提高硫酸软骨素含量的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种提高硫酸软骨素含量的制备方法，将经过碱提、酶解氧化得到的硫酸软骨素溶液，调节PH5.5-6.5，温度控制在15-25℃，缓慢的加入到搅拌中的90％的乙醇中，整个沉淀过程中乙醇的浓度始终保持在75％及其以上。经此方法沉淀得到的硫酸软骨素质地疏松，颗粒细小，容易脱水和烘干，不需要粉碎，具有节约能源、节约生产成本的优点。多得产品色泽好，质量稳定，硫酸软骨素含量在98.5％以上。
【专利说明】提高硫酸软骨素含量的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生化制药领域，特别是直接从动物软骨中提取的对心脑血管病等有良好的效果的硫酸软骨素钠的生产工艺的改进。
【背景技术】
[0002]硫酸软骨素钠，英文名Chondroitin sulfate sodium,是动物软骨中提取的酸性粘多糖，多存在于动物的软骨、喉骨、鼻骨(41%)、牛、马中膈和气管中，其分子结构为β -D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通过β I — 3糖苷键形成的重复二糖单位所组成的多糖链。
[0003]硫酸软骨素钠主要用于治疗风湿和类风湿疾病的药物，还具有抗凝、抗癌、抗血栓、降血脂等作用，可用于治疗头痛、偏头痛、冠心病、心绞痛等症状。在国外，对硫酸软骨素钠药理的研究已经达到分子水平。
[0004]目前国内提取硫酸软骨素钠的方法主要有三种:盐解法、碱解法和酶解法。主要采用的分离纯化技术有:乙醇沉淀法、离子交换色谱法、纤维素分离法、季铵盐配合法、吸附法、区带电泳分离法等。在以上的集中提取方法中，收率虽然可以达到很高的水平，但生产方法都存在很大问题，如盐解法工艺中存在除酸性蛋白调节PH值1-2在产品量大时耗时很长，硫酸软骨素中的氨基易被解离下来，从而影响了硫酸软骨素的含量。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是:提供一种提高硫酸软骨素含量的制备方法，此方法通过复沉，并控制乙醇浓度，使生产的硫酸软骨素沉淀质地疏松、颗粒细小、容易脱水和烘干，且产品不需要粉碎，能耗低，质量高`且稳定。
[0006]本发明的技术解决方案是该制备方法包括下列步骤:
[0007]1、碱提酶解:将动物软骨原料加水浸泡，用氢氧化钠调节ΡΗ8.5-9.5，升温至50-600C，保温4-6小时，加入胰蛋白酶，保持ΡΗ8.5-9.5，保温50_60°C，并搅拌6小时，升温至溶液沸腾10-20分钟，用微孔滤膜过滤得硫酸软骨素溶液；
[0008]2、乙醇沉淀:将步骤(1)得到的硫酸软骨素溶液降至室温，边搅拌便加入氯化钠，使溶液中氯化钠重量浓度为1-5%，然后加入溶液体积2-3倍的浓度为90%以上的乙醇，静置6-8小时，用微孔滤膜过滤得硫酸软骨素沉淀；
[0009]3、氧化:将步骤(2)得到的硫酸软骨素沉淀加入水中溶解，同时水中加入氯化钠，使溶液中氯化钠重量浓度为1_5%，含硫酸软骨素重量浓度为3.5-5.5%，调节PH至
9.5-11.5，加入1-3.5%的过氧化氢氧化6-8小时，过滤得滤液；
[0010]4、复沉:调节步骤(3)得到的硫酸软骨素溶液PH至5.5-6.5，温度控制在15-25°C,边搅拌,边将硫酸软骨素溶液缓慢加入到体积为硫酸软骨素溶液4.5-6.5倍的，浓度为90%以上的乙醇中，缓慢加完后继续搅拌I小时，静置沉淀10-15小时；
[0011]5、脱水干燥:沉淀结束后弃去上层酒精，收集沉淀物，用浓度为95%以上的乙醇脱水，然后干燥即得硫酸软骨素成品。
[0012]本方法进一步改进方案是，所述乙醇浓度为90%或90%以上。其中，步骤(4)的溶液含乙醇的浓度始终保持在75%或75%以上。
[0013]本发明取得的效果为:
[0014]1、将经过碱提、酶解氧化得到的硫酸软骨素溶液，调节PH5.5-6.5，温度控制在15-25°C，缓慢的加入到搅拌中的90%的乙醇中，整个沉淀过程中乙醇的浓度始终保持在75%及其以上。经此方法沉淀得到的硫酸软骨素质地疏松，颗粒细小，容易脱水和烘干，不需要粉碎，具有节约能源、节约生产成本的优点。
[0015]2、所得产品色泽好，质量稳定，且硫酸软骨素含量在98.5%以上。
【具体实施方式】
[0016]实施例1
[0017](I)碱提酶解:将动物软骨原料IOOkg加水浸泡，用氢氧化钠调节PH9.0，升温至50-600C，保温5小时，加入2kg胰蛋白酶，保持PH9.0，保温50_60°C，并搅拌6小时，升温至溶液沸腾15分钟，用微孔滤膜过滤得硫酸软骨素溶液600L ；
[0018](2)乙醇沉淀:将步骤(1)得到的硫酸软骨素溶液降至室温，边搅拌便加入氯化钠，使溶液中氯化钠重量浓度为18kg，然后加入溶液体积2.5倍的浓度为90%以上的乙醇1500L，静置7小时，用微孔滤膜过滤得硫酸软骨素沉淀；
[0019](3)氧化:将步骤(2)得到的硫酸软骨素沉淀加入250L水中溶解，同时水中加入
7.5kg氯化钠，使溶液中氯化钠重量浓`度为3%，含硫酸软骨素重量浓度为5%，调节PH至11，加入5kg过氧化氢氧化8小时，过滤得滤液；
[0020](4)复沉:调节步骤(3)得到的硫酸软骨素溶液PH至5.5-6.5，温度控制在18°C，边搅拌，边将硫酸软骨素溶液缓慢加入到浓度为90% 1250L的乙醇中，缓慢加完后继续搅拌I小时，静置沉淀15小时；
[0021](5)脱水干燥:沉淀结束后弃去上层酒精，收集沉淀物，用浓度为95%以上的乙醇脱水，然后干燥即得硫酸软骨素成品15.1kg,含量98.6%。
【权利要求】
1.提高硫酸软骨素含量的制备方法，其特征在于包括以下步骤: (1)碱提酶解:将动物软骨原料加水浸泡，用氢氧化钠调节PH8.5-9.5，升温至50-600C，保温4-6小时，加入胰蛋白酶，保持PH8.5-9.5，保温50_60°C，并搅拌6小时，升温至溶液沸腾10-20分钟，用微孔滤膜过滤得硫酸软骨素溶液； (2)乙醇沉淀:将步骤(1)得到的硫酸软骨素溶液降至室温，边搅拌便加入氯化钠，使溶液中氯化钠重量浓度为1_5%，然后加入溶液体积2-3倍的浓度为90%以上的乙醇，静置6-8小时，用微孔滤膜过滤得硫酸软骨素沉淀； (3)氧化:将步骤(2)得到的硫酸软骨素沉淀加入水中溶解，同时水中加入氯化钠，使溶液中氯化钠重量浓度为1-5 %，含硫酸软骨素重量浓度为3.5-5.5 %，调节PH至9.5-11.5，加入1-3.5%的过氧化氢氧化6-8小时，过滤得滤液； (4)复沉:调节步骤(3)得到的硫酸软骨素溶液PH至5.5-6.5，温度控制在15_25°C，边搅拌，边将硫酸软骨素溶液缓慢加入到体积为硫酸软骨素溶液4.5-6.5倍的,浓度为90%以上的乙醇中，缓慢加完后继续搅拌1小时，静置沉淀10-15小时； (5)以上的乙醇脱水，然后干燥即得硫酸软骨素成品。
2.根据权利要求1所述的提高硫酸软骨素含量的制备方法，其特征在于:沉淀与复沉所述乙醇的浓度为90 %或90 %以上。
3.根据权利要求1所述的提高硫酸软骨素含量的制备方法，其特征在于:其中步骤(4)的溶液含乙醇的浓度始终保持在75%或75%以上。
【文档编号】C08B37/08GK103804518SQ201310632537
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2013年11月25日 优先权日:2013年11月25日
【发明者】刘乃山, 陆玉梅, 迟培升, 夏衬来 申请人:青岛九龙生物医药有限公司