本发明涉及微生物生物制剂，具体的说是一种饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法。
背景技术：
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis), 是芽孢杆菌属的一种，单个细胞0.7～0.8×2～3微米，革兰氏阳性菌，无荚膜，周生鞭毛，能运动。芽孢大，椭圆到柱状，0.6～0.9×1.0～1.5微米，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙，污白色或微黄色，在液体培养时，常形成皱醭。枯草芽孢杆菌具有繁殖速度快、耐高温、耐酸碱、耐挤压、稳定性能好、应用范围广等特点，在现代分子遗传学的科研探索中常作为模式菌株，在现实的生产实践中广泛应用于食品工业、饲料工业、水产养殖、环境保护和保健医药等诸多方面；因此，愈来愈受到科技工作者和企业界人士的重视。
枯草芽孢杆菌菌体及其分泌物中含有丰富的蛋白质、氨基酸、有机酸、维生素、不饱和脂肪酸、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和肽类抗生素等生物活性物质。因此, 在畜禽养殖和水产养殖中均有较高的应用价值。
在以往研究中，科技工作者对枯草芽孢杆菌的分类学地位、生理生化特征、发酵条件及其调控等方面均有深入研究。近年来，对枯草芽孢杆菌应用研究也取得很大的进展。但对饲料用高浓度枯草芽孢杆菌发酵技术报道的并不多，对培养基含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的研制与生产未并见报道。
本发明产品功能是：1.利用芽孢菌产酶能力强的特点，提高饲料利用率；2.芽孢菌进入胃肠后，经过复苏增殖，可消耗肠道氧，有利于乳酸、双歧等厌氧益生菌发挥作用；3.腐植酸钠经微生物发酵后，生物活性增强，对芽孢菌作用具有增效性；4.芽孢菌进入后肠后甚至排除体外后还能发挥作用，可显著改善养殖环境。
培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂产品无毒、无害、无任何副作用，是一种绿色的微生物制剂添加剂，具有广阔的市场前景。
目前,在畜禽养殖和水产养殖中，提高蛋白质利用率，减少抗生素使用是急需解决的问题。而本发明恰恰非常有助于解决上述两个问题或难题。产品已在广东、湖北、江苏、河北、山东、北京、沈阳、大连等地区广泛应用，取得了很好的经济效益和社会效益。
技术实现要素：
本发明目的在于提供一种饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：以枯草芽孢杆菌为菌株, 以葡萄糖、腐植酸钠、豆粕、玉米、麦麸等为主要培养基, 将种子液接种于培养基上进行三级固体有氧发酵，之后调整培养条件进行出芽孢处理，再经干燥, 粉碎, 生产出含枯草芽孢杆菌（cfu）≥210亿个/g，pH值6.0～6.8，水分≤15%, 粒度≥120目, 色泽呈现特有的浅灰色或灰黑色、保质期18个月的生物制剂产品。
一种培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：
1) 单菌落种子纯化与优选：将枯草芽孢杆菌斜面菌种,在盛有细菌培养基的培养皿上涂布，经培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；
2）一级固体种子培养：将步骤1）中得到的单菌落种子接种到200ml茄形瓶，经培养，得到一级固体种子；
3）液体发酵培养二级种子：将步骤2）中得到的茄形瓶种子接种到发酵罐液体培养基中，一个茄形瓶与液体培养基的接种比例为1瓶：200公斤。经培养得到二级液体种子。
4）三级固体发酵料有氧发酵：将步骤3）中得到的二级液体种子接种到固体发酵料中，经通风供氧，发酵培养, 得到经培养的固体发酵料。
5）出芽孢处理：将步骤4）中得到的固体发酵料进行出芽胞处理, 即停止通风供氧，将其摊开、翻倒，降低温度和湿度，促使固体发酵料中含有的枯草芽孢杆菌形成芽孢。
6) 干燥与粉碎处理：对步骤5）得到的形成了芽胞的固体发酵料进行烘干处理，通过粉碎，生产出含枯草芽孢杆菌（cfu）≥210亿个/g的含发酵腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂产品。
8. 按照权利要求6所述的培养方法，其特征在于：步骤5）所述出芽孢处理中：需对经培养的固体发酵料，停止通风供氧，将其摊开、翻倒。
上述步骤5）、6）所述出芽孢处理中：需对经培养的固体发酵料，停止通风供氧，将其摊开、翻倒。
步骤6）将步骤5）所述含有芽胞的固体发酵料进行干燥处理与粉碎，干燥处理条件为：采用干燥炉进行干燥，干燥炉内温度60℃～80℃、干燥炉出口温度38℃～42℃、时间8～10 min；
所采用的固体发酵料出芽孢处理中，需对经培养的固体发酵料停止通风供氧，将其摊开、翻倒。
所述的培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂产品,可作为水产、畜禽养殖中的优质生物饵料添加剂，也可作为海水、淡水的水质净化剂应用。
本发明具有如下优点：
本发明具有菌种选择适当、适应性广、效果可靠、有益于环境等突出的特点。
1．适应性广、应用效果可靠。本发明生产的产品可应用于全价料、浓缩料、预混料等各类饲料生产，也可在养殖场直接添加饲喂，在水产养殖和畜禽养殖中应用广泛。大量的生产实践证明：在海参养殖中应用，可以增强免疫力和抗病力，降低水体中氨氮含量，净化水质, 延长附着基换倒时间5～7天, 提高海参产量10.9%。在蛋禽养殖中应用，可以增强幼禽免疫力，降低死淘率1.8%，提高产蛋率2.02%。在仔猪和育肥猪养殖中应用，可以防治仔猪黄白痢，提高育肥猪增重速度，减少抗生素使用量。
2．改善养殖环境、有益于生态。枯草芽孢杆菌能够广泛利用碳源和氮源，在海参的养殖中，能利用水体小分子含氮化合物、剩余的含氮饵料和海参粪便等，可促进养殖池底有机物含氮化合物的降解，可使水产养殖池水体中的氨氮、硫化氢下降， 使COD、BOD值和pH值等项指标达到正常，净化水质,提高溶解氧，改善养殖环境，提高海参产量。在畜禽养殖中应用，能减轻养殖环境中粪便的氨气味，可以明显改善养殖环境，有益于生态。
3. 培养基中含发酵腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂产品，营养成份全、无毒副作用, 安全性好。在饲料中使用，可增强免疫力, 提高成活率，促进生长发育, 提升畜禽水产品品质。