本发明涉及一种利用鱼鳞制备ACE(血管紧张素转换酶)抑制肽的方法。
背景技术：
鱼鳞是鱼类加工的主要副产品之一。鱼鳞中含有丰富的蛋白质(约占鱼鳞质量的50-70％)、脂肪(卵磷脂、多种脂肪酸)、多种矿物质、维生素和微量元素，但是大部分鱼鳞都作为废弃物丢弃而未能很好地开发利用。开发利用鱼鳞资源对减少环境污染和提高鱼类加工的附加值、对创造经济和社会效益都有很大的意义。
高血压是全球范围内的重大疾病，其发病率在全球已超过10亿，估计我国患病人数超过1.6亿。高血压是引发心血管疾病和死亡的最主要危险因素，我国每年至少有一半的心血管病死亡是与高血压有关的。同时，血压升高还是多种疾病的导火索，会使冠心病、心力衰竭及肾脏疾患等疾病的发病风险增高。而由于部分高血压患者并无明显的临床症状，高血压又被称为人类健康的“无形杀手”。因此高血压的防治已成为全世界食品医药界面临的一项艰巨任务。目前临床常用的降压药物主要有利尿降压药、受体阻滞剂、钙通道阻滞剂CCB、血管紧张素转化酶抑制剂ACE I和血管紧张素II受体拮抗剂ARB，但大部分降压药物的副作用比较多。
ACE(血管紧张素转换酶)在血压调节中扮演着重要的角色，它是一种膜结合糖蛋白，ACE能够促使血管紧张素I水解形成具有升压作用的血管紧张素II，同时促进具有使血管舒张作用的缓激肽物质的水解，导致血压升高。而ACE I就是通过抑制ACE(血管紧张素转换酶)的活性达到降血压的目的。相比其他降压物质，ACE抑制肽是一种对高血压有降压作用同时副作用相对较小的降血压药，但还是会有如咳嗽、味觉功能紊乱以及皮疹等副作用。
从天然蛋白质中提取得到的ACE抑制肽安全性高，易于消化吸收，无副作用，因此从天然蛋白质中提取ACE抑制肽成为预防和治疗高血压最具开发价值的产品之一。目前人们已经从大豆、带鱼、酪蛋白、枪鱼等物质中获得了ACE抑制肽，但采用鱼鳞作为原料制备ACE抑制肽的技术还未见报道。
技术实现要素：
本发明的首要目的在于提供一种利用鱼鳞制备ACE(血管紧张素转换酶)抑制肽的方法，该方法原料来源丰富、设备简单、操作容易，既从鱼鳞中提取高价值的ACE抑制肽，同时又实现其高附加值利用、充分发挥其资源优势。
本发明的另一目的在于提供由上述方法制得的ACE抑制肽。
本发明的再一目的在于提供上述的ACE抑制肽在制备降血压药物中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种利用鱼鳞制备ACE抑制肽的方法，包括以下步骤：
(1)将鱼鳞水洗去杂质后，用10％(W/V)的NaCl溶液浸泡1-2天，中间换液一次，脱除杂蛋白和鱼银粉；将鱼鳞捞出后再用0.4mol/L的HCl溶液、料液比1:10-1:20，浸泡1-2h，以脱除钙盐等无机盐；
(2)将鱼鳞用蒸馏水浸泡溶胀，接着用碱性蛋白酶酶解，然后离心，上清液为酶解液，将酶解液冷冻干燥得到ACE抑制肽；
步骤(1)所述的料液比优选1:15；
步骤(2)所述的酶解，pH值优选9，温度优选55℃，底物浓度为5g/100mL，加酶量为底物的6％，酶解时间优选2h；酶解结束后在沸水浴中加热10min终止酶解反应；
步骤(2)所述的离心是4℃、4000r/min离心15min。
由上述方法制得的ACE抑制肽可用于制备降血压药物。
鱼鳞的主要成分为蛋白质和羟基磷灰石，其中蛋白质含量占(50％-70％)，通过盐酸脱钙后鱼鳞中蛋白质含量达到90％以上。碱性蛋白酶可以特异性地切断蛋白质中的肽键，鱼鳞通过碱性蛋白质的水解作用可以产生多肽，通过体外ACE抑制率检测到鱼鳞水解物中含有能够抑制ACE活性的多肽。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
1、本发明方法的原料鱼鳞是鱼类加工的副产品，原料丰富，使鱼鳞资源得到了充分的利用，减少环境污染的同时提高了鱼鳞的附加值。
2、本发明技术成本低廉，采用酶法制备，工艺合理，操作简单。产品为ACE抑制率较高的ACE抑制肽，与化学合成的ACE抑制肽相比，本发明制备的ACE抑制肽安全无毒、易于消化。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
一种利用鱼鳞制备ACE抑制肽的方法，包括以下步骤：
(1)将鱼鳞水洗去杂质后，用10％(W/V)的NaCl溶液浸泡48h，中间换液一次，脱除杂蛋白和鱼银粉；将鱼鳞捞出后再用0.4mol/L的HCl溶液、料液比1:15浸泡1h，以脱除钙盐等无机盐；
(2)将鱼鳞用蒸馏水浸泡溶胀1h，然后用碱性蛋白酶酶解，酶解pH值9，温度55℃，底物浓度为5g/100mL，加酶量为底物的6％，酶解时间2h；酶解结束后在沸水浴中加热10min终止酶解反应；
(3)离心(4℃、4000r/min离心15min)，上清液为酶解液，将酶解液冷冻干燥得到ACE抑制肽，该ACE抑制肽体外ACE抑制率为86.20％。
实施例2
一种利用鱼鳞制备ACE抑制肽的方法，包括以下步骤：
(1)将鱼鳞水洗去杂质后，用10％(W/V)的NaCl溶液浸泡24h，中间换液一次，脱除杂蛋白和鱼银粉；将鱼鳞捞出后再用0.4mol/L的HCl溶液、料液比1:15浸泡2h，以脱除钙盐等无机盐；
(2)将鱼鳞用蒸馏水浸泡溶胀1h，然后用碱性蛋白酶酶解，酶解pH值9，温度60℃，底物浓度为5g/100mL，加酶量为底物的4％，酶解时间2h；酶解结束后在沸水浴中加热10min终止酶解反应；
(3)离心(4℃、4000r/min离心15min)，上清液为酶解液，将酶解液冷冻干燥得到ACE抑制肽，该ACE抑制肽体外ACE抑制率为72.48％。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。