专利名称：一种木耳多糖的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种木耳多糖的提取方法。
背景技术：
木耳营养丰富，食味鲜美，不但是营养价值很高的食用菌，而且是药用价值较高的药用菌，是世界公认的保健品。随着木耳栽培业的迅速发展及应用范围的拓宽，对木耳的营养成分以及在医疗保健作用方面的研究也在逐步深入。
木耳提取生物活性多糖可作为口服液和其它功能性食品的有效成分。传统木耳多糖提取采用水体系，木耳细胞粗大，壁厚，多糖难以从胞内扩散出来。而酸、碱法容易破坏多糖的结构，降低其生物利用率。本文采用多种酶协同作用于木耳真菌细胞壁构成物质，使得木耳真菌细胞壁破裂，促进多糖的溶出，提高了多糖的提取率。为木耳保健食品的开发提供一条新的工艺路线和方法。本方法采用酶法提取，使提取率大为提高，这对于木耳的综合开发利用及提高其经济价值具有实际意义。
发明内容
本发明的目的旨在提供一种以木耳为原料，利用酶法分别采用不同的工艺条件，提取活性多糖的新方法。
一、原料及处理取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳进行粉碎，粒度控制在20目以下。
用2～10倍乙醇于60～100℃对粉碎后的原料处理1～4小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作1～3次。
二、木耳多糖的提取工艺1.预处理①将20～50倍的水与经过处理后的木耳混匀，静置4小时，让其充分复水。
或②微波处理将20～50倍的水与经过处理后的木耳混匀，经微波2450MHz下处理1～15分钟。取出后加入原料干重10～40倍的水，再次用微波2450MHz下处理1～15分钟。重复此操作2～6次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。
或③超声波处理将20～50倍的水与经过处理后的木耳混匀，经超声波27KHz下处理1～15分钟。取出后加入原料干重10～40倍的水，再次用超声波27KHz下处理1～15分钟。重复此操作2～6次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。
2.酶解、提取将上述合并后的滤液加入适量的水(不经物理波处理的则直接加入水)，使混合液的重量达到原料干重的50倍，调节其pH值至3～7.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至40～60℃，加入果胶酶(100万u/ml)0～2.0％、纤维素酶(45万u/g)0～2.0％和木瓜蛋白酶(100万u/g)0～2.0％，酶用量按原料干重计算，开动搅拌器混匀后保持酶解0.5～3小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至70～100℃，保持1～4小时。
3.粗滤及精滤将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。
4.后处理将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。
5.精制
将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/8～1/2，得木耳多糖粗品。然后加入浓缩液体积1～5倍75％～100％的乙醇，于2～5℃醇沉2～20小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
三、下脚料的利用将上述提取过程中产生出来的木耳残渣收集起来，用碱法提取出其中的水不溶性木耳多糖。方法如下1.原料收集上述提取过程中产生的木耳滤渣，称重备用。
2.碱解取滤渣重10～50倍的水，用20％NaOH溶液调节酸碱度，使其初始pH值为7～12，再加入木耳滤渣，于50～95℃下碱解1～5小时。然后离心，分离出滤渣，收集上清液。重复此操作2～5次。
3.提纯将收集后得到的上清液合并，用1mol/LHCl调节其pH值至5～8，再将其减压浓缩至原体积的1/8～1/2，得碱性木耳多糖粗品。
4.纯化将上述多糖粗品加入浓缩液体积1～5倍75％～100％的乙醇，于2～5℃醇沉2～20小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得碱性木耳多糖纯品。
本发明具有如下优点1.将木耳中不同种类的多糖提取、浓缩、富集起来，使制品最大程度地发挥出抗肿瘤、降血压、降血脂、降血糖等功效。
2.将传统水提法与现代生物技术相结合，运用复合酶使细胞壁破碎，从而使细胞内的多糖能够充分溶出，既提高了对原料的利用程度，降低了生产成本。
3.在提取过程中引入了微波萃取工艺和超声波萃取方法，简化了提取工艺，提高了多糖得率，缩短了提取时间，减小了由于长时间加热而引起的对其活性成分的破坏。
4.在酶法提取木耳多糖之后，用碱法提取废渣中的碱溶性木耳多糖，充分利用了原料，节约了生产成本。
具体实施例方式
例1取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用20公斤乙醇于60℃对粉碎后的原料处理4小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作3次。将500公斤的水与经过处理后的木耳混匀，经微波2450MHz下处理15分钟。取出后加入400公斤的水，再次用微波2450MHz下处理15分钟。重复此操作2次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的的量达到500公斤，调节其pH值至3.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至40℃，加入果胶酶(100万u/ml)200克(酶用量按原料干重计算)，开动搅拌器混匀后保持酶解3小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至100℃，保持1小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/5，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积5倍75％的乙醇，于2℃醇沉20小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例2取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用50公斤乙醇于100℃对粉碎后的原料处理1小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作2次。将200公斤的水与经过处理后的木耳混匀，经微波2450MHz下处理5分钟。取出后加入300公斤的水，再次用微波2450MHz下处理5分钟。重复此操作2次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的的量达到500公斤，调节其pH值至4.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至60℃，加入纤维素酶(45万u/g)200克，开动搅拌器混匀后酶解0.5小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至90℃，保持2小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/2，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积1倍100％的乙醇，于3℃醇沉15小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例3取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用100公斤乙醇于100℃对粉碎后的原料处理2小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作1次。将500公斤的水与经过处理后的木耳混匀，经微波2450MHz下处理10分钟。取出后加入400公斤的水，再次用微波2450MHz下处理10分钟。重复此操作2次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到500公斤，调节其pH值至7.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至60℃，加入木瓜蛋白酶(100万u/g)200克，酶用量按原料干重计算，开动搅拌器混匀后保持酶解3小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至100℃，保持4小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/2，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积5倍75％的乙醇，于5℃醇沉20小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例4
取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用100公斤乙醇于100℃对粉碎后的原料处理1小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作1次。将500公斤的水与经过处理后的木耳混匀，经微波2450MHz下处理1分钟。取出后加入400公斤的水，再次用微波2450MHz下处理1分钟。重复此操作6次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到500公斤，调节其pH值至4.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至40℃，加入果胶酶(100万u/ml)200克和纤维素酶(45万u/g)100克，开动搅拌器混匀后保持酶解3小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至100℃，保持1小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/8，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积5倍75％的乙醇，于2℃醇沉20小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例5取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用500公斤乙醇于80℃对粉碎后的原料处理3小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作2次。将400公斤的水与经过处理后的木耳混匀，经微波2450MHz下处理10分钟。取出后加入200公斤的水，再次用微波2450MHz下处理10分钟。重复此操作4次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到500公斤，调节其pH值至5.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至55℃，加入果胶酶(100万u/ml)100克和木瓜蛋白酶(100万u/g)200克，开动搅拌器混匀后保持酶解2小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至80℃，保持3小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/5，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积4倍95％的乙醇，于4℃醇沉10小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例6取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用20公斤乙醇于100℃对粉碎后的原料处理4小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作3次。将200公斤水与经过处理后的木耳混匀，经微波2450MHz下处理15分钟。取出后加入100公斤的水，再次用微波2450MHz下处理15分钟。重复此操作6次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到500公斤，调节其pH值至7.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至60℃，加入纤维素酶(45万u/g)200克和木瓜蛋白酶(100万u/g)200克，开动搅拌器混匀后保持酶解0.5小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至70℃，保持4小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/8，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积5倍80％的乙醇，于2℃醇沉20小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例7取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用50公斤乙醇于70℃对粉碎后的原料处理4小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作3次。将200公斤水与经过处理后的木耳混匀，经微波2450MHz下处理5分钟。取出后加入100公斤的水，再次用微波2450MHz下处理5分钟。重复此操作3次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到500公斤，调节其pH值至5.0，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至50℃，加入果胶酶(100万u/ml)150克、纤维素酶(45万u/g)90克和木瓜蛋白酶(100万u/g)200克，开动搅拌器混匀后保持酶解1.5小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至90℃，保持1小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/8，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积4倍90％的乙醇，于4℃醇沉15小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例8取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用20公斤乙醇于60℃对粉碎后的原料处理4小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作3次。将500公斤的水与经过处理后的木耳混匀，经超声波27KHz下处理15分钟。取出后加入400公斤的水，再次用超声波27KHz下处理15分钟。重复此操作2次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到500公斤，调节其pH值至3.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至40℃，加入果胶酶(100万u/ml)200克，开动搅拌器混匀后保持酶解3小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至100℃，保持1小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/5，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积5倍75％的乙醇，于2℃醇沉20小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例9取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用50公斤乙醇于100℃对粉碎后的原料处理1小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作2次。将200公斤的水与经过处理后的木耳混匀，经微波2450MHz下处理5分钟。取出后加入300公斤的水，再次用微波2450MHz下处理5分钟。重复此操作2次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到500公斤，调节其pH值至4.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至60℃，加入纤维素酶(45万u/g)200克，开动搅拌器混匀后保持酶解0.5小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至90℃，保持2小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/2，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积1倍100％的乙醇，于3℃醇沉15小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例10取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用100公斤乙醇于100℃对粉碎后的原料处理2小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作1次。将500公斤的水与经过处理后的木耳混匀，经超声波27KHz下处理10分钟。取出后加入400公斤的水，再次用超声波27KHz下处理10分钟。重复此操作2次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到500公斤，调节其pH值至7.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至60℃，加入木瓜蛋白酶(100万u/g)200克，开动搅拌器混匀后保持酶解3小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至100℃，保持4小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后得到的清液通过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8人孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/2，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积5倍75％的乙醇，于5℃醇沉20小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例11取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用100公斤乙醇于100℃对粉碎后的原料处理1小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作1次。将500公斤的水与经过处理后的木耳混匀，经超声波27KHz下处理1分钟。取出后加入400公斤的水，再次用超声波27KHz下处理1分钟。重复此操作6次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到500公斤，调节其pH值至4.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至40℃，加入果胶酶(100万u/ml)200克和纤维素酶(45万u/g)100克，开动搅拌器混匀后保持酶解3小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至100℃，保持1小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/8，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积5倍75％的乙醇，于2℃醇沉20小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例12取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用50公斤乙醇于80℃对粉碎后的原料处理3小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作2次。将400公斤的水与经过处理后的木耳混匀，经超声波27KHz下处理10分钟。取出后加入200公斤的水，再次用超声波27KHz下处理10分钟。重复此操作4次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到500公斤，调节其pH值至5.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至55℃，加入果胶酶(100万u/ml)100克和木瓜蛋白酶(100万u/g)200克，开动搅拌器混匀后保持酶解2小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至80℃，保持3小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/5，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积4倍95％的乙醇，于4℃醇沉10小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例13
取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用20公斤乙醇于100℃对粉碎后的原料处理4小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作3次。将200公斤的水与经过处理后的木耳混匀，经超声波27KHz下处理15分钟。取出后加入100公斤的水，再次用超声波27KHz下处理15分钟。重复此操作6次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到500公斤，调节其pH值至7.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至60℃，加入纤维素酶(45万u/g)200克和木瓜蛋白酶(100万u/g)200克，开动搅拌器混匀后保持酶解0.5小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至70℃，保持4小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/8，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积5倍80％的乙醇，于2℃醇沉20小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例14取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质。将挑选后的干燥木耳10公斤进行粉碎，粒度控制在20目以下。然后用50公斤乙醇于70℃对粉碎后的原料处理4小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失。将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇。重复操作3次。将200公斤的水与经过处理后的木耳混匀，经超声波27KHz下处理5分钟。取出后加入100公斤的水，再次用超声波27KHz下处理5分钟。重复此操作3次。然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液。将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到500公斤，调节其pH值至5.0，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至50℃，加入果胶酶(100万u/ml)150克、纤维素酶(45万u/g)90克和木瓜蛋白酶(100万u/g)200克，开动搅拌器混匀后保持酶解1.5小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至90℃，保持1小时，然后将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提。提取液打入贮罐贮存待用。将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用。将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素。将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/8，得木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积4倍90％的乙醇，于4℃醇沉15小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
例15收集上述提取过程中产生的木耳滤渣10公斤，加入100公斤的水，用20％NaOH溶液调节酸碱度，使其初始pH值为7，再加入木耳滤渣，于70℃下碱解1小时。然后离心，分离出滤渣，收集上清液。重复此操作3次。将收集后得到的上清液合并，用1mol/LHCl调节其pH值至7，再将其减压浓缩至原体积的1/5，得碱性木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积3倍90％的乙醇，于3℃醇沉10小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得碱性木耳多糖纯品。
例16收集上述提取过程中产生的木耳滤渣10公斤，加入300公斤的水，用20％NaOH溶液调节酸碱度，使其初始pH值为12，再加入木耳滤渣，于95℃下碱解3小时。然后离心，分离出滤渣，收集上清液。重复此操作5次。将收集后得到的上清液合并，用1mol/LHCl调节其pH值至8，再将其减压浓缩至原体积的1/2，得碱性木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积5倍100％的乙醇，于5℃醇沉20小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得碱性木耳多糖纯品。
例17收集上述提取过程中产生的木耳滤渣10公斤，加入500公斤的水，用20％NaOH溶液调节酸碱度，使其初始pH值为7，再加入木耳滤渣，于50℃下碱解5小时。然后离心，分离出滤渣，收集上清液。重复此操作2次。将收集后得到的上清液合并，用1mol/LHCl调节其pH值至5，再将其减压浓缩至原体积的1/8，得碱性木耳多糖粗品。再将上述多糖粗品加入浓缩液体积1倍75％的乙醇，于2℃醇沉2小时。将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得碱性木耳多糖纯品。
权利要求
1.一种木耳多糖的提取方法，其特征在于①原料及处理取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质，将挑选后的干燥木耳进行粉碎，粒度控制在20目以下，用2～10倍乙醇于60～100℃对粉碎后的原料处理1～4小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失，将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇，重复操作1～3次，②提取木耳多糖a.预处理将20～50倍的水与处理后的木耳混匀，经微波2450MHz下处理1～15分钟，取出后加入原料干重10～40倍的水，再次用微波2450MHz下处理1～15分钟，重复此操作2～6次，然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液，b.酶解、提取将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到原料干重的50倍，调节其pH值至3～7.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至40～60℃，加入果胶酶(100万u/ml)0～2.0％、纤维素酶(45万u/g)0～2.0％和木瓜蛋白酶(100万u/g)0～2.0％(酶用量按原料干重计算)，开动搅拌器混匀后保持酶解0.5～3小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至70～100℃，保持1～4小时，c.粗滤及精滤将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提，提取液打入贮罐贮存待用，将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用，d.后处理将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用，将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素，e.提纯将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/8～1/2，得木耳多糖粗品，③纯化将上述多糖粗品加入浓缩液体积1～5倍75％～100％的乙醇，于2～5℃醇沉2～20小时，将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性，粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
2.一种木耳多糖的提取方法，其特征在于①原料及处理取干燥木耳，剔除发霉、变质等不合格木耳及木屑、砂石、头发等杂质，将挑选后的干燥木耳进行粉碎，粒度控制在20目以下，用2～10倍乙醇于60～100℃对粉碎后的原料处理1～4小时，保持过程中乙醇浓度，防止多糖损失，将乙醇处理后的原料抽滤晾干，除去残留乙醇，重复操作1～3次，②提取木耳多糖a.预处理将20～50倍的水与经过处理后的木耳混匀，经超声波27KHz下处理1～15分钟，取出后加入原料干重10～40倍的水，再次用超声波27KHz下处理1～15分钟，重复此操作2～6次，然后离心分离，分别收集上清液和滤渣，并合并滤液，b.酶解、提取将上述合并后的滤液加入适量的水，使混合液的重量达到原料干重的50倍，调节其pH值至3～7.5，然后将上述的滤渣或除醇后的原料加入混合液中，加热至40～60℃，加入果胶酶(100万u/ml)0～2.0％、纤维素酶(45万u/g)0～2.0％和木瓜蛋白酶(100万u/g)0～2.0％(酶用量按原料干重计算)，开动搅拌器混匀后保持酶解0.5～3小时，然后将原料渣及酶解液直接升温至70～100℃，保持1～4小时，c.粗滤及精滤将原料渣及提取液冷却至室温后，经筛网过滤，分离出的木耳渣用于二次酶解和水提，提取液打入贮罐贮存待用，将粗滤后的提取液经硅藻土过滤后打入贮罐贮存待用。d.后处理将酶解后的混合物抽滤，除去其中的不溶物质，收集废渣待进一步利用，将抽滤之后的滤液通过硅藻土过滤，然后将过滤后的清液过AB-8大孔吸附树脂柱，以进一步去除溶液中的色素，e.提纯将AB-8大孔吸附树脂柱处理后的提取液减压蒸馏、浓缩至原体积的1/8～1/2，得木耳多糖粗品，③纯化将上述多糖粗品加入浓缩液体积1～5倍75％～100％的乙醇，于2～5℃醇沉2～20小时，将醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性，粉碎干燥后多糖至200目以下，得木耳多糖纯品。
3.一种提取木耳下脚料中多糖的方法①原料收集上述提取过程中产生的木耳滤渣，称重备用，②碱解取滤渣重10～50倍的水，用20％NaOH溶液调节酸碱度，使其初始pH值为7～12，再加入木耳滤渣，于50～95℃下碱解1～5小时，然后离心，分离出滤渣，收集上清液，重复此操作2～5次，③提纯将收集后得到的上清液合并，用1mol/LHCl调节其pH值至5～8，再将其减压浓缩至原体积的1/8～1/2，得碱性木耳多糖粗品，④纯化将上述多糖粗品加入浓缩液体积1～5倍75％～100％的乙醇，于2～5℃醇沉2～20小时，醇沉后溶液进行过滤、干燥，温度低于60℃，防止多糖变性。粉碎干燥后多糖至200目以下，得碱性木耳多糖纯品。
全文摘要
一种木耳多糖的提取方法，它是以木耳为原料，采用醇提、微波或超声波处理，并结合复合酶法酶解，将木耳中的多糖物质充分溶解出来，提高了木耳多糖的得率，保持了多糖物质的生物活性，有利于人体的吸收。同时，利用木耳多糖加工过程中剩余的残渣提取碱性木耳多糖，最大限度地利用了原料、节约了资源，从而降低了成本。传统的提取方法多采用单纯酸法或碱法，容易破坏多糖的结构，影响多糖的吸收和利用。本发明的方法对多糖结构破坏小，多糖得率高，能最大程度地发挥出抗肿瘤、降血压、降血脂、降血糖等功效。
文档编号C08B37/00GK1580079SQ20041002059
公开日2005年2月16日 申请日期2004年5月21日 优先权日2004年5月21日
发明者朱蓓薇, 姜红, 张彧, 董秀萍, 李燕杰, 陈福存 申请人:大连轻工业学院