本发明属于生物制药领域，尤其是一种从蒲公英中提取多糖的方法。
背景技术：
蒲公英是常见的农田杂草，也是重要的中药材，属于国家重要保护品种之一，具有清热、散结和利尿通淋的功效，临床上主要用于治疗乳疮肿毒等症，蒲公英富含甾醇、多糖，大量实验表明，多糖是重要的信息分子，参与许多生理和病理过程，一些天然药物其有效成分多糖有这多种药理活性，在医疗上具有抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、抗辐射、抗突变、降血糖、增强免疫等多方面的作用。
从蒲公英中提取多糖的很多方法提取时间长，提取效率低，且对环境有一定污染。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对当前从蒲公英中提取多糖的方法存在的问题，提供一种从蒲公英中提取多糖的方法。该方法多糖提取率和纯度都得到了很大的提高，该方法具有提取时间短、方法简单、提取率高、质量稳定等优点，适合工业化生产。为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种从蒲公英中提取多糖的方法，包括以下步骤：
(1)材料预处理，将新鲜的蒲公英根洗净，切成小片，60℃干燥至恒重，用粉碎机磨成粉末，过40-60目筛备用；
(2)脱脂，将蒲公英粉末用滤纸包好，放入索氏提取器，40℃石油醚回流脱脂2-3h；
(3)单糖和寡糖的去除，将脱脂后的滤纸包风干，用70-90％乙醇回流，以除去样品中的单糖、寡糖以及其它小分子物质，用蒽酮-浓硫酸法测定回流后样品的总糖含量；
(4)热水浸提，60-80℃，料水比为1：20-1:40，提取时间2-4h，提取1-3次；
(5)浓缩，用旋转蒸发仪对提取液进行浓缩；
(6)脱蛋白，Sevag法，向提取液中加入1/4倍体积的氯仿-正丁醇，3000-4000r/min离心5-10min，中层白色絮状沉淀即为蛋白质，取上清，重复5-6次，至中间无明显沉淀为止；
(7)醇析，脱蛋白后，向提取液中加入80-95％乙醇，3000-4000r/min离心5-10min，沉淀即为粗多糖；
(8)纯化，将粗多糖复溶于水，透析24-36h，用80-95％乙醇沉淀多糖，3000-4000r/min离心5-10min，多糖沉淀分别用无水乙醇、丙酮洗3-5次，真空干燥得精制多糖。
作为进一步方案，步骤(1)中材料预处理中，将蒲公英粉碎至40目。
作为进一步方案，步骤(2)中所述的脱脂回流时间为2.5h。
作为进一步方案，步骤(3)中所述乙醇为80％乙醇。
作为进一步方案，步骤(4)中热水浸提温度为80℃，料水比为1:30，提取时间为3h，提取次数为2次。
作为进一步方案，步骤(6)中离心速度为3500r/min，离心5min，重复5次。
作为进一步方案，步骤(7)乙醇浓度为90％，离心速度为3500r/min，离心5min。
作为进一步方案，步骤(8)透析时间为36h，乙醇浓度为85％，离心速度为3500r/min，离心5min，多糖沉淀分别用无水乙醇、丙酮洗3次，真空干燥得精制多糖。
本发明中的提取方法的提取率和纯度都得到了很大的提高，具有提取时间短、方法简单、提取率高、质量稳定、回收率高等优点。
本发明优点是：
1.本发明中多糖的回收率达到97％以上。
2.本发明的提取方法具有提取时间短、方法简单、提取效率高、质量稳定、回收率高等优点，适合工业化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明
实施例1
一种从蒲公英中提取多糖的方法，包括以下步骤：
(1)称取蒲公英样品100g,干燥,粉碎至一定粒度,40目筛备用；
(2)脱脂，将蒲公英粉末用滤纸包好，放入索氏提取器，40℃石油醚回流脱脂2.5h；
(3)单糖和寡糖的去除，将脱脂后的滤纸包风干，用80％乙醇回流，以除去样品中的单糖、寡糖以及其它小分子物质，用蒽酮-浓硫酸法测定回流后样品的总糖含量；
(4)热水浸提，80℃，料水比为1：30，提取时间3h，提取2次；
(5)浓缩，用旋转蒸发仪对提取液进行浓缩；
(6)脱蛋白，Sevag法，向提取液中加入1/4倍体积的氯仿-正丁醇，3500r/min离心5min，中层白色絮状沉淀即为蛋白质，取上清，重复5次，至中间无明显沉淀为止；
(7)醇析，脱蛋白后，向提取液中加入90％乙醇，3500r/min离心5min，沉淀即为粗多糖；
(8)纯化，将粗多糖复溶于水，透析36h，用85％乙醇沉淀多糖，3500r/min离心5min，多糖沉淀分别用无水乙醇、丙酮洗3次，真空干燥得精制多糖。该法得蒲公英根部多糖占蒲公英根干重的60.08％，多糖的回收率达到97％。
实施例2
一种从蒲公英中提取多糖的方法，包括以下步骤：
(1)称取蒲公英样品100g,干燥,粉碎至一定粒度,40目筛备用；
(2)脱脂，将蒲公英粉末用滤纸包好，放入索氏提取器，40℃石油醚回流脱脂2h；
(3)单糖和寡糖的去除，将脱脂后的滤纸包风干，用70％乙醇回流，以除去样品中的单糖、寡糖以及其它小分子物质，用蒽酮-浓硫酸法测定回流后样品的总糖含量；
(4)热水浸提，60℃，料水比为1：20，提取时间2h，提取2次；
(5)浓缩，用旋转蒸发仪对提取液进行浓缩；
(6)脱蛋白，Sevag法，向提取液中加入1/4倍体积的氯仿-正丁醇，3000r/min离心10min，中层白色絮状沉淀即为蛋白质，取上清，重复5次，至中间无明显沉淀为止；
(7)醇析，脱蛋白后，向提取液中加入80％乙醇，3000r/min离心10min，沉淀即为粗多糖；
(8)纯化，将粗多糖复溶于水，透析24h，用80％乙醇沉淀多糖，3000r/min离心10min，多糖沉淀分别用无水乙醇、丙酮洗3次，真空干燥得精制多糖。该法得蒲公英根部多糖占蒲公英根干重的56.12％，多糖的回收率达到93％。
实施例3
一种从蒲公英中提取多糖的方法，包括以下步骤：
(1)称取蒲公英样品100g,干燥,粉碎至一定粒度,40目筛备用；
(2)脱脂，将蒲公英粉末用滤纸包好，放入索氏提取器，40℃石油醚回流脱脂3h；
(3)单糖和寡糖的去除，将脱脂后的滤纸包风干，用90％乙醇回流，以除去样品中 的单糖、寡糖以及其它小分子物质，用蒽酮-浓硫酸法测定回流后样品的总糖含量；
(4)热水浸提，70℃，料水比为1:40，提取时间4h，提取2次；
(5)浓缩，用旋转蒸发仪对提取液进行浓缩；
(6)脱蛋白，Sevag法，向提取液中加入1/4倍体积的氯仿-正丁醇，4000r/min离心5min，中层白色絮状沉淀即为蛋白质，取上清，重复5次，至中间无明显沉淀为止；
(7)醇析，脱蛋白后，向提取液中加入95％乙醇，4000r/min离心5min，沉淀即为粗多糖；
(8)纯化，将粗多糖复溶于水，透析36h，用95％乙醇沉淀多糖，4000r/min离心5min，多糖沉淀分别用无水乙醇、丙酮洗3次，真空干燥得精制多糖。该法得蒲公英根部多糖占蒲公英根干重的58.26％，多糖的回收率达到90％。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明的技术方案作任何形式上的限制。凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明的技术方案的范围内。