一种从蛇足石杉叶中提取石杉碱甲的方法与流程

文档序号:12742485阅读:1173来源:国知局

石杉碱甲(Huperzine A,简称Hup A),又名福定碱,是从石杉科石杉属蛇足杉(千层塔)中分离得到的一种天然生物碱,属强效的可逆性乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂,对早老性痴呆症,单纯记忆障碍以及重症肌无力症治疗有显著疗效,且药效持续时间较长,无严重不良反应,是目前国内外上述病症最有效的药物,深受关注。由于它的治疗指数高,且作用时间长,在国际上已被列为第二代胆碱酯酶的抑制剂之一。但Hup A在自然界中存在量极低,且含有大量杂质,至今国内外有大量研究人员正在探索寻找理想的分离方法。曾有人利用溶剂萃取、硅胶柱层析等方法进行分离,虽然能获得少量产品,但终因费时(一个生产周期超过一个月),得率低(低于百万分之一),难于规模化生产,而人工合成品难于获得理想的疗效。因此急需寻求一个得率高、适合规模化生产的方法。



技术实现要素:

本发明的目的在于,针对上述存在的问题,提出一种从蛇足石杉叶中提取石杉碱甲的方法,具体如下:

将蛇足石杉叶洗净晒干后,放入发酵罐中,加入表面活化剂和发酵菌后进行24小时发酵处理;之后将发酵后的蛇足石杉叶放入75%-95%的乙醚中,并同时加入10%-30%的2,5-二羟基苯甲酸,浸泡2小时后对溶液进行离心,得到滤渣再次放入75%-95%的乙醚中,并同时加入10%-30%的2,5-二羟基苯甲酸,浸泡1小时后再次离心,将两次离心上清液混合,向其中加入活性炭,处理10-15分钟后,去掉活性炭,对溶液进行水浴加热至70℃-80℃,直至溶液变成粘稠状时,停止加热,将溶液搅拌均匀后,降温至0℃以下得到晶体。

上述加入的表面活化剂是脂肪酸山梨坦和聚山梨酯的混合物,其与蛇足石杉叶的比重为脂肪酸山梨坦:聚山梨酯:蛇足石杉叶=2:1:100-150。

上述加入的发酵菌种由以下质量份数组成,枯草芽孢杆菌5份,地衣芽孢杆菌2份,发酵乳杆菌1份,发酵前需要按照比例配制成0.3%菌种含量的接种液,接种量为0.1%。

上述蛇足石杉叶与乙醚的质量体积比1:20-30。

上述加入的2,5-二羟基苯甲酸与乙醚的体积比为1:50-80。

本发明的有益效果为:

其一、本发明采用合理配比的菌种发酵,相比于常用的从蛇足石杉粉末中提取石杉碱甲,可以将蛇足石杉叶中的石杉碱甲变得益于溶于提取液中,从而可以极大的提高收率。

其二、本发明在浸提阶段加入10%-30%的2,5-二羟基苯甲酸,此种酚酸物质,可以使石杉碱甲被高效的提取出来。

其三、本发明采用活性炭脱色除杂,相比于常用的大孔吸附树脂脱色,更省时省力,并能达到很好的脱色效果,由于在脱色之前加入了2,5-二羟基苯甲酸,此种酚酸可以酸化活性炭,使活性炭的脱色效果更明显。

具体实施方式

实施例1

将蛇足石杉叶洗净晒干后,放入发酵罐中,加入表面活化剂和发酵菌后进行24小时发酵处理,其中表面活化剂是脂肪酸山梨坦和聚山梨酯的混合物,其与蛇足石杉叶的比重为脂肪酸山梨坦:聚山梨酯:蛇足石杉叶=2:1:100;之后将发酵后的蛇足石杉叶放入75%乙醚中,并同时加入10%的2,5-二羟基苯甲酸,浸泡2小时后对溶液进行离心,得到滤渣再次放入75%的乙醚中,并同时加入10%的2,5-二羟基苯甲酸,浸泡1小时后再次离心,将两次离心上清液混合,向其中加入活性炭,处理10分钟后,去掉活性炭,对溶液进行水浴加热至70℃,直至溶液变成粘稠状时,停止加热,将溶液搅拌均匀后,降温至0℃得到晶体。本实施例中,石杉碱甲的收率为75%,纯度为99.2%。

实施例2

将蛇足石杉叶洗净晒干后,放入发酵罐中,加入表面活化剂和发酵菌后进行24小时发酵处理,其中表面活化剂是脂肪酸山梨坦和聚山梨酯的混合物,其与蛇足石杉叶的比重为脂肪酸山梨坦:聚山梨酯:蛇足石杉叶=2:1:150;之后将发酵后的蛇足石杉叶放入80%乙醚中,并同时加入20%的2,5-二羟基苯甲酸,浸泡2小时后对溶液进行离心,得到滤渣再次放入95%的乙醚中,并同时加入30%的2,5-二羟基苯甲酸,浸泡1小时后再次离心,将两次离心上清液混合,向其中加入活性炭,处理15分钟后,去掉活性炭,对溶液进行水浴加热至80℃,直至溶液变成粘稠状时,停止加热,将溶液搅拌均匀后,降温至-4℃以下得到晶体。本实施例中,石杉碱甲的收率为80%,纯度为99.8%。

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