专利名称：一种玫瑰花粗多糖的提取方法
技术领域：
本发明涉及天然产物有效成分的提取分离方法，特别涉及一种玫瑰花粗多糖的提取方法。背景技术：
多糖又称多聚糖(polysaccharide)，由单糖聚合而成的极性大分子，分子量为数万至数百万。多糖是一类重要的生物活性物质，是自然界中储量丰富的生物聚合物，主要包括植物多糖、动物多糖以及微生物多糖3类。由于多糖有多种多样的生物活性功能，以及在功能食品和临床上的广泛使用，多糖的研究成为近年来的热点。到目前为止，已有三百多种多糖类化合物从天然产物中分离出来，其中从植物中提取的水溶性多糖最为重要。从植物中提取的多糖具有非常重要与特殊的生理活性，具有如免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗辐射、抗病毒、抗炎、抗疲劳、抗衰老等生物活性功能。目前人们已成功地将从近百种植物中提取出的多糖广泛地应用于保健食品和医药的研究与开发。玫瑰，别名徘徊花，原产中国，现朝鲜、日本、欧洲均有种植。玫瑰是集食用、美化、 绿化、药用于一体的木本植物，近年国内外市场急需玫瑰产品，拉动玫瑰价格逐年上升。据有关专家介绍，相比之下，玫瑰花的药用价值更高，它具有醒郁解脾，通经活血、美容美颜等功效。国内外医药专家研究表明，玫瑰花对治疗心脑血管疾病有特效，其药用价值已引起国内外医药专家的普遍重视。值得注意的是，我国从玫瑰花中提炼的玫瑰油已畅销国内外市场，其价值是黄金的广2倍，国际市场频频要货，供不应求；加工制作的玫瑰花茶不但在国内畅销，还是日本、韩国、东南亚等地市场的抢手俏货，其价格是普通花茶的纩3倍。目前玫瑰花经过提取玫瑰花精油后，即被弃掉，然而，研究表明提取玫瑰花精油后的废渣中含有多种营养成分，如糖含量高达29. 5%，且维生素、矿物质等含量丰富，玫瑰花花渣中还含有全面的氨基酸组分，参见尉芹等，玫瑰花渣化学成分与营养成分的研究[J]，西北林学院学报， 2005,20 (3):140 141。因此玫瑰花渣是一种营养成分十分丰富的天然原料，值得进一步开发利用。尚未发现关于从提取玫瑰花精油后的玫瑰花渣提取多糖的技术公开。
发明内容
本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种步骤简单、产品质量好的玫瑰花粗多糖的提取方法。本发明是通过如下技术方案实现的
一种玫瑰花粗多糖的提取方法，以玫瑰花渣为原料，主要包括如下步骤
(1)将玫瑰花渣粉碎，用蒸馏水浸泡101 后取出，用丙酮洗涤，得到预处理好的玫瑰花渣；
(2)将预处理好的玫瑰花渣和水按1:2纩30的质量比混合，在8(T10(TC水浴中回流浸提3、小时，过滤，滤液保留，将滤渣和水按1:2纩30的质量比混合再次浸提H证，过滤， 合并两次的滤液，将滤液置于旋转蒸发仪上浓缩，取上清液；
(3)往上清液中加入95%的乙醇，至稀释至乙醇浓度为65 80%，在4°C下静置2014小时，沉淀、离心得到玫瑰花粗多糖，将得到的玫瑰花粗多糖溶于水，加入三氯甲烷和正丁醇，充分震荡，静置后离心，取上清液，再次加入三氯甲烷和正丁醇，充分震荡，静置后离心，反复操作直到无沉淀为止，离心得到的上清液置于旋转蒸发仪上浓缩，取上清液；
(4)往浓缩上清液中加入95%的乙醇，使溶液中乙醇含量达到65、0%，沉淀出玫瑰花粗多糖，将玫瑰花粗多糖加水复溶，再加入95%的乙醇醇沉，如此反复水溶醇沉2 3次，离心；
(5)将离心得到的玫瑰花粗多糖冷冻干燥，即得到产品。本发明以玫瑰花渣为原料，先采用热水浸提，再用水提醇沉法，得到玫瑰花粗多糖。热水浸提后，得到的提取液浓缩后，加95%乙醇进行醇沉，使乙醇的终浓度为65% 80%， 离心，得到沉淀，脱除蛋白后的多糖复溶后，用95%乙醇反复醇沉数次，然后冷冻干燥，得到玫瑰花粗多糖，得率达到2. 13%。本发明的更优方案为
步骤(1)中，浸泡过的玫瑰花渣用同体积的丙酮洗涤2 3次，弃去滤液，得到预处理好的玫瑰花渣。步骤(2)和(3)中，旋转蒸发仪浓缩时的温度为6(T65°C，均浓缩至原来体积的 1/3。步骤(3)中，将玫瑰花粗多糖溶液震荡离心时，加入占玫瑰花粗多糖溶液体积20% 的三氯甲烷和4%的正丁醇。步骤(5)中，冷冻干燥在真空条件下进行，真空度为1. 3MPa，温度为4 6°C。本发明提取的玫瑰花粗多糖按苯酚-硫酸法进行检测，先绘制葡萄糖标准曲线， 再根据测得的样品吸光度值计算粗多糖中多糖的含量。本发明的技术特点及优良效果为
(1)以提取玫瑰花精油后的玫瑰花渣为原料提取玫瑰花多糖；
(2)使用丙酮脱除玫瑰花多糖中多酚类物质，同时可以脱除部分色素；
(3)在每次醇沉后加入脱蛋白试剂三氯甲烷和正丁醇组合，利用蛋白质在三氯甲烷等有机溶剂中变性的特点，将提取液与脱蛋白试剂混合，震荡，离心，变性后的蛋白质集中在提取液与脱蛋白试剂交界处，此法的优点是条件温和，不会引起多糖的变性；
(4)采用真空冷冻干燥，在低温、低压下进行，而且水分直接升华，使得产品具有许多特殊的性能，如性质稳定便于长时间贮存，组织结构和外观形态较好，复水性好等。本发明提高了玫瑰花的综合利用价值，产品性质稳定，便于长时间贮存，组织结构和外观形态较好，复水性好，保存了原料中的活性物质。
下面结合附图对本发明作进一步的说明。图1为本发明产品苯酚-硫酸法检测的标准葡萄糖曲线图； 图2为本发明产品的紫外吸收光谱图3为本发明产品的红外吸收光谱图。
具体实施方式
实施例1
(1)原料的预处理
将玫瑰花渣粉碎，称重25g，后先用水浸泡12小时后过滤，弃去滤液，以除去低聚糖；预处理时保持PH为原液pH，约为6. 4。
(2)丙酮洗涤原料将浸泡好的玫瑰花花渣加入同体积(w/v)的丙酮溶液，反复洗涤3次，过滤，弃去滤液，以除去部分色素以及其中的多酚类物质。(3)玫瑰花粗多糖的提取将上述洗涤后的玫瑰花花渣按照1 :30 (w/w)料水比加入750g的水中，在90°C水浴中热水回流浸提4小时。(4) 二次浸提第一次浸提结束后，过滤，得到滤液保留，将滤渣再加入750g的水浸提2小时。浸提结束后，合并两次的滤液。(5)浓缩将两次浸提得到的滤液在旋转蒸发仪上进行浓缩至原体积的1/3。(6)醇沉将浓缩好的滤液中加入95%的乙醇，使乙醇的终浓度达到65、0%，然后在4°C的冰箱中静置M小时，离心得到玫瑰花粗多糖。(7)脱除游离蛋白将玫瑰花粗多糖溶于水，按照体积加入20%的三氯甲烷和4%的正丁醇，充分震荡，静置后离心，弃去沉淀，反复数次，直到无沉淀为止，离心，得到二次上清液。(8)醇沉上清液使用旋转蒸发仪浓缩后，加入95%的乙醇，使溶液中乙醇含量达到65 80%，沉淀出多糖，沉淀得到的多糖加水复溶，再加入95%的乙醇醇沉，如此水溶醇沉进行3次。(9)真空冷冻干燥离心得到的玫瑰花粗多糖冷冻干燥得到成品。冷冻干燥的温度控制在4 6°C，真空度为1. 3 MPa0实施例2
所提取的玫瑰花粗多糖中多糖的含量按苯酚-硫酸法进行检测曲线如图1。玫瑰多糖样品在琼脂糖凝胶电泳中为一条带，表明玫瑰多糖是较为均勻的一种酸性多糖。所得玫瑰花粗多糖的紫外吸收光谱图如图2所示。用紫外可见分光光度计检测， 玫瑰多糖样品在220 nm附近有最大吸收峰，同时，在270490 mn之间也存在蛋白质、核酸的吸收峰，说明样品中存在蛋白质、色素或核酸等物质，是一种结合色素的糖蛋白复合物。所得玫瑰花粗多糖的红外吸收光谱图如图3所示。玫瑰多糖样品的红外光谱表明，玫瑰多糖具有典型的多糖特征吸收峰(2937. 59，1747. 51，1624. 06，1444. 68，1238. 30， 1103. 28,507. 91 cnT1)。其中，2937.59 cnT1处的吸收峰与C-H的伸缩振动相对应；1636CHT1 处的吸收峰为-CHO的C=O伸缩振动或N-H的变角振动；1444. 68和1238. 30 cnT1处为C-O 伸缩振动和O-H变角振动吸收峰；1103. ^cnT1处出峰则是C-O伸缩振动的特征；1250 950 cm-1之间存在吸收峰，表明糖链构型为吡喃型。
权利要求
1.一种玫瑰花粗多糖的提取方法，以玫瑰花渣为原料，其特征为，主要包括如下步骤(1)将玫瑰花渣粉碎，用蒸馏水浸泡101 后取出，用丙酮洗涤，得到预处理好的玫瑰花渣；(2)将预处理好的玫瑰花渣和水按1:2纩30的质量比混合，在8(T10(TC水浴中回流浸提3、小时，过滤，滤液保留，将滤渣和水按1:2纩30的质量比混合再次浸提H证，过滤， 合并两次的滤液，将滤液置于旋转蒸发仪上浓缩，取上清液；(3)往上清液中加入95%的乙醇，至稀释至乙醇浓度为65 80%，在4°C下静置2(Γ24小时，沉淀、离心得到玫瑰花粗多糖，将得到的玫瑰花粗多糖溶于水，加入三氯甲烷和正丁醇， 充分震荡，静置后离心，取上清液，再次加入三氯甲烷和正丁醇，充分震荡，静置后离心，反复操作直到无沉淀为止，离心得到的上清液置于旋转蒸发仪上浓缩，取上清液；(4)往浓缩上清液中加入95%的乙醇，使溶液中乙醇含量达到65、0%，沉淀出玫瑰花粗多糖，将玫瑰花粗多糖加水复溶，再加入95%的乙醇醇沉，如此反复水溶醇沉2 3次，离心；(5)将离心得到的玫瑰花粗多糖冷冻干燥，即得到产品。
2.根据权利要求1所述的玫瑰花粗多糖的提取方法，其特征在于步骤(1)中，浸泡过的玫瑰花渣用同体积的丙酮洗涤2 3次，弃去滤液，得到预处理好的玫瑰花渣。
3.根据权利要求1所述的玫瑰花粗多糖的提取方法，其特征在于步骤(2)和(3)中， 旋转蒸发仪浓缩时的温度为6(T65°C，均浓缩至原来体积的1/3。
4.根据权利要求1所述的玫瑰花粗多糖的提取方法，其特征在于步骤(3)中，将玫瑰花粗多糖溶液震荡离心时，加入占玫瑰花粗多糖溶液体积20%的三氯甲烷和4%的正丁醇。
5.根据权利要求1所述的玫瑰花粗多糖的提取方法，其特征在于步骤(5)中，冷冻干燥在真空条件下进行，真空度为1. 3MPa，温度为Γ6 。
全文摘要
本发明涉及天然产物有效成分的提取分离方法，特别公开了一种玫瑰花粗多糖的提取方法。本发明以玫瑰花渣为原料，先采用热水浸提，再用水提醇沉法，得到玫瑰花粗多糖。热水浸提后，得到的提取液浓缩后，加95%乙醇进行醇沉，使乙醇的终浓度为65%～80%，离心，得到沉淀，脱除蛋白后的多糖复溶后，用95%乙醇反复醇沉数次，然后冷冻干燥，得到玫瑰花粗多糖。本发明提高了玫瑰花的综合利用价值，产品性质稳定，便于长时间贮存，组织结构和外观形态较好，复水性好，保存了原料中的活性物质。
文档编号C08B37/00GK102417546SQ20111038582
公开日2012年4月18日 申请日期2011年11月29日 优先权日2011年11月29日
发明者崔波, 檀琮萍 申请人:山东轻工业学院