本发明涉及一种多肽类药物的制备方法，具体涉及一种艾替班特的制备方法。
背景技术：
遗传性血管水肿(hereditaryangioedema,hae)是一种罕见的常染色体显性遗传病。多数患者的病因是位于染色体11q上的c1酯酶抑制基因发生变异，导致c1酯酶抑制因子减少或功能缺陷。这些抑制因子的作用是调节部分免疫系统和凝血途径的功能，其功能减弱可引起快速而严重的面部或身体其他部位肿胀，从而导致永久性面部损毁、残障或死亡。此外，消化道水肿可以引起剧烈腹痛、恶心和呕吐，而呼吸道水肿则有窒息危险。hae在人群中的发病率为1/150000至1/10000。
醋酸艾替班特，英文名：icatibantacetate，商品名：firazyr，是一种对缓激肽b2受体选择性的竞争性拮抗剂，亲和力与缓激肽相似，主要用于治疗遗传性血管水肿(hae)的急性发作。该药物最初由sanofi开发，2001年11月jerini公司(shire)获得艾替班特的开发权。2008年9月首次在德国和英国上市，2009年3月在欧盟上市，2011年10月在美国上市，其结构式如下：
氨基酸序列：h-d-arg-arg-pro-hyp-gly-thi-ser-d-tic-oic-arg-oh
结构式说明：
1)艾替班特氨基酸序列中hyp代表l-羟脯氨酸，thi代表3-(2-噻吩基)-l-丙氨酸，tic代表1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸，oic代表l-八氢吲哚-2-羧酸；
2)序列中第1位和第8位氨基酸为d-构型，其余氨基酸为l-构型。现有的艾替班特的制备方法仍旧主要沿用1990年左右，由德国赫切斯特股份公司发明的固相合成方法，该方法制得的艾替班特产品纯度低、杂质含量高、收率低，不适合产业化生产，应用价值低。
申请号为201210028377.9专利报道了直接固相合成艾替班特的方法，采用2-氯三苯基氯树脂为起始载体，但由于该树脂在接肽过程中容易发生肽链脱落，直接影响艾替班特的总收率。
申请号为201410209368.9专利报道了一种通过液相合成片段boc-d-arg-arg-oh.2hcl，然后采用固相合成法，以王树脂为起始树脂，按照艾替班特主链肽序依次偶联具有n段fmoc保护且侧链保护的氨基酸，最后两个氨基酸采用偶联上述boc保护的片段。该方法虽然使得粗品肽纯度有一定程度的提高，但合成方法相对复杂，且采用的偶联试剂均为常规偶联试剂，在氨基酸偶联过程中，不能更好地抑制氨基酸的消旋，导致消旋肽杂质d-thi6-艾替班特和d-ser7-艾替班特偏大。
有关杂质d-thi6-艾替班特和d-ser7-艾替班特的氨基酸序列分别如下：
d-thi6-艾替班特：h-d-arg-arg-pro-hyp-gly-d-thi-ser-d-tic-oic-arg-oh
d-ser7-艾替班特：h-d-arg-arg-pro-hyp-gly-thi-d-ser-d-tic-oic-arg-oh
这两个杂质在液相中的保留时间与主峰艾替班特相近，与主峰分离十分困难，该杂质的存在严重影响艾替班特含量以及使用安全。因此迫切需要开发一种可有效抑制氨基酸消旋的艾替班特制备方法，使其消旋肽杂质d-thi6-艾替班特和d-ser7-艾替班特达到优质标准级别0.2％以下。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种合成艾替班特的方法，该方法即可显著提高艾替班特的收率，又可降低消旋肽杂质d-thi6-艾替班特和d-ser7-艾替班特的生成。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种合成艾替班特的方法，包括以下步骤：
步骤1、采用固相合成法，在偶联试剂和有机溶剂存在下，以x-arg(pbf)-wang树脂为起始树脂，按照艾替班特氨基酸序列，逐一延伸偶联具有n端保护的氨基酸，每次延伸偶联后均得到对应的树脂肽，最终合成得到艾替班特-wang树脂肽。
步骤2、将艾替班特-wang树脂肽裂解得到艾替班特。
其中，步骤1中所述x是氨基酸n端保护基，优选fmoc。
步骤1中每次延伸偶联时，所述n端保护的氨基酸和对应树脂肽的摩尔比为3-5:1，优选3:1。
步骤1中所述n端保护的氨基酸是指具有n端fmoc保护的氨基酸，优选具有n端fmoc保护且侧链保护的氨基酸，更优选fmoc-oic-oh、fmoc-d-tic-oh、fmoc-ser(tbu)-oh、fmoc-thi-oh、fmoc-gly-oh、fmoc-hyp(tbu)-oh、fmoc-pro-oh、fmoc-arg(pbf)-oh、fmoc-d-arg(pbf)-oh。
步骤1中所述偶联试剂为2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯或2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯与n,n’-二异丙基乙胺(dipea)的混合物。
步骤1中所述偶联试剂和对应树脂肽的摩尔比为3～5:1，优选3:1。
步骤1中所述有机溶剂为二甲基甲酰胺(dmf)、二甲基乙酰胺(dmac)或其混合溶剂，优选dmf。
步骤1中所述树脂肽在参与偶联反应前，需先进行脱保护，优选在六氢吡啶/dmf混合溶液中进行脱保护，更优选在20％六氢吡啶/dmf混合溶液进行脱保护。脱保护反应的温度一般为20℃～40℃，优选27℃～33℃。
步骤1中所述偶联反应均以茚三酮检测阴性为反应终点。
步骤2中所述裂解是采用由三氟乙酸(tfa)、三异丙基硅烷(tis)、余量为水组成的混合酸解液；优选由体积百分比为90-97％的三氟乙酸(tfa)、体积百分比为1-5％的三异丙基硅烷(tis)、余量为水组成的混合酸解液酸解；更优选采用由体积百分比为95％的三氟乙酸(tfa)、体积百分比为2.5％的三异丙基硅烷(tis)、余量为水组成的混合酸解液。
所述混合酸解液用量为每克艾替班特树脂需要10ml～20ml，优选15ml～20ml。
所述裂解的时间优选为室温条件下1～6小时，更优选为3～4小时。
进一步地，本发明所述合成艾替班特的方法，还包括将艾替班特进行纯化、换盐、冻干的步骤。
其中，所述纯化采用高效液相色谱纯化，具体为高效液相色谱的色谱填料为10μm的反相c18，流动相为0.01mol/l磷酸二氢钠缓冲液(ph3.0)-乙腈溶液，流速为280ml/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化。
所述换盐采用高效液相色谱换盐，具体为高效液相色谱法的色谱填料为10μm的反相c18，流动相为0.1％乙酸水溶液-乙腈-0.1mol/l乙酸铵水溶液，流速为300ml/min，采用梯度洗脱，循环上样方法。
本发明的另一目的在于提供一种偶合试剂2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯的制备方法。
2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯的结构式如下：
本发明所述偶合试剂2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯的制备方法，包括，在卤代烃作反应溶剂，叔胺作碱条件下，将2-肟氰乙酸乙酯与2-硝基苯磺酰氯反应制得。
其中，所述卤代烃选自二氯甲烷、三氯甲烷或1,2-二氯乙烷，优选二氯甲烷。
所述叔胺选自三乙胺、吡啶、n,n’-二异丙基乙胺(dipea)、4-二甲氨基吡啶(dmap)，优选n,n’-二异丙基乙胺。
所述2-肟氰乙酸乙酯与2-硝基苯磺酰氯的摩尔比为1:1.0～1.2，优选1:1.05～1.10。
所述2-肟氰乙酸乙酯与叔胺的摩尔比为1:1.0～1.3，优选1:1.1～1.2。
本发明所述2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯偶合试剂的制备方法，包括将2-肟氰乙酸乙酯溶于二氯甲烷，降温至-10℃～0℃，加入dipea；然后在0℃以下，将2-硝基苯磺酰氯的二氯甲烷溶液滴加至上述溶液中，滴毕，室温反应1～6小时，二氯甲烷/正己烷(2:1)混合液重结晶。
本发明的有益效果如下：
1)可显著提高艾替班特的收率，收率达到70％以上。
2)可有效降低消旋肽杂质d-thi6-艾替班特和d-ser7-艾替班特的产生，使其控制在0.2％以下。
3)偶合试剂2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯安全高效，使用后可再生利用，绿色环保，环境友好。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明，但决非限制本发明，本发明也并非仅局限于实施例的内容。
在本发明具体实施方式中，所述2-肟氰乙酸乙酯和2-硝基苯磺酰氯购自于国药医药集团，所用氨基酸购自于苏州天马生物有限公司，所用树脂购自于天津南开和成有限公司。
说明书和权利要求书中所用英文缩写对应的中文含义见表1。
表1英文缩写释义
实施例1：偶合试剂2-氰基-2-(2-硝基苯磺酰氧亚胺)乙酸乙酯(o-nosyloxy)的合成
称取56.8g2-肟氰乙酸乙酯(0.4mol)加入到盛有600ml二氯甲烷的2l三口瓶中，氮气保护下开启搅拌，降温至-10℃～0℃，加入56.8gdipea(0.44mol)。称取92.6g2-硝基苯磺酰氯(0.42mol)，用200ml二氯甲烷溶解，然后控温在0℃以下，将其缓慢滴加至上述溶液中，滴毕，转至室温，继续搅拌反应1小时，tlc检测反应完全(展开剂：正己烷/乙酸乙酯＝2:1)，饱和食盐水洗3次(500ml*3次)，有机层用无水硫酸钠干燥2小时，过滤，滤液旋干，二氯甲烷/正己烷(2:1) 混合液重结晶，过滤得白色固体82g，产率144％。
实施例2：树脂肽2的合成(fmoc-oic-oh偶联)
称10gfmoc-arg(pbf)-wangresin(取代度0.5mmol/g)投入到500ml玻璃反应瓶中，加入100mldmf，溶胀树脂，氮气鼓泡30～35分钟，抽干溶剂。向玻璃反应瓶中加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应5～6分钟，抽干溶剂，再加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应20～25分钟，抽干溶剂，脱保护反应过程中水浴温度控制在27℃～33℃。反应结束后向玻璃反应瓶中加入100mldmf，氮气鼓泡下洗涤4～5分钟，抽干溶剂并将此步骤再重复三次。取样进行茚三酮法检测，树脂呈蓝色。
称6.22gfmoc-oic-oh、5.25go-nosyloxy和3.4gdipea，用100mldmf溶解，于室温环境中搅拌反应20分钟，得到活化后的氨基酸溶液，将上述活化液加入到玻璃反应瓶中，氮气鼓泡下反应1.5-2小时。茚三酮法检测反应终点，树脂不变色即视为偶合完全。反应结束后，抽干溶剂，树脂依次用100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100mldmf、100mldmf洗涤。每次洗涤，保持氮气鼓泡4～5分钟后再抽干溶剂。洗涤完毕后得树脂肽2，fmoc-oic-arg(pbf)-wang树脂。
实施例3：树脂肽3的合成(fmoc-d-tic-oh偶联)
向盛放有树脂肽2的玻璃反应瓶中加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应5～6分钟，抽干溶剂，再加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应20～25分钟，抽干溶剂，脱保护反应过程中水浴温度控制在27℃～33℃。反应结束后向玻璃反应瓶中加入100mldmf，氮气鼓泡下洗涤4～5分钟，抽干溶剂并将此步骤再重复三次。取样进行二级胺法检测，树脂呈蓝色。
称6.35gfmoc-d-tic-oh、5.25go-nosyloxy和3.4gdipea，用100mldmf溶解，于室温环境中搅拌反应20分钟，得到活化后的氨基酸溶液，将上述活化液加入到玻璃反应瓶中，氮气鼓泡下反应2-2.5小时。二级胺法检测反应终点，树脂不变色即视为偶合完全。反应结束后，抽干溶剂，树脂依次用100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100mldmf、100mldmf洗涤。每次洗涤，保持氮气鼓泡4～5分钟后再抽干溶剂。洗涤完毕后得树脂肽3，fmoc-d-tic-oic-arg(pbf)-wang树脂。
实施例4：树脂肽4的合成(fmoc-ser(tbu)-oh偶联)
向盛放有树脂肽3的玻璃反应瓶中加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应5～6分钟，抽干溶剂，再加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应20～25分钟，抽干溶剂，脱保护反应过程中水浴温度控制在27℃～33℃。反应结束后向玻璃反应瓶中加入100mldmf，氮气鼓泡下洗涤4～5分钟，抽干溶剂并将此步骤再重复三次。取样进行二级胺法检测，树脂呈蓝色。
称6.10gfmoc-ser(tbu)-oh、5.25go-nosyloxy和3.4gdipea，用100mldmf溶解，于室温环境中搅拌反应20分钟，得到活化后的氨基酸溶液，将上述活化液加入到玻璃反应瓶中，氮气鼓泡下反应2-2.5小时。二级胺法检测反应终点，树脂不变色即视为偶合完全。反应结束后，抽干溶剂，树脂依次用100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100mldmf、100mldmf洗涤。每次洗涤，保持氮气鼓泡4～5分钟后再抽干溶剂。洗涤完毕后得树脂肽4，fmoc-ser(tbu)-d-tic-oic-arg(pbf)-wang树脂。
实施例5：树脂肽5的合成(fmoc-thi-oh偶联)
向盛放有树脂肽4的玻璃反应瓶中加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应5～6分钟，抽干溶剂，再加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应20～25分钟，抽干溶剂，脱保护反应过程中水浴温度控制在27℃～33℃。反应结束后向玻璃反应瓶中加入100mldmf，氮气鼓泡下洗涤4～5分钟，抽干溶剂并将此步骤再重复三次。取样进行茚三酮法检测，树脂呈蓝色。
称6.26gfmoc-thi-oh、5.25go-nosyloxy和3.4gdipea，用100mldmf溶解，于室温环境中搅拌反应20分钟，得到活化后的氨基酸溶液，将上述活化液加入到玻璃反应瓶中，氮气鼓泡下反应1.5-2小时。茚三酮法检测反应终点，树脂不变色即视为偶合完全。反应结束后，抽干溶剂，树脂依次用100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100mldmf、100mldmf洗涤。每次洗涤，保持氮气鼓泡4～5分钟后再抽干溶剂。洗涤完毕后得树脂肽5，fmoc-thi-ser(tbu)-d-tic-oic-arg(pbf)-wang树脂。
实施例6：树脂肽6的合成(fmoc-gly-oh偶联)
向盛放有树脂肽5的玻璃反应瓶中加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应5～6分钟，抽干溶剂，再加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶 液，氮气鼓泡下反应20～25分钟，抽干溶剂，脱保护反应过程中水浴温度控制在27℃～33℃。反应结束后向玻璃反应瓶中加入100mldmf，氮气鼓泡下洗涤4～5分钟，抽干溶剂并将此步骤再重复三次。取样进行茚三酮法检测，树脂呈蓝色。
称4.73gfmoc-gly-oh、5.25go-nosyloxy和3.4gdipea，用100mldmf溶解，于室温环境中搅拌反应20分钟，得到活化后的氨基酸溶液，将上述活化液加入到玻璃反应瓶中，氮气鼓泡下反应1.5-2小时。茚三酮法检测反应终点，树脂不变色即视为偶合完全。反应结束后，抽干溶剂，树脂依次用100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100mldmf、100mldmf洗涤。每次洗涤，保持氮气鼓泡4～5分钟后再抽干溶剂。洗涤完毕后得树脂肽6，fmoc-gly-thi-ser(tbu)-d-tic-oic-arg(pbf)-wang树脂。
实施例7：树脂肽7的合成(fmoc-hyp(tbu)-oh偶联)
向盛放有树脂肽6的玻璃反应瓶中加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应5～6分钟，抽干溶剂，再加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应20～25分钟，抽干溶剂，脱保护反应过程中水浴温度控制在27℃～33℃。反应结束后向玻璃反应瓶中加入100mldmf，氮气鼓泡下洗涤4～5分钟，抽干溶剂并将此步骤再重复三次。取样进行茚三酮法检测，树脂呈蓝色。
称6.51gfmoc-hyp(tbu)-oh、5.25go-nosyloxy和3.4gdipea，用100mldmf溶解，于室温环境中搅拌反应20分钟，得到活化后的氨基酸溶液，将上述活化液加入到玻璃反应瓶中，氮气鼓泡下反应1.5-2小时。茚三酮法检测反应终点，树脂不变色即视为偶合完全。反应结束后，抽干溶剂，树脂依次用100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100mldmf、100mldmf洗涤。每次洗涤，保持氮气鼓泡4～5分钟后再抽干溶剂。洗涤完毕后得树脂肽7，fmoc-hyp(tbu)-gly-thi-ser(tbu)-d-tic-oic-arg(pbf)-wang树脂。
实施例8：树脂肽8的合成(fmoc-pro-oh偶联)
向盛放有树脂肽7的玻璃反应瓶中加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应5～6分钟，抽干溶剂，再加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应20～25分钟，抽干溶剂，脱保护反应过程中水浴温度控制在27℃～33℃。反应结束后向玻璃反应瓶中加入100mldmf，氮气鼓泡下洗涤4～5分钟，抽干溶剂并将此步骤再重复三次。取样进行二级胺法检测，树脂呈蓝色。
称5.36gfmoc-pro-oh、5.25go-nosyloxy和3.4gdipea，用100mldmf溶解，于室温环境中搅拌反应20分钟，得到活化后的氨基酸溶液，将上述活化液加入到玻璃反应瓶中，氮气鼓泡下反应1.5-2小时。二级胺法检测反应终点，树脂不变色即视为偶合完全。反应结束后，抽干溶剂，树脂依次用100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100mldmf、100mldmf洗涤。每次洗涤，保持氮气鼓泡4～5分钟后再抽干溶剂。洗涤完毕后得树脂肽8，fmoc-pro-hyp(tbu)-gly-thi-ser(tbu)-d-tic-oic-arg(pbf)-wang树脂。
实施例9：树脂肽9的合成(fmoc-arg(pbf)-oh偶联)
向盛放有树脂肽8的玻璃反应瓶中加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应5～6分钟，抽干溶剂，再加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应20～25分钟，抽干溶剂，脱保护反应过程中水浴温度控制在27℃～33℃。反应结束后向玻璃反应瓶中加入100mldmf，氮气鼓泡下洗涤4～5分钟，抽干溶剂并将此步骤再重复三次。取样进行二级胺法检测，树脂呈蓝色。
称10.32gfmoc-arg(pbf)-oh、5.25go-nosyloxy和3.4gdipea，用100mldmf溶解，于室温环境中搅拌反应20分钟，得到活化后的氨基酸溶液，将上述活化液加入到玻璃反应瓶中，氮气鼓泡下反应1.5-2小时。二级胺法检测反应终点，树脂不变色即视为偶合完全。反应结束后，抽干溶剂，树脂依次用100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100mldmf、100mldmf洗涤。每次洗涤，保持氮气鼓泡4～5分钟后再抽干溶剂。洗涤完毕后得树脂肽9，fmoc-arg(pbf)-pro-hyp(tbu)-gly-thi-ser(tbu)-d-tic-oic-arg(pbf)-wang树脂。
实施例10：树脂肽10的合成(fmoc-d-arg(pbf)-oh偶联)
向盛放有树脂肽9的玻璃反应瓶中加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应5～6分钟，抽干溶剂，再加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应20～25分钟，抽干溶剂，脱保护反应过程中水浴温度控制在27℃～33℃。反应结束后向玻璃反应瓶中加入100mldmf，氮气鼓泡下洗涤4～5分钟，抽干溶剂并将此步骤再重复三次。取样进行茚三酮法检测，树脂呈蓝色。
称10.32gfmoc-d-arg(pbf)-oh、5.25go-nosyloxy和3.4gdipea，用100mldmf溶解，于室温环境中搅拌反应20分钟，得到活化后的氨基酸溶液，将上述活化液加入到玻璃反应瓶中，氮气鼓泡下反应1.5-2小时。茚三酮法检测反应终 点，树脂不变色即视为偶合完全。反应结束后，抽干溶剂，树脂依次用100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100ml异丙醇、100mldmf、100mldmf、100mldmf洗涤。每次洗涤，保持氮气鼓泡4～5分钟后再抽干溶剂。洗涤完毕后得树脂肽10，fmoc-d-arg(pbf)-arg(pbf)-pro-hyp(tbu)-gly-thi-ser(tbu)-d-tic-oic-arg(pbf)-wang树脂。
实施例11：艾替班特树脂肽的合成
向盛放有树脂肽10的玻璃反应瓶中加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应5～6分钟，抽干溶剂，再加入100ml20％六氢吡啶/dmf混合溶液，氮气鼓泡下反应20～25分钟，抽干溶剂，向反应器中加入100mldmf，氮气鼓泡下洗涤4～5分钟，抽干溶剂并将此步骤再重复三次。取样进行茚三酮法检测，茚三酮检测试剂呈蓝色。再向反应瓶中加入100ml无水乙醚，氮气鼓泡下洗涤4～5分钟，抽干溶剂，将此步骤再重复三次，得艾替班特树脂肽。
实施例12：艾替班特粗品的合成
取实施例11制得的艾替班特树脂肽，加入体积百分比为95％的tfa、体积百分比为2.5％的tis、余量为水组成的混合酸解液(混合酸解液15ml/g艾替班特树脂)，搅拌均匀，室温搅拌反应3小时，反应混合物使用砂芯漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量tfa洗涤3次，合并滤液后，控温在0℃以下，滴加至1.5l无水乙醚中，滴毕，转至室温，静止沉淀过夜，抽干，固体用无水乙醚洗涤，得类白色粉末即为艾替班特粗品，粗品纯度81.7％，其中，消旋肽杂质d-thi6-艾替班特含量0.03％、d-ser7-艾替班特含量0.02％。
实施例13：艾替班特粗品纯化
将制得的艾替班特粗品10g溶解后配制成约20mg/ml的乙腈和水的混合液(乙腈:水＝15:85，v:v)，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；
采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相c18，流动相系统为0.01mol/l磷酸二氢钠缓冲液(ph3.0)-乙腈溶液，100mm*250mm的色谱柱流速为280ml/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得艾替班特纯化中间体浓缩液。
取艾替班特纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；
采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为0.1％乙酸水溶液-乙腈-0.1mol/l乙酸铵水溶液，色谱填料为10μm的反相c18，100mm*250mm的色谱柱流速为300ml/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，取滤膜过滤后的样品上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到艾替班特醋酸水溶液，冷冻干燥，得艾替班特纯品7.5g，收率为75％，分子量：653.25(100％[m+2h]2+)，纯度：99.7％，最大单杂0.05％。