本发明涉及生物化学领域，具体涉及用动态轴向压缩柱制备金银花单体的方法。
背景技术：
金银花(Lonicerae Flos)为忍冬科(Caprifoliaceae)植物忍冬(Lonicera.japonica Thunb.)的干燥花蕾或带初开的花。具有清热解毒，疏散风热的功效。用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热。
金银花的主要成分为有机酸类、挥发油类、黄酮类、三萜皂苷类、无机元素等。绿原酸类化合物是金银花的主要有效成分。金银花主要的药理作用有：1.抗菌、抗病毒作用。金银花对多种致病菌均有一定的抑制作用，包括金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、伤寒杆菌，肺炎球菌、绿脓杆菌、结核杆菌等。金银花中抗菌消炎的主要成分是绿原酸及异绿原酸。2.抗炎及解热作用。研究结果表明，金银花对角叉菜胶、蛋清、二甲苯所致的水中游不同程度的抑制作用。3.利胆保肝作用。金银花所含的多种绿原酸类化合物具有显著的利胆作用，可以促进大鼠胆汁的分泌。3.降血脂作用。4.对免疫系统作用。5.止血作用。6.抗氧化作用。金银花所含的绿原酸可以引起大鼠、小鼠中枢神经兴奋，口服大剂量绿原酸能增加胃肠蠕动，促进胆汁分泌。
绿原酸类化合物是金银花的主要有效成分。现阶段关于从金银花中提取绿原酸的研究较多，但几乎没有从金银花中同时分离出多种单体的报道。目前工业上制备绿原酸的方法得到的绿原酸纯度较低，需经过多步分离纯化方可得到高纯度的绿原酸，且制备工艺复杂，分离步骤繁琐，溶剂消耗量大。
研究一种能够从金银花中大量制备出多种高纯单体的制备工艺可以有效的利用植物资源，为天然产物的开发提供物质基础。
技术实现要素：
本发明主要解决的技术问题是提供一种用动态轴向压缩柱制备金银花单体的方法，该方法工艺简单，可同时制备多种高纯化合物，植物原料利用率高。
本发明通过一些技术方案实现：
用动态轴向压缩柱制备金银花单体的方法，包括以下步骤：
(1)提取溶剂的配制：用乙醇和水配制30％-95％的乙醇-水混合溶液作为样品提取溶剂；
(2)样品的提取浓缩：金银花药材，用步骤(1)配制的提取溶剂超声、回流或微波提取，过滤，减压浓缩得到样品浓缩液；
(3)浓缩液的萃取：将步骤(2)得到的样品浓缩液用1～3倍量乙酸乙酯萃取2～3次，萃取物浓缩至干，得到乙酸乙酯层浸膏；
(4)流动相配制：用弱极性溶剂配制流动相，作为样品洗脱液。
(5)样品溶液稀释过滤：将步骤(3)得到的乙酸乙酯浸膏，用步骤(4)配制的流动相稀释至浓度为10～50mg/ml，过滤作为样品；
(6)动态轴向压缩柱填装：将色谱填料用步骤(4)配制的流动相匀浆得到匀浆液，将匀浆液送入动态轴向压缩柱，排出流动相后压实色谱填料，完成动态轴向压缩柱的填装；
(7)系统平衡：用步骤(4)配制的流动相冲洗步骤(6)填装的动态轴向压缩柱，持续15-20分钟，直到色谱仪检测的色谱基线平稳，至平衡状态；
(8)洗脱分离：将步骤(5)得到的样品注入步骤(7)平衡后的动态轴向压缩柱，用紫外检测器在线检测样品分离情况，根据保留时间和色谱峰的高度确定所制备金银花单体的收集起止时间点；
(9)浓缩：将步骤(8)收集得到的每种单体溶液分别减压浓缩，除去溶剂，得到高纯度的单体。
所述步骤(1)配制样品提取溶剂为乙醇-水混合溶液，体积比例30％-95％，优选为30％-60％。
所述步骤(2)超声提取的时间为25-30分钟。
所述步骤(3)乙酸乙酯萃取中样品浓缩液与乙酸乙酯的比例为1:1-1:3，萃取2-3次。
所述步骤(4)配制的流动相的弱极性溶剂为无水乙醇，流动相的体积比例乙醇：水＝12％-50％。
所述步骤(5)的样品浓度为10-50mg/ml。
所述步骤(5)采用0.45μm有机滤膜对稀释的样品溶液进行过滤。
所述步骤(6)的色谱柱填料为粒径为5-20μm的C18填料。
所述步骤(7)动态轴向压缩柱的填料高度为200-300mm。
所述步骤(8)的紫外检测器的检测波长为237nm。
本发明的优点：采用动态轴向压缩系统实现多种金银花单体的在线分离，在一次制备过程中，可以获得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体化合物，且高效液相色谱法检测纯度均在90％以上，植物资源利用率较高；有机试剂可回收利用，经济环保；制备工艺简单，生产周期短，产品质量可控，适合工业化生产。
附图说明
图1为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷单体分离流程图
具体实施方式
实施例1
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释为浓度为42mg/ml作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到94.2％，92.5％，96.8％，93.7％。
实施例2
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，回流提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释为浓度为42mg/ml作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测 器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到91.2％，90.5％，91.1％，90.7％。
实施例3
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，微波提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释为浓度为42mg/ml作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到90.2％，90.5％，92.1％，90.7％。
实施例4
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，超声提取25min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释为浓度为42mg/ml作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到92.5％，90.1％，95.8％，93.2％。
实施例5
称取金银花药材50g，加入30％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释为浓度为42mg/ml作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到90.4％，91.3％，93.6％，90.8％。
实施例6
称取金银花药材50g，加入90％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释42mg/ml作为样品溶液，作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到93.5％，90.1％，96.3％，92.7％。
实施例7
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释42mg/ml作为样品溶液，作为样品溶液；将1000g粒径为10μm 的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到93.5％，90.1％，96.3％，92.7％。
实施例8
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取2次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释42mg/ml作为样品溶液，作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到93.3％，91.3％，95.8％，93.9％。
实施例9
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用1倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释42mg/ml作为样品溶液，作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶 液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到91.8％，90.2％，94.7％，92.4％。
实施例10
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用2倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释42mg/ml作为样品溶液，作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到92.4％，90.7％，94.9％，92.6％。
实施例11
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释13mg/ml作为样品溶液，作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收 集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到94.5％，91.2％，97.4％，95.8％。
实施例12
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释28mg/ml作为样品溶液，作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到93.5％，90.9％，96.7％，94.9％。
实施例13
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释42mg/ml作为样品溶液，作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为187mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到92.7％，90.2％，95.8％，94.1％。
实施例14
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释50mg/ml作为样品溶液，作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为140ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到91.7％，90.0％，93.6％，92.5％。
实施例15
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释42mg/ml作为样品溶液，作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为100ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到93.4％，92.7％，96.9％，94.8％。
实施例16
称取金银花药材50g，加入60％乙醇，超声提取30min；将提取液过滤后出去滤渣，将滤液浓缩至密度为1.02-1.05的清膏；用3倍量乙酸乙酯进行萃取1次，萃取物浓缩至干；将乙酸乙酯浸膏用流动相稀释42mg/ml作为样品溶液，作为样品溶液；将1000g粒径为10μm的C18填料，加入2800mL匀浆试剂，设定DAC色谱柱系统压力，室温下超声30min，超 声并搅拌20min后,将匀浆液送入直径为80mm的动态轴向压缩柱，排除流动相后压实色谱柱填料，完成DAC柱的填装；用流动相持续冲洗动态轴向压缩柱15-20分钟，直到色谱仪基线平稳；设定紫外检测器的波长为237nm,输液泵的流速为200ml/min，将稀释好的样品溶液用0.45μm有机滤膜过滤后，注入平衡后的动态轴向压缩柱，进样量为300mg，用紫外检测器检测样品分离情况；根据保留时间和色谱峰高度以及TLC鉴定，确定每种金银花单体的起止收集时间，收集的到新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断氧化马钱子苷四种单体；经收集到的每种单体溶解分别减压浓缩，除去溶剂，配制成一定浓度的溶液，用高效液相色谱法检测纯度，纯度分别可以达到91.4％，90.2％，92.5％，91.3％。