一种中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法，包括：S1：中华被毛孢菌丝体多糖的提取：以中华被毛孢菌丝体为原料，超微粉碎至粒径为7～11μm的超细粉末，加入至水中，浸泡，再加热至沸腾，保持微沸，离心，取上清液即为中华被毛孢菌丝体多糖的粗提液；S2：浓缩得浓缩液；S3：沉淀：加入乙醇，边加边搅拌，静置，离心，收集沉淀；S4：干燥：冷冻干燥，即得中华被毛孢菌丝体多糖。该方法是一种简便、高效、成本低、多糖得率及含量高，且适合规模化生产的方法。
【专利说明】一种中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生物领域中的一种菌丝体多糖，具体涉及一种中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法。
【背景技术】
[0002]中华被毛孢发酵菌丝又称为虫草发酵菌丝Cs-C-QSO或蝙蝠蛾被毛孢菌丝体，为真正冬虫夏草菌。其菌丝体含有较高含量的多糖，此多糖在保健食品、医药等领域具有重要的作用，但目前对该蝙蝠蛾中华被毛孢菌丝体中的多糖提取方法存在不足使得多糖的提取率较低。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法，该方法是一种简便、高效、成本低、多糖得率及含量高，且适合规模化生产的方法，克服了现有技术中的一些不足。
[0004]本发明的目的是通过以下技术方案来实现:
[0005]一种中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法，所述制备方法包括以下步骤:
[0006]S1:中华被毛孢菌丝体多糖的提取:步骤SI中，中华被毛孢菌丝体多糖的提取的具体方法为:以中华被毛孢菌丝体为原料，超微粉碎为粉末，加入到15-20倍原料重量的水中，常温浸泡30-60分钟，再加热至沸腾，保持微沸60-120分钟后离心；分离沉淀和上清液，取沉淀并按上述步骤重复再提取I~2次，取每次离心分离后的上清液并合并，即为中华被毛孢菌丝体多糖的粗提液；
[0007]S2:浓缩:将步骤SI中中华被毛孢菌丝体多糖的粗提液进行减压蒸馏，浓缩至液体和原料的比例(质量/体积)为4: I~2: I时为止，得到浓缩液；
[0008]S3:沉淀:向步骤S2中所述的浓缩液中缓慢加入乙醇，边加边搅拌，所述乙醇加至乙醇含量达到70% -80%时停止，然后室温静置12-18小时，离心，弃上清液，收集沉淀；
[0009]S4:干燥:向步骤S3中所述的沉淀中加水溶解，加热除去乙醇，然后进行冷冻干燥，即得中华被毛孢菌丝体多糖，得率大于20%。
[0010]进一步优选地，步骤SI中，将所述中华被毛孢菌丝体超微粉碎至粒径为ΙΟμπι的超细粉末。
[0011]进一步优选地，步骤SI中，常温浸泡后再加热至沸腾，保持微沸90-105分钟。
[0012]进一步优选地,步骤SI中,所述离心的时间为20min。
[0013]进一步地，步骤S2中，将中华被毛孢菌丝体多糖的粗提液浓缩至液体和原料的比例(质量/体积)为2:1时为止。
[0014]进一步地，步骤S3中，所述乙醇为无水乙醇。
[0015]本发明提供了一种中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法，其主要具有的有益效果为:该制备方法通过超微粉碎来破坏细胞壁再经过一些列的提取过程，得到的粗多糖得率高，且纯多糖的得率超过20% ;该多糖对RAW264.7巨噬细胞株释放NO有明显的促进作用；此外，该方法是一种简便、高效、成本低且适合规模化生产的方法。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]下面根据附图对本发明作进一步详细说明。
[0017]图1是本发明实施例所述的中华被毛孢菌丝体多糖的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0018]本发明实施例所述的一种中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法，下面以具体实验案例为例来说明【具体实施方式】，应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明，此外，本发明所述的中华被毛孢菌丝体多糖均指蝙蝠蛾中华被毛孢菌丝体多糖。
[0019]实施例1
[0020]中华被毛孢菌丝体多糖的提取:以中华被毛孢菌丝体为原料，通过超微粉碎将颗粒细度粉碎为粒径10 μ m的超细粉末，通过超微粉碎后，称取50g超微粉碎后的粉末，再加入100mL蒸馏水，常温浸泡60分钟，加热至沸腾，保持微沸120分钟，8000g离心20min ；分离沉淀和上清液，取沉淀并按上述步骤重复再提取I次，即在该沉淀中加蒸馏水、常温浸泡、加热至沸腾，保持微沸后离心，取上清液，合并两次离心所得的上清液，即为中华被毛孢菌丝体多糖的粗提液。
[0021]中华被毛孢菌丝体多糖粗提液的浓缩:将上述的中华被毛孢菌丝体多糖的粗提液于旋转蒸发仪中减压浓缩至10mL,得浓缩液。
[0022] 乙醇沉淀:向上述浓缩液中缓慢加入无水乙醇，边加边搅拌，至乙醇含量达到70%时，室温静置12小时，离心除去乙醇上清液，收集沉淀。
[0023]干燥:沉淀加70mL水溶解，水浴锅上挥去乙醇，置于_20°C冰箱中冻存12h后放入冷冻干燥机中冷冻干燥，即得中华被毛孢菌丝体多糖，该多糖为含有微量杂质的粗多糖；中华被毛孢菌丝体多糖的得率为20.91%。
[0024]实施例2
[0025]中华被毛孢菌丝体多糖的提取:以中华被毛孢菌丝体为原料，通过超微粉碎将颗粒细度粉碎为粒径9μπι的超细粉末，称取50g超微粉碎后的粉末，再加入800mL蒸馏水，常温浸泡40分钟，加热至沸腾，保持微沸100分钟，SOOOg离心20min ;分离沉淀和上清液，取沉淀并按上述步骤重复再提取I次，即在该沉淀中加蒸馏水、常温浸泡、加热至沸腾，保持微沸后离心，取上清液，合并两次离心所得的上清液，即为中华被毛孢菌丝体多糖的粗提液。中华被毛孢菌丝体多糖粗提液的浓缩:将上述的中华被毛孢菌丝体多糖的粗提液于旋转蒸发仪中减压浓缩至10mL,得浓缩液。乙醇沉淀:向上述浓缩液中缓慢加入无水乙醇，边加边搅拌，至乙醇含量达到75%时，室温静置15小时，离心除去乙醇上清液，收集沉淀。干燥:沉淀加70mL水溶解，水浴锅上挥去乙醇，置于_20°C冰箱中冻存12h后放入冷冻干燥机中冷冻干燥，即得中华被毛孢菌丝体多糖，该多糖为含有微量杂质的粗多糖；中华被毛孢菌丝体多糖的得率为20.99%。
[0026]实施例3
[0027]
【权利要求】
1.一种中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法，其特征在于:所述制备方法包括以下步骤: S1:中华被毛孢菌丝体多糖的提取:以中华被毛孢菌丝体为原料，超微粉碎为粒径在7~11 μ m的超细粉末，加入到15-20倍原料重量的水中，常温浸泡30-60分钟，再加热至沸腾，保持微沸60-120分钟后离心；分离沉淀和上清液，取沉淀并按上述步骤重复再提取I~2次，取每次离心分离后的上清液并合并，即为中华被毛孢菌丝体多糖的粗提液； 52:浓缩:将步骤SI中中华被毛孢菌丝体多糖的粗提液进行减压蒸馏，浓缩至液体和原料的比例为4:1~2:1时为止，得到浓缩液； 53:沉淀:向步骤S2中所述的浓缩液中缓慢加入乙醇，边加边搅拌，所述乙醇加至乙醇含量达到70% -80%时停止，然后室温静置12-18小时，离心，弃上清液，收集沉淀； 54:干燥:向步骤S3中所述的沉淀中加水溶解，加热除去乙醇，然后进行冷冻干燥，即得中华被毛孢菌丝体多糖，得率大于20%。
2.根据权利要求1所述的中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法，其特征在于:步骤SI中，将所述中华被毛孢菌丝体超微粉碎至粒径为10 μ m的超细粉末。
3.根据权利要求1所述的中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法，其特征在于:步骤SI中，常温浸泡后再加热至沸腾，保持微沸90-105分钟。
4.根据权利要求1所述的中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法，其特征在于:步骤SI中，所述离心的时间为 20min。
5.根据权利要求1所述的中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法，其特征在于:步骤S2中，将中华被毛孢菌丝体多糖的粗提液浓缩至液体和原料的比例为2: I时为止。
6.根据权利要求1所述的中华被毛孢菌丝体多糖的制备方法，其特征在于:步骤S3中，所述乙醇为无水乙醇。
【文档编号】C08B37/00GK104177506SQ201410341978
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年7月18日 优先权日:2014年7月18日
【发明者】庞小博, 史先敏 申请人:上海天嵩生物科技有限公司