专利名称：一种富集纯化芦荟中芦荟多糖的方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种芦荟多糖的纯化方法，特别是涉及一种 利用高速逆流色谱分离法富集纯化芦荟中芦荟多糖的制备方法。
背景技术：
芦荟拉丁学名Aloe，别称卢会、讷会、象胆、奴会、劳伟；为百合科常绿、多肉质的 草本植物。叶簇生，呈座状或生于茎顶，叶常披针形或叶短宽，边缘有尖齿状刺。花序为伞 形、总状、穗状、圆锥形等，色呈红、黄或具赤色斑点，花瓣六片、雌蕊六枚。花被基部多连合 成筒状。主要成分含有芦荟大黄素(Aloeemodin)、芦荟大黄素甙(Aloin，Bartaloin)，芦 荟大黄素甙的异构体异芦荟大黄素甙(Isobartaloin)、高塔尔芦荟素(Homonataloin)、大 黄酚(Chrysophanol)、大黄酚葡萄糖甙(Chrysophanol glucoside)、蒽酚(Anthranol)等 蒽类及其甙类以及槲皮素(Quercetin)、莰非醇(Camherenol)、芦丁(Rutin)等黄酮类和 葡萄糖(Glucose)、甘露糖(mannose)、阿拉伯糖(Ala-binose)、鼠李糖(Iihamnose)、蔗糖 (Susrose)、木糖(Xylose)、果糖(Fructose)、葡萄糖醛酸(Glucuronic acid)等糖类物 质.亦含有精氨酸、天冬酰胺、谷氨酸等八种人体必需氨基酸以及胆固醇(Cholesterol)、 菜油甾醇(Campesterol)、谷甾醇(Sitoterol).芦荟多糖是一种对人类健康有显著保健作用的天然活性物质，可增强人体对疾病 的抵抗力，治愈皮肤炎、慢性肾炎、膀胱炎、支气管炎等慢性病症，并对人体的皮肤有良好的 营养、滋润、增白作用。这已经引起了医学界的极大重视，且其药效在理论和实际中都得到 了广泛验证。近年来，人们发现芦荟多糖是天然植物芦荟中最主要的成分之一，由于芦荟 易于栽种，来源方便广泛，从中提取芦荟多糖已取得了可喜进展。名称为“从芦荟提取芦荟 多糖的方法”的专利申请中便公开了将芦荟经水提醇沉得芦荟多糖的工艺流程。上述专利 文献中的芦荟多糖提取工艺主要是经过溶剂萃取，吸附树脂柱进行纯化等工艺步骤提取而 成，其分离效果远远不如高速逆流色谱分离法的分离效果。
发明内容
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种 利用高速逆流色谱分离法富集纯化芦荟中芦荟多糖的制备方法。为实现上述目的，本发明 采用的技术方案是一种利用高速逆流色谱分离法富集纯化芦荟中芦荟多糖的制备方法。其步骤如下(1)将芦荟鲜叶切成小块后用水提取，粗滤后离心，取上清液(2)在上清液中加入乙醇，析出粗芦荟多糖；(3)芦荟多糖的初步纯化将粗提物用高速逆流色谱分离法进行初步分离，收集 含芦荟多糖的组分，蒸干溶剂；(4)芦荟多糖的精制再将C3)所得组分用高速逆流色谱分离法制成高纯度95%
3以上的芦荟多糖纯品高速逆流色谱法对芦荟多糖进行初步纯化，可选用的溶剂体系主要有三个。均以 上相为固定相，下相为流动相。一号溶剂体系由三个组分构成，A组分可选用乙酸乙酯、乙 酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯等脂肪脂类。B组分可选用正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪 醇。C组分为水，优选乙酸乙酯-正丁醇-水体系。A、B、C体积比为0. 5-2 2-10 2-10. 二号溶剂体系由四个组分构成，A组分可选用乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯 等脂肪脂类。B、C组分可选用甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮、正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂 肪醇或脂肪酮。D组分为水，优选乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-水体系。A、B、C、D体积比为 0.5-5 10-100 0.5-5 10-100.三号溶剂体系由两个组分构成，A组分可选用正丁醇、 异丁醇、叔丁醇等脂肪醇。B组分为水，优选正丁醇-水体系。A、B体积比为1-100 1-100.高速逆流色谱分离法对芦荟多糖精制溶剂体系主要有三个。均以上相为固定相， 下相为流动相。一号溶剂体系由三个组分构成，A组分可选用氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤 代烃。B组分可选用甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮。C组分为水，优选氯仿-甲 醇-水体系。A、B、C体积比为2-15 2-25 1-15. 二号溶剂体系由四个组分构成，A组 分可选用氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃。B、C组分可选用甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙 酮、正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮。C组分为水，优选氯仿-异丙醇-甲醇-水 体系。A、B、C、D体积比为2-10 0.5-5 2-10 1-10.三号溶剂体系由五个组分构成， A、C组分可选用氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃。B、D组分可选用甲醇、乙醇、丙醇、异 丙醇、丙酮、正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮。E组分为水，优选二氯甲烷-异丙 醇-氯仿-甲醇-水体系。A、B、C、D、E 体积比为 0. 5-2 0.5-2 1-10 2-10 1-10.实验适用于室温为15_30°C下进行。用本法制备的芦荟多糖纯度可达到95%以上。本法适用于以各种含芦荟多糖的天 然植物，天然植物的提取物为原料制备高纯度的芦荟多糖。适用于采用各种型号的逆流色 谱仪分离制备芦荟多糖，用高速逆流色谱法制备芦荟多糖可连续、高效、快速的液液分配色 谱分离，具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点。
具体实施例方式实施例1 采用乙酸乙酯-正丁醇-水和氯仿-甲醇-异丙醇-水两溶剂体系制备纯度高于 95%的芦荟多糖使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，聚四氟乙 烯柱，柱的容积为MOml,8823A-UV紫外检测器^kogawa 3057便携式记录仪。进样前，先 用固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2. Oml/min的流速将流动相泵入柱内， 待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接收目标成分。芦 荟多糖的制备分两步进行(1)将体积比为1 2 3的乙酸乙酯-正丁醇-水混溶于分液 漏斗中，摇勻后静止分层。取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。 用1 1的上相和下相混合液20ml溶解取得的粗提取物IOOmg进行分离，收集含芦荟多糖 的组分，蒸干。(2)将体积比为5 6 0.5 4的氯仿-甲醇-异丙醇-水混溶于分液漏 斗中，摇勻后静止分层。取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用 1 1的上相和下相混合液2ml溶解(1)所得样品进行分离，收集含芦荟多糖的组分峰，冷冻干燥。得芦荟多糖固体，经HPLC分析，其纯度达到95. 4%。实施例2:采用乙酸乙酯-异丁醇-丙酮-水和氯仿-甲醇-水两溶剂体系制备纯度高于 95%的芦荟多糖使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，聚四氟乙 烯柱，柱的容积为MOml,8823A-UV紫外检测器^kogawa 3057便携式记录仪。进样前，先用 固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待 整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接收目标成分。芦荟 多糖的制备分两步进行(1)将体积比为5 40 1 60的乙酸乙酯-异丁醇-丙酮-水 混溶于分液漏斗中，摇勻后静止分层。取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相) 为流动相。用1 1的上相和下相混合液20ml溶解取得的粗提取物200mg进行分离，收集 含芦荟多糖的组分，蒸干。(2)将体积比为7 13 8的氯仿-甲醇-水混溶于分液漏斗 中，摇勻后静止分层。取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用 1 1的上相和下相混合液2ml溶解(1)所得样品进行分离，收集含芦荟多糖的组分峰，冷 冻干燥。得芦荟多糖固体，经HPLC分析，其纯度达到96. 0%。实施例3:采用正丁醇-水和二氯甲烷-异丙醇-氯仿-甲醇-水两溶剂体系制备纯度高于 95%的芦荟多糖使用半制备型高速逆流色谱仪，配有NS-1007泵，20ml进样阀，聚四氟乙 烯柱，柱的容积为MOml ,8823A-UV紫外检测器^kogawa 3057便携式记录仪。进样前，先用 固定相充满整个柱子，调整主机转速为800rpm，以2. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待 整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器紫外图谱，接收目标成分。芦荟 多糖的制备分两步进行(1)将体积比为45 53的正丁醇-水混溶于分液漏斗中，摇勻后 静止分层。取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用1 1的上 相和下相混合液20ml溶解取得的粗提取物150mg进行分离，收集含芦荟多糖的组分，蒸干。 O)将体积比为1 :1:4:7: 5的二氯甲烷-异丙醇-氯仿-甲醇-水混溶于分液漏 斗中，摇勻后静止分层。取其上层溶液(上相)为固定相，下层溶液(下相)为流动相。用 1 1的上相和下相混合液2ml溶解(1)所得样品进行分离，收集含芦荟多糖的组分峰，冷 冻干燥。得芦荟多糖固体，经HPLC分析，其纯度达到96. 5%。
权利要求
1.一种利用高速逆流色谱法富集纯化芦荟中芦荟多糖的方法，其特征在于，其步骤如下(1)将芦荟鲜叶切成小块后用水提取，粗滤后离心，取上清液。(2)在上清液中加入乙醇，析出粗芦荟多糖；(3)芦荟多糖的初步纯化将粗提物用高速逆流色谱分离法进行初步分离，收集含芦 荟多糖的组分，蒸干溶剂；(4)芦荟多糖的精制再将C3)所得组分用高速逆流色谱分离法制成高纯度95%以上 的芦荟多糖纯品。
2.根据权利要求1所述的利用高速逆流色谱分离法富集纯化芦荟中芦荟多糖的制备 方法其特质是高速逆流色谱法对芦荟多糖进行初步纯化，可选用的溶剂体系主要有三个。 均以上相为固定相，下相为流动相。一号溶剂体系由三个组分构成，A组分可选用乙酸乙酯、 乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯等脂肪脂类。B组分可选用正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂 肪醇。C组分为水，优选乙酸乙酯-正丁醇-水体系。A、B、C体积比为0.5-2 2-10 2-10. 二号溶剂体系由四个组分构成，A组分可选用乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸正丁酯 等脂肪脂类。B、C组分可选用甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮、正丁醇、异丁醇、叔丁醇等脂 肪醇或脂肪酮。D组分为水，优选乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-水体系。A、B、C、D体积比为 0.5-5 10-100 0.5-5 10-100.三号溶剂体系由两个组分构成，A组分可选用正丁醇、 异丁醇、叔丁醇等脂肪醇。B组分为水，优选正丁醇-水体系。A、B体积比为1-100 1-100。
3.根据权利要求1所述的利用高速逆流色谱分离法富集纯化芦荟中芦荟多糖的制备 方法其特质是用高速逆流色谱分离法对芦荟多糖进行初步纯化，高速逆流色谱分离法对芦荟多糖 精制溶剂体系主要有三个。均以上相为固定相，下相为流动相。一号溶剂体系由三个组 分构成，A组分可选用氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等卤代烃。B组分可选用甲醇、乙醇、丙 醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮。C组分为水，优选氯仿-甲醇-水体系。A、B、C体积比为 2-15 2-25 1-15. 二号溶剂体系由四个组分构成，A组分可选用氯仿、二氯甲烷、四氯 化碳等卤代烃。B、C组分可选用甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮、正丁醇、异丁醇、叔丁醇等 脂肪醇或脂肪酮。C组分为水，优选氯仿-异丙醇-甲醇-水体系。A、B、C、D体积比为 2-10 0.5-5 2-10 1-10.三号溶剂体系由五个组分构成，A、C组分可选用氯仿、二氯 甲烷、四氯化碳等卤代烃。B、D组分可选用甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮、正丁醇、异丁醇、 叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮。E组分为水，优选二氯甲烷-异丙醇-氯仿-甲醇-水体系。A、 B、C、D、E 体积比为 0. 5-2 0.5-2 1-10 2-10 I-IO0
全文摘要
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种芦荟多糖的纯化方法，特别是涉及一种利用高速逆流色谱分离法富集纯化芦荟中芦荟多糖的制备方法。其特点是采用高速逆流色谱分离法从天然植物芦荟浸提液经过两次纯化得到95％以上纯度的芦荟多糖。本法适用于以各种含芦荟多糖的天然植物，天然植物的提取物为原料制备高纯度的芦荟多糖。适用于采用各种型号的逆流色谱仪分离制备芦荟多糖，用高速逆流色谱法制备芦荟多糖可连续、高效、快速的液液分配色谱分离，具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点。
文档编号C08B37/00GK102101893SQ201010623139
公开日2011年6月22日 申请日期2010年12月20日 优先权日2010年12月20日
发明者姚德利, 姚德坤, 姚航, 郑君, 闫峰, 黄运生 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司