专利名称：一种石斛多糖的分离纯化方法
技术领域：
本发明涉及一种石斛多糖的分离纯化方法。
背景技术：
石斛属为兰科最大属之一，共有1500余种，广泛分布于亚洲、欧洲及大洋洲等热带及亚热带地区。我国约有80余种，主要分布于西南、华东及华南地区。在我国传统医学中，石斛属多种植物的新鲜或干燥茎被收做药用，统称石斛。铁皮石斛是我国传统的名贵中药材。现代中医理论认为，铁皮石斛具有健脾养胃、滋阴补肾、润肺生津等功效，用于治疗慢性萎缩性胃炎、高血压、糖尿病、抗肿瘤、抗衰老等。几十年来，中外学者对石斛的化学成分和药理作用进行了大量的研究，发现石斛的化学成分多种多样，其主要有效成分为石斛类多糖、生物碱等。随着人们对多糖功效的认识增多，已有人发现铁皮石斛多糖具有较强的抗肿瘤、抗氧化等生物活性。关于石斛多糖提取的专利报道近年来主要有程翼宇“ 一种金钗石斛多糖提取物的制备方法及其用途”(申请号20081016M96.7)、“ 一种金钗石斛多糖提取物的制备和应用”(申请号20081016M93. 3)，石秀伟“一种铁皮石斛多糖提取物、其药物组合物和其制备方法及其应用”(申请号200610145677. X)，俞巧仙“一种铁皮石斛多糖含片及其制备方法”(申请号200910101997. 9)，邓媛元“一种降糖活性石斛多糖及其提取方法”(申请号 201010295717. 5)，蒋来高“运用生物工程酶技术提取石斛多糖的工艺及其制品和应用”(申请号200810201683. 1)。这些专利报道极大的丰富了石斛多糖提取纯化手段，但在提取效率、保持多糖活性方面仍有所欠缺。大部分专利中的多糖提取方法，只包括几项常规步骤 脱脂、水提、醇沉、除蛋白、干燥；缺乏创新，且提取所得的多糖含量大多为20%-25%。
发明内容
本发明的目的在于提供一种石斛多糖的分离纯化制备方法，该方法缩短提取时间、减少能耗、有效保存石斛多糖生物活性。本发明是这样实现的，一种石斛多糖的分离纯化制备方法，其工艺步骤如下
1、原料以铁皮石斛为原料；
2、粉碎用粉碎机将铁皮石斛粉碎；
3、过筛粉碎后的原料进行分级过筛40-80目；
4、脱脂将石斛粗粉用10-30倍有机溶剂回流1-4次，获得药渣；
5、微波辅助溶剂萃取采用微波提取主要使原料细胞内温度迅速上升，细胞内液水份汽化产生的压力使细胞膜和细胞壁急剧破碎，形成微小的孔洞，使可溶性物质快速溶出，微波辅助溶剂萃取最佳工艺条件为微波时间75秒，微波强度800W，加入15倍质量的蒸馏水；
6、酶提在混合液中加入m的纤维素酶，调节溶液pH至6.0，并将水温恒定在40°C，酶解时间为2小时；7、水提酶解后，过滤，向滤渣中加入20-30倍蒸馏水进行水提；
8、抽滤将上述水提液进行抽滤，合并滤液；
9、真空浓缩将所得滤液进行真空浓缩，浓缩至原有体积的1/6；
10、醇沉向浓缩液中缓缓加入无水乙醇，边搅拌，边加入，调节其乙醇浓度，使整个溶液乙醇浓度达到80%左右，温度10°C左右，静止过夜；
11、离心分离醇沉过夜后进行离心，得到沉淀；
12、冷冻干燥将所得到的沉淀进行冷冻干燥，冷冻干燥条件为-80°C预冻^ir 后，-80°C真空冷冻干燥6小时，得多糖粗品；
13、除蛋白取上述多糖提取粗品，溶于水中，加入体积比5:1的氯仿正丁醇，搅拌后分层，上层重复操作4-8次后，加入乙醇，冰浴放置12小时以上，过滤，沉淀冷冻干燥后得多糖提取物。本申请人同时采用了背景技术提及的一些现有方法和本发明方法对铁皮石斛多糖进行提取，提取结果见表1。表1其他专利方法与本专利方法提取得率比较(n=3) _提取方法__得率
一神金衩石斛多糖提取物的制备方法及其用途
权利要求
1.一种石斛多糖的分离纯化方法，以铁皮石斛药材为原料，其特征在于步骤如下(1)将铁皮石斛原料粉碎后过筛得到40-80目石斛粗粉；(2)将石斛粗粉用10-30倍有机溶剂回流1-4次，合并药渣；(3)上述药渣按固液重量比例1:15加水后进行微波辅助萃取30-80秒得到萃取液，微波强度800W ；(4)上述萃取液中按体积重量加入m的纤维素酶进行酶解，调节萃取溶液pH至6.0， 并将水温恒定在40°C，酶解时间为2小时；(5)酶解后过滤，向滤渣中按重量加入20-30倍蒸馏水进行水提1-2次；水提液抽滤， 收集滤液，即得提取液；(6)将上述提取液进行真空浓缩，浓缩至原有体积的1/6，得到浓缩液；(7)向上述浓缩液中加入浓度95%的无水乙醇进行沉淀，至乙醇浓度达到80%，在温度 9-10°C下醇沉过夜；(8)将上述乙醇沉淀液进行离心分离和冷冻干燥，得到多糖粗品；冷冻干燥条件为-80°C预冻8hr后，_80°C真空冷冻干燥6小时；(9)取上述多糖粗品，溶解于适量蒸馏水中，再加入体积比5:1的氯仿正丁醇混合液中，搅拌混合后分层脱蛋白，收集上层液；重复操作4-8次后，合并上层液，加入乙醇，冰浴放置至少12小时后过滤，将滤液沉淀、冷冻和干燥后得石斛多糖提取物。
2.如权利要求1所述的一种石斛多糖的分离纯化制备方法，其特征是步骤(2)选用的有机溶剂为石油醚、乙酸乙酯、乙醇或高浓度乙醇水溶液中的一种。
3.如权利要求1所述的一种石斛多糖的分离纯化制备方法，其特征是步骤(7)中缓缓加入无水乙醇，边搅拌，边加入，调节其乙醇浓度，使整个溶液乙醇浓度达到80%左右，在温度10°C左右，静置过夜。
全文摘要
一种石斛多糖的分离纯化方法，其工艺步骤是原料→粉碎→过筛→脱脂→微波辅助溶剂萃取→酶提→过滤→水提→抽滤→真空浓缩→醇沉→离心分离→冷冻干燥→粗品→除蛋白→冷冻干燥→石斛多糖，本发明的技术效果是提高了石斛多糖提取率，缩短提取时间、减少能耗、有效保存石斛多糖生物活性。
文档编号C08B37/00GK102504041SQ20111036532
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月17日 优先权日2011年11月17日
发明者崔武卫, 田芳, 聂少平, 谢明勇, 黄晓君 申请人:云南金九地生物科技有限公司