本发明公开了一种用于油污清洗的微生物制剂的制备方法，属于清洗剂领域。
背景技术：
在工业行业中如塑胶、光学玻璃镜片、金属制品（铜、铁、铝、钢、锌、合金）等各种材料清洗表面拉伸油、切削油、防锈油、润滑油、冲压油等各种油污、污渍、油脂时往往需要进行清洗，大多采用柴油、煤油或汽油作清洗液来清洗零件。这不仅浪费能源，且存在着潜在的不安全因素，稍有不慎，则可能酿成火灾。另外采用的清洗剂本身却存在着很大的缺陷，质量高低不一，整体性能较差。因此，研发一种安全性好的高质量清洗剂已成为当下急需解决的课题。
近些年来，通用型液体洗涤剂被广泛地用于金属表面的油污的清洗，一般来说这类清洗剂都应用于常温、低盐度条件，但是在高温、高盐环境下，普通清洗剂的清洗效果不明显甚至是失去清洗效力。此外，这类清洗剂的有效成分用量大、配方复杂、原料价格高，在实际应用中有很大的局限性。
利用从的存在环境中筛选、驯化出功能微生物菌株，经过特殊的培养技术，获取天然的微生物菌株用于能够乳化油污中的成分和利用功能微生物菌种的代谢活动，吸收和降解油污中油污类固体物，同时功能微生物菌种的代谢产物如糖脂类表面活性剂、蛋白酶、纤维素酶等功能成分，能够有效促进有机类物质的降解。
技术实现要素：
本发明主要解决的技术问题：针对清洗材料表面油污的清洗剂有效成分用量大、配方复杂，清洗效果差，清洗后对材料本身有腐蚀性的问题，提供了一种用于油污清洗的微生物制剂的制备方法，本发明从先放芽孢杆菌IOS1-7和假单胞菌HPS2-5进行培养，培养后划线选取菌落进行富集培养得到菌体，对菌体用不同浓度的油污驯化得到可以降解油污的菌体，配置成菌液后与甲壳素、氨基酸、玉米粉等物质混合发酵，得到发酵液即为油污清洗剂，本发明通过筛选、驯化出功能微生物菌株，能够乳化油污中的成分，利用微生物菌种的代谢活动，吸收和降解油污类固体物，同时代谢出糖脂类表面活性剂、蛋白酶、纤维素酶等成分，有效促进有机类物质的降解，应用在材料表面的清洗，清洗效果较好，使用方便，安全环保，使用后不仅不会对材料表面有腐蚀伤害，而且可以降低油污的再次产生。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
（1）按重量份数计，分别选取15～20份牛肉膏、10～15份蛋白胨、10～15份乳制品废水、5～10份氯化钠、10～15份磷酸氢二钾、2～4份磷酸二氢钾和1～3份硫酸镁制备成固体培养基，将固体培养基在120～125℃下灭菌处理15～20min，灭菌后调节培养基的pH为7.0，分别按接种量3～5%和1～2%将放芽孢杆菌IOS1-7和假单胞菌HPS2-5接种到培养基上，并在30～35℃下恒温培养3～5天；
（2）分别选取15～20g马铃薯液，6～8g氯化钠，1～3g硫酸锌，18～20g脱脂牛奶和1000～1200mL蒸馏水制备成液体培养基，调节培养基pH值为7.0后在120～125℃灭菌10～15min，先对上述培养后的固体培养基进行划线选取两种菌的单菌落，将单菌落接种到液体培养基中进行富集培养，在27～35℃温度和120～140r/min转速下摇床培养2～4天；
（3）将上述培养后的液体培养基在1000～1200r/min转速下离心分离15～20min，收集菌体，将菌体加入不同浓度的油污进行驯化培养，先在2～3mL/L浓度下驯化3～5天，驯化后置于4～6mL/L浓度下驯化3～5天，再分别在8～10mL/L和12～15mL/L驯化5～7天，驯化结束后即可得到能够降解油污的菌体，将菌体用营养液配置成浓度为4.5×107～6.3×107的菌液；所述的不同浓度的油污是通过二氯甲烷进行稀释；
（4）按重量份数计，分别选取20～25份上述制备的菌液，10～15份甲壳素，8～10份氨基酸，2～4份尿素，15～20份玉米粉，8～10份甘油和80～90份蒸馏水，放入混合机内，混合搅拌30～40min，得混合液后放入恒温箱中在45～50℃下发酵5～7天，发酵结束后分离得发酵液即为油污清洗剂。
所述的营养液是有3～5g蛋白胨，2～4g牛肉膏粉，800～1000mL蒸馏水混合制成并调节其pH为7.0。
本发明的应用方法：将本发明制备得到的清洗剂装入喷雾器中，按3～5mL/m2均匀喷洒在需要清洗的油污表面，3～5h后用抹布轻轻擦拭即可，擦拭后再按2～4mL/m2将清洗剂喷洒在表面，可降低30～50%油污的产生。
本发明的有益效果是：
（1）本发明通过筛选、驯化出功能微生物菌株，能够乳化油污中的成分，并且利用微生物菌种的代谢活动，吸收和降解油污中油污类固体物；
（2）本发明通过筛选、驯化出功能微生物菌株可以代谢出糖脂类表面活性剂、蛋白酶、纤维素酶等功能成分，能够有效促进有机类物质的降解；
（3）本发明制备得到的清洗剂可应用于机械设备上的清洗，清洗效果较好，使用方便，安全环保；
（4）本发明制备得到的清洗剂使用后不仅不会对材料表面有伤害，而且可以降低油污的再次产生。
具体实施方式
按重量份数计，分别选取15～20份牛肉膏、10～15份蛋白胨、10～15份乳制品废水、5～10份氯化钠、10～15份磷酸氢二钾、2～4份磷酸二氢钾和1～3份硫酸镁制备成固体培养基，将固体培养基在120～125℃下灭菌处理15～20min，灭菌后调节培养基的pH为7.0，分别按接种量3～5%和1～2%将放芽孢杆菌IOS1-7和假单胞菌HPS2-5接种到培养基上，并在30～35℃下恒温培养3～5天；分别选取15～20g马铃薯液，6～8g氯化钠，1～3g硫酸锌，18～20g脱脂牛奶和1000～1200mL蒸馏水制备成液体培养基，调节培养基pH值为7.0后在120～125℃灭菌10～15min，先对上述培养后的固体培养基分别进行划线选取两种菌的单菌落，将单菌落接种到液体培养基中进行富集培养，在27～35℃温度和120～140r/min转速下摇床培养2～4天；将上述培养后的液体培养基在1000～1200r/min转速下离心分离15～20min，收集菌体，将菌体加入不同浓度的油污进行驯化培养，先在2～3mL/L浓度下驯化3～5天，驯化后置于4～6mL/L浓度下驯化3～5天，再分别在8～10mL/L和12～15mL/L驯化5～7天，驯化结束后即可得到能够降解油污的菌体，将菌体用营养液配置成浓度为4.5×107～6.3×107的菌液；所述的不同浓度的油污是通过二氯甲烷进行稀释；按重量份数计，分别选取20～25份上述制备的菌液，10～15份甲壳素，8～10份氨基酸，2～4份尿素，15～20份玉米粉，8～10份甘油和80～90份蒸馏水，放入混合机内，混合搅拌30～40min，得混合液后放入恒温箱中在45～50℃下发酵5～7天，发酵结束后分离得发酵液即为油污清洗剂。
所述的营养液是有3～5g蛋白胨，2～4g牛肉膏粉，800～1000mL蒸馏水混合制成并调节其pH为7.0。
实例1
按重量份数计，分别选取15份牛肉膏、10份蛋白胨、10份乳制品废水、5份氯化钠、10份磷酸氢二钾、2份磷酸二氢钾和1份硫酸镁制备成固体培养基，将固体培养基在120℃下灭菌处理15min，灭菌后调节培养基的pH为7.0，分别按接种量3%和1%将放芽孢杆菌IOS1-7和假单胞菌HPS2-5接种到培养基上，并在30℃下恒温培养3天；分别选取15g马铃薯液，6g氯化钠，1g硫酸锌，18g脱脂牛奶和1000mL蒸馏水制备成液体培养基，调节培养基pH值为7.0后在120℃灭菌10min，先对上述培养后的固体培养基分别进行划线选取两种菌的单菌落，将单菌落接种到液体培养基中进行富集培养，在27℃温度和120r/min转速下摇床培养2天；将上述培养后的液体培养基在1000r/min转速下离心分离15min，收集菌体，将菌体加入不同浓度的油污进行驯化培养，先在2mL/L浓度下驯化3天，驯化后置于4mL/L浓度下驯化3天，再分别在8mL/L和12mL/L驯化5天，驯化结束后即可得到能够降解油污的菌体，将菌体用营养液配置成浓度为4.5×107的菌液；所述的不同浓度的油污是通过二氯甲烷进行稀释；按重量份数计，分别选取20份上述制备的菌液，10份甲壳素，8份氨基酸，2份尿素，15份玉米粉，8份甘油和80份蒸馏水，放入混合机内，混合搅拌30min，得混合液后放入恒温箱中在45℃下发酵5天，发酵结束后分离得发酵液即为油污清洗剂。
所述的营养液是有3g蛋白胨，2g牛肉膏粉，800mL蒸馏水混合制成并调节其pH为7.0。
将本发明制备得到的清洗剂装入喷雾器中，按3mL/m2均匀喷洒在需要清洗的油污表面，3h后用抹布轻轻擦拭即可，擦拭后再按2mL/m2将清洗剂喷洒在表面，可降低30%油污的产生。
实例2
按重量份数计，分别选取17份牛肉膏、13份蛋白胨、13份乳制品废水、8份氯化钠、13份磷酸氢二钾、3份磷酸二氢钾和2份硫酸镁制备成固体培养基，将固体培养基在123℃下灭菌处理17min，灭菌后调节培养基的pH为7.0，分别按接种量4%和1.5%将放芽孢杆菌IOS1-7和假单胞菌HPS2-5接种到培养基上，并在33℃下恒温培养4天；分别选取17g马铃薯液，7g氯化钠，2g硫酸锌，19g脱脂牛奶和1100mL蒸馏水制备成液体培养基，调节培养基pH值为7.0后在123℃灭菌13min，先对上述培养后的固体培养基分别进行划线选取两种菌的单菌落，将单菌落接种到液体培养基中进行富集培养，在30℃温度和130r/min转速下摇床培养3天；将上述培养后的液体培养基在1100r/min转速下离心分离17min，收集菌体，将菌体加入不同浓度的油污进行驯化培养，先在2.5mL/L浓度下驯化4天，驯化后置于5mL/L浓度下驯化4天，再分别在9mL/L和13mL/L驯化6天，驯化结束后即可得到能够降解油污的菌体，将菌体用营养液配置成浓度为5.5×107的菌液；所述的不同浓度的油污是通过二氯甲烷进行稀释；按重量份数计，分别选取23份上述制备的菌液，13份甲壳素，9份氨基酸，3份尿素，17份玉米粉，9份甘油和85份蒸馏水，放入混合机内，混合搅拌35min，得混合液后放入恒温箱中在47℃下发酵6天，发酵结束后分离得发酵液即为油污清洗剂。
所述的营养液是有4g蛋白胨，3g牛肉膏粉，900mL蒸馏水混合制成并调节其pH为7.0。
将本发明制备得到的清洗剂装入喷雾器中，按4mL/m2均匀喷洒在需要清洗的油污表面，4h后用抹布轻轻擦拭即可，擦拭后再按3mL/m2将清洗剂喷洒在表面，可降低40%油污的产生。
实例3
按重量份数计，分别选取20份牛肉膏、15份蛋白胨、15份乳制品废水、10份氯化钠、15份磷酸氢二钾、4份磷酸二氢钾和3份硫酸镁制备成固体培养基，将固体培养基在125℃下灭菌处理20min，灭菌后调节培养基的pH为7.0，分别按接种量5%和2%将放芽孢杆菌IOS1-7和假单胞菌HPS2-5接种到培养基上，并在35℃下恒温培养5天；分别选取20g马铃薯液，8g氯化钠，3g硫酸锌，20g脱脂牛奶和1200mL蒸馏水制备成液体培养基，调节培养基pH值为7.0后在125℃灭菌15min，先对上述培养后的固体培养基分别进行划线选取两种菌的单菌落，将单菌落接种到液体培养基中进行富集培养，在35℃温度和140r/min转速下摇床培养4天；将上述培养后的液体培养基在1200r/min转速下离心分离20min，收集菌体，将菌体加入不同浓度的油污进行驯化培养，先在3mL/L浓度下驯化5天，驯化后置于6mL/L浓度下驯化5天，再分别在10mL/L和15mL/L驯化7天，驯化结束后即可得到能够降解油污的菌体，将菌体用营养液配置成浓度为6.3×107的菌液；所述的不同浓度的油污是通过二氯甲烷进行稀释；按重量份数计，分别选取25份上述制备的菌液，15份甲壳素，10份氨基酸，4份尿素，20份玉米粉，10份甘油和90份蒸馏水，放入混合机内，混合搅拌40min，得混合液后放入恒温箱中在50℃下发酵7天，发酵结束后分离得发酵液即为油污清洗剂。
所述的营养液是有5g蛋白胨，4g牛肉膏粉，1000mL蒸馏水混合制成并调节其pH为7.0。
将本发明制备得到的清洗剂装入喷雾器中，按5mL/m2均匀喷洒在需要清洗的油污表面，5h后用抹布轻轻擦拭即可，擦拭后再按4mL/m2将清洗剂喷洒在表面，可降低50%油污的产生。