京尼平苷酸的新晶型及其制备方法和应用与流程

本发明涉及一种化合物京尼平苷酸的新晶型及其制备方法和应用，具体说，是涉及京尼平苷酸新晶型在制备治疗糖脂代谢异常药物制剂中的用途，属于医药
技术领域：
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背景技术：
：京尼平苷酸(geniposidicacid)，其化学结构式如下：京尼平苷酸是一种环烯醚萜苷类化合物，广泛分布于龙胆科、茜草科、杜仲科等多种植物中。研究表明，京尼平苷酸具有多种生理活性，如抗菌、抗炎、抗氧化、促进胆汁分泌、保肝、降压、抗肿瘤、免疫调节、泻下等作用，在临床上具有重要的药用价值。同一种化合物，由于晶型不同，其生物利用度通常会存在差别，另外其稳定性、流动性、可压缩性、溶出度、溶解速率、熔点、颜色、可滤性、密度等也可能会不同，从而对其药效和应用产生一定的影响。因此，开发化合物新晶型对拓宽化合物在制备药物组合物时的选择范围具有非常重要的意义。技术实现要素：本发明的目的是提供一种京尼平苷酸的新晶型，及其制备方法和在制备治疗糖脂代谢异常药物制剂中的应用。通过本发明的实施方案获得的京尼平苷酸新晶型使用Cu-Kα辐射，在以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱中，在约20.2°处有衍射峰。通过本发明的实施方案获得的京尼平苷酸新晶型使用Cu-Kα辐射，在以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱中，为在约12.7°、13.7°、16.3°、18.4°、19.3°、20.2°、22.3°、24.5°处有衍射峰。通过本发明的实施方案获得的京尼平苷酸的新晶型使用Cu-Kα辐射，在以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱中，在12.7°、13.7°、16.3°、18.4°、19.3°、20.2°、22.3°、 24.5°各角度处的±0.2°、±0.1°、±0.05°或±0.025°的范围有衍射峰。通过本发明的实施方案获得的京尼平苷酸的新晶型使用Cu-Kα辐射，在以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱中，衍射峰的相对强度分别为：12.7°为72，13.7°为53，16.32°为88，18.4°为58，19.3°为69，20.18°为100，22.3°为82，24.53°为95。通过本发明的实施方案获得的京尼平苷酸的新晶型使用Cu-Kα辐射，在以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱中，每个峰的相对峰强度不偏离X-射线粉末衍射图中相对峰强度20％以上。通过本发明的实施方案获得的京尼平苷酸的新晶型，在使用红外光谱的KBr压片分析时在3462±4、2909±4、2646±4、1707±4、1633±4cm-1处有吸收峰。通过本发明的实施方案获得的京尼平苷酸的新晶型，当使用熔点仪进行样品分析时的熔点值大于197℃。通过本发明的实施方案获得的京尼平苷酸的新晶型是：由车前子经过2～6倍体积的体积分数为60～90％的乙醇水溶液回流提取2～6次得到的提取物的水混悬液，经过石油醚萃取到石油醚层接近无色，弃去石油醚层，水层用水饱和的正丁醇萃取，至正丁醇层接近无色，合并正丁醇层并减压浓缩，再通过大孔树脂(0％-50％乙醇-水洗脱)、硅胶柱(乙酸乙酯-甲醇-水溶液体系洗脱)、ODS反相柱(5％-30％甲醇洗脱)和SephadexLH-20凝胶柱层析(甲醇洗脱)得到京尼平苷酸样品。取京尼平苷酸样品，在加热或搅拌的状态下将其溶于溶剂中，所述溶剂为水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、醋酸、二氯甲烷、氯仿、乙醚、正己烷、四氢呋喃中的一种或几种。所得溶液冷却或放置使京尼平苷酸析出，过滤收集晶体并干燥，即可获得京尼平苷酸的新晶型的固体物质。通过本发明的实施方案获得的京尼平苷酸的新晶型以单一形式用于治疗糖脂代谢异常的药物制剂的制备中。进一步，通过本发明的实施方案获得的京尼平苷酸的新晶型以与药学上可接受的药物载体组成的组合物形式用于治疗糖脂代谢异常的药物制剂的制备中。所述的药物制剂形式可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂；优选口服剂型，如：胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。所述的口服剂型可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。适宜的填充剂 包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂；适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠；适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。所述的糖脂代谢异常包括腹型肥胖、2型糖尿病、胰岛素抵抗、血脂代谢紊乱、脂肪肝、动脉粥样硬化中的任意一种或几种。本发明利用HepG2细胞进行体外葡萄糖消耗试验，同时利用四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠和高脂饲料诱导的糖脂代谢异常小鼠进行体内降糖和降脂药效实验，结果表明，京尼平苷酸新晶型在体外试验中可促进HepG2细胞对葡萄糖的消耗，且无明显的细胞毒性；在体内试验中京尼平苷酸新晶型可明显调节模型动物体重、空腹血糖、血清胰岛素、血清和肝脏脂质水平，改善葡萄糖耐量，显示出良好的治疗糖尿病、肥胖和血脂异常等糖脂代谢异常的药效作用。附图说明图1本发明得到的京尼平苷酸新晶型的X-射线粉末衍射图。图2本发明得到的京尼平苷酸新晶型的红外光谱图。图3本发明得到的京尼平苷酸新晶型在负离子模式下得到的液相图。图4本发明得到的京尼平苷酸新晶型在负离子模式下得到的质谱图。具体实施方式实施例1取车前子粗粉1kg，用3倍体积的体积分数为60％的乙醇水溶液回流提取3h，重复3次。合并提取液，过滤、浓缩干溶剂。将用1:3比例的水稀释得到的上述浓缩提取液的水混悬液，用石油醚(60～90℃)多次萃取，至石油醚层接近无色，弃去石油醚层；水层用水饱和的正丁醇萃取，至正丁醇层接近无色，合并正丁醇层并减压浓缩。通过硅胶柱层析，用体积比为35：1：0.4的乙酸乙酯-甲醇-水溶液体系进行梯度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，之后上反相柱层析，15％甲醇洗脱，得到京尼平苷酸样品。取京尼平苷酸样品，加热并搅拌使其溶于水-甲醇-乙酸乙酯(1：2：5)中。放冷溶液至室温，使京尼平苷酸析出，过滤收集晶体并干燥，即可获得京尼平苷酸新晶型的固体物质。取干燥的京尼平苷酸新晶型，研磨，取样进行X-射线粉末衍射，使用Cu-Kα辐射，图谱见图1，其特征参数见表1。表1京尼平苷酸新晶型的X-射线粉末衍射谱的特征参数(2θ和d值误差为±0.2°)2-Thetad-spacingRel.I.[％]9.13019.6862210.869.92328.913798.0710.24958.630786.8612.72676.9558471.913.66126.4820652.7914.16956.250629.3514.89455.9479716.6915.59615.681964.1416.31945.431788.2817.1225.178859.2117.4915.070443.6918.26764.8565846.818.43334.813357.0819.29034.6013568.5619.87214.4679415.8620.18444.399510020.74224.2824415.920.89464.2515513.0221.80614.075855.5322.28443.9894381.9222.85853.8905126.8223.65593.761169.6324.00763.7068515.2424.5233.630194.5724.77093.5943328.325.26923.524567.1426.17063.4051816.6127.02483.299469.0627.60773.23118.8728.26933.156976.2828.5863.122712.8228.91993.087414.5329.62663.0153529.1630.03562.975228.930.99742.8850617.3131.62392.829335.7732.22952.7775322.1132.59022.747616.1733.26012.693797.6833.69682.659874.8734.07982.630852.4134.63012.590294.3934.98382.564916.6535.54822.525478.1737.05352.4262612.5537.5582.394826.4738.6992.326810.2339.15092.300975.47取干燥的京尼平苷酸新晶型，研磨，取样进行红外光谱检测，测定方法为KBr压片法，图谱见图2。取干燥的京尼平苷酸新晶型适量，利用熔点仪对样品进行分析，所得熔点值为200℃。称取制得的京尼平苷酸新晶型适量，用0.1％(V:V)甲酸的水溶液与甲醇按体积比为90：10混合的溶液溶解在容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，制成每1mL溶液含1μg样品，并利用超高效液相色谱-质谱联用仪(UPLC-MS)进行指纹图谱分析，分析条件如下：色谱条件：Waters，AcquityUPLCBEHC18(50×2.1mm)色谱柱；流动相A相为含0.1％(V:V)甲酸的水溶液；流动相B相为甲醇；流速为0.3min；柱温为40℃；进样量为2μL；检测模式为负离子全扫描监测。质谱条件：采用电喷雾离子源，负离子全扫描检测模式进行数据采集时，毛细管电压为2.5千伏；锥孔电压为32伏，离子源温度为120℃，去溶剂温度为300℃，去溶剂气和锥孔气均为氮气，流速分别为550L/h和50L/h。图3为得到的京尼平苷酸新晶型在负离子模式下得到的指纹图谱，图4为得到的京尼平苷酸新晶型在负离子模式下得到的质谱图。实施例2取车前子粗粉1kg，用6倍体积的体积分数为80％的乙醇水溶液回流提取2h，重复4次。合并提取液，过滤、浓缩干溶剂。将用1:2比例的水稀释得到的上述浓缩提取液的水混悬液，用石油醚(60～90℃)多次萃取，至石油醚层接近无色，弃去石油醚层；水层用水饱和的正丁醇萃取，至正丁醇层接近无色，合并正丁醇层并减压浓缩。通过D101大孔树脂吸附，用10％乙醇-水洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，之后上反相柱层析，20％甲醇洗脱，上SephadexLH-20凝胶柱层析，甲醇洗脱，得到京尼平苷酸样品。取京尼平苷酸样品，搅拌使其溶于甲醇-二氯甲烷(2：1)中，放置使京尼平苷酸析出，过滤收集晶体并干燥，即可获得京尼平苷酸新晶型的固体物质。实施例3将和HepG2细胞接种于96孔板，待细胞长至60％融合，换上含0.2％牛血清白蛋白(BSA)的不同浓度京尼平苷酸新晶型的培养液，温育24h后，检测培液中的葡萄糖残量，按下式计算24h各孔细胞的葡萄糖消耗率。葡萄糖消耗率＝(实验孔0h实测值-实验孔24h实测值)/(对照孔0h实测值-对照孔24h实测值)×100％。同时，利用MTT法考察京尼平苷酸新晶型对HepG2细胞增殖的影响。在消耗实验即将 结束时，将培养液移出，换上含0.5g/LMTT的培养液继续孵育4h，然后将培养液倒尽，吸干，每孔再加入200μL二甲亚砜，混匀后置酶标仪上于570nm处测吸光度。表2京尼平苷酸新晶型对HepG2细胞糖代谢的促进作用注：**P<0.01，***P<0.001，与对照孔相比。由表2可见：京尼平苷酸新晶型可明显增加HepG2细胞的葡萄糖消耗量，同时对于两种细胞的增殖无影响，即没有细胞毒作用。说明京尼平苷酸新晶型具有增加葡萄糖消耗量的作用，同时具有较好的安全性。实施例4选用(22±2)g健康雄性ICR小鼠，随机分为正常组和造模组，造模组腹腔注射链脲左菌素50mg/kg。3天后，筛选空腹血糖值大于11.1mmol/L的小鼠继续实验，并分为模型组和京尼平苷酸组，其中京尼平苷酸组每日给药京尼平苷酸新晶型45mg/kg，连续口服灌胃给药2周。给药结束后，测定小鼠空腹血糖和血清胰岛素含量。实验数据进行方差分析，结果以x±s表示。表3京尼平苷酸新晶型对链脲左菌素诱导的II型糖尿病小鼠的降糖作用注：###P<0.001，与正常组相比；*P<0.05，**P<0.01，与模型组相比。由表3可见：京尼平苷酸新晶型对链脲左菌素诱导的II型糖尿病小鼠具有显著的降低空腹血糖和升高血清胰岛素的作用，表明京尼平苷酸新晶型具有良好的改善糖代谢的作用。实施例5选用4周龄健康雌性C57BL/6小鼠，随机分为空白组、模型组和京尼平苷酸组，分别给予低脂饲料(蛋白质20％，碳水化合物70％，脂肪10％)、高脂饲料(蛋白质20％，碳水化合物20％，脂肪60％)和含京尼平苷酸新晶型的高脂饲料(折合京尼平苷酸新晶型给药剂量为200mg/kg)，连续饲喂2个月。饲喂结束后，测定小鼠体重、空腹血糖、血脂水平。实验数据进行方差分析，结果以x±s表示。表4京尼平苷酸新晶型对高脂饲料诱导的糖脂代谢异常小鼠的作用注：#P<0.05，##P<0.01，与空白组相比；*P<0.05，与模型组相比。由表4见：预防性给药后，与模型组相比，京尼平苷酸组的体重、血糖、血清胰岛素水平均有所改善，同时血清和肝脏脂质也显著降低，表明京尼平苷酸新晶型有良好的预防肥胖和调节糖脂代谢异常的作用。实施例6选用4周龄健康雄性C57BL/6小鼠，随机分为空白组和造模组，分别自由进食低脂饲料(蛋白质20％，碳水化合物70％，脂肪10％)和高脂饲料(蛋白质20％，碳水化合物20％，脂肪60％)。12周后测定造模组小鼠的空腹血糖水平，并根据血糖情况分为模型组和京尼平苷酸组，其中京尼平苷酸组每日给予京尼平苷酸新晶型150mg/kg，连续口服灌胃给药2周。给药结束后，测定各组小鼠体重、空腹血糖和血清甘油三酯水平，以及葡萄糖耐受情况。实验数据进行方差分析，结果以x±s表示。表5京尼平苷酸新晶型对高脂饲料诱导的糖脂代谢异常小鼠的体重和糖脂调节作用注：##P<0.01，###P<0.001，与空白组相比；*P<0.05，**P<0.01，与模型组相比。表6京尼平苷酸新晶型对高脂饲料诱导的糖脂代谢异常小鼠葡萄糖耐受能力的影响注：#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001，与空白组相比；*P<0.05，**P<0.01，与模型组相比。由表5可见：与模型组相比，京尼平苷酸组的体重、空腹血糖和血清甘油三酯均显著降低，说明京尼平苷酸新晶型有良好的减肥和糖脂代谢调节的作用。另由表6可见：京尼平苷酸新晶型可明显改善模型小鼠的葡萄糖的耐量，进一步说明京尼平苷酸新晶型具有良好的治疗糖代谢异常的活性。实施例7京尼平苷酸片剂京尼平苷酸新晶型10g，淀粉88g，硬脂酸镁2g制备工艺：取京尼平苷酸新晶型过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，压片，即得。京尼平苷酸新晶型10g，淀粉48g，乳糖40g，硬脂酸镁2g制备工艺：取京尼平苷酸过100目筛，加淀粉、乳糖、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，压片，即得。实施例8京尼平苷酸胶囊京尼平苷酸新晶型10g，淀粉88g，硬脂酸镁2g制备工艺：取京尼平苷酸新晶型过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，装胶囊，即得。京尼平苷酸新晶型10g，淀粉48g，乳糖40g，硬脂酸镁2g制备工艺：取京尼平苷酸过100目筛，加淀粉、乳糖、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，装胶囊，即得。当前第1页1 2 3