高纯度虾夷扇贝的DNA提取方法与流程

文档序号:12712446阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种高纯度虾夷扇贝的DNA提取方法,其特征在于,步骤如下:

(1)取扇贝肌肉组织3-8克,用液氮研磨后,将粉末平均加入到10-15管装有500μL STE及50μL 10% SDS裂解缓冲液的1.5mL离心管中,随即每管加入5μL 浓度为20mg/mL的蛋白酶K,55-57℃水浴10-60 min,至溶液澄清;

(2)每管加入250μL饱和酚、250μL氯仿/异戊醇(体积比24:1),轻柔晃动5-15min,室温10000-12000 rpm离心8-15min;

(3)离心后有机相位于下层,中间层为蛋白层,上层为溶有DNA的水相,吸取上清液至新离心管中,重复步骤(2),至水相和有机相之间无蛋白层残留;

(4)吸取上清液至新离心管中,加入500μL氯仿/异戊醇,轻柔晃动5-15min,室温10000-12000 rpm离心8-15min;

(5)吸取上清液,加入50μL 3M NaAc,缓慢轻柔摇匀,添加1mL在-20℃预冷的无水乙醇,放置于-20℃冰箱 20-50min,10000-15000rpm 离心8-15min,得到DNA沉淀;

(6)用预冷的 70%乙醇洗涤沉淀1-3次;

(7)沉淀干燥,根据沉淀量多少加入不同量的无菌超纯水及终浓度为0.05mg/mL的RNase A,37℃水浴15-40min,直至RNA全部溶解;

(8)用分光光度计测定DNA的浓度,同时进行琼脂糖电泳检测。

2.根据权利要求1所述的高纯度虾夷扇贝的DNA提取方法,其特征在于,所述STE成分为:100mM NaCl;10mM Tris-Cl,pH8.0;1mM EDTA,pH8.0。

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