利用动物肺提取肝素钠粗品的制备工艺的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种利用猪牛肺提取肝素钠粗品的制备工艺。步骤如下：将动物肺均化成浆液—浆液保温酶解—酶解液过滤收集滤液—对滤液进行离子交换吸附处理—树脂的洗涤与洗脱—澄清过滤—干燥，得肝素钠粗品。本发明在提取方法上，采用酶解、树脂提纯，与传统的盐解法相比，产品效价能提高18％-23％，产率提高14％以上；原料上采用价格低廉且易得的猪、牛肺，可以使成本得以大大地降低，适合规模生产；而且与盐解法相比，减少了环境污染。
【专利说明】利用动物肺提取肝素钠粗品的制备工艺
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，具体地说涉及一种利用动物脏器提取肝素钠的制备工艺。
【背景技术】
[0002]肝素钠是一种具有抗凝血功效，防止肿瘤病转移和扩散的贵重药品。在临床上用于治疗肾脏病形成的尿毒以及配合治疗暴发性流脑败血症，肾炎等。同时，肝素钠在降血脂和免疫等方面也有较好的作用，而且随着对其逐渐深入了解，其医疗用途日益扩大，市场供不应求。目前，我国通常利用猪小肠，提取新鲜肠黏膜液，运用传统的盐解工艺生产肝素钠，这种制备方法由于原材料匮乏和技术上的局限，很难进行规模性生产；在生产过程中环境污染严重；而且生产成本高，产品产率低，效价低，成本低，不可能满足市场的大量需求。
【发明内容】
[0003]本发明是这样实现的:一种利用动物肺提取肝素钠粗品的制备工艺，其特征在于:动物肺均化成浆液-浆液保温酶解-酶解液过滤、收集滤液-对滤液进行离子交换吸附处理-树脂的洗涤与洗脱-澄清过滤-干燥得肝素钠粗品。
[0004]所述的动物肺均化成浆液是指清洗好的动物肺绞碎磨成浆状物，而后在充分搅拌下加入水混匀得浆液，水的加入量以浆状物的1-1.3倍为最佳。
[0005]所述浆液保温酶解是指调整浆液的PH值为9-11时，加入胃酶或胰酶酶解剂，搅拌，升温至35°C -43°C，继续搅拌，并保持浆液的PH值7.5_9，温度37°C -40°C下酶解
3.0-5.0小时；然后升温至45°C -52°C，保持浆液PH值7.5_9，补加少量酶解剂，继续酶解
4.5-5.5小时得酶解液。在整个保温酶解过程中，对浆液PH值得调整采用稀碱液如氢氧化钠进行调整；酶解剂采用猪胰浆，其加入量按照浆液重量的1-1.5%为宜，补加量按照浆液重量的0.3-0.6%为宜。
[0006]所述的酶解液过滤收集滤液是指调整酶解液的PH值为5.0-5.5，升温至750C -80°C，搅拌加入氯化钠混匀，再升温至80°C -95°C，保温1_2小时，停止搅拌，趋热过滤，收集滤液；待滤液冷却至40°C -45°C，调整滤液的PH值的10-11，再次过滤，收集滤液并调整其PH值为8-8.5，待用。在本步骤中对酶解液与滤液的酸碱度的调整采用稀酸和稀碱如稀盐酸和稀氢氧化钠溶液；氯化钠的加入量按照酶解液重量的4.5-5%加入为宜；趋热过滤采用60目孔径的尼龙网布；再次过滤采用80目孔径的尼龙网布。
[0007]所述离子交换吸附处理是指冷却上述滤液，去除油脂薄片层，然后升温至450C -50°C，搅拌状态下加入肝素吸附专用树脂，用以吸附滤液中的有效成分，经搅拌吸附后，静置过滤；新树脂的用量一般为滤液3.5-4%，搅拌吸附处理7-8小时。
[0008]所述树脂的洗涤与洗脱是指用水漂洗应经吸附有效肝素成分的肝素吸附专用树月旨，滤干；再用树脂体积0.8-0.85的倍盐度为4.5-5玻美度氯化钠溶液洗涤，滤干；继续用树脂体积0.5-0.6倍盐度为23-24玻美度氯化钠溶液，并加入氯化钠，加入量与树枝量比为0.8-1:7.5 ;然后对洗涤好的肝素吸附专用树脂采用氯化钠溶液作为洗脱液进行洗脱操作；洗脱结束后，滤干树脂，将洗脱液予以合并，并用80目孔径尼龙网布过滤，收集洗脱液。
[0009]所述洗脱操作是指洗脱液盐度为18-20玻美度，温度为30-35°C时，第一次用树脂体积的0.8-0.85倍的洗脱液洗脱3-3.5小时，第二次用树脂体积的0.5-0.6倍的洗脱液洗脱3-3.5小时。
[0010]所述的澄清过滤是指调整洗脱液的PH值为11-12，搅拌均匀后，静置澄清，取出上层清液，对下部沉淀进行抽滤，合并清液与滤液，调节PH值为5-5.5，加入3-3.5倍的80-85%乙醇澄清剂，静置至上层液澄清为止；抽吸出上层清液，收集沉淀物并抽滤至干。
[0011]所述干燥是指将抽滤至干的肝素钠沉淀物置于布氏漏斗中抽干，然后放入干燥器内，定时置换干燥剂如五氧化二磷不再吸水为止，捣碎成颗粒状，即得肝素钠粗品。
[0012]已知动物器脏中含的肝素是由己醛酸，艾杜糖醛酸，葡萄糖醛酸与含磺酸的己胺糖的基因交替组织成的多粘糖，可以认为是多聚体类似物和多聚体同系物的混合物，分子量通常在6000-20000，在一定条件下可通过酶解成负离子，再用阴离子树脂提取，因此本发明在提取方法上，采用酶解、树脂提纯，实践证明本发明生产的肝素钠色泽较白，收率稳定，平均每个猪牛肺可提取0.8-1.2g肝素钠，产品质量也好，平均效价均在90-120之间，与传统的盐解法相比，产品效价能提高15% _20%，产率提高10%以上；本发明在原料上采用价格低廉且易得的猪、牛肺，可以使成本得以大大地降低，适合规模生产；本发明制备过程中，无有毒有害气体产生，虽然少量废渣及少量酸碱洗水产生，但废渣经干燥后，可加工成饲料出售，酸碱废水可以中和后再排放，与盐解法相比，减少了环境污染。
具体实施例
[0013]下面结合实施例对本发明作进一步说明:
[0014]实施例1:`
[0015]首先将1000g新鲜猪肺用清水仔细清洗，除去内外污物和外部皮质脂肪后，将其绞碎在磨成浆状物，而后再充分搅拌下加入1000g水混匀得浆液。
[0016]浆液在充分搅拌下，用稀氢氧化钠溶液精细调节其PH值为10时，加入猪胰浆20g，搅拌均匀后，缓慢升温至40°C，继续搅拌，并保持浆液的PH值8-8.5，温度35 V _42°C下酶解4小时；然后升温至47°C -50°C，保持浆液PH值8-8.5，补加IOg猪胰浆，继续酶解5小时得酶解液。在整个保温酶解过程中，如酶解液的PH值复查有所下降时，就应及时用稀氢氧化钠仔细地调整。
[0017]上述保温酶解过程完毕后，用稀盐酸调整其PH值5-6.0，然后升温至80°C，在充分搅拌下，加入100g氯化钠，使之混合均匀后，再升温到90°C，保温I小时，停止搅拌，用60目孔径的尼龙网布趋热过滤，除去杂质，收集滤液；待滤液冷却至40°C，用稀氢氧化钠调整其PH值11，用80目孔径的尼龙网布精细过滤除去残渣收集滤液，用稀盐酸将滤液回调其PH值8-8.5范围内。
[0018]冷却上述滤液，仔细捞除浮于液面的油脂薄片层，然后控制升温到45°C，停止加热，在搅拌状态下加入80g肝素吸附专用树脂，用以吸附滤液中的有效成分，经搅拌吸附处理8小时后，静置过滤。
[0019]经离子交换吸附处理后的肝素吸附专用树脂用水漂洗，滤干；再用70g4.5-5玻美度氯化钠洗涤一次，滤干；继续用240g23-24玻美度氯化钠溶液,并加入14g氯化钠；然后对洗涤好的肝素吸附专用树脂采用氯化钠浓溶液作为洗脱液进行洗脱操作，洗脱液盐度为18-20玻美度，温度为30-35°C，第一次用1500g洗脱液洗脱3.5小时，第二次用1200g洗脱液洗脱3小时；洗脱结束后，滤干树脂，将滤液予以合并，并用80目孔径尼龙网布过滤，收集洗脱液。
[0020]调整上述洗脱液的PH值为11-12，搅拌均匀后，静置澄清，仔细抽吸出上层清液，对下部沉淀尽量抽滤至干，合并清澈与滤液，调节PH值为5-5.5，加入3600g80% -85%乙醇，静置至上层液澄清为止；抽吸出上层清液，收集沉淀物并抽滤至干。
[0021]将抽滤至干的肝素钠沉淀物置于布氏漏斗中抽干，然后放入五氧化二磷干燥器内，定时置换干燥剂至五氧化二磷不再吸水为止，捣碎成颗粒状，即得肝素钠粗品。
[0022]实施例2:
[0023]称取猪肺lOOOg，水3000g，氢氧化钠30g，猪胰浆17g，氯化钠350g，盐酸15g，肝素专用吸附树脂93g，乙醇3000g，参照实施例1所述的步骤制备肝素钠粗品2.0g,其效价每豪克90单位。
[0024]实施例3:
[0025]称取牛肺lOOOg，水3000g，氢氧化钠40g，猪胰浆30g，氯化钠410g，盐酸10g，肝素专用吸附树脂80g，乙醇3600g，参照实施例1所述的步骤制备肝素钠粗品2.4g，其效价每豪克107单位。
[0026]在上述实施例中，肝素专用吸附树脂均采用杭州塘栖镇争光生物制品有限公司生产的争光牌肝素吸附专用树脂`。
【权利要求】
1.一种利用动物肺提取肝素钠粗品的制备工艺，其特征在于:动物肺均化成浆液-浆液保温酶解-酶解液过滤、收集滤液-对滤液进行离子交换吸附处理-树脂的洗涤与洗脱-澄清过滤-干燥得肝素钠粗品。
2.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于:所述的动物肺均化成浆液，是指将清洗好的动物肺绞碎磨成浆状物，尔后在充分搅拌下加入水混匀得浆液，水的加入量以浆状物的1-1.5倍为最佳。
3.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于:所述浆液保温酶解，是指调整浆液的PH值为9-11时，加入胃酶或胰酶酶解剂，搅拌，升温至35 V -43 V，继续搅拌，并保持浆液的PH值为7.5-9，温度为35°C _42°C下酶解30_5小时；然后升温至45°C _52°C，保持浆液PH值7.5-9，补加少量酶解剂，继续酶解4.5-5.5小时得酶解液；在整个保温酶解过程中，对浆液PH值的调节采用稀碱液如氢氧化钠进行调节；酶解剂采用猪胰浆，其加入量按照浆液重量的1-1.5%为宜，补加量按照浆液重量的0.3-0.6%为宜。
4.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于:所述的酶解液过滤、收集滤液，是指调整酶解液的PH值为5.0-5.5，升温至75°C -80°C,80°C _95°C搅拌加入氯化钠混匀，再升温至90°C -95°C，保温1-2.5小时，停止搅拌，趋热过滤，收集滤液并调整其PH值为7.5-8.5，待用。
5.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于:在酶解液过滤收集滤液步骤中对酶解液与滤液的酸碱度的调整采用稀酸和稀碱如稀盐酸和稀氢氧化钠溶液；氯化钠的加入量按照酶解液重量的4-5.5%加入为宜；趋热过滤采用60目孔径的尼龙网布；再次过滤采用80目孔径的尼龙网布。
6.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于:所述离子交换吸附处理是指冷却上述滤液，去除油脂薄片层，然后升温至40°C _55°C，搅拌状态下加入肝素吸附专用树脂，用以吸附滤液中的有效成分，经搅拌吸附后，静置过滤；新树脂的用量一般为滤液3.5-4%,搅拌吸附处理7-8小时。
7.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于:所述树脂的洗涤与洗脱是指用水漂洗应经吸附有效肝素成分的肝素吸附专用树脂，滤干；继续用树脂体积0.5-0.6倍盐度为22-24玻美度氯化钠溶液，并加入氯化钠，加入量与树枝量比为0.8-1:8.0 ;然后对洗涤好的肝素吸附专用树脂采用氯化钠溶液作为洗脱液进行洗脱操作；洗脱结束后，滤干树脂，将洗脱液予以合并，并用80目孔径尼龙网布过滤，收集洗脱液。
8.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于:所述洗脱操作是指洗脱液浓度为17-20玻美度，温度为30°C -36°C时，第一次用树脂体积的0.8-0.85倍的洗脱液洗脱3-3.5小时，第二次用树脂体积的0.5-0.6倍的洗脱液洗脱3-3.5小时。
9.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于:所述的澄清过滤是指调整洗脱液的PH值为10.5-12，搅拌均匀后，静置澄清，取出上层清液，对下部沉淀进行抽滤，合并清液与滤液，调节PH值为5-6.5，加入3-3.5倍的80-88%乙醇澄清剂，静置至上层液澄清为止；抽吸出上层清液，收集沉淀物并抽滤至干。
10.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于:所述干燥是指将抽滤至干的肝素钠沉淀物置于布氏漏斗中抽干，然后放入干燥器内，定时置换干燥剂如五氧化二磷不再吸水为止，捣碎成颗粒状，即得肝素钠粗品。
【文档编号】C08B37/10GK103755836SQ201310632474
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2013年11月25日 优先权日:2013年11月25日
【发明者】刘乃山, 尚明彩, 迟培升, 夏衬来 申请人:青岛九龙生物医药有限公司