驴的miRNA序列、制备方法及其应用与流程

文档序号:11809004阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种驴的miRNA序列,其特征在于,所述miRNA序列的核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示的序列。

2.根据权利要求1所述的驴的miRNA序列的制备方法,其特征在于,包含以下步骤:

1)取驴各个部位的若干离体组织分别放入若干个容器中,并将温度调节至:-60~-100℃;形成若干个样品组织1;

2)取步骤1中所述的样品组织1,在液氮环境中研磨,放置于若干个容器中;并加入1~3ml的总RNA抽提试剂,混合均匀后,调节温度至30~40℃孵育5~15min;调节温度至2~6℃并离心分离5~15min,取上清液加氯仿混合均匀后静置,形成若干个样品组织2;

3)调节步骤2中所述的样品组织2的温度至2~6℃,离心分离10~20min,并加入异丙醇,放置15~20min;形成若干个样品组织3;

4)调节步骤3中所述的样品组织3的温度至2~6℃,离心分离5~15min后去除上清液并洗涤沉淀;形成若干个样品组织4;

5)调节步骤4中所述的样品组织4的温度至2~6℃,离心分离1~5min,室温放置,并加入15~50ul无菌无酶水,混合均匀;形成若干个样品组织5;

6)取适量的步骤5中所述的若干个样品组织5等量混合后构建Micro RNA文库;并通过测序平台测序,将测序得到的序列进行转化、处理后,即得若干个待分析纯净序列数据;

7)将步骤6中所述的待分析纯净序列数据与若干个核苷酸序列数据库进行比对,去除重复序列和干扰片段;即得通过比对的miRNA序列;

8)将步骤7中所述的通过比对的miRNA序列与数据库中的miRNA前体进行比对筛选;即得未通过比对的miRNA序列;

9)将步骤8中所述的未通过比对的miRNA序列与已知的驴基因组序列进行比对,筛选得到若干个新型miRNA序列;

10)对步骤9中所述的新型miRNA序列进行靶基因预测;即得SEQ ID NO:1所示的序列。

3.根据权利要求2所述的驴的miRNA序列的制备方法,其特征在于,所述步骤1中取驴的心、肝、脾、肺、肾、脑、骨髓以及肌肉的离体组织。

4.根据权利要求2所述的驴的miRNA序列的制备方法,其特征在于,所述步骤2中调节温度至4℃,离心分离器的转速为:12000r/分钟,离心时间:10分钟。

5.根据权利要求2所述的驴的miRNA序列的制备方法,其特征在于;所述步骤2中的总RNA抽提试剂为Trizol试剂,每加入1ml的Trizol试剂相应加入0.2ml的氯仿,涡旋混匀15秒静置。

6.根据权利要求5所述的驴的miRNA序列的制备方法,其特征在于;所述步骤4中用75%乙醇进行洗涤沉淀,其中,每使用1ml Trizol试剂至少使用1ml 75%的乙醇。

7.根据权利要求2所述的驴的miRNA序列的制备方法,其特征在于;所述步骤5中调节步骤4中所述的样品组织4的温度至2~4℃,离心分离2~4min,室温放置2~3min。

8.根据权利要求2所述的驴的miRNA序列的制备方法,其特征在于;所述步骤6中的各个样品组织5等量混合后RNA分子完整数大于7、浓度不小于100ng/ul、总量大于10ug。

9.根据权利要求2所述的驴的miRNA序列的制备方法,其特征在于;所述步骤6中的测序平台为Hiseq 2000测序平台。

10.根据权利要求1至9任一项权利要求所述的驴的miRNA序列的应用,其特征在于,将所述驴的miRNA序列用于制备抑制目的基因表达的组合物。

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