一种提高硫酸软骨素收率的方法
【专利摘要】本发明公开了一种制备高纯度高收率硫酸软骨素的提取工艺，这种提取工艺属于化学领域。主要包括用丙酮萃取，乙醇提纯等解决了目前硫酸软骨素生产过程中混有多硫酸软骨素的问题。节约了成本，提高了硫酸软骨素的纯度，工艺简单，易操作，适合工业化生产。
【专利说明】一种提高硫酸软骨素收率的方法
【技术领域】
[0001]本法说明涉及一种提取提纯制备原料药的方法，属于化学领域，具体是一种制备尚纯度尚收率精品硫酸软骨素。
【背景技术】
[0002]硫酸软骨素是由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质，在动物体内多以硫酸软骨素-蛋白质复合物的形式存在。医学上，硫酸软骨素在体内外均有抗凝血作用，可延长凝血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间。临床上具有抗凝血、降血月旨、保护内皮细胞、抗血小板积聚和释放、促纤溶、抑制动脉平滑肌细胞增殖、降低血液粘度和抗炎等作用。
[0003]我国是世界上最大的硫酸软骨素原料药生产国，制备原料药硫酸软骨素的方法主要有两种:生物酶法，化学裂解法。生物酶法主要以酶降解产生硫酸软骨素，方法温和，但是成本很高，不适合批生产:另一种化学裂解法，产量多，但是过程中会影响硫酸软骨素的活性，不适应药用。本工艺吸取了以上两种工艺的优点，多种萃取、提取和离子交换方法，方法温和，提取量相对较大，纯度较高，而且能够最大限度的去除硫酸软骨素的杂质，比如多硫酸软骨素。
【发明内容】
[0004]本发明的目的为了改进现有技术的不足，而提供一种制备高纯度高收率硫酸软骨素的工艺；该发明提供了一种简便的高纯度硫酸软骨素制备技术，制得的硫酸软骨素效价均高于180U/mg，高于中国药典要求的170U/mg，且依据中国药典硫酸软骨素检测标准检测合格。
[0005]本发明的技术方案为:一种制备高纯度硫酸软骨素的工艺，其步骤如下:
(O将粗品硫酸软骨素溶入饮用水中，搅拌5-10小时，将其全部溶解；
(2)将步骤(I)中溶解液，用盐酸溶液调PH至7.0-8.0，然后升温至50-55 °C之间时加入胃蛋白酶，再加入胰酶，保温2-4小时；
(3 )将步骤(2 )中酶解液在30?40分钟内升温至85-90 °C，静止10-30分钟，搅拌，然后等降温至50-55°C时，用氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，静止20-30小时，分层，虹吸上清，过滤，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；
(4)待步骤(3)中上清液和离心液温度降至20-30°C，加入氯化钠，搅拌溶解，用盐酸调PH至10.0-12.0，边搅边加浓度为75-80%乙醇溶液，沉淀10-12小时；
(5)取步骤(4)中下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH至
10.0-12.0，然后加入双氧水氧化10-12小时；
(6 )将步骤(5 )中溶液加入氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液将溶液调PH至6.0-7.0，加入乙醇溶液，沉淀10-12小时；
(7)取步骤(6)中下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，然后加入体积3-5%双氧水，氧化10-12小时；
(8)将步骤(7)中溶液加入氯化钠，用盐酸溶液调PH至10.0-12.0，边搅边加浓度为95?97%的乙醇溶液，沉淀10-12小时；
(9)取步骤(8)中下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，然后加入双氧水，氧化10-12小时；
(10将步骤(9)中溶液加入氯化钠，用盐酸溶液调PH至6.0-7.0，然后冷冻至-10°C --5°C，边搅边加丙酮，在_5°C - O0C中保温24-30小时，弃去上清液，多硫酸软骨素被丙酮带走，用纯化水将沉淀物溶解，加入氯化钠，用盐酸溶液调PH至6.0-7.0，边搅边加乙醇，沉淀10-12小时；
(11)将步骤(10)中沉淀物用纯化水溶解后，用微米滤膜板框机微滤，用乙醇沉淀，再加入氯化钠溶液，静止沉淀10-12小时，取沉淀物，用乙醇溶解，静置24-30小时；
弃去上层液，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空泵通抽干；
(12)将步骤(11)中产品放在真空干燥箱中，烘干70-80小时，得产品。
[0006]有益效果:
(O本发明结合升温氧化结合多种物理提取方法并纯化得到效价高于180U/mg，收率高于80%的高纯度硫酸软骨素。(2)通过升温补加双氧水可以有效的控制硫酸软骨素氧化失活，并且实现了氧化与脱色同步进行。(3)依据硫酸软骨素及其结构类似物的极性差异，在氯化钠溶液中用丙酮萃取，在用乙醇沉淀洗脱，最后得到硫酸软骨素产品。工艺采用的丙酮萃取法，使得多硫酸软骨素杂质被萃取，而硫酸软骨素产品留在了低盐溶液中，用乙醇沉淀，极大地提高了收率，最终得到的硫酸软骨素产品达到中国药典标准，并且经测不含多硫酸软骨素成分。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
将50g粗品硫酸软骨素溶入饮用水中，搅拌5小时，将其全部溶解；用盐酸溶液调PH至
7.0，然后升温至50°C之间时加入5g/亿单位胃蛋白酶，再加入1g/亿单位胰酶，保温2小时；将酶解液在30分钟内升温至85°C，静止10分钟，搅拌，然后等降温至50时，用2mol氢氧化钠溶液调PH至10.0，静止20小时，分层，虹吸上清，过滤，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；待上清液和离心液温度降至20°C，加入25g/L氯化钠，搅拌溶解，用盐酸调PH至10.0，边搅边加浓度为75%乙醇溶液，沉淀10小时；取下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH至10.0，然后加入3%双氧水氧化10小时；将溶液加入20g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液将溶液调PH至6.0，加入乙醇溶液，沉淀10小时；取下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调PH至10.0-,然后加入体积3%双氧水，氧化10小时；将溶液加入20g/L氯化钠，用盐酸溶液调PH至10.0，边搅边加浓度为95 %的乙醇溶液，沉淀10小时；取下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调PH至10.0，然后加入3%双氧水，氧化10小时；将溶液加入20g/L氯化钠，用盐酸溶液调PH至6.0，然后冷冻至-10°C，边搅边加丙酮，在_5°C中保温24小时，弃去上清液，用纯化水将沉淀物溶解，加入氯化钠，用盐酸溶液调PH至6.0，边搅边加乙醇，沉淀10小时；将沉淀物用纯化水溶解后，用微米滤膜板框机微滤，用乙醇沉淀，再加入20g/L氯化钠溶液，静止沉淀10小时，取沉淀物，用乙醇溶解，静置24小时；弃去上层液，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空泵通抽干；将产品放在真空干燥箱中，烘干70，得产品经检测其效价为183U/mg，回收率为80.1%硫酸软骨素为0.09mg/mL硫酸皮肤素为0.01mg/mL，各项指标均均符合中国药典要求。
[0008]实施例2
将粗品硫酸软骨素溶入饮用水中，搅拌5-10小时，将其全部溶解；将溶解液用盐酸溶液调PH至6.5，然后升温至52之间时加入7g/亿单位胃蛋白酶，再加入15g/亿单位胰酶，保温3小时；将酶解液在35分钟内升温至87°C，静止20分钟，搅拌，然后等降温至52°C时，用4mol氢氧化钠溶液调PH至11.0，静止25小时，分层，虹吸上清，过滤，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；待上清液和离心液温度降至25°C，加入25g/L25g/L氯化钠，搅拌溶解，用盐酸调PH至11.0，边搅边加浓度为77%乙醇溶液，沉淀10-12小时；取下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH至10.0-12.0，然后加入4%双氧水氧化10-12小时；将溶液加入25g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液将溶液调PH至6.5，加入乙醇溶液，沉淀11小时；取下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调PH至
11.0，然后加入体积4%双氧水，氧化11小时；将溶液加入25g/L氯化钠，用盐酸溶液调PH至11.0，边搅边加浓度为96%的乙醇溶液，沉淀11小时；取下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，然后加入4%双氧水，氧化11小时；将溶液加入25g/L氯化钠，用盐酸溶液调PH至6.5，然后冷冻至_7，边搅边加丙酮，在-3中保温24-30小时，弃去上清液，用纯化水将沉淀物溶解，加入氯化钠，用盐酸溶液调PH至6.5，边搅边加乙醇，沉淀11小时；将沉淀物用纯化水溶解后，用微米滤膜板框机微滤，用乙醇沉淀，再加入25g/L氯化钠溶液，静止沉淀10-12小时，取沉淀物，用乙醇溶解，静置27小时；弃去上层液，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空泵通抽干；将产品放在真空干燥箱中，烘干75小时，得产品。经检测，得产品其效价为209U/mg，回收率为89%硫酸软骨素为0.0001mg/mL硫酸皮肤素为
0.0005mg/mL,各项指标均均符合中国药典要求。
[0009]实施例3
将粗品硫酸软骨素溶入饮用水中，搅拌10小时，将其全部溶解；用盐酸溶液调PH至8.0，然后升温至50-55°C之间时加入1g/亿单位胃蛋白酶，再加入20g/亿单位胰酶，保温4小时；将酶解液在40分钟内升温至90 °C，静止30分钟，搅拌，然后等降温至55°C时，用6mol氢氧化钠溶液调PH至12.0，静止30小时，分层，虹吸上清，过滤，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；待上清液和离心液温度降至30°C，加入30g/L氯化钠，搅拌溶解，用盐酸调PH至12.0，边搅边加浓度为80%乙醇溶液，沉淀12小时；取下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH至12.0，然后加入5%双氧水氧化12小时；将溶液加入30g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液将溶液调PH至7.0，加入乙醇溶液，沉淀10-12小时；取下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调PH至12.0，然后加入体积5%双氧水，氧化12小时；将溶液加入30g/L氯化钠，用盐酸溶液调PH至12.0，边搅边加浓度为97%的乙醇溶液，沉淀12小时；取下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调PH至12.0，然后加入5%双氧水，氧化12小时；将溶液加入30g/L氯化钠，用盐酸溶液调PH至7.0，然后冷冻至_5°C，边搅边加丙酮，在0°C中保温30小时，弃去上清液，多硫酸软骨素被丙酮带走，用纯化水将沉淀物溶解，加入氯化钠，用盐酸溶液调PH至7.0，边搅边加乙醇，沉淀12小时；将沉淀物用纯化水溶解后，用微米滤膜板框机微滤，用乙醇沉淀，再加入30g/L氯化钠溶液，静止沉淀12小时，取沉淀物，用乙醇溶解，静置30小时；弃去上层液，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空泵通抽干；产品放在真空干燥箱中，烘干80小时，得产品。经检测，得产品其效价为189U/mg，回收率为89%硫酸软骨素为0.002mg/mL硫酸皮肤素为
0.003mg/mL,各项指标均均符合中国药典要求。
【权利要求】
1.一种制备高纯度硫酸软骨素的工艺，其步骤如下: 将粗品硫酸软骨素溶入饮用水中，搅拌5-10小时，将其全部溶解； 将步骤(I)中溶解液，用盐酸溶液调PH至7.0-8.0，然后升温至50-55 °C之间时加入胃蛋白酶，再加入胰酶，保温2-4小时； 将步骤(2)中酶解液在30?40分钟内升温至85-90°C，静止10-30分钟，搅拌，然后等降温至50-55°C时，用氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，静止20-30小时，分层，虹吸上清，过滤，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液； 待步骤(3)中上清液和离心液温度降至20-30°C，加入氯化钠，搅拌溶解，用盐酸调PH至10.0-12.0，边搅边加乙醇溶液，沉淀10-12小时； 取步骤(4)中下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH至10.0-12.0，然后加入双氧水氧化10-12小时； 将步骤(5)中溶液加入氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液将溶液调PH至6.0-7.0，加入乙醇溶液，沉淀10-12小时； 取步骤(6)中下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，然后加入体积3-5%双氧水，氧化10-12小时； 将步骤(7)中溶液加入氯化钠，用盐酸溶液调PH至10.0-12.0，边搅边加浓度为95?97%的乙醇溶液，沉淀10-12小时； 取步骤(8)中下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，然后加入双氧水，氧化10-12小时； 将步骤(9)中溶液加入氯化钠，用盐酸溶液调PH至6.0-7.0，然后冷冻至-10°C- _5°C，边搅边加丙酮，在_5°C - (TC中保温24-30小时，弃去上清液，多硫酸软骨素被丙酮带走，用纯化水将沉淀物溶解，加入氯化钠，用盐酸溶液调PH至6.0-7.0，边搅边加乙醇，沉淀10-12小时； 将步骤(10)中沉淀物用纯化水溶解后，用微米滤膜板框机微滤，用乙醇沉淀，再加入氯化钠溶液，静止沉淀10-12小时，取沉淀物，用乙醇溶解，静置24-30小时； 弃去上层液，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空泵通抽干； 将步骤(11)中产品放在真空干燥箱中，烘干70-80小时，得产品。
2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(I)中的胃蛋白酶浓度为5-10g/亿单位，胰酶的浓度为10-20g/亿单位。
3.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(2)中氢氧化钠的浓度为2-6mol/L。
4.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(3)、步骤(6)、步骤(8)、步骤(10)和步骤(11)中氯化钠的浓度为20-30g/L。
5.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(4)中乙醇溶液的浓度为75%?80%。
6.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(5)和步骤(9)中的双氧水的体积分数为3-5%。
7.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于:步骤(10)中丙酮的浓度为40-45%。
【文档编号】C08B37/08GK104479046SQ201410813443
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月24日 优先权日:2014年12月24日
【发明者】刘乃山, 周晓娜, 迟培升 申请人:青岛九龙生物医药有限公司