本发明涉及药物领域，具体的，本发明涉及一类新的肽骨架中含有一个哌啶或哌嗪环的二肽类化合物、其制备方法和应用，以及所述化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
无论是在发达国家还是发展中国家，癌症都是死亡率最高的疾病之一，而发展中国家由于其不同的饮食生活习惯和较差的医疗卫生条件，无论是患病人数、死亡人数还是死亡率均要高于发达国家。在中国，2015年预计有429.2万新增肿瘤病例以及281.4万的死亡病例，各种肿瘤的发病率和死亡率持续攀升，肿瘤的治疗面临着极大的挑战(ca-cancer.j.clin.2016,66,115-132)。居高不下的肿瘤发病率和死亡率，也为肿瘤治疗药物提供了广阔的市场空间，2014年全球的抗肿瘤药物市场规模已经达到了600亿美元。在未来，这个市场还会继续扩大。我国的抗肿瘤药物研发，不仅关乎着国内巨大的市场及产生的经济价值，还具有极大的社会价值，开发新型、低毒、高效的抗肿瘤药物关系民生，意义重大。
蛋白酶体是一个真核细胞内广泛分布的巨型蛋白质复合物，具有多种蛋白质水解功能，在细胞内的主要作用是降解细胞不需要的或错误折叠的蛋白质。蛋白酶体参与细胞周期调控、细胞凋亡、细胞信号转导、dna修复及多种生理功能，对细胞生长、发育起到重要的作用。蛋白酶体通过调控影响细胞信号通路的关键蛋白(如p53,nf-κb)的水平，进而对各种生命活动发挥调节作用，而很多这些调节蛋白(如细胞周期蛋白)在肿瘤的发生生长过程中都发挥着重要作用。蛋白酶体抑制剂通过抑制蛋白酶体活性，影响细胞内多个周期蛋白的降解，促进细胞凋亡。
蛋白酶体抑制剂大多具有短肽结构的特征。目前，已有三个短肽类小分子蛋白酶体抑制剂被fda批准上市，用于多发性骨髓瘤的治疗，分别是硼酸(酯)肽类化合物bortezomib、ixazomib以及环氧酮肽类化合物carfilzomib，这更加验证了蛋白酶体作为肿瘤治疗靶点的正确性。
硼酸肽和环氧酮肽类蛋白酶体抑制剂有个共同特征，都属于共价结合抑制剂，通过其结构中羧基末端的亲电基团与蛋白酶体发生可逆或不可逆的结合抑制蛋白酶体活性而发挥抗肿瘤作用。而正是因为这种独特的共价结合作用，使得这类抑制剂毒副作用较大。而非共价结合抑制剂主要通过氢键等非共价键与蛋白酶体结合，配体与靶蛋白之间有更快的结合与分离速度，并且具有更好的组织分布特性，有希望在治疗多发性骨髓瘤的同时，在实体瘤上也有更好的应用。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是：设计并合成了一系列结构全新的非共价小分子短肽类蛋白酶体抑制剂，以肽骨架结构中并入哌啶或哌嗪环作为其结构特点，并对该类化合物进行了分子及细胞水平的蛋白酶体活性抑制评价及对肿瘤细胞的增值抑制活性评价。结果表明，该类化合物具有比共价结合抑制剂更强的蛋白酶体抑制活性及细胞增殖抑制活性，是极具前景的新型蛋白酶体抑制剂，有望为癌症治疗药物提供了新的选择。
术语定义：
本发明所用术语“芳基”是指5到12个碳原子的全碳单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电子系统。芳环的非限制性实例有：苯环、萘环和蒽环。芳环可以是取代或无取代的。芳环的取代基选自卤素、硝基、氨基、氰基、c1-c4烷基、卤代的c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4烷胺基、卤代的c1-c4烷氧基、卤代的c1-c4烷胺基。
本发明所用术语“杂芳基”指5到12个环原子的不饱和的碳环，其中一个或多个碳被杂原子例如氧、氮、硫等置换。杂芳环可以是单环，也可以是双环，即通过两个环稠合而成。具体的杂环芳基可以是：吡啶基，嘧啶基，吡嗪基，哒嗪基，异恶唑基，异噻唑基、吡唑基、噻唑基、恶唑基和咪唑基等。杂环芳基可以是取代或无取代的。杂环芳基的取代基可以选自卤素、硝基、氨基、氰基、c1-c4烷基、卤代的c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4烷胺基、卤代的c1-c4烷氧基、卤代的c1-c4烷胺基。
本发明所用术语“杂环基”指单环或稠合环基团，在环中具有5到9个环原子，其中至少一个或两个环原子是选自n、o、s(o)m(其中m是0至2的整数)的杂原子，其余环原子是c。这些环可以具有一条或多条双键，但这些环不具有完全共轭的π电子系统。杂环烷基可以是取代或无取代的。无取代的杂环烷基的可以是吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。杂环可以是取代或无取代的。杂环的取代基选自卤素、硝基、氨基、氰基、c1-c4烷基、卤代的c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4烷胺基、卤代的c1-c4烷氧基、卤代的c1-c4烷胺基。
本发明所用术语“环烷基”是指具有3-8个碳原子的饱和单环碳环。“环烷基”包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。“环烷基”还包括取代环烷基。所述的环烷基还可任选在任何可利用碳上被一个或多个取代基取代，所述的取代基选自烷氧基、卤素和卤代烷基，如全氟烷基等。
本发明所用术语“烷氧基”是指-o-烷基基团。本发明所用“烷氧基”的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基和叔丁氧基。“烷氧基”还包括取代烷氧基。烷氧基可任选被卤素取代一次或多次。
本发明所用术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘，优选为氟或氯。
本发明的目的是提供一种新的、具有通式(ⅰ)结构的六元杂环构建的二肽化合物:
其中：
r1，r2，r3各自独立选自h，c1-6烷基-d-ra，卤代的c1-6烷基-d-ra，芳基，烷芳基，杂芳基，烷杂芳基，其中，d选自o,s,n(rb)(rc),con(rd),n(rd)co,csn(rd),n(rd)cs或缺失；
ra选自h，c1-6烷基，卤代的c1-6烷基，芳基，芳烷基，烷芳基，杂芳基，杂芳烷基或缺失；
rb，rc，rd各自独立选自h，oh，c1-6烷基，卤代的c1-6烷基和n末端保护基；
r4，r5各自独立选自h，oh，c1-6烷基，卤代的c1-6烷基，芳烷基；
r6选自c1-6烷基，卤代的c1-6烷基，碳环基，杂环基，芳基，c1-6芳烷基，c1-6烷芳基，杂芳基，c1-6杂芳烷基，所述r6中的上述基团可以分别独立地被卤素，硝基，氨基，氰基，c1-6烷基，卤代的c1-6烷基，c1-6烷氧基，卤代的c1-6烷氧基任意取代；
x为c或n；
l选自
b1和b2相同或不同，分别独立选自o，s，n(rf)，c(rg)(rh)或缺失，其中rf，rg和rh分别独立选自h，c1-6烷基，卤代的c1-6烷基，c1-6烷氧基，卤代的c1-6烷氧基，rf，rg和rh相同或不同；
b选自
r7选自h，c1-6烷基，c1-6烯基，c1-6炔基，碳环基，杂环基，芳基，c1-6芳烷基，杂芳基，c1-6杂芳烷基，这些基团可以被卤素，硝基，氨基，氰基，c1-6烷基，卤代的c1-6烷基，c1-6烷氧基及卤代的c1-6烷氧基任意取代。
优选的，b1和b2分别独立选自o，s，n(rf)或者是缺失；
rf选自h，c1-6烷基，卤代的c1-6烷基，c1-6烷氧基，卤代的c1-6烷氧基；
b选自
l选自
r6选自芳基，c1-6烷芳基，杂芳基，c1-6烷杂芳基，所述的芳基，c1-6烷芳基，杂芳基，c1-6烷杂芳基可以分别独立地被卤素，硝基，氨基，氰基，c1-6烷基，卤代的c1-6烷基，c1-6烷氧基及卤代的c1-6烷氧基任意取代。
更优选的，所述的b1和b2分别独立选自n(rf)或者是缺失；
b选自
r6选自芳基或杂芳基。
优选的，所述的芳基选自苯基，萘基，蒽基；
c1-6烷基选自甲基，乙基，丙基，异丙基，正丁基，异丁基，叔丁基，正戊基，异戊基，新戊基，正己烷；
碳环基选自环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基；
杂环基选自四氢呋喃，哌啶，哌嗪；
杂芳基选自呋喃，噻吩，恶唑，异恶唑，噻唑，噻二唑，吡咯，吡唑，吡啶，吡嗪，哒嗪，嘧啶，苯并噻唑，苯并呋喃，吲哚，喹啉，异喹啉，嘌呤。
更具体地，本发明具有通式(ⅰ)结构的优选化合物为：
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺(ex.27)；
n-[4-(吡嗪-2-基甲酰胺基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺(ex.28)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(phe-hphe)-2-氯苄胺(ex.29)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(leu-hphe)-2-氯苄胺(ex.30)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(ala-hphe)-2-氯苄胺(ex.31)；
n-[4-(苯胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺(ex.32)；
n-[4-(4-氟苯胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺(ex.33)；
n-[4-(4-甲氧基苯胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺(ex.34)；
n-[4-(吡啶-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺(ex.35)；
n-[1-(吡嗪-2-甲酰基)哌啶-4-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺(ex.36)；
n-[1-(4-氟苯甲酰基)哌啶-4-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺(ex.37)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-leu]-2-氯苄胺(ex.38)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-phe]-2-氯苄胺(ex.39)；
n-[4-(吡嗪-2-甲酰基)哌嗪-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺(ex.40)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2,4-二氟苄胺(ex.41)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[hphe-asp(4-新戊酰胺)]-2-氯苄胺(ex.42)；
n-[4-(吡啶-3-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-cys(s-bn)]-2-氯苄胺(ex.43)；
n-[4-(吡啶-3-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺(ex.44)；
n-[4-(噻唑-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺(ex.45)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氟苄胺(ex.46)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-4-氯苄胺(ex.47)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-4-氟苄胺(ex.48)；
n-[4-(吡嗪-2-甲酰基)哌嗪-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺(ex.49)；
n-[1-(吡嗪-2-甲酰基)哌啶-4-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺(ex.50)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-ala]-2-氯苄胺(ex.51)；
n-[4-(吡嗪-2-基甲酰胺基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺(ex.52)；
n-[4-(吡嗪-2-甲酰基)哌嗪-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-leu]-2-氯苄胺(ex.53)；
n-[4-(噻唑-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺(ex.54)；
n-[4-(吡啶-3-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺(ex.55)；
n-[4-(4-甲氧基苯胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺(ex.56)；
n-[4-(4-三氟甲基苯胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺(ex.57)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-4-氯苄胺(ex.58)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[glu(4-叔丁酰胺)-hphe]-2-氯苄胺(ex.59)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[tyr(o-tbu)-hphe)]-2-氯苄胺(ex.60)；
n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-cys(s-bn)]-2-氯苄胺(ex.61)。
注：hphe:高苯丙氨酸；phe:苯丙氨酸；leu:亮氨酸；ala:丙氨酸；asp:天冬氨酸；cys:半胱氨酸；glu:谷氨酸；tyr:酪氨酸
本发明的另一个目的是提供上述目标化合物的制备方法，通过以下步骤实现：
(1)氨基boc保护的化合物a与化合物b在缩合试剂作用下反应得化合物c，选用的缩合试剂有二环己基碳二亚胺/4-二甲氨基吡啶、二环己基碳二亚胺/1-羟基苯并三氮唑、n-(3-二甲氨基丙基)-n’-乙基碳二亚胺盐酸盐/1-羟基苯并三氮唑。反应温度0-50℃，反应时间2-8小时，粗产品可直接用于下步反应。
(2)化合物c在酸性条件下脱去boc保护基生产化合物d，选用酸性条件为hcl的乙醚溶液，hcl的乙酸乙酯溶液，hcl的甲醇溶液，hcl的二氧六环溶液和三氟乙酸。反应温度-10-40℃，反应时间0.5-3小时。所得粗产品直接用于下步反应。
(3)化合物d与化合物e在缩合试剂作用下反应得化合物i，选用缩合试剂同步骤(1)，所得粗产品经柱层析分离得纯品。
反应式：
其中：r1，r2，r3各自独立选自h，c1-6烷基-d-ra，卤代的c1-6烷基-d-ra，芳基，烷芳基，杂芳基，烷杂芳基，其中，d选自o,s,n(rb)(rc),con(rd),n(rd)co,csn(rd),n(rd)cs或缺失；
ra选自h，c1-6烷基，卤代的c1-6烷基，芳基，芳烷基，烷芳基，杂芳基，杂芳烷基或缺失；
rb，rc，rd各自独立选自h，oh，c1-6烷基，卤代的c1-6烷基和n末端保护基；
r4，r5各自独立选自h，oh，c1-6烷基，卤代的c1-6烷基，芳烷基；
r6选自c1-6烷基，卤代的c1-6烷基，碳环基，杂环基，芳基，c1-6芳烷基，c1-6烷芳基，杂芳基，c1-6杂芳烷基，所述r6中的上述基团可以分别独立地被卤素，硝基，氨基，氰基，c1-6烷基，卤代的c1-6烷基，c1-6烷氧基，卤代的c1-6烷氧基任意取代。
本发明的另一目的是提供一种药物组合物，所述药物组合物包含至少一种如前所述任意一种形式的化合物，所述化合物的立体异构体或可药用的盐作为活性组分，并包含一种或更多种可药用的载体或赋形剂。
本发明所述的药物组合物可以制成各种药用剂型，例如口服、注射、吸入、植入等给药方式。优选注射给药和口服给药方式，例如注射剂、冻干粉针剂、片剂、胶囊或颗粒剂等。
本发明的药物组合物和该组合物的各种制剂可使用常规的药用载体制备。
本发明的另一目的是提供了通式(i)化合物和含有所述化合物的药物组合物的药用用途。即本发明提供了通式(i)化合物和含有该化合物的药物组合物在制备治疗恶性肿瘤瘤、神经退行性疾病或免疫性疾病的药物中的应用。
进一步的，所述的肿瘤选自骨髓瘤，淋巴瘤，白血病，巨球蛋白血症，乳腺癌，肉瘤，肺癌，前列腺癌，结肠癌，直肠癌，肾癌，胰腺癌，成神经细胞瘤，神经胶质瘤，头癌，颈癌，甲状腺癌，肝癌，卵巢癌，外阴癌，子宫颈癌，子宫内膜癌，睾丸癌，膀胱癌，食管癌，胃癌，鼻咽癌，颊癌，口腔癌，胃肠道间质瘤，皮肤癌。
实验证明，本发明的六元杂环构建的短肽非共价类化合物具有很好的蛋白酶体抑制活性，对rpmi8226、h929、mm-1s等多发性骨髓瘤细胞株有极强的体外增殖抑制作用。本发明化合物的合成所需原料易得，路线设计合理，反应条件温和，各步产率高，操作简便，适合工业化生产。
附图说明
图1是部分化合物对血细胞蛋白酶体的抑制活性图。
具体实施方式
本发明结合实施例作进一步的说明，以下实施例仅是说明本发明，而不是以任何方式限制本发明。
实施例11-(吡嗪-2-酰基)哌啶-4-甲酸的制备
吡嗪-2-羧酸(1.5g，12mmol)溶于40ml无水二氯甲烷，加入hobt(1.6g，12mmol)和edci(3.5g，18mmol)，室温反应半小时。随即，化合物1(1.4g，10mmol)和二异丙基乙胺(3.6ml，20mmol)加入反应液，室温反应3小时。加入30ml饱和碳酸氢钠稀释，分出有机层，无水硫酸钠干燥，回收溶剂，柱层析分离得2.3g白色固体5，收率92％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝8.88(d,1h,j＝1.0hz,pyrazine-h),8.61(d,1h,j＝2.5hz,pyrazine-h),8.52(s,1h,pyrazine-h),4.51(m,1h,ch2),3.91(m,1h,ch2),3.70(s,3h,ch3),3.20(m,1h,ch2),3.09(m,1h,ch2),2.62(m,1h,ch),2.04(m,1h,ch2),1.91(m,1h,ch2),1.81(m,2h,ch2)；esi-ms:m/z＝250[m+h]+.
化合物5(1.3g，5mmol)溶于10ml丙酮，逐滴加入20ml氢氧化锂水溶液(0.5n)，室温反应0.5h。减压蒸除丙酮，水溶液以1nhcl调ph至2～3，乙酸乙酯(20ml×3)提取，合并有机层，无水硫酸钠干燥后减压蒸除溶剂，得白色固体15，直接用于下步反应。
实施例21-(4-氟苯甲酰基)哌啶-4-甲酸的制备
化合物6的合成：以4-氟苯甲酸为原料，合成及后处理同实施例1，得白色固体2.3g，收率87％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.41(dd,2h,j＝8.5,5.5hz,ar-h),7.10(t,2h,j＝8.5hz,ar-h),4.48(m,1h,ch2),3.80(m,1h,ch2),3.72(s,3h,ch3),3.06(m,2h,ch2),2.61(m,1h,ch),1.96(m,2h,ch2),1.74(m,2h,ch2)；esi-ms:m/z＝266[m+h]+.
化合物16的合成及后处理同实施例1，得白色固体16，直接用于下步反应。
实施例34-(吡嗪-2-甲酰胺基)哌啶的制备
化合物7的合成：以4-氨基-1-boc-哌啶为原料，合成及后处理同实施例1，得白色固体2.7g，收率88％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝9.40(s,1h,pyrazine-h),8.75(d,1h,j＝2.0hz,pyrazine-h),8.52(d,1h,j＝1.5hz,pyrazine-h),7.72(d,1h,j＝8.0hz,nh),4.10(m,3h,ch+ch2),2.95(t,2h,j＝13.5hz,ch2),2.00(d,2h,j＝12.5hz,ch2),1.46(m,11h,ch2+ch3)；esi-ms:m/z＝307[m+h]+.
化合物7(1.5g，5.0mmol)溶于15ml二氯甲烷，逐滴加入8ml三氟乙酸，室温反应1小时。减压蒸除溶剂，加入乙醚析出白色固体，抽滤干燥得白色固体17，直接用于下步反应。
实施例44-(吡嗪-2-甲酰胺基)哌嗪的制备
化合物8的合成，以1-boc-哌嗪为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体2.2g，收率76％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝8.97(d,1h,j＝1.5hz,pyrazine-h),8.65(d,1h,j＝2.5hz,pyrazine-h),8.54(s,1h,pyrazine-h),3.79(t,2h,j＝5.0hz,ch2),3.62(t,2h,j＝5.0hz,ch2),3.56(t,2h,j＝5.0hz,ch2),3.49(t,2h,j＝5.0hz,ch2),1.47(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝293[m+h]+.
化合物18的合成，以化合物8为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体18，直接用于下步反应。
实施例54-(吡嗪-2-胺甲酰基)哌啶的制备
将1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-甲酸(2.8g，12mmol)置于50ml三颈瓶中，n2保护下加入25ml无水二氯甲烷，然后缓缓滴入吡啶(2.5ml，30mmol)和二氯亚砜(1.1ml，14mmol),该反应液置于室温反应半小时。随后，2-氨基吡嗪(1.0g，10mmol)和三乙胺(5.7ml，40mmol)溶于15ml二氯甲烷后缓缓滴入上述反应液，室温反应6小时。反应液加30ml饱和食盐水稀释，分出有机层，水层二氯甲烷(15ml×3)提取，合并有机层，无水硫酸钠干燥后减压除去溶剂，柱层析分离得2.4g白色固体，收率78％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝9.55(s,1h,pyrazine-h),8.35(d,1h,j＝2.0hz,pyrazine-h),8.23(s,1h,pyrazine-h),7.97(s,1h,nh),4.20(m,2h,ch2),2.81(m,2h,ch2),2.48(m,1h,ch),1.93(d,2h,j＝12.5hz,ch2),1.76(m,2h,ch2),1.47(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝307[m+h]+。
化合物19的合成：以化合物9为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体19，直接用于下步反应。
实施例64-(苯胺甲酰基)哌啶的制备
化合物10的合成：以苯胺为原料，合成及后处理方法同实施例5，得白色固体2.4g，收率86％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.53(d,2h,j＝5.0hz,ar-h),7.34(m,3h,ar-h+nh),7.12(m,1h,ar-h),4.21(d,2h,j＝10.0hz,ch2),2.80(m,2h,ch2),2.41(m,1h,ch),1.90(m,2h,ch2),1.73(m,2h,ch2),1.48(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝305[m+h]+。
化合物20的合成：以化合物10为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体20，直接用于下步反应。
实施例74-(4-氟苯胺甲酰基)哌啶的制备
化合物11的合成：以4-氟苯胺为原料，合成及后处理方法同实施例5，得白色固体2.4g，收率75％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.47(m,2h,ar-h),7.20(s,1h,nh),7.01(t,2h,j＝8.0hz,ar-h),4.18(d,2h,j＝12.0hz,ch2),2.80(t,2h,j＝12.5hz,ch2),2.37(m,1h,ch),1.90(d,2h,j＝12.5hz,ch2),1.75(m,2h,ch2),1.47(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝323[m+h]+。
化合物21的合成：以化合物11为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体21，直接用于下步反应。
实施例84-(4-甲氧基苯胺甲酰基)哌啶的制备
化合物12的合成：以4-甲氧基苯胺为原料，合成及后处理方法同实施例5，得白色固体2.7g，收率85％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.39(d,2h,j＝8.5hz,ar-h),7.38(s,1h,nh),6.83(d,2h,j＝7.5hz,ar-h),4.16(d,2h,j＝13.0hz,ch2),3.77(s,3h,ch3),2.75(m,2h,ch2),2.36(m,1h,ch),1.86(d,2h,j＝12.0hz,ch2),1.71(m,2h,ch2),1.45(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝335[m+h]+。
化合物22的合成：以化合物12为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体22，直接用于下步反应。
实施例94-(吡啶-2-基胺甲酰基)哌啶的制备
化合物13的合成：以2-氨基吡啶为原料，合成及后处理方法同实施例5，得白色固体2.7g，收率90％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝8.25(m,3h,pyridine-h+nh),7.74(m,1h,pyridine-h),7.06(dd,1h,j＝6.5,5.0hz,pyridine-h),4.18(m,2h,ch2),2.79(m,2h,ch2),2.43(m,1h,ch),1.91(d,2h,j＝12.5hz,ch2),1.74(m,2h,ch2),1.46(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝306[m+h]+。
化合物23的合成：以化合物13为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体23，直接用于下步反应。
实施例104-(吡啶-3-基胺甲酰基)哌啶的制备
化合物14的合成：以3-氨基吡啶为原料，合成及后处理方法同实施例5，得白色固体1.9g，收率63％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝8.61(s,1h,pyridine-h),8.34(d,1h,j＝4.0hz,pyridine-h),8.28(d,1h,j＝8.5hz,pyridine-h),7.81(s,1h,nh),7.32(dd,1h,j＝8.5,5.0hz,pyridine-h),4.19(d,2h,j＝13.0hz,ch2),2.79(m,2h,ch2),2.50(m,1h,ch),1.91(d,2h,j＝12.0hz,ch2),1.75(m,2h,ch2),1.46(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝306[m+h]+。
化合物24的合成：以化合物14为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体24，直接用于下步反应。
实施例11hphe-2-氯苄胺的制备
化合物27的合成：以2-氯苄胺和boc-hphe为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率88％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.35(m,2h,ar-h),7.28(m,2h,ar-h),7.20(m,3h,ar-h),7.13(d,2h,j＝7.0hz,ar-h),6.52(t,1h,j＝5.0hz,nh),5.02(d,1h,j＝6.5hz,nh),4.53(d,2h,j＝6.0hz,ch2),4.09(m,1h,ch),2.66(m,2h,ch2),2.17(m,1h,ch2),1.92(m,1h,ch2),1.43(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝403[m+h]+。
化合物33的合成：以化合物27为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体33，直接用于下步反应。
实施例12leu-2-氯苄胺的制备
化合物28的合成，以2-氯苄胺和boc-leu为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率65％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.37(m,2h,ar-h),7.23(m,2h,ar-h),6.70(t,1h,j＝5.0hz,nh),4.93(d,1h,j＝7.5hz,nh),4.55(t,2h,j＝6.0hz,ch2),4.15(m,1h,ch),1.70(m,2h,ch2),1.50(m,1h,ch),1.46(s,9h,ch3),0.94(t,6h,j＝7.0hz,ch3)；esi-ms:m/z＝355[m+h]+。
化合物34的合成：以化合物28为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体34，直接用于下步反应。
实施例13phe-2-氯苄胺的制备
化合物29的合成：以2-氯苄胺和boc-phe为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率95％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.31(d,1h,j＝7.5hz,ar-h),7.17(m,8h,ar-h),6.25(brs,1h,nh),5.07(brs,1h,nh),4.44(d,2h,j＝6.0hz,ch2),4.35(m,1h,ch),3.07(m,2h,ch2),1.40(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝389[m+h]+。
化合物35的合成：以化合物29为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体35，直接用于下步反应。
实施例14asp(4-新戊酰胺)-2-氯苄胺的制备
化合物30的合成：以2-氯苄胺和boc-asp(4-新戊酰胺)为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率95％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.33(m,3h,ar-h+nh),7.21(m,2h,ar-h),6.30(d,1h,j＝7.0hz,nh),6.00(brs,1h,nh),4.51(m,3h,ch+ch2),3.03(m,2h,ch2),2.93(dd,1h,j＝15.0,2.5hz,ch2),2.56(dd,1h,j＝15.0,6.0hz,ch2),1.43(s,9h,ch3),0.87(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝426[m+h]+。
化合物36的合成：以化合物30为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体36，直接用于下步反应。
实施例15cys(s-bn)-2-氯苄胺的制备
化合物31的合成：以2-氯苄胺和boc-cys(s-bn)为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率73％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.39(m,2h,ar-h),7.32(m,4h,ar-h),7.25(m,3h,ar-h),6.73(brs,1h,nh),5.30(brs,1h,nh),4.56(t,2h,j＝6.0hz,ch2),4.28(brs,1h,ch),3.71(d,2h,j＝6.0hz,ch2),2.93(dd,1h,j＝14.0,6.0hz,ch2),2.77(dd,1h,j＝15.0,6.5hz,ch2),1.46(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝435[m+h]+。
化合物37的合成：以化合物31为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体37，直接用于下步反应。
实施例16hphe-2,4-二氟苄胺的制备
化合物32的合成：以2,4-二氟苄胺和boc-hphe为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率84％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.31(m,3h,ar-h),7.21(m,1h,ar-h),7.16(d,2h,j＝7.5hz,ar-h),6.83(m,2h,ar-h),6.59(brs,1h,nh),5.06(brs,1h,nh),4.45(d,2h,j＝6.0hz,ch2),4.10(brs,1h,ch),2.68(t,2h,j＝7.0hz,ch2),2.17(m,1h,ch2),1.94(m,1h,ch2),1.44(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝405[m+h]+。
化合物38的合成：以化合物32为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体38，直接用于下步反应。
实施例17hphe-hphe-2-氯苄胺的制备
化合物39的合成：以化合物33和boc-hphe为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率87％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.33-7.26(m,4h,ar-h),7.25-7.11(m,10h,ar-h),6.72(brs,1h,nh),6.54(brs,1h,nh),4.85(brs,1h,nh),4.55-4.41(m,3h,ch+ch2),4.01(brs,1h,ch),2.67-2.61(m,4h,ch2),2.24-2.18(m,1h,ch2),2.11-1.96(m,2h,ch2),1.87-1.79(m,1h,ch2),1.41(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝564[m+h]+。
化合物49的合成：以化合物39为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体49，直接用于下步反应。
实施例18phe-hphe-2-氯苄胺的制备
化合物40的合成：以化合物33和boc-phe为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率88％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.35-7.33(m,1h,ar-h),7.30-7.27(m,3h,ar-h),7.24-7.13(m,8h,ar-h),7.10-7.08(d,2h,j＝7.0hz,ar-h),6.61(brs,1h,nh),6.36(brs,1h,nh),4.80(brs,1h,nh),4.54-4.40(m,3h,ch+ch2),4.30-4.27(m,1h,ch),3.04(dd,1h,j＝13.5,6.0hz,ch2),3.02(dd,1h,j＝13.5,6.0hz,ch2),2.63-2.56(m,2h,ch2),2.20-2.11(m,1h,ch2),1.97-1.92(m,1h,ch2),1.36(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝550[m+h]+。
化合物50的合成，以化合物40为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体50，直接用于下步反应。
实施例19leu-hphe-2-氯苄胺的制备
化合物41的合成：以化合物33和boc-leu为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率71％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.35-7.27(m,2h,ar-h),7.24-7.12(m,7h,ar-h),6.81(brs,1h,nh),6.57(brs,1h,nh),4.72(brs,1h,nh),4.55-4.45(m,3h,ch2+ch),4.03(brs,1h,ch),2.65(m,2h,ch2),2.24-2.22(m,1h,ch2),2.02(m,1h,ch2),1.60(m,2h,ch2),1.43-1.41(m,1h,ch),1.39(s,9h,ch3),0.91(t,6h,j＝8.0hz,ch3)；esi-ms:m/z＝516[m+h]+。
化合物51的合成：以化合物41为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体51，直接用于下步反应。
实施例20gla-hphe-2-氯苄胺的制备
化合物42的合成：以化合物33和boc-gla为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率92％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.36-7.27(m,4h,ar-h),7.24-7.13(m,5h,ar-h),6.75(brs,1h,nh),6.54(brs,1h,nh),4.75(brs,1h,nh),4.53-4.45(m,3h,ch2+ch),4.07(brs,1h,ch),2.67(m,2h,ch2),2.26-2.25(m,1h,ch2),2.03(m,1h,ch2),1.40(s,9h,ch3),1.30(d,3h,j＝6.5hz,ch3)；esi-ms:m/z＝474[m+h]+。
化合物52的合成：以化合物42为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体52，直接用于下步反应。
实施例21asp(4-新戊酰胺)-hphe-2-氯苄胺的制备
化合物43的合成：以化合物33和boc-asp(4-新戊酰胺)为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率76％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝8.51(t,1h,j＝6.0hz,nh),8.25(d,1h,j＝8.0hz,nh),7.82(t,1h,j＝6.0hz,nh),7.31-7.25(m,6h,ar-h),7.18-7.16(m,3h,ar-h),7.09(d,1h,j＝8.0hz,nh),4.35-4.28(m,3h,ch2+ch),4.20-4.18(m,1h,ch),2.82-2.71(m,2h,ch2),2.66-2.52(m,4h,ch2),2.06-1.99(m,1h,ch2),1.90-1.88(m,1h,ch2),1.37(s,9h,ch3),0.77(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝588[m+h]+。
化合物53的合成：以化合物43为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体53，直接用于下步反应。
实施例22asp(4-新戊酰胺)-leu-2-氯苄胺的制备
化合物44的合成，以化合物34和boc-asp(4-新戊酰胺)为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率80％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.35-7.32(m,2h,ar-h),7.24-7.20(m,3h,ar-h+nh),6.90(d,1h,j＝8.0hz,nh),6.10(d,1h,j＝7.0hz,nh),5.93(t,1h,j＝6.5hz,nh),4.51(dd,2h,j＝6.0,2.0hz,ch2),4.47-4.41(m,2h,ch2),2.96-2.93(m,2h,ch2),2.77(dd,1h,j＝15.0,5.0hz,ch2),2.66(dd,1h,j＝15.0,6.0hz,ch2),1.84-1.81(m,1h,ch),1.67-1.55(m,2h,ch2),1.44(s,9h,ch3),0.92(dd,6h,j＝22.0,6.5hz,ch2),0.87(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝539[m+h]+。
化合物54的合成：以化合物44为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体54，直接用于下步反应。
实施例23asp(4-新戊酰胺)-phe-2-氯苄胺的制备
化合物45的合成：以化合物35和boc-asp(4-新戊酰胺)为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率86％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝8.59(t,1h,j＝6.0hz,nh),8.16(d,1h,j＝8.0hz,nh),7.77(t,1h,j＝6.5hz,nh),7.43(d,1h,j＝7.5hz,nh),7.31-7.20(m,7h,ar-h),7.12(d,1h,j＝7.0hz,ar-h),6.92(d,1h,j＝8.0hz,ar-h),4.52-4.48(m,1h,ch),4.30-4.24(m,3h,ch+ch2),3.07(dd,1h,j＝13.5,5.0hz,ch2),2.91(dd,1h,j＝14.0,8.0hz,ch2),2.83(dd,1h,j＝13.0,6.5hz,ch2),2.75(dd,1h,j＝13.0,6.0hz,ch2),2.49-2.39(m,2h,ch2),1.35(s,9h,ch3),0.79(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝573[m+h]+。
化合物55的合成：以化合物45为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体55，直接用于下步反应。
实施例24asp(4-新戊酰胺)-hphe-2,4-二氟苄胺的制备
化合物46的合成：以化合物38和boc-asp(4-新戊酰胺)为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率69％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝8.49(t,1h,j＝5.5hz,nh),8.18(d,1h,j＝8.0hz,nh),7.83(t,1h,j＝6.0hz,nh),7.78(t,1h,j＝6.5hz,nh),7.37-7.15(m,6h,ar-h),7.06-7.00(m,2h,ar-h),4.37-4.23(m,3h,ch+ch2),4.18-4.14(m,1h,ch),2.89-2.78(m,2h,ch2),2.63-2.47(m,4h,ch2),2.05-2.02(m,1h,ch2),1.89-1.82(m,1h,ch2),1.38(s,9h,ch3),0.81(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝589[m+h]+。
化合物56的合成：以化合物46为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体56，直接用于下步反应。
实施例25hphe-asp(4-新戊酰胺)-2-氯苄胺的制备
化合物47的合成：以化合物36和boc-hphe为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率71％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝8.32(brs,1h,nh),7.77(brs,1h,nh),7.32-7.28(m,4h,ar-h),7.23-7.18(m,5h,ar-h),6.19(brs,1h,nh),5.07(brs,1h,nh),4.81(m,1h,ch),4.56-4.44(m,2h,ch2),4.07-4.04(m,1h,ch),3.05-2.97(m,3h,ch+ch2),2.73(t,2h,j＝7.5hz,ch2),2.55-2.52(m,1h,ch2),2.20-2.18(m,1h,ch2),1.97-1.93(m,1h,ch2),1.39(s,9h,ch3),0.88(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝588[m+h]+。
化合物57的合成：以化合物47为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体57，直接用于下步反应。
实施例26asp(4-新戊酰胺)-cys(s-bn)-2-氯苄胺的制备
化合物48的合成：以化合物37和boc-asp(4-新戊酰胺)为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率55％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝8.66(t,1h,j＝5.5hz,nh),8.15(d,1h,j＝8.0hz,nh),7.75(t,1h,j＝6.0hz,nh),7.42-7.40(m,1h,ar-h),7.35-7.33(m,1h,ar-h),7.31-7.20(m,7h,ar-h),6.97(d,1h,j＝8.5hz,nh),4.51(dd,1h,j＝14.0,7.5hz,ch2),4.35-4.29(m,3h,ch+ch2),3.74(s,2h,ch2),2.83-2.74(m,3h,ch+ch2),2.67-2.63(m,1h,ch2),2.54(dd,1h,j＝14.5,6.5hz,ch2),2.43(dd,1h,j＝14.5,6.5hz,ch2),1.33(s,9h,ch3),0.77(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝619[m+h]+。
化合物58的合成：以化合物48为原料，合成及后处理方法同实施例3，得白色固体58，直接用于下步反应。
实施例27n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物59的合成：化合物49(2.3g，5mmol)溶于10ml饱和nahco3水溶液和10ml二氯甲烷的混合溶剂中，冰浴降温至0℃，一次性加入三光气(0.5g，1.7mmol)，0℃反应15分钟。分出有机层，水层二氯甲烷萃取(10ml*3)，合并有机层，无水硫酸钠干燥，蒸干。化合物19(0.8g，4mmol)溶于15ml二氯甲烷，加入二异丙基乙胺(1.4ml,8mmol),将上述反应制得的异氰酸酯溶于5ml二氯甲烷后逐滴加入反应液中，室温反应6小时。反应停止后，有机层以饱和nahco3水溶液洗(15ml*2)，饱和nh4cl水溶液洗(15ml*2)，无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂，柱层析分离得白色固体1.2g，收率43％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝10.77(s,1h,nh),9.34(s,1h,pyrazine-h),8.43-8.39(m,2h,pyrazine-h+nh),8.35(d,1h,j＝2.5hz,pyrazine-h),8.07(d,1h,j＝7.5hz,nh),7.41(d,1h,j＝7.0hz,ar-h),7.33-7.16(m,13h,ar-h),6.68(d,1h,j＝7.5hz,nh),4.36-4.27(m,3h,ch+ch2),4.16-4.03(m,3h,ch+ch2),2.78-2.55(m,7h,ch+ch2),2.05-1.94(m,4h,ch2),1.80(d,2h,j＝11.5hz,ch2),1.59-1.46(m,2h,ch2)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝174.72,173.55,172.45,172.10,157.89,149.37,143.02,142.21,141.83,140.06,136.77,136.63,132.44,129.49,129.17,129.00,128.79,128.74,127.50,126.29,126.22,55.03,52.81,43.68,43.63,33.98,33.83,32.40,31.85,28.45,21.51；esi-ms:m/z＝696.1[m+h]+。
实施例28n-[4-(吡嗪-2-基甲酰胺基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物60的合成：以化合物49和化合物17为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率39％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝9.19(d,1h,j＝1.5hz,pyrazine-h),8.86(d,1h,j＝2.5hz,pyrazine-h),8.77(d,1h,j＝8.5hz,nh),8.69(d,1h,j＝2.5hz,pyrazine-h),8.44(t,1h,j＝6.0hz,nh),8.03(d,1h,j＝7.0hz,nh),7.41-7.39(m,1h,ar-h),7.32-7.24(m,7h,ar-h),7.22-7.17(m,6h,ar-h),6.71(d,1h,j＝7.0hz,nh),4.35-4.28(m,3h,ch+ch2),4.15-4.09(m,1h,ch),4.07-4.02(m,3h,ch2+ch),2.86-2.54(m,6h,ch2),2.05-1.90(m,4h,ch2),1.75(d,2h,j＝11.5hz,ch2),1.63-1.51(m,2h,ch2)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝173.53,172.09,162.63,157.81,147.87,145.41,144.07,143.67,142.21,141.84,136.59,132.47,129.51,129.22,129.04,128.80,127.52,126.31,126.23,55.18,52.78,47.18,43.44,43.33,34.14,33.89,32.44,31.84,31.53,21.51；esi-ms:m/z＝696.1[m+h]+。
实施例29n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(phe-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物61的合成：以化合物50和化合物19为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率42％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝10.74(s,1h,nh),9.33(d,1h,j＝1.5hz,pyrazine-h),8.40-8.39(m,1h,pyrazine-h),8.36-8.33(m,2h,nh+pyrazine-h),8.19(d,1h,j＝3.0hz,nh),7.45-7.43(m,1h,ar-h),7.33-7.25(m,9h,ar-h),7.20-7.17(m,4h,ar-h),6.71(d,1h,j＝8.0hz,nh),4.39-4.34(m,3h,ch2+ch),4.29-4.23(m,1h,ch),4.01-3.96(m,2h,ch2),3.06-3.02(dd,1h,j＝14.0,4.50hz,ch2),2.94-2.89(dd,1h,j＝13.5,9.50hz,ch2),2.70-2.51(m,5h,ch+ch2),2.07-1.99(m,1h,ch2),1.95-1.85(m,1h,ch2),1.74-1.71(m,2h,ch2),1.48-1.34(m,2h,ch2)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝174.66,173.22,172.03,157.64,149.35,143.03,141.84,140.05,139.19,136.75,136.63,129.72,129.53,129.15,129.06,128.81,128.78,128.45,127.55,126.55,126.29,56.56,52.91,43.59,43.50,42.51,37.25,34.16,31.76,28.33；esi-ms:m/z＝682.1[m+h]+。
实施例30n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(leu-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物62的合成：以化合物51和化合物19为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率26％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝10.77(s,1h,nh),9.34(d,1h,j＝1.0hz,pyrazine-h),8.40-8.35(m,3h,pyrazine-h+nh),8.01(d,1h,j＝7.5hz,nh),7.44-7.42(m,1h,ar-h),7.33-7.27(m,5h,ar-h),7.19-7.16(m,3h,ar-h),6.58(d,1h,j＝7.5hz,nh),4.34(d,2h,j＝6.0hz,ch2),4.27-4.23(m,1h,ch),4.18-4.13(m,1h,ch),4.06-4.04(m,2h,ch2),2.75-2.58(m,5h,ch+ch2),2.07-1.85(m,2h,ch2),1.76(d,2h,j＝12.0hz,ch2),1.71-1.64(m,1h,ch),1.64-1.44(m,4h,ch2),0.89(dd,6h,j＝19.0,6.5hz,ch3)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝174.71,174.05,172.06,157.87,149.36143.03,141.84,140.06,136.76,136.63,132.47,129.52,129.22,129.07,128.78,127.52,126.29,53.63,52.74,43.67,43.61,42.57,33.96,31.79,28.44,28.39,24.81,23.53,22.14；esi-ms:m/z＝648.1[m+h]+。
实施例31n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(ala-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物63的合成：以化合物52和化合物19为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率36％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝10.76(s,1h,nh),9.34(d,1h,j＝1.5hz,pyrazine-h),8.41-8.38(m,2h,nh+pyrazine-h),8.35(d,1h,j＝2.5hz,pyrazine-h),8.00(d,1h,j＝8.0hz,nh),7.44-7.42(m,1h,ar-h),7.33-7.27(m,5h,ar-h),7.19-7.16(m,3h,ar-h),6.65(d,1h,j＝6.5hz,nh),4.34(d,2h,j＝6.0hz,ch2),4.27-4.23(m,1h,ch),4.15(m,1h,ch),4.04(d,2h,j＝12.5hz,ch2),2.75-2.53(m,5h,ch+ch2),2.08-1.99(m,1h,ch),1.95-1.87(m,1h,ch),1.77(d,2h,j＝5.0hz,ch2),1.56-1.45(m,2h,ch2),1.28(d,3h,j＝7.0hz,ch3)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝174.71,174.27,172.13,157.71,149.36,143.03,141.86,140.06,136.75,136.66,132.43,129.50,129.16,129.03,128.81,128.78,127.54,126.28,52.74,50.85,43.52,43.48,42.54,33.95,31.85,28.44,28.39,18.14；esi-ms:m/z＝606.0[m+h]+。
实施例32n-[4-(苯胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物64的合成：以化合物49和化合物20为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率58％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝9.92(s,1h,nh),8.44(t,1h,j＝6.0hz,nh),8.10(d,1h,j＝7.5hz,nh),7.61(d,2h,j＝8.0hz,ar-h),7.42-7.39(m,1h,ar-h),7.32-7.18(m,15h,ar-h),7.03(t,1h,j＝7.5hz,ar-h),6.70(d,1h,j＝7.5hz,nh),4.32(d,2h,j＝6.0hz,ch2),4.29-4.23(m,1h,ch),4.16-4.04(m,3h,ch+ch2),2.78-2.57(m,7h,ch+ch2),2.03-1.90(m,4h,ch2),1.76(d,2h,j＝11.0hz,ch2),1.59-1.45(m,2h,ch2)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝173.59,173.56,172.10,157.90,142.22,141.82,139.79,136.62,132.44,129.50,129.17,129.10,129.01,128.79,128.75,127.51,126.30,126.23,123.50,119.61,55.03,52.81,43.73,43.69,43.27,33.97,33.85,32.40,31.85,28.67；esi-ms:m/z＝684.1[m+h]+。
实施例33n-[4-(4-氟苯胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物65的合成：以化合物49和化合物21为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率49％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.74(m,2h,nh+nh),7.29-7.27(m,2h,ar-h),7.25-7.13(m,10h,ar-h),7.10-7.02(m,6h,ar-h),6.28(d,1h,j＝8.0hz,nh),4.98(d,1h,j＝5.0hz,nh),4.52-4.47(m,2h,ch2+ch),4.42(dd,1h,j＝15.0,6.0hz,ch2),4.32-4.29(m,1h,ch),4.12-4.06(m,1h,ch),3.80(d,1h,j＝13.5hz,ch2),3.47(d,1h,j＝13.5hz,ch2),2.79-2.60(m,6h,ch2),2.24-2.11(m,2h,ch2),2.04-1.98(m,2h,ch2),1.91-1.84(m,2h,ch2),1.45-1.37(m,2h,ch2)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝173.54,172.10,165.49,165.01,163.03,157.84,142.22,141.83,136.59,132.45,131.59,131.56,130.42,130.33,129.56,129.51,129.18,129.09,129.04,128.78,127.52,126.32,126.24,115.63,115.42,55.09,52.82,47.35,43.45,43.29,34.04,33.95,32.43,31.18,31.79；esi-ms:m/z＝712.1[m+h]+。
实施例34n-[4-(4-甲氧基苯胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物66的合成：以化合物49和化合物22为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率45％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝7.42-7.28(m,8h,nh+ar-h),7.26-7.12(m,10h,nh+ar-h),7.01-6.97(brs,1h,nh),6.84(d,2h,j＝8.5hz,ar-h),4.51-4.47(m,3h,ch+ch2),4.25(brs,1h,ch),3.78(s,3h,ch3),3.65-3.58(m,2h,ch2),2.75-2.64(m,6h,ch2),2.37-2.34(m,1h,ch),2.28-2.21(m,1h,ch2),2.19-2.12(m,1h,ch2),2.07-1.96(m,2h,ch2),1.90-1.80(m,2h,ch2),1.73-1.65(m,2h,ch2)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝173.57,173.07,172.11,157.90,155.55,142.22,141.83,136.63,132.96,132.45,129.50,129.17,129.01,128.79,128.75,127.50,126.30,126.23,121.17,114.24,55.62,55.04,52.82,43.76,43.70,43.16,33.97,33.85,32.41,31.85,28.71；esi-ms:m/z＝724.1[m+h]+。
实施例35n-[4-(吡啶-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物67的合成：以化合物49和化合物23为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率39％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ＝8.73(brs,1h,nh),8.26-8.23(m,2h,pyridine-h),7.78(t,1h,j＝8.5hz,nh),7.34-7.28(m,4h,ar-h+pyridine-h),7.25-7.03(m,12h,ar-h+pyridine-h),6.76(d,1h,j＝8.0hz,nh),4.80(d,1h,j＝6.0hz,nh),4.55-4.49(m,3h,ch+ch2),4.23(m,1h,ch),3.72(d,1h,j＝13.0hz,ch2),3.60(d,1h,j＝13.0hz,ch2),2.80-2.60(m,6h,ch2),2.46-2.39(m,1h,ch),2.33-2.22(m,1h,ch2),2.17-2.12(m,1h,ch2),2.01-1.95(m,2h,ch2),1.87-1.78(m,2h,ch2),1.72-1.60(m,2h,ch2)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝174.53,173.57,172.11,157.89,152.60,148.33,142.21,141.82,138.55,136.62,132.44,129.49,129.17,129.01,128.79,128.75,127.50,126.30,126.23,119.73,114.00,55.03,52.81,43.73,43.67,42.76,33.96,33.83,32.40,31.85,28.55,28.52；esi-ms:m/z＝695.3[m+h]+。
实施例36n-[1-(吡嗪-2-甲酰基)哌啶-4-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺的制备
化合物68的合成：以化合物53和化合物15为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率45％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝8.81(d,1h,j＝3.5hz,pyrazine-h),8.74(d,1h,j＝2.5hz,pyrazine-h),8.65(s,1h,pyrazine-h),8.54(dd,1h,j＝8.5,5.5hz,nh),8.32(d,1h,j＝7.5hz,nh),8.23(d,1h,j＝8.0hz,nh),7.88(q,1h,j＝6.5hz,nh),7.41-7.39(m,1h,ar-h),7.31-7.23(m,5h,ar-h),7.23-7.14(m,3h,ar-h),4.61(q,1h,j＝7.5hz,ch),4.47-4.42(m,1h,ch2),4.36-4.28(m,2h,ch2),4.20-4.14(m,1h,ch2),3.69-3.64(m,1h,ch),3.11-3.07(m,1h,ch2),2.92-2.87(m,1h,ch2),2.79-2.54(m,7h,ch+ch2),2.11-2.04(m,1h,ch2),1.93-1.76(m,2h,ch2),1.66-1.51(m,3h,ch2),0.76(s,9h,ch3)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝174.22,172.08,171.82,170.31,165.10,150.12,145.85,144.59,143.75,141.71,136.62,132.29,129.42,129.02,128.92,128.89,128.75,127.48,126.32,52.76,50.46,50.08,46.50,41.58,37.67,33.61,32.26,31.71,29.30,29.23,28.53,28.48,27.61；esi-ms:m/z＝704.1[m+h]+。
实施例37n-[1-(4-氟苯甲酰基)哌啶-4-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺的制备
化合物69的合成：以化合物53和化合物16为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体。收率42％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝8.55(t,1h,j＝6.0hz,nh),8.32(d,1h,j＝8.0hz,nh),8.23(d,1h,j＝8.0hz,nh),7.89(t,1h,j＝6.0hz,nh),7.44-7.40(m,3h,ar-h),7.32-7.24(m,7h,ar-h),7.19-7.13(m,3h,ar-h),4.61(q,1h,j＝8.0hz,ch),4.48-4.28(m,3h,ch2),4.19-4.16(m,1h,ch2),3.64-3.56(m,1h,ch),3.10-2.99(m,1h,ch2),2.85-2.55(m,7h,ch+ch2),2.11-2.03(m,1h,ch2),1.92-1.81(m,1h,ch2),1.79-1.43(m,5h,ch2),0.76(s,9h,ch3)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝174.27,172.07,171.81,170.30,168.56,163.87,161.91,141.73,136.61,133.09,132.29,129.74,129.67,129.42,129.01,128.90,128.74,127.48,126.31,115.93,115.76,52.77,50.44,50.07,41.92,41.76,37.66,33.63,32.26,31.72,30.63,27.61,21.19,19.08,14.03；esi-ms:m/z＝720.1[m+h]+。
实施例38n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-leu]-2-氯苄胺的制备
化合物70的合成：以化合物54和化合物19为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率27％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝10.80(s,1h,nh),9.33(d,1h,j＝1.5hz,pyrazine-h),8.52(t,1h,j＝5.5hz,nh),8.40(d,1h,j＝1.5hz,pyrazing-h),8.35(d,1h,j＝2.5hz,pyrazine-h),8.07(d,1h,j＝8.0hz,nh),7.78(t,1h,j＝6.0hz,nh),7.43-7.40(m,1h,ar-h),7.32-7.26(m,3h,ar-h),6.71(d,1h,j＝7.0hz,nh),4.40(q,1h,j＝8.0hz,ch),4.36-4.26(m,3h,ch+ch2),4.00-3.95(m,2h,ch2),2.86-2.75(m,2h,ch2),2.74-2.50(m,5h,ch+ch2),1.80-1.73(m,2h,ch2),1.66-1.43(m,5h,ch+ch2),0.90(d,3h,j＝6.5hz,ch3),0.84(d,3h,j＝6.5hz,ch3),0.80(s,9h,ch3)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝174.65,172.71,172.70,170.60,157.41,149.36,143.04,140.06,136.73,136.69,132.32,129.41,129.01,128.90,127.51,52.40,51.79,50.16,43.52,43.43,42.48,37.83,32.29,28.40,28.35,27.64,24.68,23.61,21.80；esi-ms:m/z＝671.2[m+h]+。
实施例39n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-phe]-2-氯苄胺的制备
化合物71的合成：以化合物55和化合物19为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率45％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝10.80(s,1h,nh),9.34(d,1h,j＝1.5hz,pyrazine-h),8.57(t,1h,j＝6.0hz,nh),8.40(dd,1h,j＝2.5,1.5hz,pyrazing-h),8.35(d,1h,j＝2.5hz,pyrazine-h),8.16(d,1h,j＝8.0hz,nh),7.76(t,1h,j＝6.0hz,nh),7.43-7.41(m,1h,ar-h),7.30-7.18(m,7h,ar-h),7.17-7.15(m,1h,ar-h),6.66(d,1h,j＝7.5hz,nh),4.49-4.44(m,1h,ch),4.38(q,1h,j＝8.0hz,ch2),4.32(d,2h,j＝5.5hz,ch2),4.00-3.91(m,2h,ch+ch2),3.10(dd,1h,j＝14.0,5.0hz,ch2),2.93(dd,1h,j＝13.5,8.0hz,ch2),2.85(dd,1h,j＝13.0,6.5hz,ch2),2.77(dd,1h,j＝14.0,5.5hz,ch2),2.73-2.50(m,3h,ch+ch2),2.52-2.43(m,2h,ch2),1.80-1.75(m,2h,ch2),1.49-1.41(m,2h,ch2),0.80(s,9h,ch3)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝174.71,172.62,171.53,170.60,157.38,149.30,143.08,140.08,138.25,136.71,136.40,132.30,129.60,129.39,129.05,128.95,128.62,127.52,126.79,54.76,52.40,50.17,43.45,43.35,42.43,37.80,37.38,32.29,28.35,28.30,27.60；esi-ms:m/z＝705.1[m+h]+。
实施例40n-[4-(吡嗪-2-甲酰基)哌嗪-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺的制备
化合物72的合成：以化合物53和化合物18为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率79％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝8.86(d,1h,j＝1.5hz,pyrazine-h),8.77(d,1h,j＝1.5hz,pyrazine-h),8.69(dd,1h,j＝2.5,1.5hz,pyrazing-h),8.52(t,1h,j＝6.0hz,nh),8.27(d,1h,j＝7.5hz,nh),7.82(t,1h,j＝6.0hz,nh),7.43-7.41(m,1h,ar-h),7.33-7.25(m,5h,ar-h),7.20-7.15(m,3h,ar-h),6.89(d,1h,j＝8.0hz,nh),4.47(q,1h,j＝7.5hz,ch),4.32(d,2h,j＝6.0hz,ch2),4.20-4.16(m,1h,ch),3.65-3.60(m,2h,ch2),3.47-3.32(m,6h,ch2),2.85-2.76(m,2h,ch2),2.70-2.53(m,4h,ch2),2.10-2.02(m,1h,ch2),1.94-1.88(m,1h,ch2),0.79(s,9h,ch3)；13cnmr(100mhz,dmso):δ＝172.73,172.14,170.59,165.37,157.46,149.56,146.05,145.02,143.68,141.84,136.67,132.35,129.44,129.08,128.94,128.87,128.74,127.49,126.28,52.88,52.44,50.16,46.77,44.24,43.67,42.07,37.89,33.72,32.28,31.77,27.63；esi-ms:m/z＝705.1[m+h]+。
实施例41n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2,4-二氟苄胺的制备
化合物73的合成：以化合物56和化合物19为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率38％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝10.76(s,1h,nh),9.33(d,1h,j＝1.5hz,pyrazine-h),8.49(t,1h,j＝6.0hz,nh),8.40(dd,1h,j＝2.5,1.5hz,pyrazine-h),8.35(d,1h,j＝2.5hz,pyrazine-h),8.17(d,1h,j＝7.5hz,nh),7.81(t,1h,j＝6.0hz,nh),7.35(q,1h,j＝9.0hz,ar-h),7.28-7.13(m,6h,ar-h),7.02(dt,1h,j＝8.5,2.0hz,ar-h),6.74(d,1h,j＝7.5hz,nh),4.42(q,1h,j＝7.0hz,ch),4.30-4.27(m,2h,ch2),4.17-4.13(m,1h,ch),4.05-3.98(m,2h,ch2),2.85-2.54(m,9h,ch+ch2),2.06-2.03(m,1h,ch2),1.89-1.77(m,3h,ch2),1.53-1.46(m,2h,ch2),0.81(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝720.2[m+h]+。
实施例42n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[hphe-asp(4-新戊酰胺)]-2-氯苄胺的制备
化合物74的合成：以化合物57和化合物19为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率45％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝10.76(s,1h,nh),9.36(d,1h,j＝1.0hz,pyrazine-h),8.51(d,1h,j＝8.0hz,nh),8.40(dd,1h,j＝2.5,1.0hz,pyrazine-h),8.37-8.35(m,2h,nh+pyrazine-h),7.91(t,1h,j＝6.5hz,nh),7.39(dd,1h,j＝7.5,1.5hz,ar-h),7.30-7.17(m,8h,ar-h),6.86(d,1h,j＝6.0hz,nh),4.50(q,1h,j＝6.0hz,ch),4.36(dd,1h,j＝16.5,6.5hz,ch2),4.21(dd,1h,j＝16.5,6.5hz,ch2),4.03-3.98(m,2h,ch2),3.91(q,1h,j＝6.5hz,ch),2.93(dd,1h,j＝13.0,6.5hz,ch2),2.84(dd,1h,j＝13.0,6.5hz,ch2),2.80-2.55(m,7h,ch+ch2),1.97-1.92(m,2h,ch2),1.79-1.73(m,2h,ch2),1.63-1.52(m,2h,ch2),0.79(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝718.5[m+h]+。
实施例43n-[4-(吡啶-3-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-cys(s-bn)]-2-氯苄胺的制备
化合物75的合成：以化合物58和化合物24为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体。收率25％。1hnmr(500mhz,d6-dmso):δ＝10.10(s,1h,nh),8.72(s,1h,ar-h),8.64(t,1h,j＝4.5hz,ar-h),8.23-8.18(m,2h,ar-h+nh),8.02(d,1h,j＝8.5hz,nh),7.75(t,1h,j＝5.5hz,nh),7.42-7.21(m,10h,ar-h),6.72(d,1h,j＝6.5hz,nh),4.48-4.40(m,2h,ch+ch),4.33(d,2h,j＝5.5hz,ch2),3.97(t,2h,j＝13.5hz,ch2),3.74(s,2h,ch2),2.84-2.49(m,8h,ch2),1.89(s,1h,ch),1.75-1.72(m,2h,ch2),1.50-1.45(m,2h,ch2),0.78(s,9h,ch3)；esi-ms:m/z＝749.8[m+h]+。
实施例44n-[4-(吡啶-3-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物76的合成：以化合物24和49为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率47％。esi-ms:m/z＝696.3[m+h]+。
实施例45n-[4-(噻唑-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物77的合成：以4-(噻唑-2-基胺甲酰基)哌啶和49为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率53％。esi-ms:m/z＝702.3[m+h]+。
实施例46n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氟苄胺的制备
化合物78的合成：以化合物19和hphe-hphe-2-氟苄胺为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率62％。esi-ms:m/z＝680.8[m+h]+。
实施例47n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-4-氯苄胺的制备
化合物79的合成：以化合物19和hphe-hphe-4-氯苄胺为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率59％。esi-ms:m/z＝697.3[m+h]+。
实施例48n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-4-氟苄胺的制备
化合物80的合成：以化合物19和hphe-hphe-4-氟苄胺为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率68％。esi-ms:m/z＝680.8[m+h]+。
实施例49n-[4-(吡嗪-2-甲酰基)哌嗪-1-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物81的合成：以化合物18和49为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率61％。esi-ms:m/z＝683.3[m+h]+。
实施例50n-[1-(吡嗪-2-甲酰基)哌啶-4-甲酰基]二肽(hphe-hphe)-2-氯苄胺的制备
化合物82的合成：以化合物15和49为原料，合成及后处理方法同实施例1，得白色固体，收率75％。esi-ms:m/z＝682.3[m+h]+。
实施例51n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-ala]-2-氯苄胺制备
化合物83的合成：以化合物19和asp(4-新戊酰胺)-ala-2-氯苄胺为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率47％。esi-ms:m/z＝630.3[m+h]+。
实施例52n-[4-(吡嗪-2-基甲酰胺基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺制备
化合物84的合成：以化合物17和53为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率44％。esi-ms:m/z＝720.4[m+h]+。
实施例53n-[4-(吡嗪-2-甲酰基)哌嗪-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-leu]-2-氯苄胺的制备
化合物85的合成：以化合物18和54为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率49％。esi-ms:m/z＝658.3[m+h]+。
实施例54n-[4-(噻唑-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺制备
化合物86的合成：以化合物53和4-(噻唑-2-基胺甲酰基)哌啶为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率38％。esi-ms:m/z＝725.3[m+h]+。
实施例55n-[4-(吡啶-3-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺制备
化合物87的合成：以化合物24和53为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率35％。esi-ms:m/z＝719.3[m+h]+。
实施例56n-[4-(4-甲氧基苯胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺的制备
化合物88的合成：以化合物22和53为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率66％。esi-ms:m/z＝748.4[m+h]+。
实施例57n-[4-(4-三氟甲基苯胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-2-氯苄胺的制备
化合物89的合成：以化合物53和4-(4-三氟甲基苯胺甲酰基)哌啶为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率54％。esi-ms:m/z＝786.3[m+h]+。
实施例58n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-hphe]-4-氯苄胺制备
化合物90的合成：以化合物19和asp(4-新戊酰胺)-hphe-4-氯苄胺为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率39％。esi-ms:m/z＝720.3[m+h]+。
实施例59n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[glu(4-叔丁酰胺)-hphe]-2-氯苄胺制备
化合物91的合成：以化合物19和glu(4-叔丁酰胺)-hphe-2-氯苄胺为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率37％。esi-ms:m/z＝720.3[m+h]+。
实施例60n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[tyr(o-tbu)-hphe)]-2-氯苄胺的制备
化合物92的合成：以化合物19和tyr(o-tbu)-hphe-2-氯苄胺为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率46％。esi-ms:m/z＝755.3[m+h]+。
实施例61n-[4-(吡嗪-2-基胺甲酰基)哌啶-1-甲酰基]二肽[asp(4-新戊酰胺)-cys(s-bn)]-2-氯苄胺的制备
化合物93的合成：以化合物19和58为原料，合成及后处理方法同实施例27，得白色固体，收率71％。esi-ms:m/z＝752.3[m+h]+。
试验实施例1哌啶或哌嗪构建的二肽类化合物的蛋白酶体抑制活性测试
实验方法：采用荧光底物suc-leu-leu-val-tyr-amc检测活性，观察不同化合物对酶的活性抑制，以初步评价化合物的抑制效果。蛋白酶体类糜蛋白酶(chymotrypsin-likeprotease)水解底物中的tyr-amc序列，释放出amc，在激发光355nm发射光460nm的条件下可以检测到水解后产物amc的荧光吸收值，观察化合物对蛋白酶体活性的抑制情况。结果参见表1。
试验实施例2哌啶或哌嗪构建的二肽类化合物的多发性骨髓瘤细胞增殖抑制活性测试
实验方法：运用mtt法检测细胞存活率，即将生长在对数生长期的细胞，经0.01％的胰酶消化，计数，以2.0×103/well的细胞密度接种在96孔板中100ml，置于5％co2培养箱内37℃培养过夜。每一化合物设六个浓度梯度，每一浓度设三个复孔，每一浓度分别加入到对应孔中，5％co237℃培养箱内培养72小时，加入20ml的5mg/mlmtt。37℃孵育3小时后，吸弃上清，加入100ml的dmso溶解，使用spectramax340测550nm(l1)光吸收值，参考波长690nm(l2)，将(l1-l2)值对抑制剂不同浓度作图，经公式拟合得ic50。结果参见表1。
表1、化合物对蛋白酶体ct-l的抑制活性及对多发性骨髓瘤细胞的增殖抑制活性
注：nt-没有测试
试验实施例3部分哌啶或哌嗪构建的二肽类化合物对血细胞蛋白酶体ct-l的抑制活性
实验方法：对icr小鼠进行采血，加入抗凝剂，再加入不同浓度的化合物进行孵育(化合物与血的体积比为1:50)。40分钟后，将其离心(1000rpm，5min)，弃去上清。加入2倍体积的edta(5mm，ph＝8.0)进行裂解，在4℃的旋转仪上旋转60分钟，再将血样进行离心(6600rpm，10min)，去除底部的沉淀。将裂解好的血样进行蛋白浓度测定，校准至相同的蛋白浓度后进行蛋白酶体活性的检测。测试方法同试验实施例1。结果参见图1。
本发明的化合物都是蛋白酶体的高效抑制剂，活性测试结果显示，有7个化合物的蛋白酶体抑制活性强于上市化合物carfilzomib,且显示了极强的多发性骨髓瘤细胞的增殖抑制活性。进一步的对正常小鼠血液及组织蛋白酶体活性检测发现，有3个化合物的活性优于或与阳性对照相当。以上各实验说明该类化合物具有优异的抗肿瘤应用前景，因而具有良好的商业价值。