→2号DEAE柱洗脱液用恒流泵，流速6ml/min，sephadex G-25柱上端进样→恒流泵控制流速6ml/min双蒸馏水洗脱→sephadex G-25柱洗脱液用恒流泵，流速控制6ml/min，sephadex G-100柱上端进样→恒流泵控制流速6ml/min双蒸馏水洗脱，出洗脱液400ml→真空冷冻干燥42h-62h，出白色疏松纤维絮状结晶纯枸杞多糖3.8g。
枸杞多糖粗品得率为2.4-2.5％，即1吨枸杞原汁提取分离24-25kg枸杞多糖粗品；纯枸杞多糖得率为0.45-0.47％，即1吨枸杞原汁分离纯化4.5-4.7kg纯枸杞多糖。枸杞多糖纯度90％以上。
权利要求
1.枸杞多糖提取纯化工艺，以枸杞子为原料，提取枸杞多糖粗品，采用柱层析方法从枸杞多糖粗品中分离出枸杞多糖，其特征在于a.枸杞原料采用新鲜枸杞浆果，分离除去枸杞籽后，所得枸杞原汁作为分离枸杞多糖的原料，分离工艺采用膜分离技术，先用50万分子量膜分离掉枸杞色素及不溶固形物微粒，再用1万和10万分子量膜截留溶解枸杞多糖1万-10万分子量的枸杞原汁部分，然后真空冷冻干燥成枸杞多糖粗品；b.订制45mm和100mm大柱径制备型分离柱进行柱层析，可以g量级以上制备纯枸杞多糖。
2.根据权利要求1所述的枸杞多糖提取纯化工艺，其特征在于枸杞原汁制备枸杞多糖粗品的工艺流程为枸杞原汁经500目涤纶滤布吊包过滤，得枸杞清汁，枸杞清汁经50万分子量膜超滤，通过的枸杞汁再经10万分子量膜过滤，通过超滤的枸杞汁再经过1万分子阳膜超滤，截留1-10万分子量枸杞汁经真空冷冻干燥得枸杞多糖粗品。
3.根据权利要求1所述的枸杞多糖提取纯化工艺，其特征在于采用柱层析分离纯化枸杞多糖的工艺为a.使用DEAE纤维素柱层析串联两次脱色；b.使用scphadex交联葡聚糖凝胶G-25柱双蒸馏水水洗、脱盐；c.使用sephadex交联葡聚糖凝胶G-100柱双蒸馏水洗脱，分离纯化；d.经真空冷冻干燥获白色疏松纤维絮状枸杞多糖结晶纯品。
全文摘要
本发明属于生物工程药品领域。采用新鲜枸杞浆果分离除去枸杞籽后,制得枸杞原汁,先用50万分子量膜分离枸杞色素及不溶固形微粒,再用1—10万分子量膜截留溶解枸杞多糖原汁部分,真空冷冻成枸杞多糖粗品,订制Φ45mm和Φ100mm大柱径分离柱对枸杞多糖粗品柱层析,可以g量级以上制备纯枸杞多糖。本工艺采用了先进的膜分离技术和大柱层析技术,提高了枸杞多糖的制备效率和得率,适宜于工业化生产,使枸杞多糖尽快转化为药品,用于医学临床。
文档编号C08B37/00GK1263108SQ00101570
公开日2000年8月16日 申请日期2000年1月20日 优先权日2000年1月20日
发明者敖尔戈勒 申请人:宁夏轻工业设计研究院食品发酵研究所